Protocol
ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры на животных, связанные описанные в этом протоколе были ранее утверждены Уходу за животными и использованию комитета Университет Дьюка (DUIACUC) по.
1. Рак клеточной культуре и впрыска
- Развивайте флуоресцентно меченных метастатических раковых клеток (например, человека MDAMB231-GFP клетки рака молочной железы, подарок от доктора Патриции Steeg, NCI, и YFP меченных мыши клеток саркомы, подарок от д-ра Дэвида Кирша, Duke University Medical Center, отдел радиационной онкологии) не в соответствующей культуральной среде (например, Дульбекко в модификации Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 1% пенициллина / стрептавидин) при 37 ° С до примерно 90% сплошности.
- Trypsinize клеток, мыть их два раза с PBS, граф, а затем ввести их в хвостовую вену изофлурановой анестезии-10 недель самок голых крыс при 5000000 клеток на животное, с помощью шприца с иглой 27 G. Anesthes Хирургические уровняИ. А. проверяется отсутствие реакции на носок крайнем случае.
2. Мониторинг метастазов Использование MicroCT
- Изучение крыс один раз в неделю с помощью микро-CT / микро-облучатель, чтобы обнаружить присутствие метастазов выше примерно 2 мм в диаметре в диаметре. Микро-КТ в эксплуатацию, как описано выше 12.
- Тема крысы до 3% ИФ анестезии до визуализации. Подтвердите глубокую анестезию пальца щепоткой.
- После начала наркоза, быстро передавать крыс колыбели изображений в камере изображений и подключения через носовой конус к ИФ-воздушной смеси на 2,5-3%. Отрегулируйте положение крысы в колыбели таким образом, что его грудная клетка, расположенного в фотонном пучке MicroCT сканера, используя внешнее управление позиции и лазерной разделитель на подставке изображения. Убедитесь, дверь в камеру изображения закрыта, чтобы защитить следователь из гамма-лучей.
- Управление позицию животного еще раз с помощьюцветная видеокамера. Выполните пробную КТ изображения бежать с низким разрешением, а также использовать полученное изображение, чтобы отрегулировать поле зрения с XYZ размеров грудной полости.
- Изображение крысы грудной клетки с использованием 2 мм Al фильтра на 40 кВп, 2,5 мА, и 0,008 воксел на 7 FPS и вернуть животное в клетку. Визуализация одного животного следует принимать не более 15 или 20 мин. Не возвращать животное, которое перенес операцию на компании других животных, пока полностью выздоровел. Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в достаточной сознание поддерживать грудины лежачее положение.
- Подтвердите метастазы появлением относительно рентгеноконтрастных объектов, которые не могут быть объяснены внутригрудных сосудов (1А)
3. Окно палата хирургии
- Анестезия, жизненно важных функций и хвостовую вену катетеризации
- Выберите животных с наличием метастазов. Вводят животное с внутрибрюшинного DOSE 50 мг / кг фенобарбитала. Подтвердите хирургическое уровня анестезии пальца щепоткой прежде чем продолжить.
Примечание: протоколы анестезии должен быть согласован с соответствующей экспериментальной установки. Пентобарбитал был выбран здесь как длительного действия анестетика, для того, чтобы вызвать глубокий наркоз для длительных процедур, а также предложить возможность легкому повторного введения. Тем не менее, потеря животных передозировки является общей проблемой с анестезией пентобарбиталом. Другой вариант, который сохраняет вегетативные рефлексы в большей степени, чем фенобарбитала является кетамин в сочетании с седативными средствами, такими как ксилазина или медетомидина, который, однако, позволяет только для одного повторного дозирования цикла. - Бритье животных на стороне тела, что имеет метастазы, и в области шеи, используя машинку. Протрите все оставшиеся свободные волосы с поверхности кожи. После распущенные волосы удаляют, применять ветеринарный мазь для глаз, чтобы предотвратить их от высыхания.
ПРИМЕЧАНИЕ: бестимусных голых крыс могут иметь остаточную волосы, которые requiУдаление разрешения, прежде чем приступить хирургических процедур. Это очень важно, чтобы удалить все волосы тщательно, так как это может помешать хирургических процедур и визуализации. - Fix животное в положении лежа на спине на металлической пластине, которая находится на 37 ° C вода циркулирует грелку. Передние и задние конечности крепятся на пластине с лентой.
ПРИМЕЧАНИЕ: Это полезно для контроля и записи жизненно важные признаки, такие как частота сердечных сокращений и артериального оксигенации крови с помощью пульсоксиметра, на протяжении хирургических и экспериментальных процедур.
- Выберите животных с наличием метастазов. Вводят животное с внутрибрюшинного DOSE 50 мг / кг фенобарбитала. Подтвердите хирургическое уровня анестезии пальца щепоткой прежде чем продолжить.
- Интубация трахеи
- Для того чтобы разместить катетер для вентиляции животного, сначала сделать поперечное шейки разрез кожи с последующим разделением средней продольной мускулатуры брюшной части трахеи.
- Используйте многократного действия открытие к закрытию при резком щипцов для создания прохода для шва через спинной стороне трахеи.
- Сделайте небольшой надрез в трахее на Т-Он вентральной стороне, не более чем полукруглое, примерно между второй и третьей кольца трахеи. Оставьте достаточно длинный участок трахеи воздействию на дорсальной поверхности, чтобы включить фиксацию катетера трахеи.
- Вставьте 2,5 мм до 3,0 мм "Y" трахеи канюли в трахее и затяните с 4-0 мононити шва. Обеспечить канюли соединен с вентилятором на циклическое изменение давления с бутылкой, подключенного к каналу годности, который наполнен 6 см воды, чтобы поддерживать положительный легких давление. Втекающая газ должна быть 100% кислорода, если экспериментально не желал иначе.
- Вставка катетера с 25-27 G иглы, и заполнены гепаринизированной физиологического раствора в один из хвостовых вен крысы, и закрепить в месте с лентой.
Примечание: Обеспечить проходимость хвостовой вены катетер в течение всей процедуры, неоднократно инъекционных небольшое количество гепаринизированной физиологического раствора в хвостовую вену. Кроме того, орально-интубации трахеи, т.е. руководством трахеиТрубка через рот анестезированных животных и мимо гортани в трахею, является возможной альтернативой процедуре трахеотомии, описанной здесь. Тем не менее, этот метод требует специальной подготовки и опыта, чтобы избежать повреждения трахеи, а также исключает случайное катетеризации пищевода.
- Применение легких окне
- Удалить кожу со стороны грудной клетки, где метастазы находится, создавая разрез, а затем снятие кожи с использованием тупым.
Примечание: кожа может быть вырезан и удален после отрыву - Перейдите по рассекает два слоя наложенного мускулатуры (грудной, зубчатой и широчайшие мышцы спины), но оставляя межреберные мышцы нетронутыми. Создание перфорации в грудной полости приблизительно 1,5 см в диаметре, путем удаления части обычно два смежных ребра. В идеале, найдите перфорации области шестого и седьмого RIBS.
- Osteotomy:
- Чтобы свести к минимуму кровотечение и повреждение поверхности легких, плотно удерживать ребро быть сокращены с зубчатыми хирургических щипцов во время резки. Использование хирургических ножниц, разрезать медиальной стороне ребра первых, под углом примерно 45 °, в результате чего заостренный сторону оставшегося грудной кости, указывая на улице.
- Впоследствии, сократить боковой стороне грудной кости таким же образом, снова оставляя острый сторону грудной кости, указывая наружу, чтобы предотвратить повреждение поверхности легких.
- Повторите процедуру для прилегающей ребра, а затем вырезать межреберные мышцы и снять вырезали кусок. Во время этой процедуры, поддерживать давление легких таким образом, что механическое взаимодействие между поверхностью легких и грудной клетки сводится к минимуму. Для этого соответствующим образом регулируя вдохновение давление на искусственной вентиляции легких.
- Вставка из окна:
- Вставьте на заказ окно легких, состоящая из покровного стекла, что являетсяприсоединен к разъему плексигласа (Фиг.1В). Установите окно в гнездо склеиванием или путем применения очень небольшое количество вакуумной смазки. Вставка окно таким образом, что поверхностные метастазы расположены близко к центру окна. Если необходимо, отрегулируйте вставленный дыру, чтобы принести микрометастазов в центре окна, увеличивая отверстие слегка соответствующей стороны.
ПРИМЕЧАНИЕ: метастатической болезни на плевральной поверхности могут быть определены как явно узнаваемых белых точек или областей, расположенных в противном случае от розового до лосось цветных здоровые части поверхности легких, которые появляются преимущественно по трещинам. В то время как микрометастазов может произойти на других участках плевральной внешний вид, исследованные клеточные линии почти всегда отображать наплавки микрометастазов в перфорированной области, когда метастазы могут быть обнаружены рентгенологически. - После установки гнездо в перфорации, а также создание прямой контакт с висцеральной плевры лУн, шов края оконной рамы к окружающей межреберных мышц, используя 4,0 мононити шов (рис 1в). Используйте небольшое увеличение давления вдоха на искусственной вентиляции легких, чтобы помочь остаточный воздух, чтобы избежать и создать уплотнение.
Примечание: частота дыхания у крыс может сильно варьироваться, в зависимости от состояния анестезии, состояние возбуждения или тревоги, концентрации кислорода во вдыхаемом воздухе (FiO 2), и т.д., рекомендуется настроить частоту дыхания между 70 и 90 ударов в минуту. Давление вдохновение должны быть скорректированы с осторожностью и не быть установлен в более прибл. 8 см H 2 O (0,6 мм рт.ст.), чтобы избежать повреждения поверхности легких.
- Вставьте на заказ окно легких, состоящая из покровного стекла, что являетсяприсоединен к разъему плексигласа (Фиг.1В). Установите окно в гнездо склеиванием или путем применения очень небольшое количество вакуумной смазки. Вставка окно таким образом, что поверхностные метастазы расположены близко к центру окна. Если необходимо, отрегулируйте вставленный дыру, чтобы принести микрометастазов в центре окна, увеличивая отверстие слегка соответствующей стороны.
- Расположите животное в специально разработанной фиксатор, который предназначен для устранения Z-направленного движения (рис 1D) на стальную пластину, которая расположена на термостатический (электрический) одеяло отопления, под флуоресцентным микроскопом. Управление тело животноготемпературы с помощью ректального термистор. Отрегулируйте винты животного фиксатор, и давление вдохновение на искусственной вентиляции легких для достижения оптимального контроля бокового движения.
Примечание: естественное дыхание у млекопитающих включает все три направления движения легких и расширение грудной клетки: двусторонняя, спинно-брюшного и черепно-хвостовой. Для того чтобы сохранить естественное движение дыхания, насколько это возможно, важно, чтобы свести к минимуму Z-направленного сжатия в необходимом объеме. Поскольку Z-мерное удерживающее имеет потенциал, чтобы представить артефакты, которые могут повлиять на кровоток и другие параметры, желательно, чтобы постоянная условий во серии повторных измерений в одной и той же животного.
- Удалить кожу со стороны грудной клетки, где метастазы находится, создавая разрез, а затем снятие кожи с использованием тупым.
4. Работа с изображениями и измерения микроциркуляции кровотока
- Собирают клетки крови с помощью пункции сердца и маркировать их с DiI (1,1 = -dioctadecyl-3,3,3 =, 3 = тетраметил-индодикарбоцианинового перхлорат), как описано ранее <SUP> 10.
- Вводят 300 мкл меченых эритроцитов в хвостовую вену крысы перед окном камеры операция выполняется, чтобы избежать первого прохода адгезии эффекты на оконное стекло. Ликвидировать все пузырьки воздуха в шприце или катетера, как введение воздуха в вену будет препятствовать какие-либо дополнительные инъекции.
- Изображение кровотока с ПЗС-камеры микроскопа при -40 ° С температура охлаждающей чипа, и примерно 100X целом разрешение (т.е. с объектива микроскопа 10X, 10X и до камеры глазного). Используйте стандартные наборы Rhodamine / TRITC фильтра (возбуждение 450-490 нм, эмиссия> 515 нм). Запишите фактически используемой частоты кадров и разрешение пиксела получаемых в виде последовательности изображений. Запись по крайней мере, 200 (в идеале около 300) кадров стека, чтобы обеспечить успешное анализ скорости потока.
- Пополнить потери жидкости у животного путем введения примерно 1 мл физиологического раствора IP каждый час.
ПРИМЕЧАНИЕ: Экспериментальные установки, которые включают вмешательства, например,Препарат, который изменяет скорость кровотока в легочной метастазов рака, требует повторных измерений скорости кровотока в легких метастатическим раком. Для этих расширенных экспериментов, важно, чтобы пополнить животное с достаточной жидкости. - Эвтаназии животных от инфузии 3 мл 3 н KCl в хвостовую вену
- Оценить стеки, используя опубликованы, публично доступный Matlab-компьютер на базе алгоритма, который будет создавать оттенки серого скорость потока и цвет кодируется карты для всех кровотока следы 10,11. Впоследствии оценить полученные изображения в градациях серого с помощью коммерческого или публично доступное программное обеспечение для анализа изображений, таких как изображения J, после пороговой от значений, которые указывают на отсутствие движения клеток крови, т.е. не активное сосудов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Сосудистую в солидных опухолей, как известно, значительно отличаются от нормального кровоснабжения, показывающий большую степень извитости, и более высокие intervascular расстояния 13. Соответственно, дорожки кровотока в экспериментальных легочных рака молочной железы и саркомы метастазов имеют неправильную форму и большие зазоры intervascular (фиг.2А, нижние две панели) по сравнению с нормальной легочной микроциркуляции (фиг.2а, верхняя панель). В предыдущем исследовании, способность метода легочной окна была продемонстрирована для выполнения автоматических измерений изменений в скорости кровотока в нормальных легких 10. Для того, чтобы исследовать, может ли метод легких окно также измерить увеличение скорости кровотока в легочных метастазов, комбинированный препарат симпатомиметического эфедрина наркотиков и эндотелина блокатора Ambrisentan, что недавно были найдены увеличить тираж микрососудов у здоровых легких,был применен здесь (данные рассматриваемыми в другом месте). В этом исследовании, способность метода показано обнаружить увеличение скорости кровотока в легочных метастазов мышиной саркомы, вызванные дозирования с комбинацией эфедрина (20 мг / кг) и антагонист рецептора эндотелина Ambrisentan (0,5 мг / кг, оба препарата внутрибрюшинно, рис 2b). Каждая точка данных представляет ходе исследований индивидуальные средние трех измерений с интервалом пять минут, усредненное по данным, полученным в пяти животных. Первая инъекция достоверно (р <0,01) увеличение скорости кровотока в области опухоли от 0,61 ± 0,12 мм / сек до 0,74 ± 0,19, в то время как вторая инъекция поддерживается скорость повышенные расхода на 0,74 ± 0,19 мм / сек (). Вторая инъекция не вызывают каких-либо дальнейшее увеличение скорости кровотока. N = 5, все статистические данные: повторные измерения ANOVA.
Рисунок 1:. Процедура подготовки метастазов в легких крыс-подшипника для живого изображения микроскопии (А) MicroCT изображение крысы подшипника метастазов в легких (стрелки) (В) легочной оконной рамы (C) Крысы с грудной клетки перфорации и легочной окна.. прилагается. (D) запретительного устройство для ограничения Z-направленного движения грудной клетки. (E) Крыса с окном камеры и удерживая устройство под флуоресцентным микроскопом. Примечание: панель C и E показывают волосы подшипник Sprague Dawley крыс, не бестимусных голых крыс.
Рисунок 2: Количественный анализ увеличением кровотока легочных метастазов. (А) направление потока крови и скорость в нормелегких и метастазы рака от MDAMB-231 и мышиной саркомы. Колонка на левой стороне содержит оснастку выстрелов из серии изображений флуоресцентных микрофотографии. Alveolae могут быть идентифицированы как часть узора фоновой флуоресценции в нормальных легких (верхняя панель). Метастазы могут быть расположены по флуоресценции, вызванной эндогенными флуоресцирующих белков инжектированных раковых клеток (пунктирная линия). Колонны справа:. Цвет кодируется карты по направлению потока крови (цвет индикатора колесо знаменует направление, к которому течь клетки) и скорости потока, измеряется в мм / сек (B) Изменения кровотока микроциркуляторного после повторного введения комбинированной эфедрин и Ambrisentan (20 и 0,1 мг / кг на одну инъекцию). Значительное увеличение общей скорости потока (повторных измерений ANOVA, р <0,01) наблюдалось после первой инъекции, но не после второго (N = 5).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Модель представлена, что является возможным изменениям изображения в микроциркуляторном кровотока и других динамических процессов в легких метастазов у крыс, используя прижизненный микроскопии и вычислительный анализ потока крови. В то время как другие методы существуют, чтобы выполнить микроскопии на открытых легких в открытых ribcages грызунов, эта модель также первым снимком метастазами в легких, через стенки грудной клетки перфорации в условиях закрытого груди. С помощью этого метода, возможность показана для измерения фармакологически индуцированных изменений в микроциркуляции кровотока легочных метастазов.
Две основные методы существуют, чтобы изображение легких живых грызунов, которые увлажненную спонтанный поток крови, при непосредственном контакте с поверхностью легких: открытые модели грудной клетки устранить проблему постоянного движения легких из-за дыхательной и сердечной деятельности, применяя окно всасывания на поверхности легкого, позволяя при этом остальную часть комплекса сердечно-ехри и контракт в рамках открытой грудной полости 7,14. Хотя этот метод обеспечивает отличную экспериментальную доступ, открытые условия грудной клетки и окна всасывания вводит артефакты по сравнению с условиями неповрежденного легкого 8. Кроме того, процедуры с закрытыми груди, которые оставляют грудную клетку в основном без изменений нести обещание сохраняя оригинальные условия в неповрежденной грудной полости, такие как взаимного влияния сердечной и легочной движения на течение друг друга в крови динамической. Эти модели, как правило, включать в себя раму с окном, который пришит к стенке грудной клетки 15, или прозрачной мембраны, который привел в непосредственном контакте с поверхностью легких, чтобы предотвратить высыхание ткани 9. Трудность переговоры о сердечно-движение для размещения и включения изображений микроскопии основным техническим вызовом процедур с закрытыми грудной клетки, и, вероятно, ответственны за низкой общей протяженностью этой техники. В нашем случае, комбинацияТвердый окно-удерживающая рама и Z-направленного сдерживающим устройство оказалось эффективным в достаточной степени исключить боковое перемещение легких, чтобы измерения автоматизированные кровотока легочный кровоток в окне закрытого груди 10.
Общий метод для измерения скорости кровотока от прижизненной микроскопии стеков изображений является использование пространственного совмещения шаблонов кровотока в последовательных изображений данного сосудистого сегмента 14. Для того, чтобы сократить время усилия, связанные с анализом отдельных сосудов, алгоритм визуализации кровотока была введена, который производит карты кровотока скорость всей оптической области 11. Кроме того, преимущество времени, этот способ также позволяет одновременно пространственный анализ кровотока в целом оптического поля, независимо от сосудистой морфологии или ветвления. Это особенно важно при изучении опухолевого микроокружения, где несколько кровеносные сосуды contriБьют статуса питания данного района опухоли 13,16,17. Действительно, известно, извитость сосудистой сети опухоли и наличие больших intervascular пробелов может быть хорошо видно в обе метастатических форм рака, которые были расследованы, (рис 2а). Метод легких окно также была испытана на его способность регистрировать изменения в скорости кровотока в метастатическим поражением, измеряя эффект фармакологического лечения, который недавно был найден повысить скорость кровотока в малом круге кровообращения: гипертонической эфедрин наркотиков увеличивает сердечный выброс, а блокаторы рецепторов эндотелина Ambrisentan уменьшает предварительно капиллярного тон артериол, что приводит, когда препараты представлены в комбинации, к увеличению скорости кровотока в легочных капиллярах. Хотя эти данные в настоящее время рассматривается в другом месте, способность сочетании гипертонической наркотиков и антагонист рецепторов эндотелина увеличить периферическое Мускулистоеперфузии была опубликована независимо 18. В то время как в обычных условиях, дозозависимое увеличение скорости кровотока можно наблюдать после того, как инъекции, тот факт, что второй инъекции не приводит к дальнейшему увеличению скорости потока в саркомы метастазов может быть результатом того, что максимальное расширение кровеносных сосудов сосудов опухоли уже достигнута после первого комбинированного введения эфедрина и Ambrisentan.
Следующие ограничения распространяются на методике, представленной здесь: Этот протокол применяется к крысам (и теоретически, аналогичных размеров млекопитающих) примерно от 180 до 300 г и более. Меньшие млекопитающие, такие как мыши потребует специальной модификации для размещения более хрупкий анатомию и физиологию грудной клетки. Максимальное пространственное разрешение, которое может быть достигнуто с представленной техники теоретически ограничена только числовой апертуры объектива и толщины крышки слайд, который используется (~ 0.08-0.1 мкм в стандартных марок), 100х целей, с использованием масляной иммерсии. На практике, однако, остальные движение легких может ограничивать использование целей высоким разрешением за 20Х. Если все автономные движение легкого устранены, временное разрешение методики ограничивается только скоростью передачи кадров камеры, и силой сигнала флуоресцентной метки, которая определяет время экспозиции, примерно 100 кадров в сек. Следующие дополнительные ограничения применяются к представленной техники: с одной стороны, в настоящее время микроскопическое и вычислительная установка позволяет только анализ поверхности данного метастазов. Использование глубину проникновения микроскопии, такие как передовые стратегии визуализации конфокальной микроскопии, может в будущем дать измерение скорости кровотока в 3-х измерениях. Кроме того, представлены методика не может, в его нынешнем виде, может быть использован для визуализации поражений дальше вглубь паренхимы легких. В-третьих, введение в GLAОкно SS в непосредственном контакте с активными кровеносных сосудов имеет некоторый потенциал, чтобы возмущать поток микрососудов сам по себе, с помощью пространственного сжатия кровеносных сосудов, или влияя Локорегионарные температуры. В-четвертых, использование внешнего вентилятора и положительного давления в легких также имеет потенциал, чтобы изменить кровоток легочной микроциркуляции. Кроме того, только ограниченные области грудной клетки практически доступны для описанных, относительно несложных хирургических процедур. Другие участки поверхности легких, такие как медиальной-вентральной или спинной доступа потребует более сложных хирургических методов, наряду с глубокими возмущений биомеханики грудной клетки. Из-за отсутствия альтернатив микроскопии изображений в исследование кровотока микроциркуляторного, основные события можно ожидать в ближайшем будущем, чтобы преодолеть эти препятствия и изучение злокачественных опухолей при высокой височно-пространственного разрешения во всех частях легких грызунов.
Таким образом, способ Presподарил измерить закономерности и изменения в, микрососудов скорости кровотока в поверхностных метастазов в легких крыс. Сочетание острого закрытым в грудной клетке хирургического модель с автоматизированной способа измерения скорости кровотока во всей микроскопического оптического поля, этот метод предлагает относительную сохранение физиологической среде легких, способна обнаруживать изменения в общей скорости кровотока микроциркуляции и направления и относительно простым в использовании. Можно ожидать, что эта техника будет весьма полезным для всех групп, изучающих микроциркуляцию метастазами в легких и других динамических процессов в этой ситуации болезни в моделях грызунов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Athymic nude rats | Charles River | Strain code 316 | Female 10 week-old athymic nude rats |
| micro-CT/micro-Irradiator | Precision X-ray Inc. | Xrad 225Cx | Use MicroCT to detect metastases |
| DiI (1,1=-dioctadecyl-3,3,3=,3=-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate) | Sigma Aldrich | 468495-100MG | Mix 100 ul packed red blood cells with 100 ul of 0.5 mg/ml DiI in 200 proof ethanol, 2 ml of 5% dextrose solution in water, and fill up to a 10-ml final volume with saline |
| Rodent ventilator | Kent Scientific | TOPO Small Animal Ventilator | Device is important to maintain positive lung pressure after application of pneumothorax |
| Zeiss Axioskop fluorescence microscope upright | Zeiss | Axioskop | Microscope for intravital imaging |
| Andor CCD camera | Andor | iXonEM 885 | CCD camera for live imaging of blood flow |
| Pulse oximeter | StarrLife | MouseOx | Pulse oximeter |
| Fluorescence microscope | Zeiss | Axioskop | Fluorescence microscope |
References
- Billingsley, K. G., et al. Pulmonary metastases from soft tissue sarcoma: analysis of patterns of diseases and postmetastasis survival. Ann Surg. 229, 602-610 (1999).
- Rashid, O. M., Takabe, K. The evolution of the role of surgery in the management of breast cancer lung metastasis. J Thorac Dis. 4, 420-424 (2012).
- Mayer, A., Vaupel, P. Hypoxia, lactate accumulation, and acidosis: siblings or accomplices driving tumor progression and resistance to therapy. Advances in experimental medicine and biology. 789, 203-209 (2013).
- Okunieff, P., O'Dell, W., Zhang, M., Zhang, L., Maguire, D. Tumor oxygen measurements and personalized medicine. Advances in experimental medicine and biology. 765, 195-201 (2013).
- Palmer, G. M., et al. In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent reporters. Nature protocols. 6, 1355-1366 (2011).
- Palmer, G. M., et al. Optical imaging of tumor hypoxia dynamics. Journal of biomedical optics. 15, (2010).
- Funakoshi, N., et al. A new model of lung metastasis for intravital studies. Microvasc Res. 59, 361-367 (2000).
- Kuebler, W. M. Real-time imaging assessment of pulmonary vascular responses. Proc Am Thorac Soc. 8, 458-465 (2011).
- Tabuchi, A., et al. Precapillary oxygenation contributes relevantly to gas exchange in the intact lung. Am J Respir Crit Care Med. 188, 474-481 (2013).
- Hanna, G., et al. Automated measurement of blood flow velocity and direction and hemoglobin oxygen saturation in the rat lung using intravital microscopy. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. 304, 86-91 (2013).
- Fontanella, A. N., et al. Quantitative mapping of hemodynamics in the lung, brain, and dorsal window chamber-grown tumors using a novel, automated algorithm. Microcirculation. , (2013).
- Newton, J., et al. Commissioning a small-field biological irradiator using point, 2D, and 3D dosimetry techniques. Medical physics. 38, 6754-6762 (2011).
- Vaupel, P. Tumor microenvironmental physiology and its implications for radiation oncology. Seminars in radiation oncology. 14, 198-206 (2004).
- Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation. J Appl Physiol. 104, 338-346 (2008).
- Fingar, V. H., Taber, S. W., Wieman, T. J. A new model for the study of pulmonary microcirculation: determination of pulmonary edema in rats. J Surg Res. 57, 385-393 (1994).
- Manzoor, A. A., Schroeder, T., Dewhirst, M. W. One-stop-shop tumor imaging: buy hypoxia, get lactate free. The Journal of clinical investigation. 118, 1616-1619 (2008).
- Evans, S. M., et al. Imaging and analytical methods as applied to the evaluation of vasculature and hypoxia in human brain tumors. Radiation research. 170, 677-690 (2008).
- Radiloff, D. R., et al. The combination of theophylline and endothelin receptor antagonism improves exercise performance of rats under simulated high altitude. Journal of applied physiology. 113, 1243-1252 (2012).
