Summary
hava-sıvı kristal arayüzünde megamolecular biyopolimerlerin kurutma kaynaklı kendini entegrasyon için bir yöntem olup burada sağlanır. Bu metodoloji Biyopolimerlerin makroskopik potansiyellerini anlamak için değil, aynı zamanda biyomedikal ve çevre alanlarında yumuşak malzemeler için bir değerlendirme yöntemi olarak sadece yararlı olacaktır.
Abstract
su kullanımı Yaşayan organizmalar daima ortamda kurutma yatkındır. damar demetleri olarak suyun hareket ettirilmesi ve cilt katmanlarında suyun nemlendirici vakalarında görüldüğü gibi Bunların faaliyetleri, biyopolimer bazlı mikro ve makro yapılar yönlendirmektedir. Bu çalışmada, kurutma üzerine biyopolimerlerin oluşan bir sulu sıvı kristalin (LC) çözeltiler etkisini değerlendirmek için bir yöntem geliştirdi. LC biyopolimerler megamolecular ağırlığa sahip olarak, polisakkaritler, sitoskeletal proteinler ve DNA çalışması seçtik. polarize ışık altında kurutma sırasında biyopolimer çözeltilerinin gözlem kararsız hava LC arayüzü başlayarak milliscale kendini entegrasyonu ortaya koymaktadır. Sulu LC biyopolimer çözeltiler dinamiklerinin bir tek taraflı açık hücreden suyun buharlaştırılması ile kontrol edilebilir. Çapraz-polarize ışık kullanılarak çekilen görüntüleri analiz ederek, yönelim düzeni parametresinde uzay-zamansal değişikliklerin tanımak mümkündür. Buyöntem yapay çeşitli alanlarda malzemeler, aynı zamanda doğal yaşam dokuların sadece karakterizasyonu için yararlı olabilir. Biz biyomedikal ve çevre alanlarında yumuşak malzemeler için bir değerlendirme yöntemi sağlayacağına inanıyoruz.
Introduction
Biyopolimerlerin katı, çubuk şeklinde yapılar üzerinde yoğunlaşarak, dinamik yumuşak malzemeler polisakarit biyofilm matrisler 1, sitoskeletal proteinler 2 oluşan "aktif jeller" ve istenen şekil 3 "DNA origami" da dahil olmak üzere, çeşitli uygulamalarda kullanılmaktadır. yapısal özelliklerini açıklamak için, bir çok stratejileri, transmisyon elektron mikroskopisi, tarama elektron mikroskopisi, atomik kuvvet mikroskopisi ve konfokal floresan mikroskobu olarak, araştırılmıştır. Bu yöntemler çoğunlukla kurutulmuş veya statik halde üstlenilen çünkü Ancak, gerçek yaşam sistemlerinde görüldüğü gibi, makroskopik ölçeklerde dinamik davranışları açıklamak zordur. Son zamanlarda, başarılı bir şekilde polarize ışığın 4 boyunca, sulu hava LC arayüzünde biyopolimerlerin dinamik davranışı görülmektedir. yönlendirilmiş bir yapı kazandırmak görselleştirilmesi sırasında biyopolimer kurutulurkenÇözelti, geçici değişiklikler kararsız hava LC arayüzünde biyopolimerlerin kendini entegrasyonunu göstermektedir.
Burada, polarize enstrümanları kullanarak hava-LC arayüzü LC biyopolimer çözeltiler kurutulması için bir protokol açıklar. 5, 6 kurutma değerlendirmediğiniz LC fazının diğer analizler aksine, kurutma işlemi sırasında LC dinamikleri tek taraflı açık hücre sıvı fazın yan görünümde yönelim düzeni parametresinin değerlendirilmesinden burada incelenmiştir . Hücre buharlaştırma kombinasyonu ve kontrollü bir buharlaşma yönü ile makroskopik izlenmesi için izin polarize araçların kullanımı. Buna ek olarak, bu yöntem etkinliğini göstermek için, moleküler ağırlık, konsantrasyon vs etkilenen adsorbe mikro bölgeleri, kristalin yapılar üzerinde yoğunlaşarak kurutma kayıtları doğrulamak mümkün olduğunu, kurutma proörneğin polisakaritler, mikrotübüllerin (MTS), ve DNA olarak rijit çubuk şekilleri ile bazik biyopolimerler ve proseslerine araştırılmıştır. bunlar megamolecular ağırlıklara sahip hiyerarşik makromoleküllerin tipik örnekleridir ve bunların moleküller arası etkileşimler LC durumları meydana sağlayacak dolayı bu biyopolimerlerin seçtik.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Araçlar
- Polarizasyon cihazı
- Bir polarizasyon aygıtı oluşturmak için, bir halojen lamba, bir ışık kılavuzu, polarize, örnek bir sahne, bir optik tren, çubuk anlamına gelir ve bir dijital tek lens refleks kamera (bir ışık kaynağı temin kutuplaşmayı Şekil 1C ve Malzeme Listesi bkz cihaz parçalar).
Biyopolimer Çözüm 2. Hazırlık
- polisakkarit çözümleri
- Birden fazla 12 saat boyunca ~ 80 ° C'de karıştırma ile saf su (100 mL) içinde sacran 7 (0.5 g) içinde çözülür. çözünme esnasında, buharlaşmayı önlemek için bir plastik film ile bir kap kapağı. aynı şekilde, ksantan sakızının, sulu bir çözelti hazırlayın.
- % 0.5 ağırlık sulu çözeltiler elde etmek için ~ 25 ° C 'de çözüm soğutun.
- kirletici maddelerin (48.400 x g, 4 ° C, 1 saat, 3 tim kaldırmak sacran çözeltisi santrifüjes).
- MT çözümü
- Bir Britton-Robinson tamponu içinde% 0.5 ağırlık tübülin solüsyonu (1 mL) ile hazırlanması (80 mM N, N'-bis piperazin (2-etansülfonik asit) (PIPES), 1 mM etilen glikol-bis (β-aminoetil eter) - N, N, N 'N' tetraasetik asit (EGTA), buz 8 ve 5 mM MgCl2, pH 6.8).
- % 0.5 ağırlık tübülin çözeltisi (50 uL) ve kullanım guanozin-5' - [(α, β) -methyleno] trifosfat (GpCpp) (5 uL), bir GpCpp içeren tübülin solüsyonu (50 uL) hazırlanır. stabil bir MT çekirdeği elde etmek için 3 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.
NOT: GpCpp rolü MT oluşumunu desteklemek ve tamamen tübülüne MT depolimerizasyonunu bastırmaktır. - stabil bir% 0.5 ağırlık MT çözelti elde etmek için 1 gün boyunca ~ 25 ° C 'de% 0.5 ağırlık tübülin çözeltisi (950 uL) ve GpCpp içeren tübülin solüsyonu (50 uL) karıştırın.
- DNA solüsyonu
- (1 mM EDTA içeren 10 mM Tris, pH 8.0,) Tris-EDTA tampon maddesi çözeltisi içinde bir% 0.5 ağırlık, DNA çözeltisi (1 ml) hazırlayın.
- Kurutma deney için, 25 ° C 'de% 0.5 ağırlık biyopolimer örnek eriyiği bulundurun.
Çapraz polarize ışık altında 3. Kurutma Deneyleri ve Gözlem
- Tek taraflı açık hücre içindeki çözeltileri (Şekil 1A)
- Bir silikon levha kesme 1 mm bir kalınlığa sahip olan, uygun bir şekil (Malzeme listesi) (5-15 mm, 1 mm bir iç boyutu ve yaklaşık 20 mm, Şekil 1A).
- ~ 20 mm ve iki modifiye edilmemiş bir cam slaytlar (76 mm x 1 mm ile 26 x) 5-15 mm arasında, 1 mm bir iç boyutu olan bir silikon ayırıcı oluşan tek taraflı açık hücre monte ve. dışarı sızmasını örnek çözümü tutmak için önceden çift klipleriyle hücrenin her iki tarafını sabitleyin.
- Yavaş yavaş ~ 1 mm gözenek boyutlu bir pipet kullanılarak 0.5 ağırlık% biyopolimer çözeltisi (100-300 ul) her bir ekleme~ 25 ° C 'de, her bir hücreye te ucu. bir şırınga iğnesi kullanarak hücrelerin içindeki hava kabarcıklarını çıkarın.
- buharlaştırma için atmosfer basıncı altında 60 ° C'de bir hava sirkülatör bir fırında hücreleri yerleştirin; Buharlaşma yönü yerçekimi edilene tersidir.
- Bir silikon levha kesme 1 mm bir kalınlığa sahip olan, uygun bir şekil (Malzeme listesi) (5-15 mm, 1 mm bir iç boyutu ve yaklaşık 20 mm, Şekil 1A).
- Çapraz polarize ışık altında Gözlemler (Şekil 1B-1C)
- Geniş bir alanı (80 mm x 80 mm) üzerinde düz bir yüzey ışık kaynağı ile 100 W halojen lamba aracılığıyla düz bir görülebilir ışık sağlar. Tutucuları (Şekil 1C) kullanılarak 45 ° ve 135 ° 'ye polarizörleri ayarlayın.
- Bir optik tren ve çubuk standları (Şekil 1C) kullanılarak ışık kaynağı, polarizörler, numune aşamasında ve kameranın konumlarını saptamak. İki polarizörler Numune katı yerleştirin (polarizörler arasındaki mesafe ~ 5 cm olmalıdır). odaklama sağlamak için numune aşamasından ~ 20 cm kamerayı yerleştirin.
- Verilen zamanlarda, pola arasındaki aşama 3.1.3 örnekler yerleştirmekXZ-düzleminde sahne paralel rizers ve siyah bir perde cihazı kapsamaktadır; Gerçek cihaz Şekil 1C 'de gösterilmiştir.
- Standart zoom lensle dijital tek lensli refleks kamerasını kullanarak doğrusal çapraz polarize yoluyla örnekleri fotoğraflamak (Malzeme Listesi bakınız). Bilgisayar yazılımı (Malzeme Listesi bakınız) kullanılarak, bu tür odak mesafesi gibi kamera ayarlarını kontrol edin.
- Iletilen ışık yoğunluğunun uzay-zaman analizi (Şekil 1C)
- Kurutma işleminde yönelim düzeni parametre değişikliğini değerlendirmek için, 24 saat boyunca saat başı fotoğraf toplar.
- (Örneğin, ImageJ) bir görüntü işleme programı kullanılarak bir gri değer olarak, Z-doğrultusunda merkez hattı boyunca geçen ışık yoğunluğu ölçülür.
- üst açık tarafı olan uzaklığın bir fonksiyonu olarak, gri değer grafiğe geçirilir.
- Çapraz-polarize aydınlatabiliriz altında mikroskopik gözlemlert (Şekil 1D)
- Yöntemleri kontrol bir CCD kamera 9 ile donatılmış bir polarizasyon mikroskobu ile mikroskobik gözlemler yapmak. ışık yolu bir ilk dereceden geriliği plakasını tutun. PC yazılımı kullanılarak fotoğraflar için koşulları kontrol edin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1 'de gösterildiği gibi, aygıt kullanılarak, mikro bölgesi kendi kendine entegrasyon hava LC arayüzü değerlendirilmiştir bir kurutma (Şekil 2A) ile macrodomain için. Kurutma Deneyin ilk gösterimi olarak, megamolecular polisakaritler, sacran (Mw = 1.9 x 10 7 g mol-1) ve ksantan sakızı (4.7 x 10 6 g mol-1) iki türlü karşılaştırıldı. Şekil 2B, çapraz polarize ışık altında hücrenin içinde çözeltiler fotoğraflarını göstermektedir. Kurutma önce, her iki çözümlerinde bir dağınık halde iletilen ışık ile birkaç parlak bölgeleri gözlemlemek mümkündü. 6 saat boyunca 60 ° C'de kurutulduktan sonra, sacran çözelti içinde hava LC arayüzü altında bölgesi önemli ölçüde yüksek olmuştur. Bu etki, bir jel büzülme sürecine deri tabakası oluşumuna benzer arayüzde makroskopik yönlendirilmiş bir yapısı, oluşturulmuş olduğu anlamına gelir"xref"> 10. sıcaklık sadece 60 ° C ile 25 ° C arttırıldı ve bazı küçük macrodomains arayüzü altında gözlendi Öte yandan, ksantan çözeltisi yoğunluğu önemli ölçüde azalmıştır. ksantan mikro bölgesi hareketliliği çok daha hassas sacran mikro bölgesi daha sıcaklığına olmasıdır. arabirimde yönelim kritik farklılıklar böylece polarizasyon cihazı kullanılarak tespit edilmiştir.
Şekil 2C ve film S1 sacran çözelti içinde kurutma işlemi için uzay-zaman analizinin sonuçlarını göstermektedir. iletilen ışık yoğunluğu mikro bölgesi ve yönelim düzeni parametresini gösterir. hava-sıvı arayüzü etrafında en yüksek yoğunluğu önemli ölçüde artmış ve kalınlığı yaklaşık 2 mm büyüdü. Bu sonuçlar, mikro bölgeler, hava-LC arabirimi bir mesafede yönlendirmek için başlangıç olduğunu göstermektedirarayüze bir milliscale alan paralel olarak büyümeye d. polarize ışık altında Bu gözlemden, kurutma işleminde sıvı hareketleri görselleştirmek için mümkündür.
Macrodomain boyut ve yönlenme yönü açısından sacran ve ksantan zamkı arasındaki farklılıklar da birinci dereceden geriliği plaka (Şekil 2D), bir polarizasyon mikroskobu ile doğrulanmıştır. sacran sıvı faz, bir tek macrodomain arayüzünde oluşan, yani bir mavi bölge gösterdi. Buna karşılık, ksantan sakızı, sıvı hali birden macrodomains herhangi bir yönde oluşturulabilir, yani, mavi, sarı ve pembe bölge gösterdi.
Bu yöntem, aynı zamanda megamolecular ağırlıkları ile bazik katı biyopolimer üç tip karşılaştırılması için araştırılan - polisakaritler (sacran: Mw = 1.9 x 10 7 g mol-1, mikro bölgeuzunluk> 20 um), MTS (Mw = 10 9 -10, 10 g mol-1, mikro bölge uzunluğu> 10 um) ve DNA (M 1.3 x 10 6 g mol-1, w = mikro bölge uzunluğu <1 um) - 37 ° C'de bir fizyolojik ortamda. Şekil 3B'de gösterildiği gibi, kurutmadan önce, sacran çözeltisi ve MT çözeltisi bütün bölgede dağınık etki ile, benzer bir LC durumları göstermektedir. Kurutma işlemi sırasında, MT çözelti içinde etki de hava-LC arayüzünden kendini entegrasyonu uygulandı ve dağınık alanlar, tek bir macrodomain entegre edilmiştir. Öte yandan, DNA solüsyonu sıvı fazda özel bir yönünü göstermektedir. MT çözeltisi ve tampon ile hazırlanan DNA, bu çözüm durumunda, entegrasyon kurutma sırasında tuz konsantrasyonu, pH, ve iyonik güç değişikliklerden etkilenen dikkat etmek önemlidir.
(Şekil 3C) bir polarizasyon mikroskobu kullanılarak gözlendi değerlendirmektir. sacran kurutma rekor çünkü milliscale tek macrodomain oluşumunun önemli çift kırılma yoğunluklarını sergiledi. MT kurutma kayıt için, uzun eksen x-eksenine paralel olarak dalgalı demetleri görülmektedir. Bunun tersine, DNA çözeltisi kurutma kaydı tane şekilli macrodomains <5 um çapında ve rasgele doğrultularda gösterdi. Bu gözlemlerden, macrodomain boyut çubuk benzeri mikroalanları uzunluğu etkilenir olduğu açıktır. Bir polarizasyon mikroskobu kullanılarak kurutma kayıtları gözlemleyerek biyopolimer mikro bölgesini yönlü yönlendirme değerlendirmek azaltılabildi.
Sonuç olarak, polarize ışık kullanılarak yöntemleri kullanıldıKurutma havası-LC arayüzünde megamolecular biyopolimerlerin kendini entegrasyonu. Sulu LC çözeltiler dinamiklerinin bir tek taraflı açık hücreden suyun buharlaştırılması ile takip edildi. Çapraz-polarize ışık kullanılarak çekilen görüntüleri analiz ederek, uzay-zamansal değişim ve yönelim düzeni parametresini tanımak mümkündü. gösterdi kurutma işleminın doğal süreçlere benzer olduğu göz önüne alındığında, bu yöntem, çeşitli alanlarda, sadece yapay malzemelerin karakterizasyonu için faydalı değil, aynı zamanda doğal yaşam dokuların olacaktır. Bu biyomedikal ve çevre alanlarında yumuşak malzemeler için bir değerlendirme yöntemi sağlayabilir inanıyoruz.
Şekil 1: deney kurutma. (A), tek taraflı açık hücre içinde çözeltiler şematik gösterimi. (B)çapraz polarize ışık altında gözlemler için kullanılan deneysel cihazın şematik gösterimi. polarizörler normal olarak 45 ° ve 135 ° 'ye ayarlanmıştır. (C) Gerçek cihaz. Bu şekil, başvuru 6 modifiye edilmiştir. Telif Hakkı: Amerikan Kimya Derneği, 2016 bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: polisakaridler sacran ve ksantan zamkı, sulu çözeltilerin Kurutma. (A) Kurutma havası-LC arayüzünde kendini entegrasyon şematik gösterimi. (B) kendi başlangıç halinde ve sonra polisakarid çözümleri iki tür yan incelemelerçapraz polarize ışık altında 60 ° C'de kurutma 6 saat. ilk polimer konsantrasyonları ağırlıkça% 0.5 idi. (C) Belirli bir zamanda alınan her resim için Z-yönü içinde, bir hat üzerinde bir çapraz Nicols içinden ışık yoğunluğu Bulaşan. (D) 60 ° C'de kurutma, 6 saat sonra hücre içinde polimer çözeltilerinin Polarizasyon mikroskobik görüntüleri. Kırmızı oklar: arabirimde macrodomains. Bu şekil, başvuru 6 modifiye edilmiştir. Telif Hakkı: Amerikan Kimya Derneği, 2016 bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: biyopolimer sulu çözeltiler ve kurutma kayıtlarının Kurutma. (A), polys Kaynaklarıaccharides (siyanobakteri), MTS (domuz beyin) ve DNA (somon testis). (B) çapraz polarize ışık altında 37 ° C'de kurutma sırasında sacran, MT ve DNA çözeltilerinin yandan görüntüleridir. ilk polimer konsantrasyonları ağırlıkça% 0.5 idi. (C) çapraz Nicols verilen yön ile cam alt-tabaka üzerinde kurutuldu, polimer filmlerin mikroskobik görüntüleri. Tüm ölçekli çubukları 50 mikron. Bu şekil, başvuru 6 modifiye edilmiştir. Telif Hakkı: Amerikan Kimya Derneği, 2016 bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayın.
Film S1: 60 ° C'de kurutma sırasında sacran çözeltisi Kurutma işlemi kullanılarak gözlenençarpı Nicols. Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dolayı iletilen ışık yoğunluğu çok düşük olmasının kamera numunesi odaklanmak için bazen zor oldu. Bu gibi durumlarda, sahnede uzun bir saydam plastik film yerleştirerek odak düzenlemek için yardımcı oldu. gözlemlenebilir çözünürlük sınırlaması ~, bu durumda 10 mikron kamera lensi bağımlıydı. örnek kalınlığı, Dy, gözlemlenebilir sınırlama ~, bu durumda 10 mm lambanın maksimum ışık şiddetine bağlı olmuştur.
Şekil 1 B 'de gösterilen cihazın avantajı, numune yan resimlerini kurutma işlemi sırasında alınması için izin vermektedir. Gözlem tipik mikroskobu kullanılır yatay bir düzlemde, dayanmadan gerçekleştirilebilir. Kurutma deneyler sırasında bir tarafı açık hücre durarak, buharlaşma yönü düzenlenir ve yerçekimi ters yönde olup. yan görünümünü izlenmesi, kurutma sıçan hesaplanmasını sağlarE 4.
Gelecekte, cihazın numune aşamasında sıcaklık ve nem düzenleyiciler yerleştirilmesiyle, otomatik olarak yönelim düzeni parametresinde zamansal değişiklikleri izlemek için mümkün olacaktır. Ayrıca, kilo değişimi izlemek için kurulumunda bir denge konsantrasyonunun tahmin yardımcı olacaktır. Bu yöntem, aynı zamanda polisakarit 11 hidroj, 12 anizotropik şişme işlemi açıklamak için kullanılabilir. Nedenle yumuşak aktüatör yapısal değişiklikleri izlemek mümkündür olacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Bu çalışma hibe-in-aid Eğitim Bakanlığı, Kültür, Spor, Japonya Bilim ve Teknoloji, Kyoto teknobilime Merkezi ve Araştırma ve Geliştirme Mitani Vakfı Genç Bilim İnsanları (16K17956) için de destek verdi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| sacran | Green Science Materials Inc., Japan | From Aphanothece sacrum. Mw = 1.9 × 107 g mol-1 |
|
| xanthan gum | Taiyo Kagaku Co., Japan | Neosoft XC | From Xanthomonas campestris. Mw = 4.7 × 106 g mol-1 |
| tubulin | Cytoskeleton, Inc., USA | T240 | From porcine brain. |
| GpCpp | Jena Bioscience, Germany | NU405L | |
| piperazine-N,N′-bis(2-ethanesulfonic acid) | Sigma-Aldrichi, Co. LLC. | P6757-500G | PIPES |
| ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid | Dojindo Molecular Technologies, Inc. | 342-01314 | EGTA |
| MgCl2-6H2O | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 135-15055 | |
| KOH | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 162-21813 | pellet |
| DNA | Sigma-Aldrich, Co. LLC. | D1626 | From salmon testes. Mw = 1.3 × 106 Da (~2,000 bp) |
| Tris-EDTA buffer solution | Sigma-Aldrich, Co. LLC. | T9285-100ML | 10 mM Tris, pH 8.0, with 1 mM EDTA |
| slide glass | Matsunami Glass Ind., Ltd., Japan | S1111 | |
| silicon rubber sheet | Asone Co. | 6-611-32 | Thickness: 1 mm |
| centrifuge | Beckman-Coulter, Inc., USA | Avanti J-25 | equipped with a JA-20 rotor |
| light source | Sumita Optical Glass, Inc., Japan | LS-LHA | |
| light guide | Sumita Optical Glass, Inc., Japan | GF7.2-1-L1500R-M80 (AAAR-015M) | 80 mm × 80 mm |
| halogen lamp | Ushio Inc., Japan | JCR 15V150WBN | |
| holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | KMH-80 | |
| sample stage | Sigmakoki, Co.,Ltd. | TARW-25503L | |
| sample holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | SHA-25RO | |
| rod | Sigmakoki, Co.,Ltd. | ROU-12-40 | |
| posts holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | RS-6-40 | |
| posts holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | RS-12-60 | |
| posts holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | RS-12-80 | |
| posts holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | RS-12-130 | |
| carrier | Sigmakoki, Co.,Ltd. | CAA-25LS | |
| camera holder | Sigmakoki, Co.,Ltd. | CMH-2 | |
| medium optical rail | Sigmakoki, Co.,Ltd. | OBA-500SH | |
| lenstube | Tomytech, BORG | lenstube BK | 80φ, L25 mm |
| lenstube | Tomytech, BORG | lenstube BK | 80φ, L50 mm |
| multiband | Tomytech, BORG | 80φ | |
| V plate | Tomytech, BORG | V plate 60S | |
| plate holder | Viexen, Co.,Ltd. | plate holder SX | |
| EOS Kiss X7i | Canon Inc., Japan | 8594B001 | with a standard zoom lens, EFP 18-55 mm |
| photographic software | Canon Inc., Japan | EOS Utility | |
| PC | Microsoft | Surface | |
| polarization microscope | Olympus | BX51 | |
| first order retardation plate | Olympus | U-TP530 | λ = 530 nm |
| CCD camera | Olympus | DP80 | |
| photographic software | Olympus | cellSens Standard | |
| Java-based image processing program | the National Institutes of Health | ImageJ |
References
- Flemming, H. -C., Wingender, J. The biofilm matrix. Nat. Rev. Microbiology. 8 (9), 623-633 (2010).
- Osada, Y., Kawamura, R., Sano, K. Hydrogels of cytoskeletal proteins. , Springer. (2016).
- Rothemund, P. W. K. Folding DNA to create nanoscale shapes and patterns. Nature. 440, 297-302 (2006).
- Okeyoshi, K., Okajima, M. K., Kaneko, T. Milliscale self-integration of megamolecule biopolymers on a drying gas-aqueous liquid crystalline interface. Biomacromolecules. 17 (6), 2096-2103 (2016).
- De Gennes, P. G., Prost, J. The physics of liquid crystals. , Oxford University Press. Oxford, UK. (1993).
- De Gennes, P. G., Brochard-Wyart, F., Quere, D. Capillarity and wetting phenomena: drops, bubbles, pearls, waves. , Springer. (2003).
- Okajima, M. K., Kaneko, D., Mitsumata, T., Kaneko, T., Watanabe, J. Cyanobacteria that produce megamolecules with efficient self-orientations. Macromolecules. 42 (8), 3058-3062 (2009).
- Okeyoshi, K., Kawamura, R., Yoshida, R., Osada, Y. Thermo- and photo-enhanced microtubule formation from Ru(bpy)32+-conjugated tubulin. J. Mater. Chem. B. 2, 41-45 (2014).
- Olympus. Support BX51P. , Available from: http://www.olympus-ims.com/microscope/bx51p/ (2016).
- Matsuo, E. S., Tanaka, T. Kinetics of discontinuous volume-phase transition of gels. J. Chem. Phys. 89, 1695-1703 (1988).
- Okajima, K., Mishima, R., Amornwachirabodee, K., Mitsumata, T., Okeyoshi, K., Kaneko, T. Anisotropic swelling in hydrogels formed by cooperatively aligned megamolecules. RSC Adv. 5, 86723-86729 (2015).
- Joshi, G., Okeyoshi, K., Okajima, M. K., Kaneko, T. Directional control of diffusion and swelling in megamolecular polysaccharide hydrogels. Soft Matter. 12, 5515-5518 (2016).
