Summary
Protokoll för effektiv beredning av homogena prover av spinnkvalster, angrepp av experimentella växter och bedömningen av växtskador, vilket krävs för studier av samspelet växt-pest utvecklades.
Abstract
De två växthusspinnkvalster, Tetranychus urticae, är en allestädes närvarande polyphagous leddjur växtätare som livnär sig på ett anmärkningsvärt brett spektrum av arter, med mer än 150 av ekonomiskt värde. Det är ett stort skadedjur av växthusgrödor, särskilt i Solanaceae och Cucurbitaceae (t.ex., tomater, auberginer, paprika, gurka, zucchini) och växthusprydnadsväxter (t.ex. rosor, krysantemum, nejlikor), årliga fältgrödor (såsom majs, bomull, sojabönor och sockerbetor), och i perenna kulturer (alfalfa, jordgubbar, druvor, citrus, och plommon) 1,2. Förutom den extrema polyphagy som gör det till en viktig jordbruks skadedjur, T. urticae har en tendens att utveckla resistens mot ett brett spektrum av insekticider och kvalstermedel som används för dess kontroll 3-7.
T. urticae är en utmärkt experimentell organism, eftersom det har en snabb livscykel (7 dagar vid 27 ° C)och kan lätt upprätthållas vid hög densitet i laboratoriet. Metoder för att analysera genuttryck (inklusive in situ hybridisering och antikroppsfärgning) och inaktivera uttrycket av spindel kvalster endogena gener med hjälp av RNA-interferens har utvecklats 8-10. Nyligen, den hela genom ordnar av T. urticae har rapporterats, vilket skapar en möjlighet att utveckla denna skadegörare växtätare som modellorganism med motsvarande iska resurser som redan finns i några av sina värdväxter (Arabidopsis thaliana och tomaten Solanum lycopersicum) 11. Tillsammans kan dessa modellorganismer ge insikter i molekylära grunderna för växt-skadegörare interaktioner.
Här är en effektiv metod för snabb och enkel samling av ett stort antal vuxna kvinnliga kvalster, deras tillämpning på experimentell växtvärden, och bedömningen av växtskador på grund av spinn utfodring beskrivs. Den presenterade protokollet svkundfordringar snabb och effektiv samling av hundratals personer vid varje utvecklingsstadium (ägg, larver, nymfer, vuxna hannar och honor) som kan användas för efterföljande försöket.
Introduction
Interaktion Växt skadedjur är ett ämne av stor vetenskaplig och ekonomisk betydelse. Det var historiskt studeras med hjälp av både grödor (t.ex. tomat) och modellväxten, A. thaliana. I båda fallen kunde känsligheten hos växten till gräsätande mätas antingen direkt genom bedömning av växtfenotyp efter herbivore angrepp eller indirekt genom bedömning av skadedjur prestanda.
Direkta mätningar av växt känslighet utnyttjades tidigare för ett antal insektsarter med hjälp av en rad olika metoder. Till exempel är herbivory av lepidoptera-larver mättes som en uppskattning av den del av växtvävnad som förbrukas av antingen Plutella xylostella (kålmal) eller Trichoplusia ni (cabbage looper) med blotta ögat med hjälp av ett galler 12. Också, finns det metoder som utnyttjar digital avbildning av bladskador med efterföljande kvantitativ bildanalys. Sådana metoder användes istudier av A. thaliana interaktion med Frankliniella occidentalis (västra blomma trips) 13, Scaptomyza flava (blad-mining drosophila) 14, och T. ni 15.
Indirekta mätningar av växt känslighet används ofta i studier av samspelet växt-skadegörare. Exempelvis mottagligheten hos A. thaliana att persika bladlöss Myzus persicae herbivori normalt bedöms genom analys av skadedjur fruktbarhet och beskrivning av brutto morfologi av en anläggning efter interaktion 16,17. En annan typisk indirekt indikator på A. thaliana mottaglighet för ett skadedjur är en torr eller våt vikt bedömning av gräsätande. Denna parameter används ofta för att karakterisera herbivory av lepidoterans såsom Pieris rapae (liten vit), P. xylostella eller T. ni på deras larver eller PUPP steg 15,17.
Spider kvalster är cell-innehåll feEders. Mite-inducerad skador erkänns som en samling chlorotic fläckar som varierar i färg från vit till blekt grönt. Risken för att en anläggning värd för spinn herbivory tidigare bedömts antingen indirekt genom analys av spindel kvalster prestanda dagar efter angrepp 18,19, eller direkt med grov morfologi av växter veckor efter angrepp 18 eller med hjälp av en digital avbildning av löv exponerade mot kvalster i dagar med efterföljande automatiserad bildanalys 19. Dessa metoder utvecklas och används för studier av växelverkan mellan tomatplantor och T. urticae, och används typiskt litet antal spinnkvalster (5-15 per behandling) som samlades in från den blandade kvalsterpopulationen och släppts ut på bladytan med en mjuk borste. Men dessa metoder är inte lämpliga för studier där ett större antal kvalster måste tillämpas. Dessutom, medan direkt bearbetning av blad bilder i bildanalysmjukvaratill exempel Adobe Photoshop (San Jose, CA) eller ImageJ 20 kan användas för analys av tomatskador, dessa protokoll behöver ändras för att kunna tillämpas på bladen som har större reflektionsförmåga av ytan eller är lätt färgad och har mycket synliga trichomes ( t.ex. A. thaliana) som stör automatiserad urval av chlorotic fläckar som markerar växtskador. Dessutom är utvecklingsstadiet av spinnkvalster som lätt kan utnyttjas med de tidigare metoderna begränsade till de vanligaste och lätt identifierbara vuxna kvinnor och utesluter utnyttjande av andra utvecklingsstadier.
Den första kritiska steget mot high-throughput analys av växt-spinn interaktion är att skapa reproducerbara, enkla och robusta protokoll för att utmana växter med spindelkvalster och tillförlitligt bedöma interaktions utfall.
I den här filmen, en effektiv metod för snabb och enkel samling av ett stort numlet vuxna kvinnliga kvalster, är deras tillämpning på experimentell växtvärden, och bedömningen av växtskador på grund av spinn utfodring beskrivs. Den presenterade protokollet möjliggör snabb och effektiv uppsamling av hundratals personer vid varje utvecklingsstadium (ägg, larver, nymfer, vuxna hannar och honor) som kan användas för efterföljande försöket. Dessutom kan dessa protokoll tillämpas på alla kvalster värdväxt, men som särskilt visats i fallet med A. thaliana.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Underhåll av Spider Mite Befolkning
OBS: Spider kvalster föds upp på Kaliforniens röda kidneybönor (Phaseolus vulgaris).
- Odla böna växter från frön i 2-3 veckor före angrepp.
- Intermix dessa växter med angripna växter; vuxna kvalster kommer snabbt kolonisera färska växtmaterial.
- Ta bort gamla angripna bönplantor var 7-10 dagar, ersätta dem med färska växter.
2. Samla vuxna kvinnliga kvalster
- Mite samlingen med hjälp av tvättmetod
- För att samla kvalster, placera en fräsch böna fabrik i kontakt med angripna växter 1 till 2 dagar före experimentet.
- Använd 20 till 30 färska bönor växter att samla in 1.000 till 2.000 vuxna kvinnliga kvalster.
- Bered en lösning av Tween 20 på 0,001% med användning av kranvatten vid RT.
- Tvätta angripna bönplantor i Tween 20-lösning, med användning av 2 till 3 växter på en gång.
- Komplett steg 2.1.4 inom 10 minuter för att undvika kvalster dödlighet.
- Isolering av vuxna kvinnliga kvalster från Filtrering av Mite Suspension genom Siktar viss fastställd maskstorlek
- Förbered silar hos följande maskstorlek: 500 ^ m (för att avlägsna skräp) och 300 ^ m (för att samla kvinnliga vuxna kvalster) (Figur 1A).
- Filtrera suspensionen genom 500 | im sikt.
- Refilter suspensionen genom 300 | im sikt. Vuxna kvinnliga kvalster kommer att behållas.
- Doppa en 300 | im sikt med vuxna kvinnliga kvalster i rent kranvatten för att avlägsna Tween-20.
- Sprid kvalster i ett enda lager på botten av sikten.
- Använd pappershandduk för att avlägsna överflödigt vatten ur maskorna och sidor av sikten. OBS: Detta görs eftersom kvalster måste torka snabbt för att återhämta sig.
- Förbered ett aggregat som visas i figur 1B; detta gör att kvalster att röra sig fritt, men kommer att hindra dem från att fly.
- Placera sikten med kvalster på toppen av silen som används som ett stöd.
- Surround nedre sikten med vatten för att förhindra att kvalster från dispergering. OBS: Kvalster kommer att börja återhämta sig efter ca 5 min. Efter ca 30 min, är tillräcklig för att börja insamling (figur 1D) antalet rörliga kvalster. Kvalster ska samlas inom 1 timme, eftersom de producerar silke som kommer att störa samlingen.
3. Växt Infestation med kvalster
OBS: När vuxna kvinnliga kvalster har återhämtat sig, kan de användas för växt angrepp. Det finns två metoder som används för att angripa experimentella anläggningar med vuxna kvinnliga kvalster: a) med hjälp av en fin pensel (protokoll avsnitt 3.1) och b) med hjälp av en pump eller vakuumledningen (protokoll avsnitt 3.2).
- Kvalster angrepp med hjälp av en borste
OBS: Spider kvalster angreppmed en borste används för tillämpning av upp till 30 kvalster per planta.- Använd en mjuk hår rund konstborste av storlek 00 eller finare.
- Blöt borsten med RT kranvatten.
- Plocka försiktigt upp kvalster från sikten med hjälp av penselspetsen och överföra dem till anläggningen.
- Kvalster angrepp med hjälp av en pump
OBSERVERA: Växt angrepp av kvalster som samlats in av en pump / vakuumledning används när fler än 30 kvalster tillämpas. För denna metod kan användas för en vakuumpump för mikroelektroniska komponenter pickup eller en vakuumledning. Det är viktigt att hålla luftflödet konstant och av tillräcklig styrka (2-4 psi).- Fäst en 1 ml pipettspets till röret som ansluter till pumpen eller vakuumledning genom användning av ett 1,5 ml centrifugrör snitt i botten som en adapter mellan pumpen / vakuumröret och spetsen.
- Placera en bit pappershandduk mellan pipettspetsen och adaptern (1,5 ml centrifugrör). OBS: Syftet med detta är att fånga kvalster inuti than pipettspetsen under uppsugningen och även för att reducera luftflödet (Figur 1C).
- Samla kvalster direkt från sikten med användning av pipettspetsen.
- Alternativt samla kvalster en efter en från angripna blad med hjälp av en stereoskop.
- När det nödvändiga antalet kvalster har uppsamlats, avlägsna pipettspetsen från röret, att se till att den del av pappershandduk på baksidan av pipettspetsen är utsatt.
- Samla kvalster genom att knacka pipettspetsen och klumpar kvalster tillsammans. Sedan placera dem på bladet; inom några sekunder, kommer kvalstren börjar att dispergera på bladet.
4. Spela in och bedöma växt Skador
- Recording Växt Damage
OBS! A. thaliana, är växtskador bedöms efter 4 dagar av kvalster utfodring. Skador registreras som den totala ytan av chlorotic fläckar. För skador mätning, är hela rosett klipp och skannas.Inläsningsparametrarna beskrivs är för en Epson V30 scanner, men kommer att fungera som en bra utgångspunkt för alla liknande flatbäddsskanner. Håll scan parametrar konstant för alla experiment tillåter jämförelser mellan olika experimentkörningar.- Täck skannern med öppenhet blad för att förhindra kontamineskannerytan med växtmaterial.
- Skär en hel rosett och plats på skanner sängen så adaxial (övre) sidan av bladen står inför skannern ljuskälla och fånga inslag. Alternativt, om rosetter är för kompakt för att fånga enskilda blad utan överlappning, dissekera rosett i enskilda blad eller grupper av icke-överlappande blad med fina sax innan den placeras på skannerbädden. Flera rosetter kan skannas samtidigt.
- Täck rosetter eller blad med en bit vitt papper för att förhindra anslutning till och förorening av skannerlocket.
- Stäng skannerlocket och utföra en genomsökning med följande parametrar: Upplösning: 1,200 dpi; Färgläge: Adobe RGB; Ljusstyrka: 25; Filtyp: maximal kvalitet JPEG.
- Spara bildfiler för efterföljande skador analys.
- Växt Damage Kvantifiering
OBS: Det skadade området manuellt beräknas med hjälp av Photoshop. På grund av stora skillnader i bladform och intensitet hos färgen av de symptom som en följd av den kvalster utfodring, automatiska metoder var otillförlitliga. Således är ett rutnät metod används för att bedöma växtskador:- Öppna bilden av anläggningen med Photoshop.
- Skapa ett nytt lager, sedan överlagra skannad bild med ett rutnät av 0,25 mm x 0,25 mm divisioner (Visa eller Visa - Show - Grid, kortkommandot Ctrl + ').
- På ett överlagrat skikt, markera skadade blad områden med hjälp av en punkt (använd "Pencil Tool", kortkommandon B). Använd en enda punkt för varje kvadrat av gallret nedanför vilken det finns skador som täcker mer än en halv av gallerenheten. Storleken på punkt definieras i pixlar (dvs
- När alla rutor i rutnätet som visar växtskador som täcker minst hälften av nätet enheten är markerade med en prick, använd histogrammet verktyget (Window - Histogram) för att fastställa det totala antalet pixlar på lagret. Histogrammet verktyget tillåter en att mäta antalet pixlar. Eftersom varje punkt representeras av en konstant och känd antalet pixlar, kommer histogrammet verktyget mäter det totala antalet bildpunkter, som representerar det totala antalet punkter, och i förlängningen, det totala antalet markerade rutor.
- Beräkna antalet "prickar" markerade med användning av formeln:
Antalet prickar = totala antalet pixlar / antal bildpunkter per prick. - Beräkna den totala arean av skada genom att multiplicera antalet markerade punkter på bilden av arean av en kvadrat av nätet, som en prick motsvarar en kvadrat av rutnätet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Med hjälp av 20 till 30 angripna böna växter, kan man samlar in omkring 2.000 vuxna kvinnliga kvalster med användning av siktar. Den tid som krävs för att angripa 10 anläggningar med 20 kvalster per anläggning är cirka 15 minuter om du använder en borste för att överföra kvalster. Kombinationer av insamlings-och appliceringsmetoder visas i figur 2.
Detta protokoll ger reproducerbara resultat av växtskador, visar att insamlade kvalster är av liknande fysiologiska tillstånd och lämplig för växt-spinnkvalster interaktionsstudier (figur 3 A). För att bedöma protokoll reproducerbarhet, var vuxna kvinnliga kvalster samlas in med hjälp av tvättmetod där 20 kvalster placerades på rosettblad av 3 veckor gamla A. thaliana-växter (anslutning Col-0) med en våt pensel. Behandlade plantor scannades 4 dagar postinfestation och området av skada kvantifierades med användning av de tekniker som beskrivits ovan. Jämförelse av upprepade experimentresultat gjordes med hjälp av ANOVA.
Som ett exempel på försöket, bedömde vi naturlig variation i känslighet för spinn herbivory över 3 A. thaliana anslutningar genom tillämpning av 20 kvinnliga spinn per anläggning med en våt pensel och inspelning skada 4 dagar efter angrepp. Typiska utseende skada i scannade bilderna visas i figur 3B. Efteråt kan kvantifiering av skada data presenteras som ett stapeldiagram eller en boxplot och analyseras av den statistiska metoden för val (figur 3C). I detta exempel, ANOVA följt av Tukey HSD-test användes för dataanalys.
Figur 1. Experimentell inrättat för isolering av vuxna kvinnliga kvalster. (A) Ställ av siktar för att möjliggöra separation av olika spinn utvecklingsstadier. (A. 0.5 mm öppningsstorlek - tar bort skräp från kvalster fjädring b 0,3 mm -.. Samlar vuxna kvinnliga kvalster c 0,2 mm -.. Samlar unga honor, hanar och nymfer d 0.16 mm -.. Samlar larver och nymfer e.. 0,1 mm -.. samlar ägg) (B) Setup används för att låta kvalster att återhämta sig utan att fly efter tvätt och filtrering (C) Setup används för att samla kvalster med hjälp av pump (D) Sieve med att flytta vuxna kvinnliga kvalster redo att samlas..
Figur 2. Möjliga strategier för att isolera vuxna kvinnliga kvalster, enligt antalet kvalster att tillämpas. Om den experimentella designen kräver användning av ett stort antal vuxna kvinnliga spindel kvalster, är det mest effektiva sättet att använda vakuumpumpen insamlingsmetod direkt från böna blad.Om ett experiment erfordrar användning av en utvecklingsstadium än vuxna kvinnor eller ett litet antal personer som måste noggrant placeras på yngre växter, är det rekommenderat att genomföra uppsamling och fraktionering av spinnkvalster utvecklingsstadier med tvätt tillvägagångssätt med användning av siktar följt av angrepp med en borste.
Figur 3. Representativa resultat. (A) Reproducerbarhet av experimentella resultat. Skador området mätt på 3 veckor gamla A. thaliana plantor, anslutning Col-0, 4 dagar efter applicering av 20 kvinnliga spinn. Jämförelse av upprepade experimentresultat utfördes med användning av ANOVA (n = 6, F = 0,621, p = 0,735). (B och C) Naturlig variation i känslighet för spinn herbivory över 3A. thaliana anslutningar: Col-0, Ler-0, och WS2 (B) Utseende av växter efter spinn herbivory.. Röda pilar pekar mot typiska skadade områden. (C) Skillnader i känslighet för spinn herbivory som bedöms av området för skadan. Känslighet för spinn herbivory varierar betydligt mellan anslutningarna (ANOVA, n = 6, F = 13,4, P = 0,0004). Brev visar på betydande skillnader mellan genotyper vid P <0,05 (Tukey HSD test). Plottas värden är medelvärden ± standardfel av medelvärdet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna video visar protokoll som används för att isolera och att angripa växter med ett stort antal vuxna kvinnliga kvalster. Även om vi presenterade detta protokoll med hjälp av A. thaliana, kan den användas för någon växt-spinn interaktion systemet och för närvarande med framgång tillämpas även på tomat och vinranka (Vitis vinifera) växter. Protokollet ger reproducerbara resultat, vilket indikerar att insamlade kvalster är av jämförbar fysiologiska tillstånd (Figur 3).
Även dessa protokoll är enkla att utföra, flera viktiga steg kräver särskild uppmärksamhet, eftersom de kommer att påverka kvalster återhämtning. Tvätt kvalster från bladen måste göras på upp till tre bean växter samtidigt och måste slutföras inom 10 minuter med hjälp av vatten vid RT. Dessutom kvalster måste spridas på en sikt för snabb torkning. Om kvalster återhämtning är otillfredsställande, är det viktigt att kontrollera om den rekommenderade mängden av Tween 20 tvättmedel var ossutgåva och om detergenten var full avlägsnas under sköljningssteget.
Det finns två stora begränsningar i protokollet presenteras: a) kvalster samling av pumpen fungerar bra för samlingar av mer än 30 kvalster men insamling av ett mindre antal kvalster kräver användning av en pensel och är relativt långsam; emellertid att samla in och koncentrera vuxna kvalster genom tvättmetoden avsevärt underlättar deras tillämpning; b) skada analys genom att göra poäng yta chlorotic fläckar kan vara en tid-och insatskrävande steg; framtida ansträngningar bör ligga i att identifiera markörgener som kan användas som ett mått på kvalster utfodring.
Jämfört med tidigare publicerade metoder, erbjuder den presenterade metoden för spinn samling en fördel av att samla ett stort antal livskraftiga individer och effektiv separation av utvecklingsstadier i ett steg. Dessutom bedömning av växtskador fenotyp i samspel växt-skadegörare genom visuell inspectipå eller digital bildanalys är vanligtvis det första steget i en komplex analys som innebär någon form av molekyl utläsning (exempelvis genuttrycksanalys eller metabolit profilering). Nuvarande protokoll är lämpliga för tillämpningen av några kvalster och insamling av material dagar efter angrepp som är värdefulla för analysen av de långsiktiga interaktioner mellan växt och skadedjur; Men gör detta protokoll en att tillämpa hundratals kvalster samtidigt för att effektivt fånga upp växt reaktioner som sker under en kortare tid (h) och vid utfodringsplatsen.
Sammanfattningsvis har metoder för att tillämpa vuxna kvinnliga kvalster på värdväxter och bedömning av växtskador beskrivits. Dessa protokoll är viktigt för experiment som syftar till att förstå den genetiska och molekylära grunden för samspelet mellan växter och de två växthusspinnkvalster.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Plant material: | |||
| California red kidney bean | Stokes, Thorold, ON, Canada | 2 week old, well infested with spider mites 2 or 3 days before use. Other cultivars of Phaseolus vulgaris can be used. | |
| Chemicals: | |||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | 1% stock solution is prepared to simplify aliquoting |
| Tap water | At room temperature, heat- and cold-shock affect mite survival rate and performance | ||
| Other materials and equipment: | |||
| Plastic tray | |||
| Set of scissors | |||
| 2 L beakers | |||
| Paper towels | |||
| Sets of sieves | Manufactured in house | Detailed instructions are available | |
| Thin brush | |||
| Pipettes | |||
| Pipette tips | 0.2 and 1 ml | ||
| 1.5 ml centrifuge tubes | |||
| Air pump | Aquarium type pump with inverted air flow. Vacuum line can be used. Required pressure drop is approx. 2-4 psi | ||
| Stereoscope | |||
| Scanner | Epson | V30 | Any flatbed scanner allowing necessary degree of control over scan quality. We use Epson V30 for our experiments. |
| Computer | Windows or OS X PC which is compatible with scanner hardware and Adobe Photoshop software. | ||
| Adobe Photoshop software | Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA | various | Any version with Histogram tool included. |
References
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Vandebaan, H. E. Ecological and Genetic-Factors Influencing Evolution of Pesticide Resistance in Tetranychid and Phytoseiid Mites. Exp Appl Acarol. 4, 277-300 (1988).
- Van Leeuwen, T., et al. Mitochondrial heteroplasmy and the evolution of insecticide resistance: Non-Mendelian inheritance in action. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 5980-5985 (2008).
- Van Leeuwen, T., Vontas, J., Tsagkarakou, A., Dermauw, W., Tirry, L. Acaricide resistance mechanisms in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and other important Acari: A review. Insect Biochem Molec. 40, 563-572 (2010).
- Dermauw, W., et al. The cys-loop ligand-gated ion channel gene family of Tetranychus urticae: Implications for acaricide toxicology and a novel mutation associated with abamectin resistance. Insect Biochem Molec. 42, 455-465 (2012).
- Van Leeuwen, T., et al. Population bulk segregant mapping uncovers resistance mutations and the mode of action of a chitin synthesis inhibitor in arthropods. Proceedings of the National Academy of Sciences. 109, 4407-4412 (2012).
- Dearden, P. K., Donly, C., Grbic, M. Expression of pair-rule gene homologues in a chelicerate: early patterning of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae. Development. 129, 5461-5472 (2002).
- Khila, A., Grbic, M. Gene silencing in the spider mite Tetranychus urticae: dsRNA and siRNA parental silencing of the Distal-less gene. Development genes and evolution. 217, 241-251 (2007).
- Grbic, M., et al. Mity model: Tetranychus urticae, a candidate for chelicerate model organism. BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 29, 489-496 (2007).
- Grbic, M., et al. The genome of Tetranychus urticae reveals herbivorous pest adaptations. Nature. 479, 487-492 (2011).
- Kliebenstein, D., Pedersen, D., Barker, B., Mitchell-Olds, T. Comparative analysis of quantitative trait loci controlling glucosinolates, myrosinase and insect resistance in Arabidopsis thaliana. Genetics. 161, 325-332 (2002).
- Abe, H., et al. Function of jasmonate in response and tolerance of Arabidopsis to thrip feeding. Plant & cell physiology. 49, 68-80 (2008).
- Whiteman, N. K., et al. Mining the plant-herbivore interface with a leafmining Drosophila of Arabidopsis. Molecular ecology. 20, 995-1014 (2011).
- Goodspeed, D., Chehab, E. W., Min-Venditti, A., Braam, J., Covington, M. F. Arabidopsis synchronizes jasmonate-mediated defense with insect circadian behavior. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 4674-4677 (2012).
- Kim, J. H., Lee, B. W., Schroeder, F. C., Jander, G. Identification of indole glucosinolate breakdown products with antifeedant effects on Myzus persicae (green peach aphid). The Plant journal : for cell and molecular biology. 54, 1015-1026 (2008).
- Adio, A. M., et al. Biosynthesis and defensive function of Ndelta-acetylornithine, a jasmonate-induced Arabidopsis metabolite. Plant Cell. 23, 3303-3318 (2011).
- Li, L., et al. The tomato homolog of CORONATINE-INSENSITIVE1 is required for the maternal control of seed maturation, jasmonate-signaled defense responses, and glandular trichome development. Plant Cell. 16, 126-143 (2004).
- Kant, M. R., Ament, K., Sabelis, M. W., Haring, M. A., Schuurink, R. C. Differential timing of spider mite-induced direct and indirect defenses in tomato plants. Plant Physiol. 135, 483-495 (2004).
- Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9, 671-675 (2012).
