Summary
우리는 cytometry에 의해 동시 표현의 기본 급성 골수성 백혈병 세포에 백혈병 줄기 세포 마커를 감지 하는 프로토콜 개요. 우리 3 조상 인구와 성숙의 정도 증가 함께 상 상속 LSC 인구를 측정 하는 방법을 보여 줍니다. 우리는 이러한 인구에 해당 환자-파생-xenografts의 존재를 확인 했다.
Abstract
급성 골수성 백혈병 (AML)은 다른 유형의 그리고 치료 하지 않으면, 치명적인 질병. 그것은 성인 백혈병 관련 된 사망의 가장 흔한 원인입니다. 처음, AML는 조 혈 줄기 세포 (HSC)의 질병 차별화, 폭발 세포 백혈병의 후속 축적의 체포를 특징으로하 고 기능성 조 혈 요소의 생산을 감소. 이 백혈병 줄기 세포 (LSC)의 존재를 확장,이 동적 셀 다양 한 선택 압력을 극복 하기 위해 진화 하는 구획 부과 시 백혈병 진행 및 치료 하는 동안. LSC 인구를 추가로 정의 하려면 CD90 추가 CD45RA CD34 + CD38-셀 구획 내에서 정상적인 HSCs multipotent 창시자의 차별 수 있습니다. 여기, 우리 multiparametric cytometry에 의해 인간의 AML의 기본 폭발 셀에 여러 개의 상 상속 LSC 마커 (CD34, CD38, CD45RA, CD90)의 동시 표현 검색 프로토콜 개요. 또한, 우리 3 조상 인구와 성숙의 정도 증가 함께 상 상속 LSC 인구를 측정 하는 방법을 보여 줍니다. 우리는 이러한 인구에 해당 환자-파생-xenografts의 존재를 확인 했다. 검색의이 방법 및 상 상속 LSC의 정량화 임상 후속의 화학 요법 응답 사용할 수 있습니다 (즉., 최소 잔여 질병), 잔여 LSC AML 재발을 일으킬 수 있습니다.
Introduction
급성 골수성 백혈병 (AML) 백혈병 관련 된 사망의 가장 흔한 원인입니다. 처음, AML는 조 혈 줄기 세포 (HSC)의 클론 질병 차별화, 폭발 셀의 후속 축적의 체포를 특징으로하 고 기능성 조 혈 요소의 생산을 감소. 최근, 폭발 세포 인구의 클론이 차세대 시퀀싱 (NGS) 전략을 사용 하 여 종양 세포1의 내부 클론 진화의 존재를 보여주는 본질적으로 설립 되었습니다.
이 leukemic 줄기 세포 (LSC)의 존재를 확장합니다. 그것은이 동적 셀 구획 백혈병 진행 및 치료 하는 동안에 부과 하는 다양 한 선택 압력을 극복 하기 위해 진화 가설입니다. 따라서 LSC 현재 화학요법 식이요법을 저항 하 고 깊은 임상 의미2질병 재발을 중재 하는데 있다. 다양 한 마커 CD1233, CLL-14, CD975 또는6팀-3 같은 LSC 하 설명 했습니다. CD34 + CD38-폭발 세포의 구획 LSC7 농축 간주 됩니다 하지만 또한 정상적인 HSC를 포함 합니다. CD90 CD45RA 표현 CD34 + CD38에 적용-정상 및 악성 조 혈 전8의 몇몇 단계를 분리 하는 허가 (P6) 구획 (그림 1). 특히, 정상적인 CD34 + CD38, CD90 + CD45RA HSCs, multipotent 창시자 (MPP) 같은 CD34 + CD38-CD90dimCD45RA-세포와 CD34 + CD38-CD90-CD45RA + 림프 액 multipotent 조상 (LMPP) 셀 AML의 대부분에 결정 될 수 있는 경우8 ,9. CD38의 평균 형광 강도 (MFI) CD34 + 세포 구획 내에서 고려 되어야 하는 특히 중요 하다. CD38 강도 3 개의 새로운 세포 구획 그를 정의 하기 때문에: CD38 네거티브 (P6), CD38 dim (P7)와 CD38 밝은 (P8) (그림 1). CD38 MFI를 사용 하 여 hematogones 또는 플라즈마 세포 내부 긍정적인 컨트롤로 이러한 세포는 강하게 CD38 표현으로 결정 될 수 있습니다.
Immunodeficient 끄 덕/SCID/IL2Rγcnull (NSG) 마우스 모델은 정상의 engraftment를 위해 널리 이용 된다 그리고 악성 인간 조 혈 모 세포10,11. 직렬 xenotransplantation 분석 LSC 또는 HSC 함수를 실험적으로 확인 하는 데 사용 됩니다. 이 연구는 광범위 하 게 대규모 시퀀싱 접근에 의해 분석 되었습니다 했습니다. 그럼에도 불구 하 고, 덜 AML 폭발 인구는 주요 AML (그림 2)에 비해 NSG 쥐에 engrafted LSC 및 HSC immunophenotype에 대 한 알려져 있다.
LSC의 숫자는 이렇게 본질적으로 낮은, 식별 및 LSC의 정량화는 도전 하며 여기에 설명 된 방법을 사용할 수 있습니다 흐름 cytometric 분석 결과 진단 및 임상 수행으로 (로 잔여 LSC 수 있습니다 화학 요법 응답을 평가 하 급성 골수성 백혈병 재발 발생할). LSC의 존재는 긍정적인 최소 잔여 질병 (MRD)를 나타낼 수 있습니다. 날짜 하려면, MRD 분자 방법 (즉, RT-PCR, NGS)에 의존 대부분 AML에 모니터링10,12. 그러나,이 프로토콜에 우리 검색 여러 HSC/LSC 마커 (CD34, CD38, CD45RA, CD90)의 동시 단백질 표정 인간의 AML의 기본 폭발 셀에 multiparametric 흐름 cytometry2,,89. 항 체의이 조합은 어떤 표준 흐름 cytometry 실험실에 적용 될 수 있습니다 그리고이 흐름 MRD 분석 결과 특히 재미 있는 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 (RT-PCR)에 의해 MRD 불가능 때 즉, 경우 백혈병 특정 분자 마커 진단 AML 샘플에서 감지 되지 않습니다. 또한,이 프로토콜은 더 민감한 분자 MRD 기술 보완으로 감지 하 고 비정상적인 조 혈 조상 세포를 계량 하는 것을 목표로 나타내는 기능 셀 특성 (그림 3).
우리 3 조 혈 모 조상 인구와 성숙의 다른 학위를 가진 상 상속 LSC 구획 cytometry 임상 실험실의 대부분에서 사용할 수 있는 항 체와 함께 하 여 계량 하는 방법을 보여 줍니다. 또한, 우리는 해당 환자-파생-xenografts (PDX) 이러한 셀 구획의 존재를 확인 하 고 치료에 후속.
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Protocol
우리는 과학적 목적을 위한 동물의 사용에 대 한 유럽 표준을 따른다. 이 연구는 지역 윤리 위원회 (#3097-2015120414583482v3)에 의해 승인 되었다.
1. 샘플 준비
- 골 수의 mL 당 1.8 mg의 농도에서 항 응 혈 약 ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA)을 포함 하는 튜브에 드 노 보 AML에서에서 골 (2 mL)를 수집 합니다.
- Ficoll 분리, 뒤 붉은 세포를 granulocytes, 단 세포를 분리 하는 밀도 그라데이션 분리를 수행 합니다. 골 3 양의 인산 염 버퍼 식 염 수에 희석 (PBS: NaCl 137 m m, KCl 2.7 m m, Na2HPO4 10 m m, KH2포4 1.8 m m). 조심 스럽게 희석된 골의 1 볼륨 1 양의 Ficoll 오버레이. 회전 브레이크 없이 300 x g에서 30 분. 새로운 무 균 튜브에 흰 버 피 코트 층의 mononucleated 세포를 전송 합니다.
- 10 mL PBS의 셀을 두 번 씻어) 오염 혈 청 성분을 제거 하기 위해 5 분 동안 300 x g에서 원심과.
2. 적혈구 (RBC)의 세포
- 셀에 세포의 용 해 버퍼 (염화 암모늄 0.8%)의 2 개 mL를 추가 작은, 소용돌이 부드럽게 하 고 5 분 x 300g에 5 분 원심 분리기에 대 한 실 온에서 품 어.
참고: 필요한 경우이 단계를 반복 합니다. - 워시 셀 PBS에는 이전 (1.3)를 설명합니다.
3. 환자 xenografts 파생.
- 폭발 세포 골 수에서 Ficoll 분리 후 가져오고 immunomagnetic를 사용 하 여 세포 고갈 후 부정적인 선택 (CD3 T-와 B-세포에 대 한 CD20). 제조업체의 지침을 따릅니다.
- 5 x 106 AML 폭발 셀 무조건된 NSG 쥐의 꼬리 정 맥에 주사. 금지 장치를 사용 하 여 꼬리 정 맥 주입을 촉진 하기 위하여. 계속 마우스 기존의 조건 및 특정 병원 체 자유로운 조건에서 특히 모든 시간, 개별 환기 케이지를 사용 하 여 층 류 후드 조작. 매 2 주, 모 세관 submandibular 컬렉션 메서드는 보통을 사용 하 여 혈액의 60 µ L를 걸릴. 장소 5 mL에 모 세관 튜브 하단 라운드. 작은 멸 균 거 즈 패드를 사용 하 여 부드러운 압력을 적용 하 여 피를 중지 합니다. Expulse 깨끗 한 주사기 혈액입니다.
- 세포의 용 해 버퍼의 1 ml을 추가 하 고 5 분 동안 품 어. 다음 5 분 동안 5 분 PBS와 300 x g에서 centrifugre 세척에 대 한 300 x g에서 원심. 상쾌한, 3 µ L 안티 인간 CD45 FITC와 1 µ L 안티 murine 10% 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 얼룩과 추가 100 µ L PBS를 제거 CD45 APC와 4 ° C에서 30 분 동안 품 어.
- PBS (2 mL) 10 %BSA 5 분 동안 300 x g에서 원심 분리기에에서 셀 펠 릿 두 번 세척.
- Aliquot 최대 흐름 cytometry 튜브로 PBS의 100 µ L 당 1 x 106 셀.
- CD45 (인간의 대 murine) 식의 설문 조사 engraftment chimerism 분석 하 여 2 주마다 cytometry (그림 2A , B)를 사용합니다.
- 희생 (주변 폭발 수가 이상 70% 또는 질병의 심각한 임상 증상)에서 수집 되 폭발 세포 골 및 분쇄 spleens에서 tibias 홍 여 하 고 PBS와 화관 앞13에서 설명한. 자 궁 경부 전위 국제 지침에 의해 마우스를 안락사.
- 셀 펠 릿 RBC 있으면 혈액 세포 세포의 용 해 버퍼 (단계 2.1)의 세포를 수행 합니다.
- 워시 셀 펠 릿 두 번 PBS (2 mL) 10 %BSA 300 x g에서 원심 분리기에서에서 5 분.
- 교류 cytometry 튜브로 PBS의 100 µ L 당 1 x 106 셀에 셀과 aliquot 업을 수집 합니다.
4. 얼룩
- 활용 된 항 체 (단계 4.2 참조)와 소용돌이 추가 합니다. 실 온에서 어둠 속에서 15 분에 대 한 셀을 품 어.
- 인간의 기본 또는 PDX 샘플 안티-CD36-FITC의 10 µ L, 안티-CD19-ECD의 5 µ L, 안티-CD33-PC5.5의 5 µ L, 안티-CD90-APC의 5 µ L, 안티-CD34-AA700, 안티 CD45RA APC H7의 5 µ L, 안티-CD38-태평양 파랑의 5 µ L의 5 µ L의 5 µ L의 구성에 대 한 다음 패널을 사용 하 여 안티-CD45-코의 µ 한 안티-CD123-PC7 및 2.5 L
- 5 분에 대 한 300 x g에서 원심 분리 하 여 2 ml PBS의 셀을 세척 하 여 언바운드 항 체를 제거 합니다.
- 다시 최종 흐름 cytometric 분석에 대 한 PBS의 450 µ L에서 세포를 일시 중단 합니다.
5. 게이팅 흐름 cytometry 분석을 위한 전략
- 빨강, 파랑, 보라색 레이저를 갖춘 교류 cytometer에서 데이터 수집 (적어도 500000 셀)을 수행 합니다. 1) 광학 정렬, 2) 유체 시스템, 3) 광학 감도 및 4) fluorospheres를 사용 하 여 표준화에 대 한 매일 cytometer 설정 확인
- CD38 식 (그림 1)을 정의 하려면 순차 제어 전략을 따릅니다.
- 정상적인 골 수 샘플에서 세포를 사용 하 여 정의 하는 hematogones 또는 플라즈마 세포 CD38 식에 대 한 긍정적인 통제 될 것입니다.
참고:이 게이트는 특히 후속 putative LSC 인구 그것의 정의에 따라 평가 해야 합니다. - CD45dim/SSC (사이드 분산형) 낮은 인구 기준 (그림 1A)에 의해 생리 선구자 세포 (정상 돌풍 세포)를 정의 합니다. 이 폭발 인구 내의 정의 CD38 표시 하는 hematogones + + CD19 + 형 (그림 1B)와 마지막으로, CD36 및 CD33 식을 사용 하 여 정의 하는 myeloblasts, monoblasts, 및 erythroblasts (그림 1C). (그림 1E)와 같이 hematogones CD34 식을 결정 합니다. P6-P10 (그림 1D)로 정의 된 폭발 세포 내에서 일어나는 여러 가지 부분 모집단을 평가 합니다. P6, P7, P8 조상 모집단 미리 CD38 게이트를 기반으로 폭발 셀 CD34 구획을 구분 합니다. P8 구획 P6 CD38 기반 (FMO) 컨트롤 마이너스 CD38 형광에 있는 셀을 포함 하는 hematogones로 동일한 CD38 강도 있는 폭발을 포함 하 고 P7 셀 CD38 관련 2 개의 극치 사이 식 (그림 1D)입니다.
- 정상적인 골 수 샘플에서 세포를 사용 하 여 정의 하는 hematogones 또는 플라즈마 세포 CD38 식에 대 한 긍정적인 통제 될 것입니다.
- CD34 + 38-(P6)에서 문이 셀, CD90 CD45RA 표현 (그림 1 층)을 사용 하 여 상 상속 LSC에서 HSC를 구분 합니다.
참고: HSC 형은 CD34 + CD38-CD90 + CD45RA-multipotent 창시자 (MPP)는 CD34 + CD38로 정의-CD90-CD45RA-. 상 상속 LSC 형은 CD34 + CD38-CD90dimCD45RA +와 더 미 숙 다운스트림 인구는 CD34 + CD38로 정의 된 림프 액 창시자 (LMPP)-CD90-CD45RA +.
6입니다. MRD RT-PCR에 의해 모니터링
- 앞에서 설명한14RT-PCR에 의해 모니터 MRD 수준.
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Representative Results
여기 우리 조상 인구 정상 및 악성 인간의 골 수 샘플을 결정 하는 방법을 제시. 우리는 성공적인 PDX에서 골 수 및 비장 수집 하 고 위에서 설명한 대로 multiparametric cytometry 수행. 우리는 폭발 세포 진단 환자 샘플 및 해당 PDX 및 특히, CD34 + CD38-조상 구획 사이 특히 putative LSC에 농축의 여러 모집단 비교. 우리는 발견 CD34 + CD38-폭발 분수에서 PDX 진단 환자 샘플 0.53%, 그림 2C, D(3.48%)에 비해 높았다. 흥미롭게도, 우리는 putative LSC의 더 높은 백분율을 발견 (CD34 + CD38 표시-CD90-CD45RA + 형) 기본 환자 샘플 (0.48%, 그림 2E, F대 2.76%)에 비해 PDX에서 악성의 가능한 농축 제안 이 마우스 모델에서 혈액 조직에 조상 세포. 일반적인 조상 세포 분수의 주파수는 PDX 환자 샘플 사이 다 하지 않았다.
또한, 우리는 두 개의 서로 다른 환자 샘플, 진단 및 치료 후속 MRD의 수준을 결정에서 CD34, CD38, CD90, 및 CD45A (로이 프로토콜에서 설명)의 식에 따라 폭발 세포 조상 인구를 공부 했습니다. 첫 번째 환자, CD34 + CD38-(P6) 분수 0.06% 진단에서에서 첫 번째 치료 후속 (그림 3A, B)에서 3.33%로 증가. 대조적으로, CD34 + CD38-첫 번째 치료 후속 (그림 3 C, D)에서 2.27% 진단에서 7.8%에서 두 번째 환자에서 감소 (P6) 분수. 따라서, putative LSC 분수 진단에서 0%에서 0.65% (그림 3A', B') 첫 번째 환자에서 증가 하 고 후속 치료 (그림 3C 에서 1.44% 진단에서 6.57%에서 두 번째 환자에서 감소 ', D'). 마찬가지로, MRD 분자 마커 모니터링 (즉, NPM1 돌연변이 [첫 환자] 및 CBFB MYH11 전 [두 번째 환자]) 분자 MRD 첫 번째 치료에 대 한 두 번째 환자 (0.05%)에 비해 첫 번째 환자 (0.8%)에서 더 적은 감소를 보였다 후속 지점 (그림 3E, G). 마지막으로, 상 상속 P6 LSC는 악성 확인, 하 백혈병의 표현 CD123와 CD33 견적 되었다, 보여주는 두 환자 (그림 3 층, G)에 대 한 비정상적인 표현의 CD33 항 관련.
그림 1 : 생리 선구자 및 AML 폭발 사용 전략 게이팅. 게이팅 생리 일어나 정상적인 골 수에 대 한 표시와 함께 밀도 줄거리. (A) Gating 폭발 셀 기반으로 CD45dimSSClow 표현 형 mononucleated의 모든 셀에. Hematogones의 (B) Gating (CD38 + CD19 +) CD38 양성의. (C). CD33 및 CD36 기반 게이팅 정상 myeloblasts, monoblasts 및 erythroblasts의 전략. (D) 폭발 셀 CD34 + 조상 모집단으로 구분 될 수 있습니다 및 P6로 CD38 식을 사용 하 여 (CD34 + CD38-), P7 (CD34 + CD38dim), P8 (CD34 + CD38 +) 세포 구획. Hematogones의 (E) Gating CD34, CD38 식에 따라, CD38 양성 확인 합니다. (G) 결정의 HSC, MPP, LMPP, 및 이전 CD90 CD45RA의 식을 사용 하 여 상 상속 LSC 모집단9를설명 합니다. 참고,이 LSC의 감지 되지 않습니다 정상적인 골 수 샘플입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 폭발 세포 조상 인구와 해당 환자-파생 된-이 종이 식 (PDX) multiparametric cytometry에 의해 환자에. (A-B) PDX의 chimerism 분석입니다. (A) Murine 인간과 폭발 처음 크기와 구조 (FSC, SSC)에 의해 정의 됩니다. (B) 그 후, murine CD45 얼룩 대 인간 비율 나타내는 xenoengraftment 및 백혈병 부담입니다. CD34 + CD38-폭발의 비교 세포 (C) 기본 진단 및 (D) PDX AML 샘플 사이의 비율. 상 상속 LSC의 비교 (CD34 + CD38-CD90-CD45RA +) (E) 기본 AML (F) PDX 사이. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 두 환자 진단에 최소 잔여 질병 (MRD) 탐지에 대 한 면제 유도 치료 후에 폭발 세포 조상 인구. 죄 사 함 유도 치료 후 진단 및 (B, D)에 (A, C) 두 명의 대표적인 환자에서 CD34 + CD38-폭발 셀 모집단의 cytometric 분석 흐름. 피 규 어 (A'-D') 각각 P6 게이츠 putative LSC를 포함 하는 진단 및 초기 치료 후 두 환자에 대 한 설명. (E, G)은 분자 마커 5 개월의 기간 동안이 두 환자에 대 한 사용 하 여 최소 잔여 질병 (MRD) 분석 (NPM1 돌연변이 CBFß MYH11 유전자 융해, 각각). (F, G) 백혈병의 표현 CD123와 두 환자에 대 한 비정상적인 표현의 CD33 보여주는 putative P6 LSC에서 CD33 항 관련. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
막 또는 세포질 마커 cytometry에 의해 정확 하 고 재현성 평가 악기 설정을 매일 광학 정렬, 적절 한 유체 시스템, 광학 감도 및 표준화의 기능에 대 한 확인 필요 교정 구슬을 사용 하 여.
AML CD90 및 CD45RA를 사용 하 여 다중 변수 흐름 cytometry 분석에서 폭발 세포 인구의 탐지는 비교적 간단 하 고 신뢰할 수 있는 방법입니다. 이 분석에서 중요 한 단계는 CD34 + CD38-인구의 정확한 게이팅을 수행 하려면 CD38 식 폭발 세포에의 한 정확한 평가입니다. CD38 강도 특히 hematogones 플라즈마 세포 (CD38 +)에 정상 골 수 세포를 사용 하 여 정의 됩니다. 다른 마커의 강도 isotype 컨트롤을 사용 하 여 결정 됩니다.
CD45RA 및 CD90의 추가 putative LSC에서 HSC를 구별 하는 데 사용 됩니다. 후자와 하지 HSC 아마 질병 재발의 원인, 따라서이 프로토콜 흐름 cytometry 패널을 사용 하 여 모니터링 하는 최소 잔여 질병에 대 한 관심의 이다. 급성 골수성 백혈병의 치료 기간 동안 모니터링 위험 계층을 개선 하 고 급성 골수성 백혈병 치료 가이드 필수적 이다. 불행히도, 적절 한 분자 마커는 모든 환자에 사용할 수 없습니다. 따라서, MRD cytometry 모니터링은 모든 AML 경우 가능한 수 있습니다. CD34 + CD38-시 조 및 상 상속 LSC 인구 AML 사례의 대부분에 focalizes도이 방법은 철저 한 되지 않을 수 있습니다. 주의 그것은 가능한 putative LSC 구획 정상적인 창시자, 즉, LMPP 포함 될 수 있습니다)입니다. 또한, 우리가 배제할 수 없다이 비정상적인 식 패턴을 따르지 기능 LSC 드문 경우입니다. 노트, CD34, 부정적인 고려 되는 NPM1 돌연변이 AML에도 우리 putative LSC 감지 수 있습니다. 따라서,이 질 및 AML LSC 구획의 복잡성에도 불구 하 고 우리의 방법을 사용할 수 있습니다 동안 화학요법 응답의 바이오 마커 AML의 후속으로.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 일부 프랑스 협회 Laurette Fugain, LigueContre 르 암 (북한 센터), Fondation 드 프랑스 (백혈병 위원회), SIRIC Oncolille, 및 프랑스 국립 암 연구소에서 지원 됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pancoll | PAN-Biotech | P04-60500 | |
| RBC Lysis Buffer (10x) | Ozyme | BLE420301 | RBC Lysis solution A : 8.29 g of NH4Cl + 0.037 g of Na2EDTA in 100 mL of sterile H2O and RBC Lysis solution B: 1 g of KHCO3 in 100 mL of sterile H2O |
| NOD/SCID/IL2Rγcnull (NSG) mice | JACKSON LABORATORY | Stock No: 005557 | |
| PBS | Gibco by life technologies | 14190-144 | |
| AutoMACS Running Buffer – MACS Separation Buffer | MACS Buffer Miltenybiotec | 130-091-221 | |
| Anti-CD36-FITC (clone FA6-152, Iotest) | Beckman Coulter | PN IM0766U | |
| Anti-CD33-PC5.5 (clone D3HL60.251, Iotest) | Beckman Coulter | B36289 | |
| Anti-CD90-APC (clone 5E10) | Biolegend | 328114 | |
| Anti-CD19-ECD (clone J3-119, Iotest) | Beckman Coulter | A07770 | |
| Anti-CD34-AA700 (clone 581, Iotest) | Beckman Coulter | B92417 | |
| Anti-CD45RA-APC-H7 (clone HI100) | Beckton Dickinson | 560674 | |
| Anti-CD38-Pacific Blue (clone LSI98-4-3, Iotest) | Beckman Coulter | B92396 | |
| Anti-CD45-KO (clone J.33, Iotest) | Beckman Coulter | B36294 | |
| Anti-CD3-PE | Beckman Coulter | IM1451 | |
| Anti-CD20-PE | Beckman Coulter | A07747 | |
| Anti-CD123-PC7 | Beckman Coulter | B13647 | |
| Flow-Set | Beckman Coulter | A63492 | |
| Flow-Check | Beckman Coulter | A63493 | |
| Navios | Beckman Coulter | DS-14644A | |
| LSR Fortessa X20 | BD Biosciences | ||
| CST BD | BD Biosciences | 655051 | |
| FacsFlow | BD Biosciences | 336911 | |
| Anti-hCD45-FITC | Biolegend | BLE304006 | |
| Anti-mCD45-APC | Biolegend | BLE103112 | |
| EasySep human PE selection kit | Stem Cell Technologies | 18000 | |
| EasySep magnet | Stem Cell Technologies | 18551 |
References
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