Summary
Den mest brukte metode for nanostrukturerte lipidbærer (NLC) syntese omfatter olje-i-vann-emulsjon, homogenisering og størkning. Dette ble endret her ved å bruke høy skjær spredning etter størkning for å oppnå en NLC med ønskelig størrelse, forbedret narkotika innkapsling og narkotika lasteeffektivitet som en potensiell bærer for dacarbazine levering.
Abstract
Den eneste formel dakarbazin (DAC) i klinisk anvendelse er intravenøs infusjon, presentere en dårlig terapeutisk profil på grunn av den lave dispersitet av medikamentet i vandig oppløsning. For å overvinne dette, ble en nanostrukturerte lipidbærer (NLC) bestående av glyserylpalmitostearat og isopropylmyristat utviklet for å innkapsle Dac. NLCS med kontrollert størrelse ble oppnådd ved anvendelse av høy skjærkraft dispersjon (HSD) etter størkning av olje-i-vann-emulsjon. Syntese parametere, inkludert overflateaktivt middel-konsentrasjon, hastighet og tid for HSD ble optimalisert for å oppnå den minste NLC med størrelse, polydispersion indeks og zeta-potensial på 155 ± 10 nm, 0,2 ± 0,01, og -43,4 ± 2 mV, respektivt. De optimale parametere ble også benyttet for Dac-lastet NLC forberedelse. Den resulterende NLC lastet med Dac besatt størrelse, polydispersion indeks og zeta potensial på 190 ± 10 nm, 0,2 ± 0,01, og -43,5 ± 1,2 mV, henholdsvis. Stoffet innkapsling efyteevne og medikament-last nådde 98% og 14%, respektivt. Dette er den første rapport om innkapsling av Dac ved hjelp NLC, noe som tyder på at NLC kan være en ny potensiell kandidat som legemiddelbærer for å forbedre den terapeutiske profilen av Dac.
Introduction
Dakarbazin (Dac) er et alkyleringsmiddel som utøver antitumoraktivitet gjennom nukleinsyrer metylering eller direkte DNA-skade, som fører til cellesyklus-stans og celledød 1.
Som et første linje kjemoterapeutisk middel, har Dac vært brukt alene eller i kombinasjon med andre kjemoterapeutiske medikamenter for behandling av forskjellige kreftformer 2-6. Det er det mest aktive middel hittil anvendt i behandling av kutan og metastatisk melanom, som er den mest aggressive formen for hudkreft 3,7,8. Responsraten er imidlertid bare 20% i beste fall, og den terapeutiske effekten er ofte ledsaget av alvorlige systemiske bivirkninger.
I sin naturlige form, er Dac hydrofil og er ustabil på grunn av sin foto 9. Den eneste tilgjengelige formel for klinisk bruk for tiden er et sterilt pulver som skal brukes i suspensjon for intravenøs infusjon 7,8. Den lave svarprosenten og høy systemisk toksisitet rspiste av stoffet er i stor grad tilskrives den dårlige løselighet i vann, derfor lav tilgjengelighet på målområde, og høy distribusjon på non-target områder, noe som begrenser den maksimale dosen av stoffet 10. Den hurtige nedbrytning og metabolisme etter intravenøs opptak sammen med utviklingen av medikamentresistens begrenser den kliniske anvendelsen og terapeutisk effekt av legemidlet 11. Derfor er det et presserende behov for å utvikle alternative Dac formuleringer for behandling av malignt melanom.
Kolloidale systemer som inneholder liposomer, har miceller eller nanostrukturerte partikler blitt intensivt undersøkt for deres bruk i levering av legemidler som vurderes av Marilene et al. 12 nanostrukturerte partikler som potensielle legemiddelbærere har vært å tiltrekke økt oppmerksomhet i det siste tiåret på grunn av deres evne til å øke narkotika lasting effektivitet, kontroll narkotika utgivelse, forbedre narkotika farmakokinetikk og biodistribusjon, og derfor reduce narkotika systemisk toksisitet 13. Bare noen få nanoformulations har imidlertid vært så langt for Dac levering undersøkt, som viser beskyttelse av medikamentet fra bildet degenerasjon, øket oppløselighet medikament, og forbedret terapeutisk effekt 10,14,15. Men disse formuleringene led av lav innkapslingspolymeren effektivitet, mens noen også bruke syntetiske polymernanopartikler som ikke er kostnadseffektivt.
Nanostrukturerte lipid bærere (NLC), laget av en blanding av fast og flytende lipider, har blitt utviklet for levering av legemidler 16,17. Medikamentene som skal innkapsles ofte er løselige i både væske- lipider og faste lipider faser 18, noe som resulterer i en høy lasting og kontrollert frigivelse 19. Denne studien tar sikte på å utvikle en ny Dac formulering basert på NLC-innkapsling hjelp glycerylpalmitostearat og isopropylmyristat som lipider. Fremstillingen involvert olje-i-vann-emulsjon, fordampning, størkning, og homogenization. Forberedelsene har vært preget av NLC størrelse, form, ultrastructure, og dispersitet, narkotika innkapsling effektivitet og narkotika lasting 20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Fremstilling av olje-i-vann-emulsjon
- Veie glyserylpalmitostearat (120 mg), isopropylmyristat (60 mg), d-α-tocopheryl polyetylenglykol suksinat (30 mg) og soyabønne lecitin (30 mg), og legge dem til 12,5 ml av organiske løsningsmidler (6,25 ml aceton og 6,25 ml etanol). Raskt å oppløse blandingen ved temperaturen 70 ° C (5 ° C over smeltepunktet av det faste lipid) i vannbad.
- Tilsett enten 125, 250 eller 375 mg av Poloxamer188 i 12,5 ml DDH 2 O for å oppnå 1-3% (henholdsvis) av Poloxamer 188 løsning, som er gjenstand for oppvarming ved den samme temperatur som ovenfor.
- Legge til den vandige fase fra trinn 1,2 til oljefasen fra trinn 1.1 dråpevis til dannelse av emulsjoner i henhold til magnetisk omrøring ved 400 rpm. Omrøring av emulsjonen ved 400 rpm i ytterligere 4 timer for å tillate fordampning av de organiske oppløsningsmidler.
2. størkning og Homogenisering
- La than emulsjon i et kaldt rom (4 ° C) i 2 timer for å størkne / krystalliserer.
- For å få NLC, utsette emulsjonen til høy ren spredning (HSD) med en homogenisator ved 10,000-15,000 rpm for 10-40 min.
3. Optimalisering av NLC Forberedelse
- Ta prøver fra trinn 2.2 med et overflateaktivt middel-konsentrasjon på 1, 2 og 3% gjennomgår HSD ved hastigheter på 10 000, 15 000 og 20 000 rpm, henholdsvis, og tidsintervaller på 10, 20, 30 og 40 min, henholdsvis,
- Undersøk prøver for partikkelstørrelse (PS), poly spredning indeks (PDI), morfologi og ultrastructure 20.
Merk: Parameterne som produserer partikler med den minste størrelsen (155 nm) og PDI (0,2) verdi er fastsatt som optimal.
4. Utarbeidelse av Dac-lastet NLC (NLC-Dac)
- Fremstille oljefasen løsning som beskrevet i trinn 1,1 med tilsetning av Dac (70 mg) før oppløsning av blandingen ved 70 ° C i vannbad.
- Prepare en vandig fase oppløsning som beskrevet i trinn 1.2 til 1% overflateaktivt middel, og legge til denne løsning som ble fremstilt i trinn 4.1 dråpevis for å danne en emulsjon i henhold til magnetisk omrøring ved 400 rpm. Omrøring av emulsjonen for ytterligere 4 timer for å fordampe de organiske løsningsmidler.
- La emulsjonen i et kaldt rom (4 ° C) i 2 timer for å størkne / krystalliseres som beskrevet i trinn 2, og til slutt, utsette emulsjonen for høy skjær dispersjon (HSD) ved bruk av de optimale parametere bestemt i trinn 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Forberedelsene av NLC og NLC-Dac bruker glycerylpalmitostearat og isopropylmyristat med ulike parametere ble preget for PS, PDI, morfologi og ultrastructure 20. PS og PDI av NLCS var surfaktant konsentrasjon, HSD hastighet og varighet avhengig. Som bedømt av PS og PDI av NLCS, ble de beste resultatene oppnådd med 1% av overflateaktivt middel og en ren dispersjon hastighet på 15.000 rpm i 30 minutter (figur 1 A, B og C), som derfor wwew valgt som den optimale parametere for NLC fremstillingen i denne studien.
Figur 1. Optimalisering av parametrene som brukes i NLC fremstilling. Den optimale tensidkonsentrasjonen og hastigheten og tiden for HSD ble bestemt i henhold til deres effekt på PS og PDI. (
Den optimale parametre ble brukt for NLC-Dac forberedelse. Den minste størrelse oppnådd var 150 ± 10 nm for NLC (figur 2A) og 190 ± 10 nm for NLC-Dac (figur 2B), begge med PDI på 0,2 ± 0,001, noe som indikerer en god ensartethet.
Figur 2. DLS måling av NLC (A) Optimal størrelsesfordeling av ren NLC.; (B) den optimale størrelsen fordeling av NLC-Dac.
(figur 3).
Figur 3. TEM avbildning av NLC og NLC-Dac. Både NLC og NLC-Dac viste en sfærisk form. (A) Basic NLC struktur omfatter en surfaktant lag (solid svart pil), flytende lipid matrise (hvit solid pil), og solide lipid krystaller (stiplede hvite piler); (B) NLC-Dac også utstilt grunnstrukturen som sett i NLC men surfaktant lag, flytende lipid matrise og solid lipid krystaller dukket utvidet; en ekstra understellet kunne ses inne i de faste lipid krystaller (indikert med stiplede sorte piler), som indikerer medikamentbelastning. Bar skala: 50 nm, Forstørrelse: 55,000X. Denne figuren har blitt forandret fra 20.
"1"> opplasting og innkapsling av Dac i NLC er angitt med størrelsen og strukturen endres som vist i figurene 2 og 3 hvor NLC-Dac viser et større format og endres interne strukturer sammenlignet med NLC. Den grunnleggende strukturen av NLC omfatter et overflateaktivt middel sjikt, et væske lipidmatriks og faste lipid krystaller (figur 3A). NLC-Dac oppviste også den grunnleggende struktur som en NLC, men med utvidede overflateaktivt middel lag, flytende lipid matriks og faste lipid krystaller, sammen med en ekstra bærekonstruksjon inne de faste lipid krystaller (figur 3B), som indikerer medikamentbelastning og innkapsling. De faste lipid Krystallene sett i NLC først tettere enn at det i NLC-Dac, noe som indikerer at det faste lipid er mindre krystallisert i NLC-Dac.
Stoffet innkapsling effektivitet (EF) og medikament-last (DL) prosentvis ble utledet fra følgende ligninger:
"Fo: keep-together.within-page =" 1 "> EE% = W 1 - W 2 / W 1 x 100 = 98,5%DL% = W 1 - W 2 / W 3 x 100 = 14%
hvor W en mengde Dac lagt i NLC, W to mengden av un-omsluttet Dac, W 3 mengden av lipider lagt 20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Lipidbaserte nanostrukturerte partikler er blitt benyttet for å tilveiebringe en høyt lipofil bærer for avgivelse av hydrofobe legemidler. En NLC er den andre generasjonen av fast lipid nanostrukturerte bærer, som er faste ved romtemperatur og ved kroppstemperatur. Inkorporering av et fast lipid inn i en flytende lipid i en NLC resulterer i en mindre perfekt krystalliseringen, og dermed øke den medikament-last effektivitet og også redusere utvisning av innkapslede stoffer under lagring.
For NLC syntese, involverer den mest brukte metode olje-i-vann-emulsjon, homogenisering og størkning / krystallisering 21,22. Homogeniseringen gjør det mulig NLCS å dispergere grundig i en vandig fase, mens størkningen ved lav temperatur tillater den indre oljefasen til å krystallisere. Forskjellige homogenisering fremgangsmåter er blitt rapportert blant annet magnetisk omrøring, ultralydbehandling, og HSD som anvendes før og / eller under størkn 23,24
I denne studien ble det brukte metoden i utgangspunktet fulgt for NLC forberedelse. Som et resultat var utilfredsstillende, ble metoden modifisert slik at HSD ble påført etter størkning. Denne endringen vist seg svært effektiv i partikkel generasjon, PS og PDI kontroll, og samtidig gjøre den NLC syntese enklere, sammenlignet med tidligere rapporter om NLC forberedelse ved hjelp av de samme lipider 23,25. Det var verdt å merke seg at lengden på fordampning (protokoll 1.3) og størkning (protokoll 2.1) er svært kritisk som for lang eller for kort tid ville ha negative effekter på den generasjonen av NLC.
Denne studien tyder på at NLC partikler og deres aggregering ble dannet under størkning. HSD kan forstyrre aggregering, som var muligens på grunn av hydrofob interaksjon mellom NLCS, og også stabilisere partiklene ved grundig remiksing dem med overflateaktivt stoff. Syntesefremgangsmåten ble optimalisert for eksempel thatt den NLC og NLC-Dac ble produsert med en størrelse 155 ± 10 nm og 190 ± 10 nm, henholdsvis, og en PDI på 0,2 ± 0,01. Den høye grad av ensartethet med partikkelstørrelser og de små PDI verdier angir at en tilstrekkelig dispersjon energi ble oppnådd og er godt fordelt i løsningen for avbrudd av partikkelaggregater. Det har blitt foreslått at partiklene av 100-200 nm ikke er utsatt for opptak av ikke-målrettede celler, inkludert mononukleære phagocytic system, og dermed ha en lang blodsirkulasjon tid in vivo 26,27, mens en PDI på mer enn 0,5 er en indikasjon partikkel aggregering 28; jo lavere PDI verdien er, jo høyere størrelsen homogenitet mellom partiklene 29. Ytterligere økning av HSD hastighet og tid over det optimale punktet kan resultere i ytterligere PS reduksjon, og følgelig en økning av vekselvirkninger mellom små partikler såvel som re-aggregering. Forskjellen i størrelse og struktur mellom NLC og NLC-Dac tyder på at Dac lasting og innkapsling var vellykket. Stoffet binding til det ytre lag av den NLC og innkapsling inne lipidmatriser gi mulighet for forlenget legemiddelfrigivelse, som kan innebære medikamentfrigjøring for det første fra det ytre lag, etterfulgt av frigjøring fra den flytende lipid matriks og deretter fra de faste lipid krystallene av NLC 30.
Foreløpig fire nanoformulations har vært forsøkt for levering av Dac som monoterapi. Den siste formuleringen rapportert designet for duell innkapsling av Dac og vitamin A 32. Men disse formuleringene led av en lav innkapslingseffektivitet og / eller forholdsvis kompliserte synteseprosedyrer. Dette er den første rapporten for innkapsling av Dac med en NLC, beviser en fordel fremfor andre kapslinger rapportert tidligere. NLC-Dac er lett å lage og presenterer høyere narkotika innkapsling og narkotika lasteeffektivitet 20. Den NLC-Dac viste nesten 50% avmedikament utgitt i første 2 timer mens de resterende slippes sakte i opptil 30 timer 20. Den tidlige frigivelse kan skyldes bindingen av legemidlet med overflateaktivt middel-lag på overflaten av NLC, som indikerer at denne formuleringen ikke kan være ideell for å erstatte formuleringen for tiden i klinisk bruk. Men stoffet i NLC-Dac dukket opp mer stabil sammenlignet med nanoemulsion rapportert tidligere 10. I tillegg er det lipid-baserte kjøretøyer blitt foreslått for behandling av kutant melanom og epidermoid karsinom gjennom topisk levering av legemidler 32,10, noe som indikerer at NLC-Dac utviklet i denne studien kan også være potensielt fordelaktig for lokal påføring hvor tidlig medikamentfrigjøring ikke ville potensielt føre til alvorlig systemisk toksisitet.
På grunn av den kollektive begrensninger med de tilgjengelige stoffet levering bærere utviklet så langt, trengs det mer forskning for å utvikle mer avanserte nanomaterialer for Dac levering for målrettetkreftbehandling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noe å avsløre.
Acknowledgments
Han anerkjenner at Saudi Arabia finansierte stipend (I821) for å gjøre forskningen mulig. Forfatterne er takknemlige for Dr Xianwei Liu for kompetansestøtte i TEM-analyse ved Cranfield University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dacarbazine (DAC) | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | D2390-100MG | drug used for uploading |
| glyceryl palmitostearate | Gattefossé (Saint_Priest_cédex, France) | 85251-77-0 | solid lipid |
| d-α- Tocopherol polyethylene glycol succinate (TPGS) | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 57668 | lipid phase surfactant |
| Poloxamer 188 | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 15759-1KG | liqiud phase surfactant |
| Acetone | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 650501-1L | organic solvent |
| Ethanol | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 459836-1L | organic solvent |
| Soybean lecithin (SL) | Cuisine Innovation (Dijon, France) | SLL1402 | lipid phase surfactant |
| Double-distilled water was collected in our laboratory from | Millipore-Q Gradient A10 ultra-pure water system (Millipore, France) | SAS - 67120 | aqueous phase |
| T 25 digital ULTRA-TURRAX | IKA | 3725000 | as high shear disperser |
| Hotplate Magnetic Stirrer | Scientific Support, Inc | 1454 | emulsion homogenization |
References
- Loo, T. L., Housholder, G. E., Gerulath, A. H., Saunders, P. H., Farquhar, D. Mechanism of action and pharmacology studies with DTIC (NSC 45388). Cancer Treat Rep. 60 (2), 149-152 (1976).
- Behringer, K., et al. Omission of dacarbazine or bleomycin, or both, from the ABVD regimen in treatment of early-stage favourable Hodgkin's lymphoma (GHSG HD13): An open-label, randomised, non-inferiority trial. The Lancet. 385 (9976), 1418-1427 (2014).
- Carvajal, R. D., et al. A phase 2 randomised study of ramucirumab (IMC-1121B) with or without dacarbazine in patients with metastatic melanoma. Eur J Cancer. 50 (12), 2099-2107 (2014).
- Jiang, G., Li, R., Sun, C., Liu, Y., Zheng, J. Dacarbazine combined targeted therapy versus dacarbazine alone in patients with malignant melanoma: A meta-analysis. PLoS ONE. 9 (12), (2014).
- Lazar, V., et al. Sorafenib plus dacarbazine in solid tumors: A phase i study with dynamic contrast-enhanced ultrasonography and genomic analysis of sequential tumor biopsy samples. Invest New Drugs. 32 (2), 312-322 (2014).
- Niemeijer, N. D., Alblas, G., Van Hulsteijn, L. T., Dekkers, O. M., Corssmit, E. P. M. Chemotherapy with cyclophosphamide, vincristine and dacarbazine for malignant paraganglioma and pheochromocytoma: Systematic review and meta-analysis. Clin Endocrinol (Oxf). 81 (5), 642-651 (2014).
- Bedikian, A. Y., Garbe, C., Conry, R., Lebbe, C., Grob, J. J. Dacarbazine with or without oblimersen (a Bcl-2 antisense oligonucleotide) in chemotherapy-naive patients with advanced melanoma and low-normal serum lactate dehydrogenase: 'The AGENDA trial'. Melanoma Res. 24 (3), 237-243 (2014).
- Daponte, A., et al. Phase III randomized study of fotemustine and dacarbazine versus dacarbazine with or without interferon-a in advanced malignant melanoma. J Trans Med. 11 (1), (2013).
- Jiao, J., Rhodes, D. G., Burgess, D. J. Multiple Emulsion Stability: Pressure Balance and Interfacial Film Strength. J Colloid Interface Sci. 250 (2), 444-450 (2002).
- Kakumanu, S., Tagne, J. B., Wilson, T. A., Nicolosi, R. J. A nanoemulsion formulation of dacarbazine reduces tumor size in a xenograft mouse epidermoid carcinoma model compared to dacarbazine suspension. Nanomedicine. 7 (3), 277-283 (2011).
- Xie, T., Nguyen, T., Hupe, M., Wei, M. L. Multidrug resistance decreases with mutations of melanosomal regulatory genes. Cancer Res. 69 (3), 992-999 (2009).
- Estanqueiro, M., Amaral, M. H., Conceição, J., Lobo, J. M. S. Nanotechnological carriers for cancer chemotherapy: the state of the art. Colloids Surf., B. 126, 631-648 (2015).
- Koziara, J. M., Whisman, T. R., Tseng, M. T., Mumper, R. J. In-vivo efficacy of novel paclitaxel nanoparticles in paclitaxel-resistant human colorectal tumors. J Controlled Release. 112 (3), 312-319 (2006).
- Ding, B., et al. Biodegradable methoxy poly (ethylene glycol)-poly (lactide) nanoparticles for controlled delivery of dacarbazine: Preparation, characterization and anticancer activity evaluation. Afr J Pharm Pharacol. 5 (11), 1369-1377 (2011).
- Ding, B., et al. Anti-DR5 monoclonal antibody-mediated DTIC-loaded nanoparticles combining chemotherapy and immunotherapy for malignant melanoma: target formulation development and in vitro anticancer activity. Int J Nanomedicine. 6, 1991-2005 (2011).
- Jenning, V., Thünemann, A. F., Gohla, S. H. Characterisation of a novel solid lipid nanoparticle carrier system based on binary mixtures of liquid and solid lipids. Int J Pharm. 199 (2), 167-177 (2000).
- Müller, R. H., Radtke, M., Wissing, S. A. Nanostructured lipid matrices for improved microencapsulation of drugs. Int J Pharm. 242 (1-2), 121-128 (2002).
- Pouton, C. W. Lipid formulations for oral administration of drugs: Non-emulsifying, self-emulsifying and 'self-microemulsifying' drug delivery systems. Eur. J. Pharm. Sci. 11 (Suppl. 2), S93-S98 (2000).
- Jores, K., Mehnert, W., Drechsler, M., Bunjes, H., Johann, C., Mäder, K. Investigations on the structure of solid lipid nanoparticles (SLN) and oil-loaded solid lipid nanoparticles by photon correlation spectroscopy, field-flow fractionation and transmission electron microscopy. J Controlled Release. 95 (2), 217-227 (2004).
- Almousallam, M., Zhu, H. Encapsulation of cancer therapeutic agent dacarbazine using nanostructured lipid carrier. Int nano lett. , (2015).
- Ng, W. K., et al. Thymoquinone-loaded nanostructured lipid carrier exhibited cytotoxicity towards breast cancer cell lines (MDA-MB-231 and MCF-7) and cervical cancer cell lines (HeLa and SiHa). BioMed Research International. , (2015).
- Sun, M., et al. Quercetin-nanostructured lipid carriers: Characteristics and anti-breast cancer activities in vitro. Colloids Surf., B. 113, 15-24 (2014).
- Savla, R., Garbuzenko, O. B., Chen, S., Rodriguez-Rodriguez, L., Minko, T. Tumor-Targeted Responsive Nanoparticle-Based Systems for Magnetic Resonance Imaging and Therapy. Pharm Res. 31 (12), 3487-3502 (2014).
- Chen, Y., et al. Formulation, characterization, and evaluation of in vitro skin permeation and in vivo pharmacodynamics of surface-charged tripterine-loaded nanostructured lipid carriers. Int J Nanomedicine. 7, 3023 (2012).
- Sanna, V., Caria, G., Mariani, A. Effect of lipid nanoparticles containing fatty alcohols having different chain length on the ex vivo skin permeability of Econazole nitrate. Powder Technol. 201 (1), 32-36 (2010).
- Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis. Adv Drug Deliv Rev. 54 (5), 631-651 (2002).
- Visaria, R. K., et al. Enhancement of tumor thermal therapy using gold nanoparticle-assisted tumor necrosis factor-a delivery. Mol Cancer Ther. 5 (4), 1014-1020 (2006).
- Tripathi, A., Gupta, R., Saraf, S. A. PLGA nanoparticles of anti tubercular drug: Drug loading and release studies of a water in-soluble drug. Int J PharmTech Res. 2 (3), 2116-2123 (2010).
- Joshi, M., Patravale, V. Nanostructured lipid carrier (NLC) based gel of celecoxib. Int J Pharm. 346 (1-2), 124-132 (2008).
- Lim, W. M., Rajinikanth, P. S., Mallikarjun, C., Kang, Y. B. Formulation and delivery of itraconazole to the brain using a nanolipid carrier system. Int J Nanomedicine. 9 (1), 2117-2126 (2014).
- Bei, D., Zhang, T., Murowchick, J. B., Youan, B. C. Formulation of dacarbazine-loaded cubosomes. Part III. physicochemical characterization. AAPS PharmSciTech. 11 (3), 1243-1249 (2010).
- Lei, M., et al. Dual drug encapsulation in a novel nano-vesicular carrier for the treatment of cutaneous melanoma: Characterization and in vitro/in vivo evaluation. RSC Advances. 5 (26), (2015).
