Summary
Questo video articolo fornisce una dimostrazione dettagliata delle procedure necessarie per rimuovere con successo il pancreas da un mouse tramite la dissezione per l'analisi istologica e profiling metabolico.
Abstract
Stiamo indagando il fattore di trascrizione specifico del pancreas, 1a cre-ricombinasi; ratto di salmone affumicato-fermata-salmone affumicato-Kristen sarcoma, glicina, l'acido aspartico pone al codone 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) ceppo il mouse come un modello di cancro del pancreas umano. L'obiettivo dei nostri studi attuale consiste nell'identificare nuovi biomarcatori metabolici della progressione del cancro del pancreas. Abbiamo eseguito il profilo metabolico di urina, feci, sangue ed estratti di tessuto del pancreas, come pure le analisi istologiche del pancreas per mettere in scena la progressione del cancro. Il pancreas del mouse non è un organo solido ben definito come negli esseri umani, ma piuttosto è un tessuto molle diffusamente distribuito che non è facilmente identificabile da parte di persone non hanno familiarità con l'anatomia interna del mouse o da individui che hanno poca o nessuna esperienza di prestazione dissezioni di organo del mouse. Lo scopo di questo articolo è quello di fornire una dettagliata graduale dimostrazione visiva per guidare i novizi nella rimozione del pancreas del mouse tramite la dissezione. Questo articolo dovrebbe essere particolarmente utile per gli studenti e gli investigatori di nuovo alla ricerca che richiede la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.
Introduction
Il mouse è emersa come un importante modello animale di cancro del pancreas umano1,2. Nel Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modello del topo, Kristen oncogene di ratto sarcoma (K-Ras) viene attivata esclusivamente nel pancreas, con conseguente apertura di lesioni precancerose del pancreas, conosciuto come neoplasia intraepiteliale pancreatica (PanINs), che il progresso per gli adenocarcinomi duttali pancreatici, comunemente come PDACs3. Questo sistema di modello del mouse fornisce uno dei migliori modelli animali disponibili per cancro del pancreas umano4,5, con l'ulteriore vantaggio che il PanINs emergono entro i primi cinque mesi di vita e frequentemente di progresso per PDAC entro un singolo anno4,5, considerando che il cancro del pancreas si verifica più frequentemente negli esseri umani 60-70 anni di età.
Estrazione del pancreas tramite la dissezione dal Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + topi alle varie età permette per un esame istologico longitudinale dello sviluppo del cancro del pancreas, che vanno dalle prime fasi PanIN attraverso la progressione a PDAC3,4 , 5. raccolta del pancreas alle età che variano da cinque a quindici mesi può essere utilizzata anche per preparare il tessuto estratti per caratterizzare i cambiamenti globali nel pancreas4 metabolismo che si verificano durante la transizione da sano al tessuto malato 6,7.
Questo articolo presenta una guida visiva completa i passaggi necessari per eseguire un'estrazione del pancreas del mouse e fornisce linee guida per la conservazione di un pancreas per ulteriori analisi. Questa guida sarà altrettanto preziosa per individui conducendo una ricerca su altre malattie del pancreas, compreso il diabete di tipo e dovrebbero essere particolarmente utili per gli studenti e gli investigatori nuovi di ricerca che coinvolge la raccolta del pancreas del mouse utilizzando dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.
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Protocol
le procedure effettuate nel video e descritti di seguito sono state approvate da istituzionale Animal Care ed uso Committee (IACUC) presso l'Università di Miami.
1. preparazione e Test di stimolo
- stabilire due aree distinte per la procedura chirurgica, il tavolo operatorio e la tabella post-operazione. Fase di entrambe le aree con tutti i materiali e gli utensili necessari.
Tabella
- stage operativo sotto un cappuccio ventilato. Organizzare la tabella con l'apparecchiatura in un modo che permette il continua e senza ostacoli delle prestazioni della procedura.
- Stabilire una tabella di postoperatoria nella stessa stanza e vicino al tavolo principale dell'operazione. Mantenere entrambe le tabelle come ambienti sterili durante tutta la procedura.
- Posto i seguenti rifornimenti sul tavolo operatorio: un barattolo con coperchio, una provetta da 15 mL, un paio di forbici chirurgiche, una bottiglia di etanolo al 70%, due pannelli in schiuma, due pinze, due siringhe di calibro 1 mL 21, due provette da 50 mL, una provetta , un flaconcino criogenico, quattro rilievi chirurgici, dieci birilli, un dispenser di salviette sterilizzanti e un contenitore di sharps.
- Posto le seguenti forniture sul tavolo post-operazione: una bilancia analitica, uno 4 L dewar di azoto liquido, una vasta poco profonda bocca dewar, un rack di Conetti galleggiante, un paio di forbici chirurgiche, due pinze, quattro fiale criogeniche e un dispenser di salviette sterili.
- Riempire un 50 mL e un tubo da 15 mL 75% volume con formalina.
- Con uno spillo in ogni angolo, apporre un tampone chirurgico ad un Consiglio di schiuma approssimativo 30 x 30 cm per servire come il bordo di dissezione. Utilizzare i rimanenti quattro perni durante l'operazione. Preparare un piccolo bordo di schiuma con un tampone chirurgico per trasferire gli organi alla tabella post-op.
Attenzione: Isoflurano (99.9%) è una sostanza chimica tossica e deve essere utilizzato in una cappa di sfiato per garantire il massimo livello di sicurezza dall'evacuazione di gas anestetico dei rifiuti 8. Ulteriori informazioni riguardanti i rischi per i ricercatori associati all'utilizzo del metodo open-goccia con isoflurano possono essere trovate in un articolo di Taylor e Mook 8. - Inserire un tampone chirurgico il vaso di vetro e bagnare con qualche goccia di isoflurane (99.9%) e posizionare un asciugamano di carta sopra la parte superiore per evitare il contatto diretto del mouse con l'isoflurano. Analogamente, utilizzare un tampone chirurgico per linea tubo restante e bagnare con qualche goccia di isoflurano e posizionare un cuscinetto supplementare sopra la parte superiore per evitare il contatto diretto tra il mouse e l'isoflurano.
- Pour azoto liquido in bocca ampia superficiale dewar fino alla linea di riempimento massimo è raggiunto.
- Posto il mouse selezionato per dissezione in anestesia da camera, cioè il vaso di vetro con un tampone imbevuto con poche gocce di isoflurane (99.9%) coperta con il coperchio, per un minimo di ~ 1
Nota: Questo tempo varia da mouse a mouse. Una volta che il mouse è incosciente, rimuoverlo dall'alloggiamento e posizionarlo al centro del tavolo operativo. - Orientare il mouse in modo che si è sdraiato sul lato ventrale e con la testa puntato lontano dallo scienziato. Posizionare la testa all'interno del tubo interno foderato con un tampone chirurgico imbevuto con qualche goccia di isoflurane (99.9%) e un pizzico di piede per assicurare che il mouse non risponde agli stimoli per eseguire un test di stimolo.
- Se questo test ha esito negativo e il mouse risponde alla prova di pizzico del piede, ripetere il passaggio 1.8.
2. Incisione, cuore di puntura e l'eutanasia iniziale
- Pin gli arti del mouse alla scheda di schiuma chirurgica e bagnato il lato ventrale del mouse con etanolo al 70%.
- Pizzicare la pelle/pelliccia vicino all'apertura uretra con pinze e tirare leggermente verso l'alto. Fare un'incisione con le forbici chirurgiche attraverso la cavità addominale, a partire dall'apertura uretra, la linea mediana e termina al mento.
- Vicino al punto di partenza dell'incisione iniziale, afferrare un lato della pelliccia/pelle con il forcipe e fare un'altra incisione con le forbici verso il basso e in diagonale verso la zampa posteriore.
- Ripetere questa operazione nello stesso modo sul lato opposto.
Nota: La pelliccia/pelle può essere appuntata giù per creare una più ampia apertura, ma non è necessaria.
- Cuore di individuare e rimuovere il pericardio, che è la sacca intorno al cuore, per evitare l'intasamento dell'ago della siringa.
- Afferrare il pericardio con il forcipe e tagliare con le forbici. Eseguire la puntura di cuore inserendo con attenzione l'ago della siringa nel cuore pulsante e iniziare lentamente per ritrarre lo stantuffo.
- Per la raccolta del sangue ottimale, usare lo stantuffo dell'ago per imitare l'azione di pompaggio del cuore ed evitare di disegno troppo in fretta.
Nota: In genere circa 1 mL di sangue può essere raccolto. - Dopo aver completato la raccolta di sangue, dissipare il sangue nella provetta da centrifuga e smaltire la siringa nel contenitore di sharps.
- Dopo la puntura di cuore viene eseguita, eseguire l'eutanasia rimuovendo gli allegati collegamento cuore.
Nota: L'eparina, un anticoagulante, non è stato aggiunto alla siringa in questa procedura prima della puntura cuore per permettere al sangue di coagulare per raccolta del siero in questo studio specifico. Tuttavia, se il ricercatore ha desiderato impedire la coagulazione del sangue per la raccolta del plasma, l'eparina potrebbe aggiungersi alla siringa prima della puntura di cuore.
- Se lo studio comporta la genotipizzazione del mouse, praticare una porzione dell'orecchio con le forbici e inserire in una provetta da centrifuga per una verifica di genotipo.
3. pancreas estrazione
- Locate stomaco sul lato sinistro del mouse. Begin delicatamente (in modo da evitare di strappare) che separa il pancreas dallo stomaco e duodeno utilizzando due pinze.
Nota: Prima di scollegare il pancreas dallo stomaco e l'intestino, è molto importante che le pinze sono utilizzate delicatamente per guidare il tessuto pancreatico lontano gli organi e a non schiacciare o strappare il pancreas con il forcipe.- Continuano a separare il pancreas dalle sezioni piccolo intestino digiuno e ileo e infine dall'intestino cieco dell'intestino crasso.
- In intestino cieco, riposizionare il forcipe e continuare la separazione del pancreas lungo il restante colon verso il retto.
Nota: A questo punto, è conveniente tagliare e rimuovere la parte dallo stomaco alla regione del colon immediatamente precedente retto. - Individuare il pancreas e attaccato la milza. Far scorrere il pancreas verso il lato destro del mouse. Separare le connessioni rimanenti tra il pancreas e la cavità toracica con il forcipe per scollegare completamente il pancreas e la milza comunicanti.
- Rimuovere il pancreas e stenderlo per esame. Lasciare la milza associata al pancreas per scopi di identificazione.
- Rimuovi tutto del tessuto connettivo, il tessuto grasso e mesenterico dal pancreas.
Nota: Questo tessuto è più bianco nel colore e quindi può essere facilmente distinto dal tessuto del pancreas che è pinker in colore. Ciò è particolarmente importante se l'intero pancreas deve essere rimosso. Ad esempio, se il pancreas deve essere pesato e rispetto al peso corporeo o tra gruppi di animali. Nel Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + modello del topo, in particolare nei mesi precedenti, tessuto pancreatico fibroso duro potrebbe essere presente. In questo caso, la rimozione accurata del pancreas dovrà svolgersi come l'intestino potrebbe essere intrecciata nel tessuto del tumore. Nei casi avanzati, possono anche essere presenti anormale della milza e tessuto del fegato.
- Rimuovi tutto del tessuto connettivo, il tessuto grasso e mesenterico dal pancreas.
- Se lo si desidera, rimuovere altri organi a questo punto.
4. raccolta dei dati e archiviazione
- dopo l'estrazione degli organi, spostare i campioni alla zona postoperatoria per conservazione.
- Pesare ogni organo e metterli nel loro rispettivo flacone criogenico.
Nota: lungo with la massa di ciascun campione, eventuali irregolarità devono essere registrate per riferimento futuro. - Una volta che gli organi sono pesati, inserirli nell'azoto liquido per congelamento snap.
- Dopo lo snap di congelamento, riporre gli organi a-80 ° C per la conservazione a lungo termine.
- Il formalina memorizzato i campioni sulla parte superiore del banco durante la notte e la mattina successiva modificare loro soluzione da formalina in etanolo al 70%.
Nota: Questi campioni devono essere conservati a 4 ° C per la conservazione a lungo termine. - Per immagazzinaggio a lungo termine, congelare il pugno di sangue e l'orecchio a-80 ° C.. Per la raccolta del siero dal sangue, permettere al sangue di coagulare per 30 min e poi centrifugare esso. Rimuovere la parte di siero utilizzando una pipetta e quindi conservare a -80 ° C.
5. Clean Up
- Sanitize tutti la dissezione strumenti con le salviettine sterilizzante. Tappo del tubo interno foderato con l'isoflurano imbevuto chirurgiche pad. Sostituire il tampone chirurgico sulla scheda di schiuma con un tampone chirurgico fresco. Disporre le porzioni del mouse che non sono state raccolte per l'alloggio ' politica di smaltimento animale s.
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Representative Results
La figura 1 Mostra una panoramica dell'area ambiente operativa e la figura 2 Mostra l'area di operazione post. Mentre questa impostazione fornisce la quantità minima di attrezzature e messa in scena, gli individui possono scegliere di modificare questo per meglio soddisfare le esigenze individuali. Il protocollo dovrebbe essere ottimizzato secondo le specifiche esigenze dell'esperimento. Questa procedura è condotta in modo che termina la vita di un topo, che richiede adeguata euthanization9. Quando il ricercatore è pronto, il mouse viene posizionato nella camera di anestesia con i pad imbevuto di isoflurane (Figura 3).
Una volta che il mouse è incosciente, rimuovere il mouse e posizionarlo sul lato dorsale sulla scheda. Una punta-pizzico procedura deve essere eseguita per assicurarsi che il mouse sia insensibile al dolore (Figura 4). Applicare etanolo al 70% per sterilizzare la zona di incisione iniziale. Il tiraggio del sangue terminale deve essere condotto in primo luogo, prima della rimozione del pancreas, per garantire il recupero di sangue adeguato. Prima della rimozione di sangue, il pericardio dovrebbe essere rimosso per evitare l'ostruzione dell'ago 21 G di apertura. Dopo aver completato il terminal sangue disegnare, il cuore si stacca come un metodo secondario di eutanasia e il pancreas viene quindi rimosso.
Iniziare individuando lo stomaco, che fornisce un buon punto di partenza per la rimozione del pancreas (Figura 5). Nota: Occorre prestare estrema attenzione durante la rimozione del pancreas, che è un tessuto delicato e fragile, e pertanto tutte le operazioni devono essere eseguite con forza gentile. Usando il forcipe, inizio della dissezione iniziando a tirare delicatamente il pancreas dalla stomaco e continuano a separare il tessuto pancreatico dal rivestimento esterno del tratto gastrointestinale (GI) lavorando dallo stomaco al duodeno, digiuno e ileo ( Figura 6). Una volta raggiunto l'intestino cieco, facilitare la rimozione del pancreas avviene riposizionando il forcipe in modo che l'intestino cieco è in possesso di un forcipe e le altre pinze viene utilizzata per continuare a separare il pancreas dal grande intestino (Figura 7). Dopo la rimozione dal grande intestino, il pancreas è posto sul lato destro del mouse e gli eventuali allegati rimanenti sono mozzata(nella figura 8).
Il pancreas deve essere fanned per ispezione ed eventuali anomalie devono essere registrati (Figura 9). Nel Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + mouse ceppo, il pancreas potrebbe potenzialmente contengono un tumore indurito (Figura 10). Altri organi devono essere esaminati anche per potenziale metastasi. Una volta che il pancreas è stato rimosso, esso dovrebbe essere pesato e registrato il peso. Una parte del pancreas dovrebbe essere snap-congelati in azoto liquido per future analisi del profilo metabolica o altri test e una porzione del pancreas deve essere collocati in formalina per future analisi istologica. Figura 11 Mostra il deposito iniziale di vari organi raccolti dalla dissezione per uso in un'analisi successiva. Gli organi raccolti da dissezione e archiviati per un ulteriore esame dipenderà gli obiettivi del singolo ricercatore.
Campioni di tessuto e di sangue possono essere utilizzati per le analisi istologiche e profiling metabolico. Nella Figura 12è riportato un esempio dell'analisi istologica del tessuto del pancreas. Profiling metabolico può essere condotta su campioni di tessuto congelato snap e campione di sangue. Spettri di spettroscopia (RMN) rappresentante risonanza magnetica dei componenti idrofile e idrofobe di estratti di tessuto del pancreas sono mostrati in Figura 13A e 13B, rispettivamente. Un rappresentanza spettro NMR raccolto su un campione di siero preparato da campioni di sangue prelevati al momento di una procedura di estrazione di sangue terminale è illustrato nella Figura 14.
Figura 1 : Gestione temporanea di Area operativa. Layout generale degli strumenti corretti e condizioni operative per la dissezione. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2 : Allestimento della zona di post-funzionamento. Layout generale degli strumenti corretti e condizioni operative per le procedure postoperatorie. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3 : Anestesia camera. Ambiente adeguato per l'anestesia tramite isoflurano. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4 : Esame di stimolo. Il test di stimolo condotto del mouse prima l'incisione iniziale per garantire alcun dolore o disagio non è essere sopportato. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5 : Inizio rimozione del Pancreas. L'orientamento del mouse che indica l'estrazione iniziale del pancreas, posizione indicata dal forcipe. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 6 : Pancreas estrazione lungo l'intestino. Processo di isolamento del pancreas dal tratto gastrointestinale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 7 : Rimozione del pancreas all'intestino cieco. Riposizionamento delle pinze una volta l'intestino cieco è raggiunto. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 8 : Rimozione di pancreas. Posto del pancreas sul lato destro del mouse. Eventuali allegati rimanenti dovrebbero essere tagliati per rimuovere completamente il pancreas. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 9 : Pancreas esame. Il pancreas con la milza associata all'esame dopo la rimozione dal mouse. Milza è indicata dalla freccia verticale, e il pancreas è indicato dalla freccia orizzontale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 10 : Pancreas esame. Il pancreas con la milza associata visualizzati da un tumore al pancreas all'esame dopo la rimozione dal mouse. Milza è indicata dalla freccia verticale, e il pancreas è indicato dalla freccia orizzontale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 11 : Deposito di organi rimossi. Deposito appropriato di organi e campioni raccolti, preparato per l'archiviazione a lungo termine e analisi future. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 12 : Analisi istologica del tessuto pancreatico. Ematossilina ed eosina macchiato immagini da tessuto pancreatico. A) tessuto del pancreas normale da un Ptf1acre /-; LSL-KrasG12D /- controllo mouse. B) PanIN tessuto dal pancreas di un Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + Studio mouse. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 13 : Analisi del profilo metabolico. Spettri di spettroscopia (RMN) a risonanza magnetica nucleare protonica unidimensionale dei componenti di fase A) idrofila e B) idrofobo di estratti di tessuto del pancreas dopo omogeneizzazione del tessuto e sottoposto ad estrazione di cloroformio/metanolo. Gli spettri NMR sono stato acquistati a 850 MHz e sono adatti per l'uso nelle analisi metaboliche di profilatura. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 14 : Lo spettro NMR di rappresentante del siero. Il sangue raccolto dalla procedura draw sangue terminale può essere utilizzato per analisi del profilo metabolico. Questo spettro mostra un tipico spettro 850 MHz NMR protonica unidimensionale raccolti su siero ottenuto da un campione di sangue terminale sorteggio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Significato per quanto riguarda i metodi esistenti
Mentre esista altri video informale delle dissezioni del mouse, questo video articolo fornisce la prima qualità professionale, inter pares, dimostrazione visiva di tutti i passaggi dettagliati necessari per l'estrazione e la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione10 . Il pancreas è un organo principale per attività metabolica e insulino produzione, la dissezione e la raccolta del pancreas permette la conservazione delle caratteristiche fisiologiche11. Isolando il pancreas, le analisi future possono essere effettuata sul campione. Questa procedura consente il confronto e lo studio delle interazioni da altri tessuti all'interno dell'organismo stesso entro il lasso di tempo stesso.
Limiti della tecnica
La limitazione più grande di questa procedura è cessazione del mouse vita, impedendo longitudinale raccolta e campionamento di più campioni di tessuto dallo stesso mouse. Al fine di analizzare le tendenze relazionate a età, sesso o altri quantificatori, una popolazione a sezione trasversale deve essere implementata, come abbiamo fatto per il nostro studio di biomarcatori metabolici del cancro del pancreas. Un'altra limitazione di questo protocollo è l'incapacità di sospendere la procedura. Una volta avviata la euthanization, la procedura deve essere eseguita nella sua interezza.
Fasi critiche all'interno del protocollo
Esecuzione del test stimolo pizzicando la zampa posteriore del mouse è fondamentale per garantire che il mouse riceva un trattamento umano. Se il mouse non reagisce a questo stimolo, quindi la procedura può svolgersi come previsto. Tuttavia, dovrebbe il mouse visualizzare una risposta in difficoltà a seguito del test di stimolo, il mouse deve essere restituito alla camera di anestesia per un ulteriore periodo di tempo e le prove ripetute fino a12non si osserva una reazione al test di stimolo.
Allo stesso modo, la puntura di cuore terminale seguita dalla rimozione dei collegamenti al cuore subito dopo che il campione di sangue terminal viene raccolti come un metodo secondario dell'eutanasia assicura il sacrificio umano del mouse. Per garantire un tiraggio del sangue efficace, lo scienziato deve utilizzare una pompata con la siringa che è simile al cuore pulsante del mouse, consentendo massima raccolta di sangue per l'analisi.
Le modifiche e la risoluzione dei problemi
Gli organi da formalina per soluzioni di etanolo 70% di commutazione prepara gli organi per il processo di incorporamento richiesto per l'analisi istologica. Soluzioni di archiviazione diversi possono essere richieste se lo scienziato sceglie di realizzare altri esperimenti con gli organi. Prima dell'analisi, è importante limitare qualsiasi potenziale di scioglimento degli organi conservati nel congelatore-80 ° C per preservare l'integrità dell'organo.
Uso del Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modello murino riduce al minimo la presenza di non-pancreatica primaria tumori e malattie13. Pertanto, è importante notare eventuali irregolarità che sono evidenti per il pancreas o altri organi durante la dissezione e la raccolta dei campioni di tessuto per l'analisi.
Applicazioni future
Raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione consente più tipi di analisi per essere condotti sullo stesso campione. Il più popolare di questi includono, ma non sono limitato a, microscopia a fluorescenza, ematossilina ed eosina istologia, immunoistochimica, spettrometria di massa e risonanza magnetica nucleare spettroscopia6,7, 14 , 15. malattie come il diabete, pancreatite e cancro del pancreas possono essere studiate utilizzando tecniche di cui sopra16.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Acknowledgments
MAK riconosce il supporto per questo lavoro dai National Institutes of Health / numero - 1R15CA152985-01A1 di sovvenzione del National Cancer Institute. Questo progetto è stato supportato anche dal Miami University Undergraduate Research Award programma, le opportunità di dottorato-laurea Università di Miami per Scholarship Program e il programma di studiosi di Miami University estivo.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
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