Прижизненные микроскопии и Тромб индукция в мочке из безволосой мыши

Summary

Модель уха безволосой SKH1-Hr ^ч мыши позволяет прижизненную флуоресцентную микроскопию микроциркуляции и фототоксической индукции тромба без предварительного хирургического препарата в исследуемом микрососудистом русле. Таким образом, ухо безволосой мыши является отличным в естественных условиях модели для изучения сложных взаимодействий в процессе образования тромба, микрососудистой эволюции тромба, и тромболизис.

Abstract

Тромботический осложнения сосудистых заболеваний являются одной из ведущих причин заболеваемости и смертности в промышленно развитых странах. Из - за сложные взаимодействия между клеточными и не-клеточными компонентами крови во время образования тромба, надежные исследования физиологии и патофизиологии тромбоза могут быть выполнены только в естественных условиях. Таким образом, эта статья представляет собой модель уха в безволосых мышей и фокусируется на анализе в естественных условиях микроциркуляции, образования тромбов и развития тромбов. С помощью прижизненной флуоресцентной микроскопии и внутривенного (IV) применения соответствующих флуоресцентных красителей, повторяющийся анализ микроциркуляции в предсердии легко может быть выполнен без необходимости хирургической подготовки. Кроме того, эта модель может быть адаптирована для исследований в естественных условиях различных проблем, включая заживление ран, реперфузионного повреждения, или ангиогенеза. Таким образом, ухо безволосых мышей является идеальной моделью для в ЛьвовО исследовании микроциркуляции кожи в физиологических или патофизиологических условиях и для оценки его реакции на различное системное или местное лечение.

Introduction

Целью данной статьи является описание методики прижизненной микроскопии, приложенной к ушной раковине безволосой мыши для прямого наблюдения и анализа микроциркуляции, образования тромбов и эволюции тромба. При скорости падения 1 в 1000, венозный тромбоз по-прежнему является частой причиной заболеваемости. Несмотря на то, диагностика, профилактика, стратегии и методы лечения были разработаны в последние годы, одна треть венозного тромбоза проявляется как эмболии легочной артерии ^1. Артериальный тромбоз играет важную роль в сердечно-сосудистых заболеваниях, которые являются наиболее частой причиной смерти в промышленно развитых странах. Артериа....

Protocol

Все эксперименты в естественных условиях (7221.3-1-006 / 15) были проведены в соответствии с немецким законодательством о защите животных и Руководстве NIH по уходу и использованию лабораторных животных (Институт лабораторных животных ресурсов, Национальный исследовательский совет).

1. Общие Keeping животных

1. Выполните эксперименты с самцам мышей ^ч SKH1-Hr в возрасте от 4 до 6 недель. Использование животных с весом от 20 до 25 г.
2. Хранить животное в патогена объекта и в стандартных условиях от 24 до 26 ° C и примерно 60% относительной влажности, с устойчивым доступом к воде и пищи неограниченных ....

Results

Эффекты каннабиноидов лечения на тромбообразование

После инъекции 0,05 мл FITC-декстрана, фототоксические индукции тромба приводит к повреждению эндотелия и образованию пристеночного тромба (фиг.2 и 3). В настоящем исследовании, тромб индукции после внутрибрюшинной инъекции каннабиноидов (5 мг / кг веса тела) или транспортного средства приводит к тромботической окклюзии сосуда во всех венул

Discussion

Есть несколько важных шагов для успешной индукции тромба в мочке уха мышей ^ч SKH1-Hr. Для устранения неполадок, соответствующие этапы протокола, указаны в скобках.

условия Экзаменационные идеальны у молодых животных в возрасте 4 - 6 недель и с низким ороговения эпидермиса. В более старых животных, качество визуализации сосудов хуже и менее сопоставимы за счет более высокой расстояния между поверхностью кожи и целевых сосудов (этап 1.1).

Для того, чтобы.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Мышки СХ-1/ч	Charles River	477	можно приобрести у других продавцов
стандартный	лабораторный пищевой ssnuff Spezialdiaeten	V1594-0	можно приобрести у других продавцов;
операционный стереомикроскоп	Leica	M651/M655	можно приобрести у других продавцов;
прижизненный микроскоп	Zeiss	Axiotech Vario 100	можно приобрести у других продавцов;
цель (20X/0.95)	Zeiss	20x/0,50 Вт; План-НЕОФЛУАР	можно приобрести у других продавцов;
объектив (63X/0.95)	Zeiss	63x/0,95 Вт; ACHROPLAN	можно приобрести у других продавцов;
черно-белая CCD-камера	Пипер	FK 6990 IQ-S	можно приобрести у других продавцов;
DVD-рекордер	Panasonic	DMR-EX99V	можно приобрести у других продавцов;
натрия хлорид	Braun	5/12612055/1011	можно приобрести у других продавцов
Кетамин 10%	Bela pharm	F3901-6	можно приобрести у других продавцов
Ксилазин 2%	Bayer	6293841.00.00	можно приобрести у других продавцов
ФИТК-дестран 5%	Сигма	46945-100MG-F	можно приобрести у других поставщиков
дексапантенол 5% глазная мазь	Bayer	6029009.00.00	можно приобрести у других продавцов
формальдегид 4%	Sigma	HT501128-4L	можно приобрести у других продавцов;
DMSO	Sigma	472301	можно приобрести у других поставщиков;
накладки 5 x 5 x 1 мм	Menzel	L4339	можно приобрести у других продавцов;
Клейкие ленты	Leukosilk	4683400	можно приобрести у других производителей
центрифуга	Beckman Coulter	CLGS 15	можно приобрести у других продавцов;
гематологический анализатор	Sysmex	KX-21 A6980	можно приобрести у других вендоров;
ЭДТА-пробирка для крови	Sarstedt	201,341	можно приобрести у других продавцов
ватные палочки	Sanyo	604-A-1	можно приобрести у других продавцов;
инфракрасный фонарь	Beurer	5/13855	можно приобрести у других продавцов;
одноразовый синринг	Braun	2020-08	можно приобрести у других поставщиков
инсулиновый шприц	Braun	9161502	можно приобрести у других продавцов;
одноразовые иглы для подкожных инъекций	Braun	465 7640	можно приобрести у других продавцов;
сквозной капиллярный	Sarstedt	19,447	можно приобрести у других продавцов
нагревательную плиту	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	можно приобрести у других производителей
ножницы 14,5 см	Aesculap	BC259R	можно приобрести у других вендоров
иглодержатель	Aesculap	BM081R	можно приобрести у других продавцов
микрощипцы	Aesculap	BD331R	можно приобрести у других вендоров;
микроножницы	Aesculap	OC496R	можно приобрести у других вендоров;
скальпель 21	Дальхаузен	11.000.00.511	можно приобрести у других продавцов
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	можно приобрести у других поставщиков
Пролен 6-0	Ethicon	XN8706. P33	можно приобрести у других вендоров
электрокаутер	Servoprax	H40140	можно приобрести у других вендоров;
Прокладка			со встроенным подогревом, 0,5  см высотой