Abstract
Hjerneslag rammer hvit substans utgjør opptil 25% av kliniske slag presentasjoner, oppstår stille til priser som kan være 5-10 ganger større, og bidrar vesentlig til utviklingen av vaskulær demens. Få modeller av fokus hvit substans slag finnes, og denne mangelen på egnede modeller har hemmet forståelse av neurobiologic mekanismene som er involvert i skade respons og reparasjon etter denne type slag. Den største begrensningen av andre subkortikale takts modellene er at de ikke fokalt begrense infarkt til den hvite saken eller har primært blitt validert i ikke-murine arter. Dette begrenser muligheten til å bruke det store utvalget av murine forskning verktøy for å studere nevrobiologi av hvit substans hjerneslag. Her presenterer vi en metode for pålitelig produksjon av et samlings slag i murine hvit substans ved hjelp av en lokal injeksjon av en irreversibel eNOS inhibitor. Vi presenterer også flere varianter av den generelle protokollen inkludert to unike stereovariasjoner, retrograd neuronal sporing, samt merking frisk vev og disseksjon som i stor grad utvide den potensielle anvendelser av denne teknikken. Disse variasjonene kan flere fremgangsmåter for å analysere neurobiologic virkningene av denne felles og studerte form av slag.
Protocol
Bruk av dyr i denne protokollen er utført i henhold til prosedyrer godkjent av University of California Los Angeles Animal Care og bruk komité.
Merk: Begynn med å identifisere målet murine befolkningen. I tidligere studier, har bare hann vill type C57 / BL6 mus blitt brukt, men forskjellige transgene eller knockout-mus kan også brukes. Merk at stereotaktiske koordinater er basert på C57 / BL6 anatomi. Det anbefales at hver bruker i utgangspunktet bekrefte lokalisering av hjerneslag til hvit substans.
1. Hvit Matter Stroke Induksjon - Medial Vinklet Approach
- Begynn med å fremstille et trukket glass pipette ved hjelp av 0,5 mm kapillar-rør slik at den ytre diameter er mellom 15-25 mikrometer 11.
- Fremstille en steril 10 ul delmengde av L-Nio (N (5) - (1) -iminoethyl-L-ornitin-HCl) ved 27,4 mg / ml (130 um) i steril 0,9% normalt saltvann.
- Forhånds fylle trukket glass pipettemed et lite volum av L-Nio (2-5 ul) ved å feste glass til pipetten slange koblet til en vakuumledning. Lå pipetten flatt på benken toppen og sett trakk enden i L-Nio løsning.
- Påfør vakuum inntil minst 2 mm i 0,5 mm del av pipetten er fylt. Slå av vakuum og trekke pipetten. Sett det til side til trinn 1.12.
- Plassere musen i en induksjonskammeret og indusere anestesi i mus ved anvendelse av standard 32% isofluran strømme gjennom en fordamper (5 l / min inhalert med 5 l / min oksygen og 0,5 l / min N2) i 1 min eller inntil dypt bedøvet. Overfør musen til en stereotaktisk apparat utstyrt med en stereomikroskop. Gi vedlikehold anestesi ved bruk av 32% isofluran strømme gjennom en fordamper (2 l / min inhalert med 5 l / min oksygen og 0,5 l / min N2) og en nesekonus. Sjekk anestesidybden med en tå klype.
- Juster injeksjon armen til 36 °.
- Affixa trukket glass pipette holder til den distale enden av et lavt volum trykk innsprøytningssystem og fest den til injeksjon arm av stereooppsett.
- Coat bedøvet dyret værhår med vaselin og sted kunstig tåre salve over begge øynene. Forbered en steril kirurgiske feltet ved å plassere en steril drapere over dyrets hode med en 5-10 cm åpning over hodet. Forbered en aspetic kirurgisk overflaten ved å barbere pelsen liggende skallen. Rengjør hodebunnen med vekslende Betadine og 70% spritservietter.
- Lag en 1,5 cm midtlinjen skalp snitt med sterile gode saks for å eksponere skallen overflaten. Tørk skallen med en steril bomullspinne og bruker en stereomikroskop ved 1-3X forstørrelse, fjerne eventuelle overliggende periostal vev ved hjelp av en steril mikro punkt verktøy.
- Marker Bregma som et referansepunkt ved hjelp av en fin spiss markør.
- Bor et 2 mm ellipitical kraniotomi ved hjelp av en steril fin stip kirurgisk borekronen0; begynner baktil på Bregma og utvide anteriorly like til venstre for midtlinjen. Fjerne bein fragmenter og overliggende bløtvev slik som cerebral cortex kan visualiseres.
- Hold kirurgiske feltet og kortikale overflaten fuktig ved midlertidig å bruke dråper sterilt saltvann.
- Påføre et trukket glass pipette til injektoren arm av stereotaktisk apparatur. Juster den distale enden av pipetten med Bregma og nullstille stereotaktiske koordinater.
- Advance pipetten til den første anterior / posterior (A / P) og mediale / laterale (M / L) koordinatene gitt i tabell 1.
- Advance pipetten til kortikale overflaten og null dorsal / ventrale (D / V) måling.
- Sakte går pipetten inn i hjernen til den når den første D / V koordinere i tabell 1.
- Ved hjelp av et lavt volum trykk injeksjonssystem innstilt på 20 psi i 20 ms pulser, injisere 100 nl av L-Nio inn i hjernen og vente 5 min for å forhindre tilbakeløpopp pipetten sporet.
- Bruk en kalibrert reticle i okularet av stereotaktisk mikroskop og en forstørrelse på 3X.
- Følgelig forskyve et totalt 0,100 mm 3 (0,5 mm lengde i en pipette diameter 0,5 mm, tilsvarende 100 nl) fra det trukket glass pipette for hvert sett av koordinater. Ved å bruke en reticule, måle og standardisere siden hver satt opp varierer avhengig av forstørrelse og vekter som brukes.
- For nøyaktig måling volumet under hver injeksjon, nærmer vinklet pipette med mikroskopet fra siden slik at luften-fluid menisken har en sagittal visning. Menisken skal vises i det samme fokalplan av både den indre og ytre vegg av pipetten.
- Sakte trekke pipette og gjenta trinn 1.13-1.16.3 ved den andre og tredje sett av koordinater som er gitt i tabell 1.
- Etter den siste injeksjonen, fjern pipette og plassere nok bein voks til å fylle kraniotomi nettstedet. ENpproximate kantene av hodebunnen såret og bindes med dermal klebemiddel.
- Injisere 0,1 ml av 0,5% Marcaine inn i sårkantene ved hjelp av en steril 30 G nål for å forhindre for å hindre lokal smerte forbundet med hodebunnen innsnitt.
- Gå tilbake dyret til bolig og forsyningspostoperativ antibiotika (0,48 mg / ml trimetoprim-sulfametoksazol, eller 0,5 mg / ml Levofloxacin) i drikkevannet i 5 dager.
2. Hvit Matter Stroke Induksjon - Bakre Vinklet Approach
- Utfør trinn 01.01 til 01.12 som i medial vinklet tilnærming protokollen, bortsett justere injeksjon arm av stereooppsett til 45 grader orientert anterior til bakre.
- Advance pipetten til den første A / P og M / L koordinatene gitt i Tabell 2.
- Komplett resten av trinnene 1.14-1.20 som i den laterale vinklet tilnærming protokollen.
3. Retrograd neuronal merking
- Forbered en steril 10ul alikvot av L-Nio på 54,8 mg / ml i 0,9% normalt saltvann.
- Forbered en steril prøve av 20% Fluororuby (eller 20% biotinylert dekstran amin eller 2% Fluorogold) i 0,9% vanlig saltvann.
- Fortynn sammen 1: 1 til endelige konsentrasjoner på 27,4 mg / ml L-Nio og 10% Fluororuby.
- Utfør slag protokollen som ovenfor i trinn 1.3-1.23.
- Visualiser opprinnelig fluorescerende tracer i vev delen av perfusjon fiksering, cryosectioning og mikroskopi som beskrevet tidligere åtte.
4. Tissue Processing for immunfluorescens
- På en passende post-takts intervallet fra 3 timer til 14 dager etter hjerneslag, avlive mus via isofluran overdose eller lokal IACUC godkjent prosedyre.
- Åpne brysthulen ved hjelp av vinklede saks og sette inn en 23 G sommerfugl nål inn i venstre hjertekammer.
- Plasser et lite kutt i høyre atrium hjelp av gode saks for å tillate en strøm spor for perfusjon væske.
- Tran perfuse med 30-40 ml kald fosfat-bufret saltvann, etterfulgt av 30-40 ml kald 4% paraformaldehyd ved en hastighet på 10 ml / min ved RT.
- Halshogge musen og fjerne hjernen ved hjelp av steril saks for å åpne skallen posteriorly og deretter forsiktig fjerne den overliggende skallen med en slikkepott, plasserer hjernen i kaldt 4% PFA i 24 timer, og deretter overføre til 30% sukrose i PBS i 48 timer .
- Forbered førti mikron flytende delene med en cryostat og utføre antistoff behandling som tidligere beskrevet 6-8. I denne studien bruke følgende antistoffer: kanin anti-neurofilament 200 (1: 500 fortynning); kanin anti-vimentin (1: 500); geit-anti-GFAP (1: 500); kanin anti-Iba-en (1: 1000).
5. Tissue Processing for Protein eller RNA-analyse
- På en passende post-takts intervallet fra 3 timer til 14 dager etter hjerneslag, avlive via isofluran overdose eller lokal IACUC godkjent prosedyre.
- halshogge detmus og fjerne hjernen ved hjelp av steril saks for å åpne skallen posteriorly og deretter forsiktig fjerne den overliggende skallen med en slikkepott.
- Sette inn en steril spatel 4 mm på forsiden av hjernen for å bryte luktelappen og synsnerver. Løft forsiktig hjernen ut av calvarium og plasser i iskald disseksjon buffer (1 x Hanks Balanced Salt Solution, 25 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 35 mM glukose, 4 mM natriumbikarbonat, og 0,01 mg / ml cykloheksamid).
- Ved hjelp av en hjerne blokk og sterile nye barberblader, forberede 2-3 mm plater som inneholder hjerneslag og sted i kald disseksjon buffer.
- Under en dissekere mikroskop, identifisere hvit substans underliggende motor cortex i det injiserte halvkule. På lengre post-takts mellomrom, kan regionen bli visuelt identifisert av fokal nekrose og myelin blekhet.
Merk: Ved tidligere etter slag intervaller, injeksjon av L-Nio blandet med en ul 10% Fast Grønn kan tillate visuell identifisering av hjerneslag (- Under veiledning av en dissekere mikroskop og med en ny skalpell, nøye dissekere regionen hvit substans som inneholder slag, identifisert av enten Fast Grønn merking eller tap vev. Fjern liggende cortex og underliggende striatum som ønsket.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved hjelp av modellen presentert, kan den hvite substansen liggende forbena sensorisk cortex pålitelig være målrettet. Dette kjemisk induserte slagmodell, produserer fokal aksonal og myelin tap, astrocytosis, og microgliosis (figur 1), slik det er typisk sett i humane lakunære infarkter. Ved å bruke tre injeksjoner, er en klinisk nyttig modell etablert med tidlig verdifall på forbena motoriske oppgaver 7 og en liten, men signifikant del av hjernevevet erfaringer iskemi som immunhistokjemiske, Immunofluorescent, og biokjemiske teknikker er gjennomførbare og pålitelig i den kvantitative nivå. Ved tidlige tidspunkter (t) etter hjerneslag induksjon, kan forandringer i aksonal molekylær organisasjon påvises (figur 2). Etter 7 dager fullfører hjerneslag sin modning til en omskrevet område av aksonal tap (Figur 1a). I våre hender, produserer denne metoden et samlings hvit substans lesjon den tilnærmettely 800 um i horisontal diameter og som strekker seg omtrent 1 mm langs det anterior-posterior aksen av corpus callosum. Ved 7 dager, er den gjennomsnittlige totale infarktstørrelsen omtrent 0,200 mm 3, og vil ha en elliptisk form. Vi har observert ca. 10% variasjon i størrelse både slag mellom dyr og mellom seksjonene, avhengig av hvor i ellipsen seksjonen finner sted. Ytterligere vekst i størrelsen av infarktet er sjelden sett ut over 7 dager.
Tilsetningen av en samtidig injeksjon av dekstran amin resulterer i betydelig neuronal merking i lag 5 og 6 lag neuronale cellelegemer som har aksoner som rager gjennom regionen av slag (figur 3). Liggende kortikale nevroner som ikke ødelegges av de narre aspekter av fremgangsmåten (passering av fine nål), gjennomgå distal aksonal skade, og kan identifiseres ved inkluderingen av en tracer med den L-Nio preparat. Denne tilnærmingen var bruk d for å demonstrere dynamiske endringer i axon innledende segment etter hjerneslag 8.
Mens den lille størrelsen av området for vev påvirket av slag begrenser bruken av andre vanlige teknikker så som 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) farging, kan den hvite substansen slag region bli identifisert i friskt vev. Tilsetningen av et vanlig fargestoff så som Fast Grønn frembringer en identifiserbar region av vev som kan bli dissekert under et disseksjonsmikroskop (figur 4). Når dissekert dette vev kan anvendes for proteinanalyse med western blot eller immunopresipitering, eller for RNA isolering og analyse (figur 4C). Gjennom bruk av ulike transgene mus linjer, kan en rekke innovative tilnærminger brukes til å studere nevrobiologi etter samlings hvit substans hjerneslag inkludert celle skjebne kartlegging studier og laser capture mikrodisseksjon (Figur 4C).
telt "fo: keep-together.within-page =" 1 ">
Figur 1:. Focal hvit substans Stroke Bruke Både Medial og posterior Vinklet Approaches Immunofluorescent merking for nevrofilamenter (A, rød) viser graden av aksonal tap sju dager etter hjerneslag ved hjelp av den mediale tilnærming. Ved hjelp av den bakre vinklede tilnærmelse blir den hvite substansen slag lesjon rettet like over den laterale ventrikkel (B, C) og viser intens microglial (B) og astrocytic reaktivitet (C). To astrocyttkulturer mellomgløde markører, vimentin (rød) og glial fibrillary surt protein (GFAP, grønn), begge avdekke endringer i morfologi av hvit substans (fiber) astrocytter etter hjerneslag (C). Skala barer = 500 mikrometer. Klikk her for å se et større version av dette tallet.
Figur 2:. Hvit Matter Stroke Endrer aksonal Microdomain organisasjon innen tre timer av hvit substans slag induksjon, aksonal microdomain organisasjon på noden, preget av beta-IV spektrin (rød) og på paranode, preget av contactin-assosiert protein (caspr, grønn), er forstyrret (piler, B). Kontralaterale hvit substans axoner vise vanlig nodal, paranodal, og juxtaparanodal organisasjon (A og C), mens den ipsilaterale hvit substans viser nodal og paranodal forlengelse som er typisk for axoner med tapt axoglial kontakt (B og D). Scale bar = 5 mikrometer.
Figur 3: Retrograd Neuronal Labeling med hvit substans Stroke Identifiserer Individuell Nerveceller med aksonal skade. Samtidig injeksjon av fluorescerende dekstran amin (rød) på tidspunktet for slag induksjon tillater identifisering av enkeltnerveceller med aksoner skadet av slag. Mesteparten av merkingen skjer i aksoner innen Layer 5 og 6 nevroner i grunnskolen sensorimotor cortices overliggende strøk. Bilde representerer 7 dager etter hjerneslag. Scale bar = 500 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4:. Mikrodisseksjon av hvit substans Stroke lesjoner for bruk i biokjemiske og Transkripsjon Analyser Co-injeksjon av Fast Grønn på tidspunktet for hjerneslag induksjon tillater tidlig identifisering av de skadde regionen på 24 timer (A, øvre panel). Immunoblotting for spesifikke aksonal proteiner kan bli utført for å demonstrere reduksjoner i regionen av slag alene (A, nedre panel). På lengre tids poeng, kan regionen hvit substans hjerneslag (venstre panel) skal fokalt dissekert uten spesiell merking (B). Øvre høyre panel viser området av hvit substans etter fjerning av dissekert region, mens den høyre panel lavere viser dissekert region av hvit substans inneholdende slag (B). PCR for oligodendrocytt-spesifikke gener ved bruk av RNA isolert fra dissekert regioner fra hvit substans (C). IL = ipsilaterale; CL = motsatt; c = kontroll; s = hjerneslag.
| injeksjon | Anterior / posterior | Medial / Lateral | Dorsal / Ventralt |
| 0,22 | 0,22 | -2,10 | |
| 2 | 0,70 | 0,15 | -2,16 |
| 3 | 1.21 | 0,15 | -2,18 |
Tabell 1: Stereo Koordinater for Lateral Vinklet Approach (i mm).
| injeksjon | Anterior / posterior | Medial / Lateral | Dorsal / Ventralt |
| -0,75 | -0,96 | -2,10 | |
| 2 | -1,00 | -0,96 | -2,05 |
| 3 | -1,25 | -0,96 | -2,00 |
Tabell 2: Stereo koordinater for posteriore Vinklet Approach (i mm).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Et antall tidligere modeller av subkortikal slag er blitt beskrevet blant annet brenn injeksjoner av endotelin-1 i den interne kapselen, subkortikal hvit substans og striatum hos rotte og mus 12-14 6,15. Nyere modeller av små brenn slag har benyttet kolesterol microemboli injeksjon i halspulsåren 16 og photothrombotic okklusjon av en enkelt trengende arteriole 17. Hver av disse modellene har både fordeler og ulemper 5. Den beskrevne modellen gir en lesjon som har en rekke egenskaper som etterligner menneskelig lacunar infarkt inkludert aksonal misdannelser og tap, myelin degradering, et samlings nekrotisk kjerne og en klinisk underskudd som er minimal, og viser ganske rask gjenoppretting avhengig av alder 7. Målretting murine hvit substans tillater et bredt spekter av genetiske manipulasjoner som kan understøtte mekanistiske undersøkelser.
den kritisketrinnene i protokollen omfatter å benytte nøyaktige stereotaktiske koordinater. Fordi murine hvit substans er liten i størrelse og varierer fra stamme til stamme, kan revisjon av stereotaktisk koordinatene være nødvendig, avhengig av alder og stammen av mus anvendt. Kontroll av volumet av injeksjons er også viktig, da dette er direkte korrelert til størrelsen på infarktet. Større injeksjoner vil produsere større slag som griper inn i overliggende cortex og underliggende striatum.
Focal injeksjon av ET-1 ved anvendelse av metode som er beskrevet her er blitt rapportert, men endotelin-1 ble vist å ha direkte parakrine effekter på oligodendrocytt differensiering og modning 10,18 forvirrer studiet av post-slag hvit substans biologi. I motsetning til L-Nio tilnærming er rettet mot endotelceller alene som gir et identisk lesjon og eliminerer eventuelle ledsagende parakrine effekter på de som er involvert i reaksjon skade cellene. L-Nio er ikke direkte cytotoksisk og selected dose ble bestemt av foreløpige dose eskalerings eksperimenter (data ikke vist). Den bakre vinklet tilnærming ble utviklet for å mer presist underslag axoner fra primære motor cortex produserer maksimal atferds underskudd som kan tilbakeføres til hvit substans skade. Den mediale vinklet tilnærming også skader motor cortex axonene men strekker seg mer sideveis og innebærer axoner underliggende primære sensoriske cortex.
Slaget lesjon utvides ganske raskt over det første 24-timers. Av syv dager, størrelsen på infarktet er maksimal, og vi har ikke observert signifikante lesjon vekst utover den tid. Andre cellulære hendelser og aksonal degenerasjon vil skje utover denne innledende fasen, men infarktstørrelsen målt ved nekrotiske kjernen vil ikke endres vesentlig i fravær av noen intervensjon.
Ko-injeksjon av nevroanatomi tracere ved slag identifiserer neuroner som opplever iskemisk aksonal skade. Ved hjelp av enten Sydenial eller posterior vinklet tilnærming, nevronale cellelegemer med skadet aksonal projeksjoner være uskadd. Dette skaper en nyttig modell for å studere effekten av ischemisk aksotomi på sentralnervesystemet neuroner. Vi har benyttet primært retrograd sporstoffer inkludert dekstran amin og Fluorogold, som både viser utmerket opptak av slagskadet aksoner. Ved å ansette et stort utvalg av transgene og knock-out mus linjer, kan brukere av denne protokollen undersøke den spesifikke rollen nevronale gener involvert i hvit substans slag skade respons og reparasjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen
Acknowledgments
SN og MDD fått støtte fra NIH K08 NS083740 og UCLA Department of Neurology. AJG erkjenner støtte av Dr. Miriam og Sheldon G. Adelson Medical Research Foundation og Larry L. Hillblom Foundation. KLN erkjenner takknemlig støtte fra American Heart Association 14BFSC17760005 ASA-Bugher Stroke Center. ILL, EGS og STC ble støttet av NIH R01 NS071481. JDH erkjenner støtte fra NIH K08 NS083740.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride | Calbiochem | 400600-20MG | |
| Isoflurane | Phoenix Pharmaceutical, Inc. | NDC 57319-559-06 | |
| Capillary tubes | World Precision Instruments | 50-821-807 | |
| Picospritzer | Parker Instrumentation | Picospritzer II | |
| Stereotactic setup | Kent Scientific | KSC51725 | |
| Pipette puller | KOPF | Model 720 | |
| Stereomicroscope SZ51 | Olympus | 88-124 | |
| Fine scissors | Fine Scientific Tools | 14084-08 | |
| Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8547 | |
| Curved Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8598 | |
| Blunt dissection tool | Fine Scientific Tools | 10066-15 | |
| Drill | Dremel | 8220-1/28 | |
| Drill bits | Fine Scientific Tools | 19007-05 | |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| Marcaine | HOSPIRA | NDC 0409-1610-50 | |
| Trimethoprim-Sulfamethaxole | STI Pharmacy | NDC 54879-007-16 | |
| Fluororuby | Fluorochrome Inc | 30 mg | |
| Paraformaldehyde | Fisher | O4042-500 | |
| Sucrose | Fisher | BP220-10 | |
| Cryostat | Leica CM3050 S | 14047033518 | |
| Glass slides | Fisher | 12-544-7 | |
| Fast Green | Sigma | F7252-5G | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ1500 | |
| 23 G butterfly needle | Fisher | 14-840-35 | |
| 10x Hank's Balanced Salt Solution | Life Technologies | 14065056 | |
| 1 M HEPES-KOH, pH 7.4 | Affymetrix | 16924 | |
| D-Glucose | Sigma | G8270 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Cyclohexamide | Sigma | 01810 |
References
- Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129, 28-292 (2014).
- Saini, M., et al. Silent stroke: not listened to rather than silent. Stroke. 43, 3102-3104 (2012).
- Koton, S., et al. Burden and outcome of prevalent ischemic brain disease in a national acute stroke registry. Stroke. 44, 3293-3297 (2013).
- Jiwa, N. S., Garrard, P., Hainsworth, A. H. Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment: a systematic review. J Neurochem. 115, 814-828 (2010).
- Sozmen, E. G., Hinman, J. D., Carmichael, S. T. Models that matter: white matter stroke models. Neurotherapeutics. 9, 349-358 (2012).
- Sozmen, E. G., Kolekar, A., Havton, L. A., Carmichael, S. T. A white matter stroke model in the mouse: axonal damage, progenitor responses and MRI correlates. J Neurosci Methods. 180, 261-272 (2009).
- Rosenzweig, S., Carmichael, S. T. Age-dependent exacerbation of white matter stroke outcomes: a role for oxidative damage and inflammatory mediators. Stroke. 44, 2579-2586 (2013).
- Hinman, J. D., Rasband, M. N., Carmichael, S. T. Remodeling of the axon initial segment after focal cortical and white matter stroke. Stroke. 44, 182-189 (2013).
- McCall, T. B., Feelisch, M., Palmer, R. M., Moncada, S. Identification of N-iminoethyl-L-ornithine as an irreversible inhibitor of nitric oxide synthase in phagocytic cells. Brit j pharmacol. 102, 234-238 (1991).
- Gadea, A., Aguirre, A., Haydar, T. F., Gallo, V.
- Dean, D. A. Preparation (pulling) of needles for gene delivery by microinjection. CSH prot. , (2006).
- Hughes, P. M., et al. Focal lesions in the rat central nervous system induced by endothelin-1. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1276-1286 (2003).
- Whitehead, S. N., Hachinski, V. C., Cechetto, D. F. Interaction between a rat model of cerebral ischemia and beta-amyloid toxicity: inflammatory responses. Stroke. 36, 107-112 (2005).
- Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat. Behav Brain Res. 169, 206-211 (2006).
- Horie, N., et al. Mouse model of focal cerebral ischemia using endothelin-1. J Neurosci Methods. 173, 286-290 (2008).
- Wang, M., et al. Cognitive deficits and delayed neuronal loss in a mouse model of multiple microinfarcts. Neuroscience. 32, 17948-17960 (2012).
- Shih, A. Y., et al. The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit. Nat Neurosci. 16, 55-63 (2013).
- Jung, K. J., et al. The role of endothelin receptor A during myelination of developing oligodendrocytes. J Korean Med Sci. 26, 92-99 (2011).
