Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

التطبيق التتابعي من coverslips الزجاج لتقييم الضاغطة تصلب العدسة الفأر: الانفعال والمظهرية تحليلات

Published: May 3, 2016 doi: 10.3791/53986

Abstract

عدسة العين هي جهاز شفاف ينكسر ويركز الضوء لتكوين صورة واضحة على الشبكية. في البشر، وانقباض العضلات الهدبية لتشويه العدسة، مما يؤدي إلى زيادة في قوة عدسة 'البصرية في التركيز على الأشياء القريبة، وهي عملية تعرف باسم الإقامة. وقد التغيرات المرتبطة بالعمر في عدسة صلابة مرتبطة طول النظر الشيخوخي، انخفاض في قدرة عدسة 'لاستيعاب، واستطرادا، فإن الحاجة لنظارة القراءة. على الرغم من العدسات الماوس لا تستوعب أو تطوير بصر الشيخوخة، يمكن أن نماذج الماوس توفر أداة لا تقدر بثمن الوراثية لأمراض عدسة الفهم، والشيخوخة المتسارعة التي لوحظت في الفئران يمكن دراسة التغيرات المرتبطة بالعمر في العدسة. يوضح هذا البروتوكول طريقة بسيطة ودقيقة، وفعالة من حيث التكلفة لتحديد عدسة الماوس صلابة، وذلك باستخدام coverslips الزجاج لتطبيق بالتتابع زيادة الأحمال الضغط على العدسة. وتؤكد بيانات تمثيلية أن العدسات الماوس تصبح أكثر صلابة مع التقدم في السن، مثلالعدسات الإنسان. هذا الأسلوب هو تكرار للغاية ويحتمل أن يتم زيادتها إلى ميكانيكيا العدسات اختبار من الحيوانات الكبيرة.

Protocol

تم تنفيذ كافة الإجراءات الحيوانية وفقا للتوصيات الواردة في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من قبل المعاهد الوطنية للصحة وبموجب البروتوكول الذي وافقت عليه لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في معهد سكريبس للأبحاث.

1. عدسة تشريح

  1. الموت ببطء الفئران وفقا لتوصيات في المعاهد الوطنية للصحة "دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية" وافق بروتوكولات استخدام مؤسسة الحيوان.
  2. استأصل العين من الفئران باستخدام ملقط المنحنية. خفض الأنسجة حول العين مع ملقط لجعل العين من مأخذ، ثم نتف العين من مأخذ مع ملقط. نقل العيون العذبة 1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في طبق تشريح.
  3. قطع العصب البصري وعلى مقربة من مقلة العين وقت ممكن. بلطف وعناية إدراج ملاقط غرامة على التوالي في مقلة العين من خلال وهر حفرةالبريد مخارج العصب البصري الخلفي.
  4. جعل بعناية شق مع مقص في مقلة العين من الخلفية إلى حافة القرنية. العدسات القوارض تحتل ~ 30٪ من العين. جعل هذه الشقوق بعناية، وعدم إدراج الملقط أو المقص عميق جدا داخل العين لتجنب حدوث تلف العدسة.
  5. قطع على طول التقاطع بين القرنية والصلبة على الأقل نصف الطريق حول مقلة العين.
  6. دفع بلطف على القرنية لإزالة العدسة من العين من خلال افتتاح المحرز في خطوات 1.4 و 1.5.
  7. استخدام غرامة ملقط غيض مباشرة لإزالة بعناية أي الحطام الكبيرة التي لا تزال تعلق على العدسة. تفقد البصر عدسة عن أي ضرر قبل الانتقال إلى قياسات صلابة.

2. قياس صلابة

  1. وزن لا يقل عن 10 coverslips من المربع نفسه باستخدام الميزان التحليلي. العثور على متوسط ​​وزن لل coverslips. من أجل التناسق، استخدم نفس مربع من coverslips لجميع التجارب. قبل الرطبلل coverslips والزاوية اليمنى مرآة في برنامج تلفزيوني 1X في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة على الأقل قبل بدء التجارب.
  2. ملء غرفة القياس (انظر الشكل 1) مع 65-75 مل من برنامج تلفزيوني 1X. وجاء في غرفة القياس من زجاجي من قبل آلة متجر في المنزل، وقدمت ديفوتس في الغرفة عن طريق الحفر الصحافة لتعيين العمق المطلوب مع مثقاب المناسب. لا تزال عدسات شفافة في برنامج تلفزيوني 1X في درجة حرارة الغرفة لمدة الاختبارات الميكانيكية.

الشكل 1
الشكل 1: تصلب غرفة القياس صورة تظهر أبعاد غرفة قياس صلابة حسب الطلب مع مجموعة متنوعة من ديفوتس من أعماق وأشكال مختلفة. وتستخدم ديفوتس الجولة التي هي 200 ميكرون أو 300 ميكرون عميقة (السهام الصفراء) لقياسات العدسات الماوس. ديفوتس هي 2 ملم وقطرها 13 ~- 14 ملم من على حافة الغرفة الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. وضع مرآة الزاوية اليمنى الى داخل القاعة على مسافة ثابتة من ديفت التي سيتم استخدامها لعقد العدسة. تأكد من أن المرآة لا تتحرك أثناء التجربة.
  2. نقل العدسات تشريح لغرفة القياس بدقة مع الاستيلاء على ملقط أو ملقط منحنية.
  3. التقاط صورة من أعلى إلى ضوء عدسة المفرغة من النفقات العامة مباشرة. خذ الماوس صور عدسة في 30X التكبير مع إضاءة من تشريح المجهر (القاع) ومصدر ضوء الألياف البصرية على الجانبين الأيمن والأيسر. تعيين امدادات الطاقة الألياف البصرية إلى 80٪ من الحد الأقصى لشدة الضوء. ضبط الانتاج امدادات الطاقة على أساس الإضاءة المحيطة، وتفضيلات المستخدم وجودة الصورة حسب الحاجة.
  4. التقاط صورة جانبية نظرا لعدسة المفرغة، وهو ما يمكن ملاحظته من خلال ريمرآة GHT الزاوية. إذا لم يتم معايرة الكاميرا، التقاط صورة من حافة المرآة في التركيز. حافة المرآة هي 5 ملم طويلة، ويمكن في وقت لاحق هذا القياس أن تستخدم لتحديد بكسل / مم، ويكون بمثابة شريط النطاق في الصور.
  5. مكان العدسة في ديفت، وتؤكد أن عدسة يجلس بشكل آمن ومباشرة في ديفت. التقاط صورة للعدسة قبل التحميل. العدسة يجب أن يستريح في ديفت على الأمامي، أو القطب الخلفي.
  6. ضع 1 ساترة بلطف على العدسة. الانتظار 2 دقيقة للسماح للزحف، وتأخذ صورة جانبية رأي آخر من عدسة المحملة.
  7. متابعة إضافة coverslips كما في الخطوة 2.8 واتخاذ جنبا عرض الصور بعد إضافة كل ساترة كما في الخطوة 2.8 حتى يتم تطبيق ما مجموعه 10 coverslips.
  8. إزالة جميع coverslips. الانتظار 2 دقيقة، والتقاط صورة جانبية نظرا للعدسة (داخل وخارج ديفت) بعد إزالة كافة coverslips.

قياس 3. عدسة نواة

  1. لdetermالمعهد الوطني للإحصاء حجم نواة العدسة، وتحريك العدسة لطبق بيتري نظيفة مليئة برنامج تلفزيوني 1X.
  2. decapsulate بلطف العدسة باستخدام ملقط غرامة على التوالي.
  3. تنصل من خلايا الألياف القشرية من قبل المتداول العدسة بين أصابع القفاز. فإن عدسة النواة المتبقية يشعر وكأنه الرخام الصلب. استخدام هذا الإجراء لعزل نواة على العدسات الكبار ابتداء من الساعة 1 شهر من العمر. منذ نواة معزولة هي هيئة جامدة، وإجراء مزيد من التجارب الميكانيكية للنواة العدسة لا يمكن القيام بها باستخدام هذه الطريقة الموصوفة.
  4. شطف بلطف نواة العدسة في برنامج تلفزيوني 1X في طبق بيتري.
  5. وضع نواة العدسة مرة أخرى إلى غرفة القياس (وليس في ديفت)، والتقاط صورة للنواة العدسة من خلال مرآة الزاوية اليمنى.

الشكل 2
الشكل 2: والعدسات الماوس مضغوط بواسطة Coverslips (A) تخطيطي و (ب) صورة من السابقينالإعداد perimental تظهر عدسة الماوس القديمة 2-أشهر في ديفت 200 ميكرون العميقة في غرفة قياس مليئة برنامج تلفزيوني 1X. استخدمت مرآة زاوية الحق وكاميرا رقمية محمولة على المجهر تشريح لجمع الصور من عدسة خلال ضغط من قبل coverslips. (C) صور وجهات النظر السهمي من عدسة من نوع البرية القديمة 2-أشهر ضغطها أعداد coverslips زيادة تباعا توفير البيانات الخام لقياس أقطار المحورية والاستوائية وحساب سلالات المحورية والاستوائية خلال القائم على ساترة اختبار ضغط. يمكن في بعض الأحيان أن ينظر إلى انعكاس العدسة في لل coverslips (الأكثر وضوحا بشكل واضح في الصورة 1 ساترة). عند إجراء القياسات، تجاهل التفكير وقياس لقمة العدسة. (D) صور وجهات النظر السهمي من العمر 2-أشهر من النوع البري عدسة بعد ضغط وعدسة نواة معزولة. عدسة بعد ضغط ونواة معزولة يجلسون خارج ديفت. الحانات الحجم، 1 مم. تم تعديل هذا الرقم من Gokhفي، وآخرون. بلوس واحد، 2012 19. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

تحليل 4. صورة

  1. قياس أقطار الاستوائية والمحورية من العدسات قبل التحميل وبعد كل خطوة التحميل باستخدام يماغيج أو برامج مماثلة. قياس قطر كل نواة العدسة. نواة عدسة كروية تقريبا حتى قياس في أي اتجاه سوف تكفي 19،21.
  2. تصحيح العدسة المحورية أقطار عن طريق إضافة عمق ديفت المستخدمة. في غرفة القياس، حجب ديفت 200 ميكرون (العدسات القديمة 2-الشهر الماوس) أو 300 ميكرون (العدسات الماوس عمرها 4 أشهر وعمرها 8 أشهر) من سمك المحوري للعدسة.
  3. حساب محوري وسلالات الاستوائية من القياسات عدسة قطرها باستخدام المعادلة، ε = (د - د 0) / د حيث ε هو سلالة، د هو محوري أو البريدقطر quatorial في حمولة معينة، ود 0 هو المقابلة قطر المحوري أو الاستوائي في حمولة الصفر.
  4. رسم محوري وسلالات الاستوائية وظائف من الحمل المفروض (في ملغ).
  5. رسم محوري، الاستوائية وبأقطار النووية. حساب ورسم نسبة الارتفاع عدسة بقسمة قطر المحوري بواسطة قطر الاستوائية.
  6. حساب ورسم حجم العدسة باستخدام المعادلة، وحجم = 4/3 × π × ص ض 2 × ص حيث r E هو الاستوائية دائرة نصف قطرها وص A هو دائرة نصف قطرها المحوري تقاس من صورة التي مأخوذة في الخطوة 2.6. تفترض هذه المعادلة العدسة هو كروي مفلطح (الإهليلجي) 1،22.
  7. حساب ورسم حجم النووي باستخدام المعادلة، وحجم = 4/3 × π × ص N حيث r N هو نصف قطر نواة العدسة كما تقاس من صورة التي مأخوذة في الخطوة 3.5. تفترض هذه المعادلة ط عدسة نواةسا المجال 19،21.
  8. حساب ورسم جزء النووي الذي يشكل نسبة حجم النووي لحجم العدسة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تم قياس صلابة وأبعاد العدسات الماوس القديمة 8 أشهر 2-، 4- و. وكانت الفئران كل البرية من نوع الحيوانات على C57BL6 خلفية سلالة نقية تم الحصول عليها من مرفق تربية TSRI الحيوان، وتحميل كل عدسة مع 1-10 coverslips. حسبت سلالات المحورية والاستوائية بوصفها وظيفة من الحمل التطبيقية عن طريق قياس محوري وبأقطار الاستوائية للعدسة بعد إضافة كل ساترة، ومن ثم تطبيع كل تغيير في قطر إلى قطر تفريغ المقابلة. تم اختبار ثمانية العدسات من كل عصر، ويتم التعبير عن نتائج متوسط ​​± الخطأ المعياري. كما هو موضح سابقا 19، سلالة المحوري هو وظيفة لوغاريتمي من تحميل تطبيق (الشكل 3A). كان هناك انخفاض ملحوظ إحصائيا تعتمد على عمر في سلالات المحورية والاستوائية تحت أقصى تطبيقها الحمل (الشكل 3)، مشيرا إلى أن عدسة الماوس يصلب مع التقدم في السن. شارعوكانت قياسات المطر استنساخه للغاية عبر العدسات من نفس الفئة العمرية، كما يتبين من الأخطاء معيار الصغيرة.

واستخدمت بيانات الصورة التي تم جمعها خلال هذه التجربة أيضا لتحديد العديد من الخصائص المورفولوجية عدسة أخرى (الشكل 4). كما هو متوقع، محوري وبأقطار الاستوائية وحجم عدسة زيادة مع تقدم العمر (الشكل 4A، 4B و 4D). تشير نسبة الارتفاع أن العدسة التي يبلغ قطرها الاستوائي أكبر قليلا من قطر المحوري، ولم هذه المعلمة لن تتغير مع تقدم العمر (الشكل 4C). ازداد القطر، وحجم وجزء من نواة العدسة مع تقدم العمر (الشكل 4E، 4F و4G). وتشير هذه النتائج إلى أن نواة العدسة يعيد تشكيل لزيادة في الحجم النسبي والذين تتراوح أعمارهم العدسة.

وتشير هذه البيانات إلى أن العدسات الماوس زيادة في صلابة مع التقدم في السن، على غرار التغييرات في جينج العدسات الإنسان 9،15. يوافق هذه البيانات أيضا مع الملاحظات السابقة التي تستخدم طريقة مشابهة 18 وBrillouin المجهر الضوئي 23 التي تزيد العدسات الماوس في صلابة مع التقدم في السن. وقد استخدمت دراستين أخرى الطريقة الموصوفة لإظهار أن tropomodulin-1، وأشار في نهاية لالأكتين متوجا البروتين، CP49، وهو مطرز المتوسط ​​بروتين خيوط، وهناك حاجة aquaporin 0 للحفاظ على عدسة صلابة 19،20. مع هذا الأسلوب، وعدد كبير من نماذج الماوس لأمراض العدسة والشيخوخة المتسارعة من الفئران يمكن استخدامها لفهم التغيرات عدسة صلابة بسبب الاختلاف الجيني و / أو الشيخوخة. ويمكن أيضا أن تتكيف هذه الطريقة للعدسات من الأنواع الأخرى. هي الأمثل أبعاد الغرفة المستخدمة في هذه التجارب، والعدسات الماوس، ولكن يمكن بسهولة أن زيادتها للعدسات من أكبر الأنواع. في المستقبل، سيكون من المثير للاهتمام أن تحديد ما إذا كان حجم عدسة جداول مع عدسة صلابة عبر الأنواع.

س: المحافظة على together.within الصفحات = "1"> عند أدنى حمولة (1 ساترة، 129.3 ملغ)، لم يكن هناك اختلاف واضح في محوري وسلالات الاستوائية بين 2-، 4- والعدسات عمرها 8 أشهر. أصبحت الزيادة في عدسة صلابة مع التقدم في السن أكثر وضوحا في ارتفاع الأحمال. ومن الممكن أن القشرة الخارجية للعدسة (~ 100 ميكرون) والتي يتم ضغطها باستخدام ساترة الأولى لا تغيير في صلابة مع التقدم في السن، أو أن هذا الأسلوب غير قادر على تمييز التغييرات الصغيرة في الضغط على الأحمال المنخفضة. وتشير البيانات إلى morphometrics أن الزيادات في كل من العدسة كاملة وحجم النووي ترتبط مع زيادة صلابة عدسة بوصفها وظيفة من العمر.

الشكل (3)
الشكل (3):. المحورية والاستوائية منحنيات سلالة تحميل ليبلغ 8 أشهر 2-، 4- و (2M، 4M و8M) من النوع البري العدسات الماوس (A) المحورية تآمر سلالة الضغط بوصفها وظيفة من تحميل تطبيق ( ملغ). شركات (B) الاستوائيةرسم سلالة ressive بوصفها وظيفة من تحميل تطبيق (ملغ). الأربع والعدسات عمرها 8 أشهر عرضت سلالة أقل من العدسات القديمة 2-أشهر في الأحمال القصوى ما يعادلها، مما يشير إلى زيادة في عدسة صلابة مع التقدم في السن. **، ف <0.01. لاحظ أن العمودي يختلف بين (أ) و (ب). يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الرقم 4: الخصائص المورفولوجية لل2-، 4- وعمره 8 أشهر (2M، 4M و8M) من النوع البري العدسات الماوس (A) المحورية قطر و (ب) قطرها الاستوائي يزيد تدريجيا مع التقدم في السن. فإن هذه النسبة عدسة الجانب (C) أن العدسات الماوس أوسع قليلا عند خط الاستواء العدسة. حجم عدسة (D)، قطر النووي (E)، وحجم النووي (F) وجزء النووي (G) زيادة تدريجيا مع التقدم في السن. **، ف <0.01. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

هناك العديد من الاعتبارات الرئيسية عند استخدام هذه الطريقة لقياس عدسة صلابة. أولا، يتم تطبيق لل coverslips إلى عدسة بزاوية مائلة قليلا (8-8،5 درجة) فيما يتعلق السفلي من الغرفة (θ). وهذا ينطبق على عنصر صغير جدا من الحمل استوائيا بدلا من محوريا. ومع ذلك، يعتبر هذا الحمل الاستوائية ضئيلة بسبب الخطيئة θ ≈ 0.1 19. إذا تم تكييف هذا الأسلوب للعدسات أكبر، سيكون من الضروري قياس لتحديد ما إذا كان ينبغي أن تؤخذ تحميل الاستوائية في حسابات سلالة زاوية لل coverslips إلى الجزء السفلي من الغرفة. ثانيا، لا بد من السماح للعدسة لكي تتوازن بعد إضافة كل ساترة. فترة الانتظار من 2 دقيقة يسمح لتشويه تعتمد على الوقت (أي، زحف) لتحدث، بحيث يتم التقاط الصور فقط عندما تكون العدسة في شكل التوازن 19. ثالثا، هو الأمثل هذا البروتوكول لقياس الضغط الضغط على م[أوس] عدسات عبر مجموعة واسعة ديناميكية من الأحمال. في الدراسات التجريبية، وتحميل تطبيق من 1293 ملغ (أي عشرة 18 × 18 ملم coverslips) ضغط عدسة الماوس إلى أقصى سلالة، والتي تتجاوز زيادة الأحمال لا يسبب ملموس مزيد من تشويه. ويرجع ذلك إلى وجود نواة العدسة الصلبة التي لا تشوه ملحوظ تحت ضغط 19 هذا. رابعا، هذا البروتوكول يتجنب تلف الأنسجة لا رجعة فيه. في التجارب التي نشرت سابقا، لم يلاحظ أي تغييرات في الخصائص الميكانيكية للالعدسات الماوس على تكرار التحميل، مما يشير إلى أن هذه الطريقة لا تضر عدسة 19. عند اختبار ميكانيكيا عدسات من نوع مختلف أو العدسات متحولة، وينبغي أن يتم الاختبارات التجريبية لتحديد الحد الأقصى للحمولة اللازمة لأقصى قدر من الضغط بتكرار الخطوات 2،8-2،10 ومقارنة منحنيات سلالة الحمل، عدسة بأقطار وأحجام العدسة بين الأولى والثانية جار التحميل. وأخيرا، وهذه الطريقة لقياس التجريبية لصلابة س و العدسة كلها، ولا يمكن التفريق بين المساهمات من أنواع مختلفة من الخلايا (خلايا الظهارية، والألياف القشرية، والألياف النووية) والعدسة كبسولة إلى الخواص الميكانيكية كلها عدسة.

يتم رسم سلالات المحورية والاستوائية هنا وظائف من الحمل المفروض. وكميا الدراسات السابقة عدسة الماوس صلابة 19،21، والمرونة 21 أو التغيير في قطر 18 على الحمل التطبيقية. سلالة هو كمية لا بعدية التي تسمح المقارنة المباشرة بين العدسات من مختلف الأحجام. لاحظ أن تمديد الاستوائي (سلالة إيجابي) يحدث بالتزامن مع تطبيق ضغط المحوري (سلالة السلبي) نظرا لحفظ حجم العدسة (أي بواسون المفعول). ومع ذلك، فإن سلالات الاستوائية المرصودة أصغر بكثير في الحجم المطلق من سلالات المحورية، مشيرا إلى أن هذا الأسلوب له أقل دقة للكشف عن تغيرات صغيرة في سلالة الاستوائية بالمقارنة مع سلالة المحوري.

الإقليم الشمالي "> باختصار، هذا الأسلوب بسيط مع جهاز تجميعها بسهولة لقياس عدسة الماوس صلابة يمكن تطبيقها بشكل عام وعلى نطاق واسع في مجال البحوث عدسة لفهم أفضل لكيفية الطفرات في البروتينات، الأمراض و / أو الشيخوخة تؤثر على عدسة صلابة، بينما العدسات الماوس لا استيعاب، وهذه الطريقة لا تزال توضيح البروتينات والتعديلات المرتبطة بالعمر التي تساهم في زيادة تصلب العدسة، ويحتمل أن تساهم المعرفة الجديدة لتطوير علاجات جديدة للبصر الشيخوخة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fine tip straight forceps Fine Scientific Tools 11252-40
Microdissection scissors, straight edge Fine Scientific Tools 15000-00
Curved forceps Fine Scientific Tools 11272-40
Seizing forceps Hammacher HSC 702-93 Optional
Dissection dish Fisher Scientific 12565154
60 mm Petri dish Fisher Scientific 0875713A
1x phosphate buffered saline (PBS) Life Technologies 14190
18 x 18 mm glass coverslips Fisher Scientific 12-542A
Measurement chamber with divots to hold lenses Custom-made (see Figure 1)
Right-angle mirror Edmund Optics 45-591
Light source Schott/Fostec 8375
Illuminated dissecting microscope Olympus SZX-ILLD100 With SZ-PT phototube
Digital camera Nikon Coolpix 990

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lovicu, F. J., Robinson, M. L. Development of the ocular lens. , Cambridge University Press. (2004).
  2. Piatigorsky, J. Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features. Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).
  3. Glasser, A. Restoration of accommodation: surgical options for correction of presbyopia. Clin Exp Optom. 91 (3), 279-295 (2008).
  4. Keeney, A. H., Hagman, R. E., Fratello, C. J. Dictionary of ophthalmic optics. , Butterworth-Heinemann. (1995).
  5. Millodot, M. Dictionary of optometry and visual science. 7, Elsevier/Butterworth-Heinemann. (2009).
  6. Heys, K. R., Cram, S. L., Truscott, R. J. Massive increase in the stiffness of the human lens nucleus with age: the basis for presbyopia. Mol Vis. 10, 956-963 (2004).
  7. Heys, K. R., Friedrich, M. G., Truscott, R. J. Presbyopia and heat: changes associated with aging of the human lens suggest a functional role for the small heat shock protein, alpha-crystallin, in maintaining lens flexibility. Aging Cell. 6 (6), 807-815 (2007).
  8. Pierscionek, B. K. Age-related response of human lenses to stretching forces. Exp Eye Res. 60 (3), 325-332 (1995).
  9. Glasser, A., Biometric Campbell, M. C. optical and physical changes in the isolated human crystalline lens with age in relation to presbyopia. Vision Res. 39 (11), 1991-2015 (1999).
  10. Weeber, H. A., van der Heijde, R. G. On the relationship between lens stiffness and accommodative amplitude. Exp Eye Res. 85 (5), 602-607 (2007).
  11. Weeber, H. A., et al. Dynamic mechanical properties of human lenses. Exp Eye Res. 80 (3), 425-434 (2005).
  12. Fisher, R. F. Elastic properties of the human lens. Exp Eye Res. 11 (1), 143 (1971).
  13. Krueger, R. R., Sun, X. K., Stroh, J., Myers, R. Experimental increase in accommodative potential after neodymium: yttrium-aluminum-garnet laser photodisruption of paired cadaver lenses. Ophthalmology. 108 (11), 2122-2129 (2001).
  14. Burd, H. J., Wilde, G. S., Judge, S. J. An improved spinning lens test to determine the stiffness of the human lens. Exp Eye Res. 92 (1), 28-39 (2011).
  15. Glasser, A., Campbell, M. C. Presbyopia and the optical changes in the human crystalline lens with age. Vision Res. 38 (2), 209-229 (1998).
  16. Pau, H., Kranz, J. The increasing sclerosis of the human lens with age and its relevance to accommodation and presbyopia. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 229 (3), 294-296 (1991).
  17. Hollman, K. W., O'Donnell, M., Erpelding, T. N. Mapping elasticity in human lenses using bubble-based acoustic radiation force. Exp Eye Res. 85 (6), 890-893 (2007).
  18. Baradia, H., Nikahd, N., Glasser, A. Mouse lens stiffness measurements. Exp Eye Res. 91 (2), 300-307 (2010).
  19. Gokhin, D. S., et al. Tmod1 and CP49 synergize to control the fiber cell geometry, transparency, and mechanical stiffness of the mouse lens. PLoS One. 7 (11), e48734 (2012).
  20. Sindhu Kumari, S., et al. Role of Aquaporin 0 in lens biomechanics. Biochem Biophys Res Commun. , (2015).
  21. Fudge, D. S., et al. Intermediate filaments regulate tissue size and stiffness in the murine lens. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (6), 3860-3867 (2011).
  22. Kuszak, J. R., Mazurkiewicz, M., Zoltoski, R. Computer modeling of secondary fiber development and growth: I. Nonprimate lenses. Mol Vis. 12, 251-270 (2006).
  23. Scarcelli, G., Kim, P., Yun, S. H. In vivo measurement of age-related stiffening in the crystalline lens by Brillouin optical microscopy. Biophys J. 101 (6), 1539-1545 (2011).

Tags

البيولوجيا الخلوية، العدد 111، الميكانيكا عدسة، سلالة، والعين، والشيخوخة، عدسة النواة، morphometrics، ضغط، الميكانيكا الحيوية
التطبيق التتابعي من coverslips الزجاج لتقييم الضاغطة تصلب العدسة الفأر: الانفعال والمظهرية تحليلات
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Cheng, C., Gokhin, D. S., Nowak, R.More

Cheng, C., Gokhin, D. S., Nowak, R. B., Fowler, V. M. Sequential Application of Glass Coverslips to Assess the Compressive Stiffness of the Mouse Lens: Strain and Morphometric Analyses. J. Vis. Exp. (111), e53986, doi:10.3791/53986 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter