Summary
Denne video artikel giver en detaljeret demonstration af de procedurer, der kræves for at kunne fjerne bugspytkirtlen fra en mus af dissektion for histologiske analyse og metabolisk profilering.
Abstract
Vi har undersøgt bugspytkirtlen specifikke transkriptionsfaktor, 1a cre-recombinase; LOX-stop-lox-Kristen rotte sarkom, glycin til aspartinsyre på 12-codon (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) mus stamme som en model af menneskelige bugspytkirtelkræft. Målet med vores aktuelle undersøgelser er at identificere roman metaboliske markører for kræft i bugspytkirtlen progression. Vi har udført, metabolisk profilering af urin, afføring, blod, og bugspytkirtlen væv ekstrakter og histologiske analyser af bugspytkirtlen til at iscenesætte kræft progression. Musen bugspytkirtlen er ikke en veldefineret solid orgel som hos mennesker, men er snarere et diffust fordelt blødt væv, der ikke er let identificeres af enkeltpersoner uvante med musen indre anatomi eller af personer, der har lidt eller ingen erfaring udfører musen orgel dissektioner. Formålet med denne artikel er at give en detaljeret trinvis visuel demonstration at guide nybegyndere i fjernelse af musen bugspytkirtlen ved dissektion. Denne artikel bør være særligt værdifuldt til studerende og efterforskere ny forskning, der kræver høst af musen bugspytkirtlen af dissektion for metabolisk profilering eller histologiske analyser.
Introduction
Musen har vist sig som en vigtig dyremodel af human bugspytkirtelkræft1,2. I Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + musemodel, Kristen rotte sarkom (K-Ras) onkogen aktiveres udelukkende i bugspytkirtlen, resulterer i indledningen af præcancerøse læsioner i bugspytkirtlen, kendt som pancreas intraepithelial neoplasias (PanINs), fremskridtet til pancreas duktalt adenocarcinomer, almindeligvis benævnt PDACs3. Denne mus modelsystem giver en af de bedste tilgængelige dyremodeller for humane bugspytkirtelkræft4,5, med den yderligere fordel, at PanINs dukke op inden for de første fem måneder af livet og ofte fremskridt til PDAC inden for en enkelt år4,5, hvorimod kræft i bugspytkirtlen hyppigst opstår hos mennesker 60-70 år.
Udtræk af bugspytkirtlen af dissektion fra Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + mus på forskellige alderstrin giver mulighed for detaljerede langsgående histologisk undersøgelse af udviklingen af kræft i bugspytkirtlen, lige fra de tidligste PanIN faser gennem progression til PDAC3,4 , 5. høst bugspytkirtlen på aldre spænder fra fem til femten måneder kan også bruges til at forberede væv ekstrakter til at karakterisere de globale forandringer i bugspytkirtlen4 metabolisme, der opstår under overgangen fra sund til sygt væv 6,7.
Denne artikel præsenterer en komplet visuel vejledning af de trin, der kræves for at udføre en mus bugspytkirtlen udvinding og indeholder retningslinjer for opbevaring af en bugspytkirtlen for yderligere analyse. Denne guide vil være lige så værdifuld for personer udfører forskning på andre pancreas sygdomme, herunder type I diabetes, og er især nyttigt til studerende og efterforskere nye til forskning, der indebærer høst mus bugspytkirtlen ved brug af dissektion for metabolisk profilering eller histologiske analyser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
de procedurer, der udføres i videoen og beskrevet nedenfor er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg (IACUC) på Miami University.
1. forberedelse og Stimulus Test
- etablere to særskilte områder for den kirurgiske procedure, operationsbordet og tabellen efter operationen. Stage begge områder med alle materialer og redskaber nødvendigt.
- Fase de opererer tabel under en ventileret hætte. Arrangere tabellen med udstyret på en måde, der giver mulighed for kontinuerlig og uhindret udførelsen af proceduren.
- Oprette en postoperativ tabel i samme rum og i nærheden af hovedtabellen i drift. Vedligeholde begge tabeller som sterile miljøer under hele proceduren.
- Sted følgende forsyninger på operationsbordet: en glaskrukke med låg, en 15 mL tube, et par af kirurgisk saks, en squeeze flaske med 70% ethanol, to skum boards, to pincet, to 1 mL 21 gauge sprøjter, to 50 mL rør, et centrifugeglas , en kryogene hætteglas, fire kirurgisk puder, ti pins, en dispenser for sterilisering klude og en skarpe container.
- Placer følgende leveringer på tabellen efter operationen: en Analysevægt, en 4 L dewar flydende kvælstof, en lavvandet bred mund dewar, en flydende microtube rack, et par kirurgisk saks, to pincet, fire kryogene hætteglas og en dispenser af sterile vådservietter.
- Udfylde en 50 mL og en 15 mL tube til 75% volumen med formalin.
- Ved hjælp af en PIN-kode i hvert hjørne, anbringer en kirurgisk pad til en omtrentlig 30 cm x 30 cm skum bestyrelsen til at tjene som dissektion board. Bruge de resterende fire ben under operationen. Forberede en mindre skum bord med en kirurgisk pad til at overføre organerne til tabellen post-op.
Forsigtig: Isofluran (99,9%) er en giftig kemisk, og bør anvendes i en udluftning hætte til at sikre det maksimale niveau for sikkerhed fra scavenging affald bedøvende gas 8. Yderligere oplysninger om risiciene for forskere tilknyttet brugen af open-slip-metoden ved hjælp af isofluran kan findes i en artikel af Taylor og Mook 8. - Placer et kirurgisk pad i glaskrukke og blød med et par dråber af isofluran (99,9%) og placere et stykke køkkenrulle over toppen for at undgå direkte kontakt af mus med isofluran. På samme måde, bruge en kirurgisk pad til at line de resterende rør og blød med et par dråber af isofluran og placere en ekstra pad over toppen for at forhindre direkte kontakt mellem mus og isofluran.
- Hæld flydende kvælstof i den lavvandede bred mund dewar indtil maksimum fylde linje er nået.
- Sted musen valgt til dissektion i anæstesi kammer, dvs glaskrukke med en pude gennemblødt med et par dråber af isofluran (99,9%) dækket med låg, til ~ 1 min.
Bemærk: Denne gang varierer fra mus til mus. Når musen er bevidstløs, fjerne det fra salen og placere det på drift brættet. - Orientere musen så at det lyver ventrale side op og med hovedet peger væk fra videnskabsmanden. Placere hovedet inde i røret, foret med en kirurgisk pad gennemblødt med et par dråber af isofluran (99,9%), og udføre en stimulus test af en mund knivspids til at sikre, at musen ikke reagerer på stimuli.
- Hvis denne test fejler og musen reagerer på foden knivspids test, Gentag trin 1.8.
2. Første indsnit, hjertet punktere og aktiv dødshjælp
- Pin lemmer af mus til kirurgisk skum bestyrelsen og våd den ventrale side af musen med 70% ethanol.
- Knivspids pels/huden i nærheden af urinrørets åbning med pincet og trække lidt opad. Gøre et snit med kirurgisk saksen igennem bughulen starter fra den urethrae åbning midterlinjen og slutter ved hagen.
- i nærheden af udgangspunktet for den første indsnit, grab én side af skind/hud med pincet og gøre et andet snit med saksen nedad og diagonalt mod tilbage pote.
- Gentage dette på samme måde på den modsatte side.
Bemærk: Skind/hud kan være fastgjort til at skabe en bredere åbning, men er ikke nødvendigt.
- Finde hjertet og fjerne at hjertesækken, som er sac omkring hjertet, for at undgå tilstopning af sprøjte nål.
- Fatte at hjertesækken med pincet og skære det med saksen. Udføre hjerte punktering af omhyggeligt indsætte sprøjte nål i det bankende hjerte og langsomt begynde at trække stemplet.
- For optimal indsamling, bruge stemplet af nålen til at efterligne pumpefunktion af hjertet og undgå tegning for hurtigt.
Bemærk: Typisk ca. 1 mL blod kan indsamles. - Efter endt samlingen blod, fjerne blod ind i centrifugeglasset og bortskaffe sprøjte ind i objektbeholderen klid.
- Efter hjertet punktering udføres, udføre eutanasi ved at fjerne vedhæftede filer forbinder hjertet.
Bemærk: Heparin, en antikoagulerende blev ikke føjet til sprøjte i denne procedure inden hjertet punktering at tillade blodet at størkne for serum samling i denne specifikke undersøgelse. Hvis forskeren ønskede at forhindre blodkoagulation for at indsamle plasma, kan heparin kunne føjes til sprøjte før hjertet punktering.
- Hvis undersøgelsen omfatter genotypebestemmelse af musen, røverkøb en del af øret med saksen og anbringes i et centrifugeglas genotype kontrollere.
3. bugspytkirtlen udvinding
- Find mave på den venstre side af musen. Begynd forsigtigt (for at undgå rive) adskiller bugspytkirtlen fra mavesækken og tolvfingertarmen ved hjælp af to pincet.
Bemærk: Når afmonterer bugspytkirtlen fra maven og tarmene, det er meget vigtigt, at pincet bruges forsigtigt at guide bugspytkirtlen væv væk fra organer ikke knuse eller rive bugspytkirtlen med pincet.- Fortsætte med at adskille bugspytkirtlen fra tyndtarmen jejunum og ileum sektioner, og endelig fra caecum af tyktarmen.
- På caecum, flytte pincet og fortsat adskillelse af bugspytkirtlen langs de resterende kolon mod endetarmen.
Bemærk: På dette punkt, er det praktisk at skære og fjerne del fra maven til regionen i den kolon umiddelbart forud for endetarmen. - Find bugspytkirtlen og knyttet milt. Skub bugspytkirtlen mod højre side af musen. Adskille de resterende forbindelser mellem bugspytkirtlen og brysthulen med pincet fuldt løsrive bugspytkirtlen og støder op milt.
- Fjerne bugspytkirtlen og sprede det til undersøgelse. Forlade milten knyttet til bugspytkirtlen til identifikationsformål.
- Fjern alle bindevæv, fedt og mesenteriallymfeknuderne væv fra bugspytkirtlen.
Bemærk: Dette væv er hvidere i farve og dermed kan være let at skelne fra bugspytkirtlen væv, der er pinker i farve. Dette er især vigtigt, hvis hele bugspytkirtlen skal fjernes. For eksempel, hvis bugspytkirtlen skal vejes og i forhold til kropsvægt eller mellem grupper af dyr. I Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + musemodel, specielt i de ældre måneder, hårde fibrøst pancreas væv kan være til stede. I dette tilfælde skal der foretages omhyggelig fjernelse af bugspytkirtlen som tarmene kunne være interlaced i tumor væv. I avancerede tilfælde, unormal milten og leveren væv kan også være til stede.
- Fjern alle bindevæv, fedt og mesenteriallymfeknuderne væv fra bugspytkirtlen.
- Hvis det ønskes, fjerne andre organer på dette punkt.
4. dataindsamling og opbevaring
- efter udvinding af organerne, flytte prøverne til postoperativ området for bevarelse.
- Vejer hver orgel og placere dem i deres respektive kryogene hætteglas.
Bemærk: langs with massen af hver prøve, alle uregelmæssigheder skal registreres for fremtidig reference. - Når organerne vejes, placere dem i de flydende kvælstof til snap nedfrysning.
- Efter snap frysning, gemme organer ved-80 ° C til langtidsopbevaring.
- Placer formalin gemt prøver på bænk toppen natten over, og næste morgen ændre deres løsning fra formalin til 70% ethanol.
Bemærk: Disse prøver skal opbevares ved 4 ° C for langtidsopbevaring. - Til lang sigt opbevaring, fryse blodet og øre punch ved-80 ° C.. For serum samling fra blodet, Tillad blodet at størkne i 30 min. derefter centrifugeres det. Fjerne serum del ved hjælp af en pipette og derefter opbevares ved-80 ° C.
5. Clean Up
- Sanitize alle dissektion værktøjer med sterilisering klude. Cap røret foret med isofluran gennemblødt kirurgisk pad. Erstatte den kirurgiske pad ombord skum med en frisk kirurgisk pad. Afhænde dele af musen, ikke var indsamles pr. faciliteten ' s animalske bortskaffelse politik.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 viser et overblik over miljøområdet operationelle og figur 2 viser post drift området. Mens denne indstilling giver den minimale mængde af udstyr og iscenesættelse, enkeltpersoner kan vælge at ændre dette passer bedst til individuelle behov. Protokollen skal optimeres efter de specifikke behov i eksperimentet. Denne procedure er udført på en måde, der afslutter livet af en mus, der kræver passende euthanization9. Når forskeren er klar, er musen placeret i anæstesi kammer med isofluran-gennemblødt puder (figur 3).
Når musen er bevidstløs, fjerne musen og placere den dorsale side om bord. En tå-knivspids procedure bør udføres for at sikre, at musen ikke reagerer på smerte (figur 4). Anvende 70% ethanol for at sterilisere området første snit. Terminal blod lodtrækningen skal udføres først, før bugspytkirtlen fjernelse, at sikre tilstrækkelige blod hentning. Før blod fjernelse, bør at hjertesækken fjernes for at forhindre tilstopning af 21 G nålen åbning. Efter færdiggører den terminal blod tegne, hjertet er afmonteret som en sekundær metode til eutanasi og bugspytkirtlen er derefter fjernes.
Begynde ved at placere maven, hvilket giver et godt udgangspunkt for bugspytkirtlen fjernelse (figur 5). Bemærk: Stor forsigtighed bør udøves under fjernelse af bugspytkirtlen, som er en delikat og skrøbelige væv, og derfor alle operationer skulle udføres med blid kraft. Brug af pincet, begynde dissektion af begynder at forsigtigt trække bugspytkirtlen fra maven og fortsætte med at adskille de pancreas væv fra den ydre foring af mave (GI) tarmkanalen arbejder fra maven til duodenum, jejunum og ileum ( Figur 6). Når caecum er nået, er lettere fjernelse af bugspytkirtlen opnået ved repositionering pincet, således at en pincet er i besiddelse af caecum og andre pincet bruges til at fortsætte med at adskille bugspytkirtlen fra tyktarmen (figur 7). Efter fjernelse af tyktarmen, bugspytkirtlen er placeret på højre side af musen og eventuelle resterende vedhæftede filer er afhuggede()figur 8).
Bugspytkirtlen bør være pustet ud for inspektion og eventuelle afvigelser bør være registreret (figur 9). I Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + mus stamme, bugspytkirtlen kunne potentielt indeholder en hærdet tumor (figur 10). Andre organer bør også undersøges for eventuelle metastaser. Når bugspytkirtlen er fjernet, det skal vejes, og vægten registreres. En del af bugspytkirtlen bør snap-frosset i flydende nitrogen for fremtidige metabolisk profilering analyse eller andre test og en del af bugspytkirtlen bør placeres i formalin til fremtidige histologiske analyse. Figur 11 viser den indledende oplagring af de forskellige organer indsamlet fra dissektion til brug i senere analyse. Organer indsamlet af dissektion og gemt til yderligere undersøgelse vil afhænge af mål for den enkelte forsker.
Væv og blodprøver kan bruges for histologiske analyser og metabolisk profilering. Et eksempel på den histologiske analyse af bugspytkirtlen væv er vist i figur 12. Metabolisk profilering kan udføres på snap-frosne vævsprøver og blodprøve. Repræsentative Kernemagnetisk resonans (NMR) spektroskopi spektre af de hydrofile og hydrofobe dele af bugspytkirtlen væv ekstrakter er vist i fig. 13A og 13B, henholdsvis. En repræsentativ NMR spektret indsamlet på en serum fremstilles af blod indsamlet i forbindelse med en terminal blod tegne procedure er vist i Figur 14.
Figur 1 : Iscenesættelse af opererer område. Generelle layout af korrekte værktøjer og driftsbetingelser for dissektion. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Iscenesættelse af efter operationen område. Generelle layout af korrekte værktøjer og driftsbetingelser for de postoperative procedurer. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Anæstesi afdeling. Ordentlig miljø for anæstesi via isofluran. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 : Stimulus undersøgelse. Stimulus-test udført på mus inden den første indsnit at sikre nogen smerte eller ubehag er ikke at være udholdt. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5 : Begyndelse fjernelse af bugspytkirtlen. Orientering af de mus, der angiver den indledende ekstraktion af bugspytkirtlen, position, som pincet. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6 : Bugspytkirtlen udvinding langs tarmene. Processen med at isolere bugspytkirtlen fra mave-tarmkanalen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7 : Bugspytkirtlen fjernelse på Caecum. Repositionering af pincet engang caecum er nået. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 8 : Bugspytkirtlen fjernelse. Placer bugspytkirtlen på højre side af musen. Eventuelle resterende vedhæftede filer skal skæres for at helt fjerne bugspytkirtlen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 9 : Bugspytkirtlen undersøgelse. Bugspytkirtlen med vedlagte milt undersøges efter fjernelse fra musen. Milt er angivet med den lodrette pil, og bugspytkirtlen er angivet med den vandrette pil. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 10 : Bugspytkirtlen undersøgelse. Bugspytkirtlen med vedlagte milt vise en pancreas tumor undersøges efter fjernelse fra musen. Milt er angivet med den lodrette pil, og bugspytkirtlen er angivet med den vandrette pil. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 11 : Oplagring af organer fjernet. Passende lager af organer og prøver indsamles, forberedt til langsigtet lagring og fremtidig analyse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 12 : Histologisk analyse af bugspytkirtlen væv. Hæmatoxylin og eosin farvede billeder fra bugspytkirtlen væv. A) normal bugspytkirtel væv fra en Ptf1acre /-; LSL-KrasG12D /- kontrol mus. B) PanIN væv fra bugspytkirtlen af en Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + undersøgelse mus. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 13 : Metabolisk profilering analyse. Endimensional proton Kernemagnetisk resonans (NMR) spektroskopi spektre af fase A) hydrofile og B) hydrofobe dele af bugspytkirtlen væv uddrag efter væv homogenisering og udsat for chloroform/methanol udvinding. NMR-spektrene var erhvervet på 850 MHz og er velegnet til brug i metabolisk profilering analyser. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 14 : Repræsentant NMR spektret af Serum. Blod indsamlet af terminal blod tegne procedure kan anvendes til metabolisk profilering analyse. Dette spektrum viser en typisk endimensional proton 850 MHz NMR spektret indsamlet på serum fremstillet af en terminal blodprøve uafgjort. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Betydning med hensyn til eksisterende metoder
Mens andre uformelle videoer af musen dissektioner findes, denne video artikel giver den første professionelle kvalitet, peer reviewede, visuel demonstration af alle de detaljerede trin påkrævet for udvinding og høst af musen bugspytkirtlen af dissektion10 . Med bugspytkirtlen er en vigtigste organ for metaboliske aktivitet og insulin produktion, dissektion og høst i bugspytkirtlen giver mulighed for bevarelse af den fysiologiske egenskaber11. Ved at isolere bugspytkirtlen, kan fremtidige analyse foretages på prøve. Denne procedure giver mulighed for sammenligning og undersøgelse af interaktioner fra andre væv inden for den samme organisme inden for den samme tidsramme.
Begrænsninger af teknikken
Den største begrænsning af denne procedure er opsigelse af musens liv, derved forhindre langsgående indsamling og prøvetagning af flere vævsprøver fra samme mus. For at analysere tendenser relateret til alder, køn eller andre kvantorer, skal en tværsnits befolkning gennemføres, som vi har gjort for vores undersøgelse af metaboliske markører for kræft i bugspytkirtlen. En anden begrænsning af denne protokol er udygtighed hen til pause proceduren. Når euthanization er indledt, skal proceduren gennemføres i sin helhed.
Kritiske trin i protokollen
Udførelse af stimulus test ved at klemme den bagben pote af musen er afgørende for at sikre, at musen får human behandling. Hvis musen ikke reagerer på denne stimulus, kan derefter proceduren gennemføres som planlagt. Dog skal skal musen vise en nødlidende reaktion som følge af stimulus test, musen returneres til anæstesi-afdeling i en yderligere periode på tid og test gentages indtil en reaktion på stimulus prøve ikke er observeret12.
Ligeledes, den terminal hjerte punktering efterfulgt af fjernelse af tilslutninger til hjertet umiddelbart efter terminal blodprøven er indsamlet som en sekundær metode af eutanasi sikrer Human ofringen af musen. For at sikre en effektiv blod draw, skal videnskabsmanden bruge en pumpende bevægelse med sprøjten, der svarer til hjerteslag af musen, der giver mulighed for maksimal indsamling af blod til analyse.
Ændringer og fejlfinding
Skifte organer fra formalin til 70% ethanol løsninger forbereder organer til indlejring processen kræves for histologiske analyse. Forskellige storage-løsninger kan være påkrævet bør videnskabsmanden vælger at udføre andre eksperimenter med organer. Før analyse er det vigtigt at begrænse enhver potentiel optøning af de organer, der er gemt i-80 ° C fryser at bevare orglet integritet.
Brug af Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + musemodel minimerer forekomsten af ikke-pancreas primære tumorer og sygdomme13. Derfor, er det vigtigt at konstatere eventuelle uregelmæssigheder, der er tilsyneladende til bugspytkirtlen eller andre organer under dissektion og samling af vævsprøver til analyse.
Fremtidige ansøgninger
Høst af musen bugspytkirtlen af dissektion giver mulighed for flere typer af analyse vil blive gennemført på samme prøve. Den mest populære af disse omfatter, men er ikke begrænset til, Fluorescens mikroskopi, hæmatoxylin og eosin histologi, immunhistokemi, massespektrometri og Kernemagnetisk resonans-spektroskopi6,7, 14 , 15. sygdomme som diabetes, betændelse i bugspytkirtlen og kræft i bugspytkirtlen kan studeres ved hjælp af teknikker nævnt ovenfor16.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
MAK anerkender støtte til dette arbejde fra National Institutes of Health / National Cancer Institute giver nummer - 1R15CA152985-01A1. Dette projekt er også blevet støttet af Miami University Undergraduate Research Award Program, Miami University ph.d.-bachelor muligheder for Scholarship Program og Miami University forskere sommerprogram.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
