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Bioengineering

तैयारी और Photoacoustic युक्त सोना nanorods सेलुलर वाहन का विश्लेषण

Published: May 2, 2016 doi: 10.3791/53328
Automatic Translation
1, 1, 2, 1, 1, 3, 4, 1, 1
1Institute of Applied Physics, Italian National Research Council, 2Department of Experimental and Clinical Biomedical Sciences, University of Florence, Firenze, 3Department of Physics and Astronomy, University of Florence, Sesto Fiorentino, 4Department of Pharmacy and Biotechnology, University of Bologna

Abstract

सोना nanorods, ट्यूमर में लगभग अवरक्त खिड़की, कम cytotoxicity और घर के लिए क्षमता में उनकी गहन ऑप्टिकल absorbance के लिए धन्यवाद इस तरह photothermal पृथक और कैंसर के photoacoustic इमेजिंग के रूप में जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों की एक श्रृंखला के लिए आकर्षक हैं। हालांकि, ट्यूमर के लिए उनकी डिलीवरी अभी भी एक मुद्दा बनी हुई है। एक नवीन दृष्टिकोण ट्यूमर जुड़े मैक्रोफेज के tropism कि इन विट्रो में सोना nanorods साथ लोड किया जा सकता है के शोषण के होते हैं। यहाँ, हम तैयारी और सोना nanorods युक्त सेलुलर वाहनों की photoacoustic निरीक्षण का वर्णन है। PEGylated सोना nanorods के क्रम में एक cationic प्रोफ़ाइल प्राप्त करने के लिए, चतुर्धातुक अमोनियम यौगिकों के साथ संशोधित कर रहे हैं। साधारण पेट्री डिश में murine मैक्रोफेज के साथ संपर्क पर, इन कणों endocytic vesicles में बड़े पैमाने पर तेज गुजरना करने के लिए पाए जाते हैं। तो फिर इन कोशिकाओं biopolymeric हाइड्रोजेल, जो सत्यापित करने के लिए उपयोग किया जाता है में एम्बेडेड रहे हैं कि photoacoustic रूपांतरण की स्थिरताकणों के सेलुलर वाहनों में उनके शामिल किए जाने में बनाए रखा है। हमें विश्वास है कि इन परिणामों उपन्यास रणनीतियों के विकास ट्यूमर के लिए plasmonic कणों को वितरित करने के लिए नई प्रेरणा प्रदान कर सकते हैं।

Introduction

पिछले दशक के दौरान, इस तरह के सोने nanorods, nanoshells और nanocages के रूप में विभिन्न plasmonic कणों, जैव चिकित्सा प्रकाशिकी 1, 2, 3, 4 में अनुप्रयोगों के लिए काफी ध्यान दिया है। सोना स्टैंडर्ड nanospheres के साथ विचरण पर, इन नए कणों के निकट अवरक्त (NIR) खिड़की है कि अंतर्जात घटकों पर 1 उच्चतम ऑप्टिकल विपरीत शरीर के माध्यम से गहरी पैठ और ऑप्टिकल के लिए प्रदान में resonate। यह सुविधा ऐसे photoacoustic (पीए) इमेजिंग और कैंसर के photothermal पृथक रूप में अभिनव अनुप्रयोगों के लिए रुचि पैदा कर दिया। हालांकि, कई मुद्दों पर इन कणों के नैदानिक ​​प्रवेश को नियंत्रित। उदाहरण के लिए, उनके ऑप्टिकल सक्रियण उनकी overheating प्रेरित करने के लिए और अधिक गोलाकार प्रोफाइल, जो एक photoinstability 5, 6, 7 ड्राइव के प्रति उनके कार्यात्मक आकार को संशोधित करने के लिए, 8 आदत sup>, 9। एक और मुद्दा यह है कि वैज्ञानिक बहस हावी उनके ट्यूमर में प्रणालीगत प्रसव है। विशेष रूप से, सोना nanorods आकार है कि ट्यूमर है कि बढ़ाया पारगम्यता और बनाए रखने और घातक मार्कर की विशिष्ट जांच के साथ विकार की आसानी प्रदर्शित व्याप्त करने के लिए आदर्श हैं गठबंधन। इसलिए, खून में एक प्रत्यक्ष इंजेक्शन के लिए उनकी तैयारी एक व्यवहार्य योजना 10, 11, 12, 13 के रूप में माना जाता है। हालांकि, इस मार्ग, समस्याग्रस्त रहता है के साथ कणों की सबसे mononuclear भक्षककोशिकीय प्रणाली 10, 11, 12 के द्वारा कब्जा होता जा रहा है। इसके अलावा, एक और चिंता का शरीर 14 के माध्यम से प्रचलन के बाद कणों की ऑप्टिकल और जैव रासायनिक स्थिरता है। जब कणों उनकी कोलाइडयन स्थिरता और कुल खो देते हैं, उनकी plasmonic सुविधाओं और गर्मी हस्तांतरण गतिशीलता plasmonic युग्मन 15 से पीड़ित हो सकता है, 16, 17 और 18 पार overheating।

हाल ही में, धारणा ट्यूमर जुड़े मैक्रोफेज के tropism फायदा उठाने के लिए एक स्मार्ट विकल्प 19, 20, 21 के रूप में उभरा है। इन कोशिकाओं को एक जन्मजात का पता लगाने और उच्च विशिष्टता के साथ ट्यूमर व्याप्त करने की क्षमता का आयोजन करेगा। इसलिए, एक परिप्रेक्ष्य, एक मरीज ​​से इन कोशिकाओं को अलग उन्हें इन विट्रो में सोना nanorods साथ लोड और फिर उन्हें उन्हें प्रसव के आरोप में सेलुलर वाहन के रूप में उपयोग करने के लिए, रोगी में वापस इंजेक्षन इरादे के साथ करने के लिए हो सकता है। एक और लाभ यह कणों की ऑप्टिकल और जैव रासायनिक स्थिरता पर अधिक नियंत्रण हासिल करने के लिए क्योंकि उनके जैविक इंटरफेस विट्रो में निर्माण किया जाएगा। फिर भी, ऑप्टिकल विपरीत एजेंट के रूप में इन सेलुलर वाहनों के प्रदर्शन के एक महत्वपूर्ण विश्लेषण की जरूरत है।

इस काम में, हम तैयारी और Cellul के महत्वपूर्ण मुद्दों का वर्णनएआर वाहनों कैंसर के पीए इमेजिंग के लिए सोना nanorods हैं। PEGylated सोना nanorods के क्रम में एक cationic प्रोफ़ाइल है कि Plasmatic झिल्ली 23, 24 के साथ उनकी बातचीत को बढ़ावा देने की उम्मीद है प्राप्त करने के लिए, चतुर्धातुक अमोनियम यौगिकों 22 के साथ संशोधित कर रहे हैं। इन कणों, सबसे सेलुलर प्रकार से कुशल और unspecific तेज गुजरना उम्मीद है कि उनके जैविक कार्यों के साथ ज्यादा हस्तक्षेप किए बिना। Murine मैक्रोफेज अप सेल प्रति के रूप में कई के रूप में 200, 000 cationic सोना nanorods, जो तंग endocytic पुटिकाओं के भीतर ही सीमित हो जाते हैं साथ लोड कर रहे हैं। यह विन्यास plasmonic युग्मन और इन पुटिकाओं के अंदर पार overheating के खतरे की वजह से चिंता पैदा करना चाहिए। इसलिए, मैक्रोफेज, biopolymeric हाइड्रोजेल कि जैविक ऊतकों की नकल में एम्बेडेड रहे हैं सत्यापित करने के लिए है कि कणों के पीए रूपांतरण की स्थिरता के सबसे endocytic पुटिकाओं के लिए मध्यम विकास से स्थानांतरण में बनाए रखा है। प्रभावी ढंग सेई माप मानदंड आदेश पीए इमेजिंग के लिए तत्काल ब्याज की शर्तों के तहत पीए रूपांतरण की स्थिरता को मापने के लिए बाहर काम कर रहे हैं। एक देगी सीमा 10 हर्ट्ज की खासियत पुनरावृत्ति दर के साथ 50 लेजर दालों की एक ट्रेन के बाद ऑप्टिकल अस्थिरता के बहुत शुरुआत में सेट किया गया है।

हमें विश्वास है कि इन परिणामों उपन्यास रणनीतियों के विकास ट्यूमर के लिए plasmonic कणों को वितरित करने के लिए गति प्रदान कर सकते हैं।

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Protocol

नोट: सोना nanorods के सभी सांद्रता नाममात्र Au molarities के संदर्भ में व्यक्त कर रहे हैं। अन्य कार्यों के साथ तुलना के लिए, ध्यान दें कि 1 एम Au मोटे तौर पर, 20 माइक्रोन सोना nanorods से मेल खाती है हमारे मामले में।

1. Cationic सोना nanorods की तैयारी

नोट: विधि, एस्कॉर्बिक एसिड के साथ HAuCl 4 की autocatalytic कमी से cetrimonium ब्रोमाइड (CTAB) -capped सोना nanorods के संश्लेषण के साथ शुरू होता है प्रोटोकॉल Ratto एट अल 26 के अनुसार Nikoobakht एट अल 25 से शुरू की है और अनुकूलित के अनुसार।।। तो फिर इन सोना nanorods आदेश, Plasmatic झिल्ली के लिए अधिक biocompatibility और आत्मीयता हासिल करने के लिए पॉलीथीन ग्लाइकोल के संयोजन के द्वारा में संशोधित कर रहे हैं किस्में 10, 11, 27, 28 और चतुर्धातुक अमोनियम यौगिकों 22।

  1. एक concentratio पर 24 मिलीलीटर CTAB से ढकी सोना nanorods शुद्धcentrifugation के दो चक्र (12,000 XG, 30 मिनट) और निस्तारण से 450 माइक्रोन के Au के एन। सुनिश्चित करें कि प्रारंभिक मात्रा को मृत मात्रा के अनुपात के आसपास 1/200 या कम इस प्रोटोकॉल में सभी centrifugation कदम के लिए है सुनिश्चित करें। एक धोने के समाधान के रूप में 500 माइक्रोन जलीय CTAB का प्रयोग करें और अंत में पीएच 5 500 माइक्रोन CTAB और 0.005% (वी / वी) polysorbate 20 से युक्त में 6 मिलीलीटर 100 मिमी एसीटेट बफर में कणों को हस्तांतरण।
  2. 30 μl 10 मिमी जलीय अल्फा-methoxy-ओमेगा mercapto-पाली (एथिलीन ग्लाइकोल) (मेगावाट ~ 5000) जोड़ें और 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए प्रतिक्रिया करने के लिए छोड़ दें।
  3. डाइमिथाइल sulfoxide में एन, एन, एन -trimethylammonium ब्रोमाइड और 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए आराम पर छोड़ - 30 μl 100 मिमी (11-Mercaptoundecyl) जोड़ें।
  4. अगले, निस्तारण centrifugation के चार चक्र (12,000 XG, 30 मिनट) और इन कणों के पानी में 18 मिलीलीटर 0.005% (वी / वी) polysorbate 20 जोड़ सकते हैं और शुद्ध। समाधान धोने के रूप में पानी में 0.005% (वी / वी) polysorbate 20 उपयोग और अंत में पीएच 2.4 मिलीलीटर बाँझ पीबीएस में कणों का स्थानांतरण7.4। सोने के अंतिम नाममात्र एकाग्रता 4.5 मिमी है।

सोना nanorods साथ murine मैक्रोफेज की 2. लोड हो रहा है

  1. monocyte / macrophagic सेल लाइन J774a.1 और DMEM 10% भ्रूण गोजातीय सीरम, 1 मिमी glutamine, 100 इकाइयों / एमएल पेनिसिलिन और 100 माइक्रोग्राम / एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन के रूप में संस्कृति के माध्यम के साथ पूरक का प्रयोग करें। प्लेट 60 मिमी व्यास के चार पेट्री डिश में 5 एक्स 10 5 कोशिकाओं और उन्हें 24 घंटे के लिए विकसित करने के लिए इतनी के रूप में सेना की टुकड़ी के समय subconfluent जा करने की अनुमति (2.2 कदम देखें)।
    1. प्रोटोकॉल के दौरान, मानक संस्कृति की स्थिति (37 डिग्री सेल्सियस, 5% सीओ 2, 95% हवा और 100% सापेक्ष आर्द्रता) के तहत कोशिकाओं को बनाए रखने। कोशिकाओं में हेरफेर करने के लिए एक लामिना का प्रवाह कैबिनेट और उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण का प्रयोग करें।
  2. 24 घंटे के बाद, cationic सोना nanorods के साथ कोशिकाओं लोड और उन्हें तैयार करने chitosan फिल्मों में एम्बेड करने के लिए:
    1. आदेश कणों कोशिकाओं द्वारा उठाए जाने की अनुमति देने के लिए, 4.5 का एक विभाज्य जोड़नेप्रत्येक पेट्री डिश में पीबीएस में मिमी Au cationic सोना nanorods, तो के रूप में 100 सुक्ष्ममापी Au के एक अंतिम एकाग्रता को प्राप्त करने के लिए। 24 घंटे के लिए ऊष्मायन में पेट्री डिश छोड़ दें।
    2. इसके बाद, उनकी अच्छी स्थिति और अपलोड की पुष्टि के लिए एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के नीचे कोशिकाओं निरीक्षण करते हैं। कोशिकाओं को अपनी सामान्य आकृति विज्ञान और अंधेरे intracellular पुटिकाओं के एक नंबर प्रदर्शन करना चाहिए। एक खुरचनी द्वारा कोशिकाओं को अलग, दो पेट्री डिश से उन लोगों के विलय, आदेश के बाद कदम (कम से कम 2 एक्स 10 6 कोशिकाओं) के लिए कोशिकाओं का एक उपयुक्त राशि प्राप्त करने के लिए, और किसी भी समाप्त करने के लिए उन्हें (120 XG, 6 मिनट) अपकेंद्रित्र cationic सोना nanorods से अधिक। सेलुलर गोली लगभग काले दिखना चाहिए।
    3. 2 मिलीलीटर पीबीएस में गोली निलंबित और एक Bürker चैम्बर के उपयोग के द्वारा कोशिकाओं की गिनती। अपकेंद्रित्र एक निलंबन 2 एक्स 10 6 कोशिकाओं (120 XG, 6 मिनट) और (डब्ल्यू / वी) कमरे के तापमान पर दस मिनट के लिए पीबीएस में formaldehyde 2 मिलीलीटर 3.6% में उनकी गोली ठीक से युक्त। अंत में, centrifugat द्वारा इस गोली तीन बार धोनेआयन (120 XG, 6 मिनट) लगानेवाला हटाने के लिए आदेश में। समाधान धोने के रूप में पीबीएस का प्रयोग करें।

Chitosan फिल्मों में मैक्रोफेज के 3. embedment

नोट: chitosan 26, 27, 28 के विशिष्ट गुणों, 29 cationic सोना nanorods साथ दाग मैक्रोफेज युक्त biomimetic phantoms का उत्पादन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। ऐसे agarose के रूप में अन्य हाइड्रोजेल करने के लिए सम्मान के साथ, chitosan फिल्मों है कि बहुत मजबूत है और पतले हैं, जो पीए माइक्रोस्कोपी 6 के लिए महत्वपूर्ण है सक्षम बनाता है। इन phantoms का निर्माण पिछले प्रोटोकॉल 29, 30, कुछ संशोधनों के followings के 30 में निर्धारित के साथ 31 के अनुसार किया जाता है।

  1. एक अम्लीय (4.5 पीएच, एसिटिक एसिड के अलावा द्वारा प्राप्त) और चिपचिपा 3% तैयार (w / v) कम आणविक वजन chitosan (औसत मेगावाट 120 केडीए) समाधान, अच्छी तरह से यह मिश्रण औरयह 40 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए homogenize करते हैं।
  2. अगले, chitosan समाधान के 500 μl के साथ cationic सोना nanorods (2 x 10 6 कोशिकाओं) युक्त murine मैक्रोफेज मिश्रण।
  3. आदेश ~, प्राप्त करने के लिए 50 माइक्रोन मोटी phantoms 1.91 सेमी 2 polystyrene सांचों में मिश्रण के 250 मिलीग्राम डालना और 24 घंटे के लिए एक नाइट्रोजन धारा के तहत उन्हें छोड़ दो में। इसके बाद, आदेश पार से जोड़ने के लिए प्रेरित करने के लिए, 500 μl 1 एम NaOH के साथ इन नमूनों का इलाज है, और उन्हें ultrapure पानी की 10 मिलीलीटर से कुल्ला।

4. Photoacoustic रूपांतरण की स्थिरता का टेस्ट

नोट: पीए रूपांतरण की स्थिरता कि रेफरी 6 में वर्णित है घर का बना सेटअप के साथ पीए प्रयोगों के माध्यम से जांच की है।

  1. एक पेट्री डिश में डूबे एक प्लास्टिक धारक के उपयोग के द्वारा डि पानी में मैक्रोफेज युक्त एक chitosan फिल्म है, उदाहरण के लिए निलंबित, के रूप में तो प्लेट के नीचे से ~ 5 मिमी की दूरी रखने के लिए। एक micrometric XY मंच पर इस थाली रखोआदेश नमूना स्थिति को नियंत्रित करने के लिए।
  2. सोना nanorods (जैसे के अनुदैर्ध्य plasmonic बैंड के साथ गूंज में ~ 5 nsec पल्स अवधि के साथ एक लेजर बीम ध्यान केंद्रित, एक ऑप्टिकल पैरामीट्रिक थरथरानवाला एक क्यू स्विच एन डी के तीसरे हार्मोनिक द्वारा पंप से: 400 की तरंगदैर्ध्य रेंज के साथ YAG लेजर - 2500 5 nsec के एनएम और नाड़ी की अवधि) एक ~ 300 माइक्रोन मौके व्यास के साथ फिल्म सतह को सीधा।
    1. लेजर से बाहर निकलें के सामने एक attenuator धुन करने के लिए लेजर प्रभाव प्लेस और एक बीम फाड़नेवाला का उपयोग एक ऊर्जा मीटर (जैसे, एक pyroelectric डिटेक्टर) करने के लिए लेजर बीम का हिस्सा ध्यान केंद्रित करने और प्रभाव में उतार-चढ़ाव पर नजर रखने के लिए। संरेखण के दौरान MJ / नाड़ी प्रति 2 सेमी 1 ~ नीचे ऑप्टिकल प्रभाव को बनाए रखें। उचित लेजर सुरक्षा eyewear का प्रयोग करें जब लेजर पर है।
  3. फिल्म सतह के बंद पेट्री डिश ~ 2 मिमी में और micrometric अनुवाद का उपयोग करके अपनी स्थिति को समायोजित - एक अल्ट्रासाउंड ट्रांसड्यूसर (20 मेगाहर्ट्ज 1 की आवृत्ति रेंज) डुबकीऔर बारी-बारी चरणों पीए संकेत फिल्म से उत्सर्जित अधिकतम करने के लिए।
  4. एक जांच प्रभाव एफ लो कि नमूना 6 को नुकसान नहीं करता निर्धारण करते हैं:
    1. लगभग 1 MJ / कम से कम 500 दालों के लिए पल्स प्रति 2 सेमी एक प्रभाव में नमूने के एक यादृच्छिक बिंदु चमकाना। प्रत्येक नाड़ी के लिए, अल्ट्रासाउंड ट्रांसड्यूसर और एक आस्टसीलस्कप के साथ ऊर्जा मीटर से लेजर प्रभाव से इसी पीए संकेत अधिग्रहण। एफ लो परीक्षण के रूप में औसत प्रभाव का नाम।
    2. पल्स संख्या के एक समारोह के रूप में अपनी चोटी से शिखर आयाम के रूप में पीए संकेत की तीव्रता की गणना। आदेश लेजर तीव्रता उतार चढ़ाव तोड़ करने के लिए, एफ लो परीक्षण करने के लिए अपने स्वयं के प्रभाव के अनुपात करने के लिए प्रत्येक पीए संकेत के आयाम मानक के अनुसार। पल्स संख्या के एक समारोह के रूप में सामान्यीकृत पीए तीव्रता की प्रवृत्ति का विश्लेषण और समय के साथ इसकी स्थिरता की पुष्टि करें।
    3. अस्थिरता के मामले में, दोहराने कदम 4.4.1 एफ लो का एक कम मूल्य के साथ 4.4.3 के लिए लो परीक्षण के एक मूल्य के साथ उन्हें फिर जब तक स्थिरता का एक नुकसान उठता है। जांच के प्रभाव एफ लो कि स्थिरता सुनिश्चित करता एफ लो परीक्षण का दूसरा सबसे अधिक मूल्य के रूप में सेट।
  5. उपाय के एक देगी दहलीज प्रभाव:
    1. नमूने की एक और यादृच्छिक बिंदु का चयन और एफ लो पर 500 दालों में एक औसत पीए तीव्रता (लो मैं एक) जांच।
    2. एक मामूली एफ लो से अधिक से अधिक प्रभाव सेट और 50 दालों उद्धार। एफ exc के रूप में उनकी औसत प्रभाव का नाम।
    3. एक बार फिर से एक औसत पीए तीव्रता (लो मैं ख) एफ लो पर 500 दालों के ऊपर जांच। अनुपात आर = मैं लो बी / मैं लो एक गणना। एकता नीचे आर के एक मूल्य के नमूने की ऑप्टिकल संपत्तियों की एक अपरिवर्तनीय बदलाव का सबूत देता है।
    4. फिल्म को स्थानांतरित करने के micrometric XY मंच का उपयोग करें और अंक बदलयादृच्छिक पर नमूने के टी। दोहराएँ कदम 4.5.1, एफ exc के विभिन्न मूल्यों के साथ 4.5.4 के लिए इतनी के रूप में नीचे के आसपास है और एकता के ऊपर आर के कुछ मूल्यों को लेने के लिए। 15 अंक ही उचित है।
    5. एफ exc के एक समारोह के रूप में प्लॉट आर और कहा कि मूल्य के रूप वें देगी दहलीज प्रभाव एफ की पहचान जब आर सांख्यिकीय अनिश्चितता से परे एक से अलग करने के लिए शुरू होता है। 6

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Representative Results

इधर, कैंसर के पीए इमेजिंग के लिए सोना nanorods युक्त सेलुलर वाहनों की व्यवहार्यता प्रोटोकॉल के ठेठ परिणामों के साथ एक साथ दिखाया गया है।

चित्रा 1 में मंदिर छवियों चरण 2 कणों की और मंदिर इमेजिंग के लिए कोशिकाओं की तैयारी कहीं और 17 में वर्णित है के बाद चरण 1 के बाद कणों और उनके सेलुलर वाहनों के सामान्य उपस्थिति दिखाने के लिए। Cationic सोना nanorods मैक्रोफेज में एक विशाल संचय, जो अपने सामान्य आकृति विज्ञान बनाए रखने से गुजरना। कण तंग endocytic पुटिकाओं के भीतर ही सीमित हो पाए जाते हैं।

चित्रा 2A cationic सोना nanorods युक्त मैक्रोफेज की एक ऑप्टिकल संचरण छवि प्रदर्शित करता है और चरण 3 के बाद एक chitosan प्रेत में छितरी हुई इस माइक्रोग्राफ द्वारा सिद्ध के रूप में, chitosan हाइड्रोजेल में शामिल किए जाने नहीं करता है एकffect सेलुलर आकारिकी। प्रकोष्ठों में अच्छी तरह से नमूना भर में बिखरे हैं। Chitosan कोशिकाओं के बिना सोना nanorods युक्त फिल्मों का नियंत्रण कर रहे हैं सजातीय। चित्रा 2 बी से पता चलता है कि सोने nanorods की ठेठ plasmonic बैंड जब कणों मैक्रोफेज द्वारा लिया जाता है, हमारे पिछले काम 14, 32 के साथ लगातार बनाए रखा है। इसलिए, इस तरह endocytic पुटिकाओं में अलगाव और अलग अलग आकार और आकार के साथ कणों कि एक polydisperse कोलाइड 28 में एक समय में होना का एक अंतर तेज पर plasmonic युग्मन के रूप में प्रभाव, 33 इन प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा नहीं है। चित्रा 2B भी chitosan की व्यवहार्यता साबित होता है एक ऑप्टिकल प्रेत के रूप में।

चित्रा 3 एफ exc के एक समारोह के चरण 4 के अनुसार मापा के रूप में आर की प्रवृत्ति से पता चलता है और डेटा और विश्लेषण है कि determ के लिए आवश्यक हैं की एक विचार देता हैकदम 4.5.5 के अनुसार एफ वीं की ination। एफ वें होना करने के लिए (11 ± 1) MJ / इस उदाहरण में 2 सेमी मिला था। जब कुछ MJ / 2 सेमी, जो सेलुलर वाहनों से पीए रूपांतरण की स्थिरता की जांच के लिए उच्च सटीकता प्रदान करता है पर 500 दालों पर औसतन इस नमूने पर पीए माप शोर अनुपात (SNR) के लिए संकेत 20 से अधिक के साथ संकेत दिया है।

आकृति 1
चित्रा 1. Cationic सोना nanorods और मैक्रोफेज लक्षण वर्णन एक: (650 × 500) एनएम 2 के रूप में संश्लेषित सोना nanorods के मंदिर छवि, बी, सी और डी। क्रमशः (13 × 8.6) माइक्रोन 2, (2.3 × 1.7) माइक्रोन 2 और (870 × 650) एनएम 2 cationic सोना nanorods के साथ इलाज मैक्रोफेज के मंदिर छवियों। निम्न का प्रकटनपैनल डी में कणों सेल में उनका झुकाव से प्रभावित है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. Chitosan फिल्म लक्षण वर्णन एक:। Cationic सोना nanorods युक्त मैक्रोफेज की ऑप्टिकल ट्रांसमिशन छवि और एक chitosan प्रेत में बिखरे बी:। कोशिकाओं के बिना सोना nanorods युक्त chitosan phantoms (ठोस काला लाइन, नियंत्रण नमूना) और सोने युक्त मैक्रोफेज के ऑप्टिकल विलुप्त होने स्पेक्ट्रा nanorods (लाल रेखा टूट)। यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।

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चित्रा 3. सेलुलर वाहनों photostability। मैं लो की तीव्रता के बाद और प्रत्येक एफ exc बनाम एफ exc में विकिरण से पहले लिया के अनुपात आर। त्रुटि सलाखों एफ लो पर संकेत के उतार चढ़ाव से उत्पन्न। देगी दहलीज इन आंकड़ों से निकाले के रूप में आर एकता से नीचे गिर जाता है। लाल ठोस लाइन आंख के लिए एक गाइड के रूप में कार्य करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

ट्यूमर जुड़े मैक्रोफेज निशाना बनाने की धारणा एक शक्तिशाली अवधारणा कैंसर 34, 35, 36 का मुकाबला करने के रूप में उभर रहा है। इधर, उनके विनाश के बजाय, इन कोशिकाओं सेलुलर वाहनों के रूप में, एक ट्यूमर में सोना nanorods लाने के लिए उनकी tropism के शोषण से भर्ती कर रहे हैं। इस परिप्रेक्ष्य में कणों की एक विचारशील डिजाइन, कोशिकाओं और उनके लक्षण वर्णन में उनके एकीकरण की आवश्यकता है। हमने पाया है कि cationic सोना nanorods के साथ भरी हुई murine मैक्रोफेज के photostability endocytic पुटिकाओं के भीतर कणों का कारावास, जिसका मतलब यह है कि उनके plasmonic युग्मन और पार overheating महत्वपूर्ण नहीं हैं से ग्रस्त नहीं है। हम परिकल्पना है कि खूंटी किस्में और इस तरह के सोने nanospheres के रूप में आकार है कि बंद गूंज रहे हैं, की घटनाओं, कणों को रोकने के लिए भी तंग संपर्क, उनके व्यास 17 (लगभग 10 एनएम) और एक थर्मल प्रसार लंबाई के बारे में है जो में लाने के लिए (करीब 30 एनएमplasmonic युग्मन और पार overheating के लिए क्रमश: 5 NSEC) में।

प्रोटोकॉल कणों के डिजाइन में और उनके photostability की जांच के मौजूदा तरीकों के संबंध में अभिनव है। चरण 1 के अनुसार सोना nanorods के डिजाइन Vigderman एट अल। 22 कि चतुर्धातुक अमोनियम यौगिकों endocytic vesicles में सोना nanorods के एक बड़े पैमाने पर तेज और धारणा है कि सेल एक cationic प्रोफ़ाइल 24 के साथ एजेंटों मर्मज्ञ ड्राइव करने के लिए सक्षम हैं, 37 से अवलोकन जोड़ती मई एक खूंटी के भीतर एम्बेडेड हो 38 खोल और कार्यात्मक रहते हुए कोलाइडयन स्थिरता और biocompatibility 28 फायदा हो रहा है। दरअसल चरण 1 युआन एट अल। 38 से विधि जैसा दिखता है, छोटे और सस्ता चतुर्धातुक अमोनियम यौगिकों के साथ सेल मर्मज्ञ पेप्टाइड्स के प्रतिस्थापन के साथ। इन संशोधनों के साथ, cationic सोना nanorods multifunctional और टिकाऊ हैं। इन particl के बादतों पीए इमेजिंग के लिए इसके विपरीत एजेंट के रूप में इरादा कर रहे हैं, एक फिलीस्तीनी अथॉरिटी जांच उनके कार्यात्मक सुविधाओं का परीक्षण करने के लिए आदर्श है। चरण 4 में एक देगी सीमा की परिभाषा से पीए रूपांतरण की स्थिरता की माप मात्रात्मक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, जो वैज्ञानिक साहित्य के फ्रेम में अद्वितीय विशेषताएं हैं। इसके अलावा, हम ध्यान दें कि इस विधि पीए उपकरणों की एक अंशांकन आवश्यकता नहीं है।

प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम पीए इमेजिंग के लिए विपरीत एजेंटों के रूप में उनकी दक्षता के मामले में सेलुलर वाहनों का निरीक्षण करने के chitosan फिल्मों के निर्माण में शामिल हैं। Chitosan एक रेखीय श्रृंखला शामिल glucosamine और एन -acetyl glucosamine अवशेषों 1,4-glycosidic बांड द्वारा एक साथ शामिल biopolymer है। इस तरह अपने ध्यान में लीन होना आकार, porosity और यांत्रिक गुणों, साथ ही अपनी बहुमुखी प्रतिभा और handiness के रूप में chitosan के कुछ physiochemical सुविधाओं, यह पतली फिल्मों या झरझरा झिल्ली 2 के रूप में हाइड्रोजेल के निर्माण के लिए एक आदर्श विकल्प है9, 39, 40। इसके अलावा, chitosan के polysaccharide रीढ़ संरचनात्मक रूप glycosaminoglycans के समान है, संयोजी ऊतक के अतिरिक्त सेलुलर मैट्रिक्स, जो इंजीनियरिंग biomimetic और सेल समर्थन scaffolds 41 के लिए इसके उपयोग को बढ़ावा दिया है का प्रमुख घटक है। कुल मिलाकर, chitosan हाइड्रोजेल थर्मल और लोचदार moduli कि संयोजी ऊतक 29, 41, 42, जो पीए परीक्षण के लिए आदर्श है के प्रतिनिधि हैं दिखा रहे हैं। देखभाल उचित मोटाई (50 माइक्रोन), कम ऑप्टिकल मैलापन और अच्छा एकरूपता के साथ फिल्मों प्राप्त करने के लिए लिया जाना चाहिए। ध्यान दें कि चरण 3 में दिए गए खुराक अनुकूलित किया गया है। chitosan में murine मैक्रोफेज के चिपचिपा निलंबन परिश्रम के साथ मिलाया जाना चाहिए कदम के अनुसार 3.2। इन निर्देशों के साथ, इन फिल्मों को पहले से ही अलग-अलग आकार 6 में सोना nanorods के पीए रूपांतरण की स्थिरता तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया गया है।

possiप्रोटोकॉल के ble संशोधनों cationic सोना nanorods और चरणों में सेलुलर वाहन 1 और 2 के चरण 1 में विधि वृद्धिशील सुधार, उदाहरण के लिए विषय हो सकता है की तैयारी, सेल मर्मज्ञ एजेंट के प्रतिस्थापन या खूंटी की लंबाई से शामिल किस्में आदि के क्रम में, ट्यूमर जुड़े मैक्रोफेज के शरीर क्रिया विज्ञान के साथ किसी भी हस्तक्षेप को कम करने के लिए। कि मैक्रोफेज के लिए विशिष्ट हैं ligands के उपयोग के लिए एक विकल्प हो सकता है 43। अन्य मापदंडों कि कणों के तेज को प्रभावित कर उनके आकार और आकार 33 और उनके अकार्बनिक कोटिंग शामिल हैं। उदाहरण के लिए, सिलिका का एक खोल अधिक परिष्कार और अधिक विदेशी सामग्री की कीमत पर, उच्च internalization 44, एकत्रीकरण 17 और पीए स्थिरता 7 के खिलाफ ऑप्टिकल स्थिरता का एक संयोजन दे सकता है। हम अनुमान internalization की endosomal मार्ग एक आम प्रभाव 33, 43, 44, हो सकता है कि 45। चरण 2 से कोशिकाओं की एक महत्वपूर्ण परीक्षा चल रही है और ऑप्टिकल विपरीत, व्यवहार्यता और इन विट्रो में और vivo में कीमोटैक्टिक गतिविधि की सबसे अच्छी व्यवस्था अभी भी एकाग्रता और ऊष्मायन की अवधि के मामले में plasmonic कणों की खुराक को समायोजित करने की आवश्यकता हो सकती है। हालांकि कोशिकाओं और हमारे हाथ में प्रारंभिक सबूत की आकृति विज्ञान एक कम cytotoxicity सुझाव देते हैं, इन मानकों की जांच इस काम के दायरे से परे है। एक और परिप्रेक्ष्य प्रतिरक्षा प्रणाली को 46 और प्राथमिक कोशिकाओं के अन्य कोशिकाओं है, जो एक मामला-दर-मामला आधार पर चुना जा सकता है के साथ कदम 2 पुन: पेश करने के लिए होगा। दरअसल, हम अटकलें धारणा मिलाना है कि उनके electrokinetic क्षमता के साथ कणों की तेज सबसे बहुमुखी है।

प्रोटोकॉल की सीमाएं, जीवित कोशिकाओं के बजाय तय कोशिकाओं का उपयोग करने की आवश्यकता शामिल हैं क्योंकि चरण 3 में नुस्खे सेल के संरक्षण के साथ असंगत हैंlular व्यवहार्यता। अन्य प्रतिबंध कदम 4.4 में एक जांच प्रभाव के निर्धारण में एक पर्याप्त SNR की जरूरत है, जो ऑप्टिकल absorbance और फिल्म के photostability की पर्याप्त संयोजन में तब्दील करने के लिए संबंधित हैं।

अंत में, हम तैयार करने के लिए और सेलुलर वाहनों है कि photoacoustic इमेजिंग के लिए इसके विपरीत एजेंट के रूप में संभव है की एक कार्यात्मक लक्षण वर्णन प्रदर्शन करने के लिए एक अभिनव प्रोटोकॉल का वर्णन किया है। हमने पाया है कि सोने की शुरूआत murine मैक्रोफेज में nanorods नकारात्मक उनके photostability को प्रभावित नहीं करता है। हमारे वर्तमान काम का ध्यान इन कोशिकाओं के शरीर क्रिया विज्ञान पर है, उनकी व्यवहार्यता और कीमोटैक्टिक गतिविधि के लिए एक विशेष ध्यान के साथ। भविष्य में, इस विधि अलग सेलुलर ऑप्टिकल विपरीत एजेंटों के विभिन्न समाधान युक्त वाहनों की तैयारी की जांच के लिए परीक्षण किया जाएगा। पीए जांच भी, इन विट्रो में घातक कोशिकाओं के लिए ऑप्टिकल विपरीत एजेंटों की targetability परीक्षण करने के लिए सेवा कर सकते हैंसेलुलर वाहनों के उपयोग के बिना।

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Disclosures

लेखकों घोषणा की कि वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि।

Acknowledgments

इस काम आंशिक Eranet + परियोजनाओं LUS बुलबुला और बीआई-TRE की सीमा के भीतर Regione Toscana और यूरोपीय समुदाय द्वारा समर्थित किया गया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hexadecyltrimethylammonium bromide Sigma-Aldrich H6269 To synthesize gold nanorods
Gold(III) chloride trihydrate Sigma-Aldrich 520918 To synthesize gold nanorods
Silver nitrate Sigma-Aldrich S6506 To synthesize gold nanorods
L-ascorbic acid Sigma-Aldrich A5960 To synthesize gold nanorods
Sodium borohydride Sigma-Aldrich To synthesize gold nanoseeds
MeO-PEG-SH Iris Biotech PEG1171 To PEGylate gold nanorods. Molecular weight about 5,000 Da.
Acetic acid Sigma-Aldrich 320099 To PEGylate gold nanorods and solubilize chitosan
Sodium acetate Sigma-Aldrich S8750 To PEGylate gold nanorods
(11-Mercaptoundecyl)-N,N,N-trimethylammonium bromide Sigma-Aldrich 733305 To modify gold nanorods with quaternary ammonium compounds
Dimethyl sulfoxide Sigma-Aldrich 276855 To solubilize (11-mercaptoundecyl)-N,N,N-trimethylammonium bromide
Polysorbate 20 Sigma-Aldrich P2287 To centrifuge PEGylated gold nanorods
PBS Lonza BE17-516F To suspend gold nanorods before incubation with cells and to treat pellets of cells
J774a.1 ATCC TIB-67 Monocyte/macrophage murine cell line
DMEM Lonza BE12-707F Cell culture medium
FBS Lonza DE14-801F To be added to cell culture medium
L-glutamine Lonza BE17-605E To be added to cell culture medium
Penicillin/streptomycin Lonza DE17-602E To be added to cell culture medium
Petri dish NEST 705001 Cell culture dish
Cell scraper EuroClone ES7018 To detach cells
Formaldehyde Fluka 47630 To fix cells
Chitosan, low molecular weight Sigma-Aldrich 448869 75-85% deacetylated. Molecular weight about 120,000 Da.
Sodium hydroxyde Sigma-Aldrich 306576 To insolubilize chitosan and generate the hydrogel
Polystyrene cell culture plates NEST 702011 Used as molds to fabricate chitosan hydrogels
Optical parametric oscillator pumped by the third harmonic of a Q-switched Nd:YAG laser Continuum, Santa Clara, USA Surelite OPO plus Source of optical excitation for photoacoustic tests
Pyroelectric detector  Gentec, Quebec, Canada QE8SP To monitor optical fluence for photoacoustic tests
Pre amplified needle hydrophone Precision Acoustic, Dorset, UK Model with 1 mm sensor diameter and 1-20 MHz frequency range To measure photoacoustic signals

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References

  1. Ratto, F., Matteini, P., Centi, S., Rossi, F., Pini, R. Gold nanorods as new nanochromophores for photothermal therapies. J. Biophotonics. (1-2), 4-41 (2011).
  2. Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. The golden age: gold nanoparticles for biomedicine. Chem. Soc. Rev. 41, 2740-2779 (2012).
  3. Hahn, M. A., Singh, A. K., Sharma, P., Brown, S. C., Moudgil, B. M. Nanoparticles as Contrast Agents for in-Vivo Bioimaging: Current Status and Future Perspectives. Anal. Bioanal. Chem. 399 (1), 3-27 (2011).
  4. Dreaden, E. C., Austin, L. A., Mackey, M. A., El-Sayed, M. A. Size matters: gold nanoparticles in targeted cancer drug delivery. Ther. Deliv. 3 (4), 457-478 (2012).
  5. Manohar, S., Ungureanu, C., Van Leeuwen, T. G. Gold nanorods as molecular contrast agents in photoacoustic imaging: The promises and the caveats. Contrast Media Mol. Imaging. 6 (5), 389-400 (2011).
  6. Cavigli, L., et al. Size Affects the Stability of the Photoacoustic Conversion of Gold Nanorods. J. Phys. Chem. C. 118 (29), 16140-16146 (2014).
  7. Chen, L. -C., et al. Enhanced photoacoustic stability of gold nanorods by silica matrix confinement. J. Biomed. Opt. 15 (1), 016010 (2010).
  8. Ratto, F., et al. CW laser-induced photothermal conversion and shape transformation of gold nanodogbones in hydrated chitosan films. J. Nanopart. Res. 13, 4337-4348 (2011).
  9. Mercatelli, R., et al. Quantitative readout of optically encoded gold nanorods using an ordinary dark-field microscope. Nanoscale. 5 (20), 9645-9650 (2013).
  10. Von Maltzahn, G., et al. Computationally guided photothermal tumor therapy using long-circulating gold nanorod antennas. Cancer Res. 69 (9), 3892-3900 (2009).
  11. Jokerst, J. V., Cole, A. J., Van De Sompel, D., Gambhir, S. S. Gold nanorods for ovarian cancer detection with photoacoustic imaging and resection guidance via Raman imaging in living mice. ACS Nano. 6 (11), 10366-10377 (2012).
  12. Huang, X., et al. A reexamination of active and passive tumor targeting by using rod-shaped gold nanocrystals and covalently conjugated peptide ligands. ACS Nano. 4 (10), 5887-5896 (2010).
  13. Alkilany, A. M., Thompson, L. B., Boulos, S. P., Sisco, P. N., Murphy, C. J. Gold nanorods: Their potential for photothermal therapeutics and drug delivery, tempered by the complexity of their biological interactions. Adv. Drug Deliv. Rev. 64, 190-199 (2012).
  14. Centi, S., et al. In vitro assessment of antibody-conjugated gold nanorods for systemic injections. J. Nanobiotechnology. 12, 55 (2014).
  15. Jain, P. K., Eustis, S., El-Sayed, M. A. Plasmon coupling in nanorod assemblies: Optical absorption, discrete dipole approximation simulation, and exciton-coupling model. J. Phys. Chem. B. 110 (37), 18243-18253 (2006).
  16. Funston, A. M., Novo, C., Davis, T. J., Mulvaney, P. Plasmon coupling of gold nanorods at short distances and in different geometries. Nano Lett. 9 (4), 1651-1658 (2009).
  17. Mazzoni, M., Ratto, F., Fortunato, C., Centi, S., Tatini, F., Pini, R. Partial Decoupling in Aggregates of Silanized Gold Nanorods. J. Phys. Chem. C. 118 (34), 20018-20025 (2014).
  18. Lapotko, D. O., Lukianova, E., Oraevsky, A. A. Selective laser nano-thermolysis of human leukemia cells with microbubbles generated around clusters of gold nanoparticles. Lasers Surg. Med. 38 (6), 631-642 (2006).
  19. Choi, M. R., et al. A cellular trojan horse for delivery of therapeutic nanoparticles into tumors. Nano Letters. 7 (12), 3759-3765 (2007).
  20. Dreaden, E. C., Mwakwari, S. C., La Austin,, Kieffer, M. J., Oyelere, A. K., El-Sayed, M. A. Small molecule-gold nanorod conjugates selectively target and induce macrophage cytotoxicity towards breast cancer cells. Small. 8 (18), 2819-2822 (2012).
  21. Yang, T. D., et al. Real-time phase-contrast imaging of photothermal treatment of head and neck squamous cell carcinoma: an in vitro study of macrophages as a vector for the delivery of gold nanoshells. J. Biomed. Opt. 17 (12), 128003 (2012).
  22. Vigderman, L., Manna, P., Zubarev, E. R. Quantitative Replacement of Cetyl Trimethylammonium Bromide by Cationic Thiol Ligands on the Surface of Gold Nanorods and Their Extremely Large Uptake by Cancer Cells. Angew. Chem. Int. Ed. (English). 51 (3), 636-641 (2012).
  23. Richard, J. P., et al. Cell-penetrating peptides: A reevaluation of the mechanism of cellular uptake. J. Biol. Chem. 278 (1), 585-590 (2003).
  24. Delehanty, J. B., Boeneman, K., Bradburne, C. E., Robertson, K., Bongard, J. E., Medintz, I. L. Peptides for specific intracellular delivery and targeting of nanoparticles: implications for developing nanoparticle-mediated drug delivery. Ther. Deliv. 1, 411-433 (2010).
  25. Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. Preparation and growth mechanism of gold nanorods (NRs) using seed-mediated growth method. Chem. Mater. 15 (10), 1957-1962 (2003).
  26. Ratto, F., Matteini, P., Rossi, F., Pini, R. Size and shape control in the overgrowth of gold nanorods. J. Nanopart. Res. 12 (6), 2029-2036 (2009).
  27. Niidome, T., et al. PEG-modified gold nanorods with a stealth character for in vivo applications. J. Control. Release. 114 (3), 343-347 (2006).
  28. Tatini, F., et al. Size dependent biological profiles of PEGylated gold nanorods. J. Mater. Chem. B. 2, 6072-6080 (2014).
  29. Matteini, P., Ratto, F., Rossi, F., Centi, S., Dei, L., Pini, R. Chitosan films doped with gold nanorods as laser-activatable hybrid bioadhesives. Adv. Mater. 22 (38), 4313-4316 (2010).
  30. Matteini, P., Ratto, F., Rossi, F., de Angelis, M., Cavigli, L., Pini, R. Hybrid nanocomposite films for laser-activated tissue bonding. J. Biophotonics. 5 (11-12), 868-877 (2012).
  31. Matteini, P., Tatini, F., Cavigli, L., Ottaviano, S., Ghini, G., Pini, R. Graphene as a photothermal switch for controlled drug release. Nanoscale. 6, 7947-7953 (2014).
  32. Ratto, F., Witort, E., et al. Plasmonic Particles that Hit Hypoxic Cells. Adv. Funct. Mater. 25 (2), 316-323 (2015).
  33. Chithrani, D. B. Intracellular uptake, transport, and processing of gold nanostructures. Molec. Membrane Biol. 27 (7), 299-311 (2010).
  34. Mitchem, J. B., et al. Targeting tumor-infiltrating macrophages decreases tumor-initiating cells, relieves immunosuppression, and improves chemotherapeutic responses. Cancer Res. 73 (3), 1128-1141 (2013).
  35. Mantovani, A., Allavena, P. The interaction of anticancer therapies with tumor-associated macrophages. J. Exp. Med. 212 (4), 435-445 (2015).
  36. Panni, R. Z., Linehan, D. C., DeNardo, D. G. Targeting tumor-infiltrating macrophages to combat cancer. Immunotherapy. 5 (10), 1075-1087 (2013).
  37. Oh, E., et al. Cellular uptake and fate of PEGylated gold nanoparticles is dependent on both cell-penetration peptides and particle size. ACS Nano. 5 (8), 6434-6448 (2011).
  38. Yuan, H., Fales, A. M., Vo-Dinh, T. TAT peptide-functionalized gold nanostars: Enhanced intracellular delivery and efficient NIR photothermal therapy using ultralow irradiance. J. Am. Chem. Soc. 134 (28), 11358-11361 (2012).
  39. Ladest, S., Fales, A. M., Domard, A. Multi-membrane hydrogels. Nature. 452, 76-79 (2008).
  40. Matteini, P., et al. Photothermally activated hybrid films for quantitative confined release of chemical species. Angew. Chem. Int. Ed. (English). 52, 5956-5960 (2013).
  41. Khor, E., Lim, L. Y. Implantable applications of chitin and chitosan. Biomaterials. 24 (13), 2339-2349 (2003).
  42. Kennedy, L. C., et al. T cells enhance gold nanoparticle delivery to tumors in vivo. Nanoscale Res. Lett. 6 (1), 283 (2011).
  43. Pissuwan, D., Valenzuela, S. M., Killingsworth, M. C., Xu, X., Cortie, M. B. Targeted destruction of murine macrophage cells with bioconjugated gold nanorods. J. Nanopart. Res. 9 (6), 1109-1124 (2007).
  44. Jokerst, J. V., Thangaraj, M., Kempen, P. J., Sinclair, R., Gambhir, S. S. Photoacoustic imaging of mesenchymal stem cells in living mice via silica-coated gold nanorods. ACS Nano. 6 (7), 5920-5930 (2012).
  45. Ding, H., et al. Gold nanorods coated with multilayer polyelectrolyte as contrast agents for multimodal imaging. J. Phys. Chem. C. 111 (34), 12552-12557 (2007).
  46. Esposito, G., et al. et al. In vivo laser assisted microvascular repair and end-to-end anastomosis by means of indocyanine green-infused chitosan patches: A pilot study. Lasers Surg. Med. 45 (5), 318-325 (2013).

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जैव अभियांत्रिकी अंक 111 Plasmonic कणों सोना nanorods chitosan सेलुलर वाहनों मैक्रोफेज Photoacoustic माइक्रोस्कोपी photostability
तैयारी और Photoacoustic युक्त सोना nanorods सेलुलर वाहन का विश्लेषण
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Cavigli, L., Tatini, F., Borri, C.,… More

Cavigli, L., Tatini, F., Borri, C., Ratto, F., Centi, S., Cini, A., Lelli, B., Matteini, P., Pini, R. Preparation and Photoacoustic Analysis of Cellular Vehicles Containing Gold Nanorods. J. Vis. Exp. (111), e53328, doi:10.3791/53328 (2016).

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