Protocol
निम्न विधि 7.8 अनुकूलित है अवरोध उत्पादक उपभेदों के साथ प्रतियोगी उपभेदों परीक्षण करने के लिए।
नोट: इस प्रोटोकॉल बैक्टीरियल संस्कृतियों के साथ एयरोसोल पीढ़ी शामिल है। यह केवल स्थानीय स्तर पर मंजूरी दे दी सुरक्षा कारणों के कार्यान्वयन के साथ एक निहित अंतरिक्ष में किया जा सकता है। एक स्तर 2 सुरक्षा कैबिनेट के भीतर अगर प्लेट पर संस्कृति का छिड़काव अगर प्लेट के प्रदूषण और आसपास के वातावरण को कम कर देंगे। यह भी छिड़काव बैक्टीरिया की एयरोसोल साँस लेना से शोधकर्ता रक्षा करेगा, यह एक प्रमुख चिंता का विषय है, तो शोधकर्ता रोकथाम स्तर 2 जीवों का उपयोग कर रहा है। उपयुक्त व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहना जाना चाहिए। पेट्री डिश आसपास के क्षेत्र में सबसे अच्छा डिस्पोजेबल शोषक ऊतक के साथ कवर किया जाता है। पोस्ट-स्प्रे पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग कर परिशोधन की सलाह दी है।
1. अगर प्लेट तैयारी
- मनु के अनुसार मस्तिष्क दिल अर्क (भी) अगर तैयारfacturer के निर्देशों।
- 121 डिग्री सेल्सियस, 20 मिनट के लिए 15 साई, या आटोक्लेव निर्माता की सिफारिशों के अनुसार कम से BHI अगर आटोक्लेव, बाँझ।
- बाँझ पेट्री डिश में निष्फल BHI अगर की 15 मिलीलीटर aliquots डालो और यह स्थापित करने के लिए अनुमति देते हैं।
नोट: यह सुनिश्चित करें परख के भीतर अगर की ही शेयर से निकलती हर अगर प्लेट इस्तेमाल किया जा रहा है और वहाँ एक थाली में अगर की एक ही राशि है। यह उपलब्ध पोषक तत्वों और तुलनीयता की इजाजत दी प्लेटों के बीच अवरोध प्रसार में परिवर्तनशीलता को सीमित करता है।
2. बाँझ शोरबा तैयारी
- निर्माता के निर्देशों के अनुसार BHI शोरबा तैयार करें।
- BHI के 10 मिलीलीटर aliquots 28 मिलीलीटर कांच की बोतलों के लिए यूनिवर्सल जोड़ें।
- 121 डिग्री सेल्सियस पर BHI शोरबा आटोक्लेव, 20 मिनट के लिए 15 साई, या आटोक्लेव निर्माता की सिफारिशों के अनुसार, बाँझ।
नोट: परख में इस्तेमाल सभी शोरबा सुनिश्चित शोरबा aut के एक ही बैच से निकलती हैएक ही समय पोषक तत्व है जो परिणामों में भिन्नता का कारण बन सकता है में भिन्नता सीमित करने पर oclaved।
3. तैयारी बाँझ Vaporizer बोतल (s)
- vapourizer बोतल विघटित।
- vapourizer के माध्यम से 5% सतह सक्रिय सफाई एजेंट स्प्रे, आंतरिक दूषित पदार्थों को खत्म करने के लिए रात में 5% की सतह सक्रिय सफाई एजेंट में vapourizer बोतल, ढक्कन और vapourizer लेना।
नोट: दस्ताने और उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण जब सतह सक्रिय सफाई एजेंट से निपटने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए। - बाँझ हवा का प्रवाह हुड के तहत vaporizer, ढक्कन और बोतलों सूखी।
- 70% इथेनॉल के साथ बोतल भरें, vapourizer पुनः अनुलग्न और vapourizer के माध्यम से इथेनॉल के कुछ स्प्रे।
- vaporizer पर ढक्कन लगा और उपयोग करें जब तक अंदर इथेनॉल के साथ दुकान।
- इसके तत्काल बाद का उपयोग करें, aseptically बाँझ BHI शोरबा के साथ बोतल कुल्ला और vapourizer के माध्यम से शोरबा स्प्रे करने से पहले।
नोट: यह इथेनॉल एएफएफ रोकताinoculum धारा 6.3 में बोतल को जोड़ा गया ecting।
4. बैक्टीरियल रात संस्कृति तैयारी (s)
- स्ट्रीक प्रतियोगी और दबाव से अवरोध एक बाँझ BHI अगर प्लेट पर है और लगभग 18 घंटा (रातोंरात) के लिए aerobically 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं।
नोट: यह प्लेट बैक्टीरिया जब 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत है कि एक ही सप्ताह के भीतर कई प्रतिकृति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है की एक शेयर पैदा करता है। - एक 28 मिलीलीटर यूनिवर्सल बोतल के भीतर आवश्यक प्रतियोगी बैक्टीरियल तनाव का एक भी कॉलोनी के साथ बाँझ BHI शोरबा के 10 मिलीलीटर टीका लगाना।
- एक कक्षीय प्रकार के बरतन में 250 rpm पर झटकों से aerobically रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर यूनिवर्सल बोतल सेते हैं।
5. एफडीए उत्पादक को अलग से स्पॉट संस्कृति
- धारा 4 में वर्णित के रूप में रातोंरात संस्कृति (s) तैयार करें।
- सुनिश्चित करें अगर प्लेटें, पूरी तरह से सूख रहे हैं ढक्कन पर कोई संक्षेपण के साथ, टीका करने से पहले (पीएलए incubating द्वारा जैसे37 डिग्री सेल्सियस पर 60 मिनट) के लिए ते; इस साइट से टीका थाली भर में फैलने से inoculum रोकता है।
- पिपेट अगर प्लेट के केंद्र पर रातोंरात संस्कृति के 25 μl। पूरी तरह से पिपेट सवार निराशाजनक हवा के बुलबुले स्प्रे कि अगर भर संस्कृति को रोकने के लिए करने से बचें।
- संस्कृति कमरे के तापमान पर सूखे की अनुमति दें संस्कृति के प्रसार को सीमित करने के लिए। aerobically रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर अगर प्लेटें सेते हैं।
6. तैयारी टेस्ट प्रतियोगी तनाव के स्प्रे inoculum (s)
- BHI शोरबा में धारा 4 पतला वर्णित के रूप में रातोंरात संस्कृति 10 गुना लगभग 4 x 10 6 CFU मिलीलीटर -1 उपज के लिए रातोंरात संस्कृति तैयार है, और 600 आयुध डिपो 0.3 ± 0.05 के निलंबन।
नोट: एक 10 गुना कमजोर पड़ने, 4 x 10 6 CFU मिलीलीटर -1 सब बैक्टीरियल प्रजातियों के लिए नहीं देना होगा 1 एक्स 10 के बीच धारावाहिक dilutions चढ़ाना प्रसार के द्वारा आवश्यक कमजोर पड़ने कारक की गणना - एक बाँझ प्लास्टिक इत्र vaporizer बोतल में पतला संस्कृति डालो।
नोट: कुल मात्रा से अधिक आवश्यक है के लिए अगर प्लेट की संख्या छिड़काव किया जा रहा होना चाहिए। लगभग प्रति प्लेट 250 μl एक 9 सेमी व्यास पेट्री डिश के लिए उपयुक्त है।
7. स्थगित विकास निषेध परख
- vaporizer बोतलों में से प्रत्येक के माध्यम से संस्कृति स्प्रे सुनिश्चित करने के लिए कि संस्कृति अगर पर छिड़काव करने से पहले स्प्रे तंत्र में भरी हुई है।
- अगर ऊपर लगभग 15 सेमी की दूरी से, पूरे अगर सतह के ऊपर पतला संस्कृति के लगभग 250 μl (एक ठेठ 50 मिलीलीटर vaporizer का 3 स्प्रे) स्प्रे। aerobically रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर अगर प्लेटें सेते हैं। स्प्रे की एक ही नंबर के साथ अन्य प्लेटों के लिए दोहराएँ।
8. व्याख्या स्थगित विकास निषेध परख परिणाम
- छिड़काव प्रतिस्पर्धा का विकास निषेध क्षेत्र को मापनेटो तनाव (चित्रा 1 ए - सी, "एक्स" "एक्स" के लिए) (- सी, "वाई" के लिए "वाई" चित्रा 1 ए) मिलीमीटर में, अवरोध-निर्माता के केंद्रीय स्थान के व्यास को घटाकर।
नोट: चित्रा 1E से पता चलता है कि कैसे इस डेटा प्रस्तुत किया जा सकता - निषेध के क्षेत्रों के लिए स्पष्टता स्कोर रिकॉर्ड।
नोट: यह मनाया निषेध की डिग्री इंगित करता है। उदाहरण चित्रा 1 ए में दिखाए जाते हैं - डी, उपभेदों कि मानकीकरण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता प्रतिनिधि परिणाम अनुभाग में सुझाव दिया है। निम्नलिखित पैमाने स्पष्टता स्कोरिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है: 0 से स्पष्टता स्कोर प्रतियोगी तनाव के विकास की पूरी निषेध के एक क्षेत्र का वर्णन है। 1 के स्कोर केवल व्यक्तिगत समाशोधन के क्षेत्र में मौजूद कालोनियों के साथ, विकास के लगभग पूर्ण निषेध के एक क्षेत्र का वर्णन है। 2 के स्कोर कम विकास का एक दृश्य क्षेत्र का वर्णन करने के लिए, इस क्षेत्र के भीतर विकास चोर हैधाराप्रवाह या मिला हुआ पास लेकिन> 50% से घनत्व में कमी कर दी। 3 का स्कोर केवल न्यूनतम विकास दर में कमी का वर्णन करने के लिए, विकास मिला हुआ है और कम से कम 50% से कम है, एक क्षेत्र अभी भी दिखाई दे और औसत दर्जे का है। 4 के एक स्कोर विकास का कोई स्पष्ट निषेध का वर्णन है। 5 के स्कोर का वर्णन करने के लिए है कि प्रतियोगी तनाव के विकास परीक्षण अवरोध उत्पादक तनाव की निकटता में वृद्धि की गई थी। उदाहरण के लिए चित्रा 1 देखें। इन अंकों प्रयोगकर्ता को व्यक्तिपरक हैं।
9. replicates
- जैविक तीन प्रतियों में कम से कम दोहराएँ assays प्राप्त परिणामों के reproducibility निर्धारित करने के लिए।
नोट: प्रतिकृति के अलग अलग दिनों पर प्रदर्शन कर रहे हैं, माप लेने और 4 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन से हटाने के बाद तुरंत प्लेटों स्कोर है, तो या तो दुकान प्लेटों या उन्हें discarding पहले प्लेटों के उच्च गुणवत्ता तस्वीरें ले। भंडारण या प्लेटों की तस्वीरें अलग-अलग दिनों के बीच परिणामों की आसान तुलना में सक्षम बनाता है, टीउसकी भर में दिन / प्रयोगों प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य स्कोरिंग की पुष्टि के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। जागरूक प्लेटों की भंडारण क्षमता के परिणाम को बदलने के लिए है हो।
नोट: स्पष्ट तस्वीरें जगह प्लेटों के लिए मद्धम रोशनी का एक क्षेत्र में एक मैट काले रंग की पृष्ठभूमि पर उनकी ढक्कन के बिना ईमानदार, एक उच्च संकल्प कैमरा (≥8 सांसद) लेंस (मैक्रो मोड) के करीब वस्तुओं पर ध्यान केंद्रित करने में सक्षम का उपयोग करें। वैकल्पिक रूप से, सफेद रोशनी करने के लिए सेट पार प्रकाशक के साथ कुछ जेल लगे उच्च गुणवत्ता, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य छवियों का उत्पादन कर सकते हैं।
Representative Results
परख परिणाम केन्द्र देखा अवरोध उत्पादक तनाव (चित्रा 1) के पास मढ़ा प्रतियोगी तनाव में एक अंतर के रूप में नमूदार होना चाहिए। इन मतभेदों को पूर्ण निषेध (चित्रा 1 ए), आंशिक निषेध (चित्रा 1 बी और 1 सी), कोई निषेध (चित्रा -1) या सकारात्मक सहयोग के रूप में व्याख्या की जा सकती है। व्यापक रूप से उपलब्ध प्रयोगशाला तनाव एस एपिडिडर्मिस Tü3298 और एस एपिडिडर्मिस Rp62A, और एस एपिडिडर्मिस Rp62A और एस ऑरियस न्यूमैन क्रमशः आंकड़े 1 बी और 1 डी में इस्तेमाल किया गया। हमारा सुझाव है कि इन उपभेदों इस प्रोटोकॉल का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
परीक्षण किया प्रजातियों पर निर्भर करता है, पूर्ण निषेध और आंशिक निषेध सबसे अधिक संभावना रोगाणुरोधी पेप्टाइड्स, एंटीबायोटिक दवाओं या अन्य प्रसारण विकास inhibito का परिणाम हैअवरोध उत्पादक तनाव द्वारा उत्पादित रु। आंशिक निषेध भी प्रतियोगी कारण तेज करने के लिए या अवरोध तनाव 6 से तनाव पोषक तत्वों की sequestering के लिए कम पोषक तत्वों की उपलब्धता से जोड़ा गया है।
अलग अवरोध उत्पादक वियोजन ही प्रतियोगी तनाव के खिलाफ जांच के बीच अवरोध के क्षेत्र का आकार की तुलना में निम्न में से किसी में मतभेद इंगित करता है: अवरोध उत्पादक तनाव द्वारा उत्पादित रोगाणुरोधी की राशि; मीडिया के माध्यम से फैलाना अवरोध की क्षमता; अवरोध के प्रकार का उत्पादन किया और अवरोधकों को प्रतियोगी तनाव के प्रतिरोध स्तर का उत्पादन किया जा रहा है। एक ही अवरोध उत्पादक तनाव के खिलाफ जांच की विभिन्न प्रतियोगी प्रकारों के बीच अवरोध के क्षेत्र का आकार की तुलना अवरोध उत्पादन किया जा रहा करने के लिए प्रतियोगी स्ट्रेन के प्रतिरोध स्तर का संकेत है।
तो जीवाणुओं की असंगत आवेदन हुआ है प्लेटों का प्रयोग नहीं किया जाना चाहिए। उदाहरण के लिए, यदि परीक्षण प्रतियोगी संस्कृति भी है पतला निषेध का क्षेत्र बड़ा दिखाई देते हैं और अधिक से आम तौर पर मनाया जाता है (चित्रा 2A) एक कम स्पष्ट रूप से परिभाषित बढ़त के साथ होगा; यह किसी भी तुलनात्मक क्षेत्र माप की विश्वसनीयता पर असर पड़ेगा। अवरोध उत्पादक तनाव मौके को पूरी तरह से रात ऊष्मायन से पहले सूख नहीं किया गया था, तो अवरोध तनाव प्रसार करने के लिए और एक स्पष्ट रूप से परिभाषित स्थान (चित्रा 2 बी), जो आम तौर पर क्षेत्र माप को प्रभावित करता है, लेकिन यह भी स्पष्टता स्कोरिंग प्रभावित कर सकते हैं फार्म नहीं होने की संभावना है। प्रतियोगी तनाव हैनहीं छिड़काव समान रूप से इस बैक्टीरिया की एक असमान प्रसार (चित्रा 2 सी) के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। प्रतियोगी तनाव भी ध्यान केंद्रित किया जाता है तो यह संभव है कि प्रतियोगी तनाव अवरोध तनाव (चित्रा 2 सी) के शीर्ष पर विकसित हो सकता है, कई मामलों में इस प्रतियोगी / अवरोध तनाव भूमिकाओं में से कुछ उलटा हो सकता है।
(0 का स्कोर) गुणात्मक और मात्रात्मक परिणाम की सीमा है कि आस्थगित विकास निषेध परख से प्राप्त की जा सकती परिणाम विकास निषेध के लिए (ए) पूरा निषेध से लेकर कर सकते हैं, (बी) आंशिक निषेध (1 के स्कोर): चित्रा 1। , (सी) आंशिक (डी) कोई निषेध (4 के स्कोर) के लिए निषेध (2 अंक)। लेबल (वाई) अवरोध उपभेदों के विकास के किनारों और निषेध की सबसे बाहरी किनारे से संकेत मिलता हैक्षेत्र (एक्स)। 0 मिमी से अधिक से अधिक 10 मिमी के लिए निषेध रेंज के क्षेत्र का आकार, के रूप में (ई) है, जो प्लेटें एक में फोटो खिंचवाने के लिए माप से पता चलता में दिखाया गया है, बी, सी और डी के लिए परिणाम हाल staphylococcal वियोजन (ए लिए दिखाए जाते हैं , सी) या आम प्रयोगशाला staphylococcal आइसोलेट्स एस एपिडिडर्मिस Tü3298 (अवरोध) और एस एपिडिडर्मिस Rp62A (प्रतिद्वंद्वी) (बी), और एस एपिडिडर्मिस Rp62A (अवरोध) और एस ऑरियस न्यूमैन (प्रतिद्वंद्वी) (डी)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: गरीब तकनीक के कारण असंगत परिणाम के उदाहरण परिणाम अगर उम्मीद की तुलना में अलग दिखाई दे सकते हैं (ए। (बी) अवरोध तनाव ऊष्मायन / प्लेटें से पहले पूरी तरह से सूखा नहीं था सूखा या (सी) नहीं थे। एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें यह आंकड़ा की।
Discussion
इस बैक्टीरियल प्रजातियों प्रतियोगिता प्रोटोकॉल है कि वह दूसरों से अलग करता है की एक महत्वपूर्ण कदम है, अवरोध की रात ऊष्मायन प्रतियोगी को अलग अलग करने के अलावा पहले है। अवरोध तनाव इस विकास की अवधि निरोधात्मक यौगिकों का उत्पादन करने की आवश्यकता है। के रूप में प्रतियोगी तनाव एक ही माध्यम के शीर्ष पर मढ़ा जाता है, इस विधि शोधकर्ता पूरी क्षमता का निरीक्षण करने के लिए अनुमति देता है अवरोध तनाव के प्रतियोगी तनाव के विकास के साथ हस्तक्षेप करने के लिए। नतीजतन, इस परख क्या प्रकृति के साथ होता है को दर्शाता है; एक अलग पूरी तरह से एक आला में स्थापित किया गया है, और अन्य सफलतापूर्वक आला आक्रमण करने के लिए सक्षम होने के लिए किसी भी निरोधात्मक चर प्रतिक्रिया करने के लिए सक्षम होना चाहिए।
वहाँ है कि ज्यादातर गलत परिणाम पैदा करने के लिए गलत तरीके से प्रदर्शन की संभावना है इस प्रोटोकॉल के दो हिस्से हैं। सबसे पहले, vaporizer बोतलों की अधूरी नसबंदी परख में बैक्टीरिया को दूषित कर लागू कर सकते हैं। Incuएक बाँझ बर्तन में कदम 3.6 में vaporizer बोतल कुल्ला करने के लिए इस्तेमाल किया शोरबा के bation बोतलें पुष्टि करने के लिए पूरी तरह से निष्फल रहे थे इस्तेमाल किया जा सकता है। ऐसे Virkon के रूप में कीटाणुनाशक समाधान, में अतिरिक्त washes, सतह सक्रिय सफाई एजेंट में धोने, 3.2 चरण में वर्णित करने से पहले इस्तेमाल किया जा सकता है, तो अतिरिक्त नसबंदी की आवश्यकता है।
एक दूसरा कदम है कि गलत परिणाम कारण हो सकता है प्रतियोगी तनाव (कदम 6.1) के कमजोर पड़ने है। कमजोर पड़ने इष्टतम नहीं है, तो निषेध का स्पष्ट माप आसानी से निर्धारित नहीं किया जा सकता है। इस परख अवरोध उत्पादक एस बनाम ग्राम पॉजिटिव और ग्राम नकारात्मक प्रजातियों में से एक विस्तृत श्रृंखला में उपभेदों के रूप में विभिन्न नाक वियोजन का उपयोग कर अनुकूलित किया गया था प्रतियोगी तनाव 7.8 के रूप में ऑरियस SH1000। यह बाद में प्रतियोगी और अवरोध करनेवाला उत्पादक उपभेदों के रूप में विभिन्न coagulase नकारात्मक और सकारात्मक coagulase-staphylococci का उपयोग कर परीक्षण किया गया है। जब प्रतियोगी के रूप में ऊपर वर्णित के अलावा अन्य पीढ़ी का परीक्षणतनाव, inoculum के लिए कमजोर पड़ने के कुछ अनुकूलन आवश्यक हो सकता है।
अगर स्पष्टता स्कोर दोहराता के बीच काफी भिन्नता है, यह एक विशिष्ट ऑप्टिकल घनत्व के लिए यह निर्धारित करके प्रतियोगी तनाव inoculum मानकीकृत करने के लिए आवश्यक हो सकता है। हालांकि, इस समय परख स्थापित करने के लिए ले जाता है, और यह प्रयोग के प्रति संसाधित करने के लिए संभव है उपभेदों की संख्या को कम करने की संभावना है में वृद्धि होगी। नेत्रहीन एक उचित आयुध डिपो एक मैकफ़ारलैंड मानक का उपयोग कर एक तेजी से विकल्प प्रदान कर सकता है संस्कृति का समायोजन।
इस तकनीक की एक सीमा यह है कि यह केवल कृषि बैक्टीरिया के लिए लागू किया जा सकता है। यही कारण है कि कई अध्ययनों -16 rRNA अनुक्रमण का उपयोग प्रतिस्पर्धी बहिष्कार बातचीत 3,4,13 भविष्यवाणी करने के लिए। हालांकि, आनुवंशिक और metagenomic तकनीक सिर्फ एक ही प्रजाति के स्तर के लिए समुदाय के सदस्यों को अलग कर सकते हैं, और / या विशेष intraspecific विशेषता बदलाव के लिए खाते में नहीं है। यह एक particul के सहयोग के लिए स्क्रीन के लिए संभव हैएआर जीन है कि उपस्थिति या बैक्टीरियल प्रजातियों 5 के अभाव के साथ एक विशेषता encodes, लेकिन यह एक जीन एक प्रजाति के बहिष्कार के साथ जुड़े होने की संभावना के पूर्व ज्ञान की आवश्यकता है।
इस तकनीक का एक सुरक्षा विचार है कि, बैक्टीरिया की एयरोसोल पीढ़ी के कारण, यह केवल प्रयोगशालाओं में एक स्तर 2 सुरक्षा कैबिनेट के साथ इसी तरह सुरक्षा सावधानियों के साथ प्रयोग किया जा सकता है, या है। वहाँ वियोजन कि intraspecific विशेषता बदलाव के लिए खाते और बैक्टीरिया के एयरोसौल्ज़ नहीं पैदा करते हैं के बीच प्रतियोगिता के लिए परीक्षण करने के लिए वैकल्पिक तकनीकों हैं। ऐसा ही एक तरीका एक साथ विरोध परख 2 है। इस विधि में, एक अलग से एक inoculum एक अगर प्लेट पर फैल जाता है, और एक दूसरे को अलग inoculum देखा या शीर्ष पर छुरा घोंपा है एक बार पहले सूख गया है। यह एक पर्यावरण जहां उपभेदों सीधी प्रतिस्पर्धा (एक साथ विरोध) में हैं उत्पादन होगा, दोनों निरोधात्मक यौगिकों का उत्पादन और पहली पोषक तत्वों मांजना के लिए प्रतिस्पर्धा। लाभएक साथ विरोध परख पर आस्थगित विकास निषेध परख के ई अवरोध को अलग हमेशा पूरी तरह से प्रतियोगी को अलग के आक्रमण से पहले स्थापित किया जा रहा से प्रतिस्पर्धात्मक लाभ है चाहिए। सबसे आलों में के रूप में, एक अलग से पहले एक और तनाव जोड़ा जाता है, बजाय दो वियोजन एक ही समय पर 8 जोड़ा जा रहा है स्थापित किया जाएगा यह वही है जो वातावरण में होगा की अधिक प्रतिबिंबित करता है।
एक अन्य विकल्प के जीवाणुओं की एयरोसोल पीढ़ी से बचने के लिए प्रतियोगी शीर्ष अगर में अलग-थलग, जो बजाय डाला जा सकता है अवरोध को अलग पर छिड़काव जोड़ने के लिए होगा। हालांकि, शीर्ष अगर जोड़ा की मात्रा प्लेट की भी कवरेज सुनिश्चित करने के लिए लगभग 3 मिलीलीटर होने की आवश्यकता होगी। इस खंड के भीतर, प्रतियोगी को अलग अलग अवरोध के रूप में एक ही मीडिया पर बढ़ नहीं होगा, तो कम हो पोषक तत्वों से ग्रस्त नहीं होगा। प्रतियोगी भी UNT किसी भी निरोधात्मक यौगिकों के साथ सीधे संपर्क में नहीं होगाआईएल वे शीर्ष अगर में दूर तक फैला हुआ। इस तरह की एक परख आस्थगित निषेध या एक साथ विरोध के रूप में वर्णित नहीं किया जा सकता है।
इसी तरह की एक विधि पहले से नैदानिक एस के बीच bacitracin प्रतिरोध के स्तर का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है ऑरियस 10 आइसोलेट्स। यहां वर्णित प्रोटोकॉल और है कि 10 के द्वारा वर्णित के बीच मुख्य अंतर यह है, बाद केवल ढेर सारे प्रतियोगी संवेदनशील (inhibition- स्पष्टता स्कोर 0 पूरा) या प्रतिरोधी के रूप में उपभेदों है (कोई inhibition- स्पष्टता के लिए आंशिक स्कोर 1-5)। आस्थगित विकास निषेध परख इसलिए भी उपन्यास बहु दवा प्रतिरोधी रोगजनकों के खिलाफ सक्रिय antimicrobials के लिए खोज करने के लिए विशेष रूप से antimicrobials, या यहाँ तक के उत्पादकों को प्रतिरोध के स्तर के लिए स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
यह सुझाव दिया गया है कि मेजबान microflora जीवाणु समुदाय 9 की अवांछनीय सदस्यों को समाप्त करने के लिए चालाकी से किया जा सकता है। Corynebacteria या Staph के आवेदनylococcus एपिडिडर्मिस पहले से ही एस समाप्त करने के लिए दिखाया गया है आबादी 11,12 का एक महत्वपूर्ण अनुपात में nares में ऑरियस बसाना। विशिष्ट उपभेदों कि प्रतिस्पर्धात्मक रूप से इस तरह के यहाँ वर्णित एक के रूप तकनीकों के माध्यम से मेजबान वनस्पतियों की अवांछनीय सदस्यों, बाहर कर सकते हैं, में अध्ययन इसलिए भविष्य चिकित्सा विज्ञान को जन्म दे सकता है।
Disclosures
लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
जेसीएम यूनिलीवर पीएलसी (बी बी / L023040 / 1) के साथ एक बीबीएसआरसी-आईपीए पुरस्कार द्वारा वित्त पोषित है। डायन उच्चतर शिक्षा पीएचडी छात्रवृत्ति की एक सऊदी अरब मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain heart infusion broth | Lab M | lab049 | rich general purpose media |
| agar-agar | Merck Milipore | 101614 | |
| Petri dishes | Sarstedt | 82.1473.001 | |
| Plastic perfume vaporizer | not known | - | 10 cm high with 3.5 cm diameter clear plastic spray bottle with lid, purchased from the travel section of a supermarket |
| Universal bottles | no longer in production, alternative SLS BOT5006 | 28 ml glass cylindrical bottle (~280 mm diameter, 850 mm height), flat bottomed with plastic screw cap | |
| Decon 90 | Decon | surface active cleaning agent |
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