Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

Thioether/vinil sülfür-gergin helisel peptidler fotoğraf yolu ile indüklenen Thiol-KD/yne Hydrothiolation oluşturmak

Published: August 1, 2018 doi: 10.3791/57356
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1
1Key Laboratory of Chemical Genomics, School of Chemical Biology and Biotechnology, Peking University Shenzhen Graduate School
* These authors contributed equally

Summary

Helisel peptidler sülfür hayvan zinciri fotoğraf kaynaklı thiol-KD/thiol-yne hydrothiolation kullanarak thioether/vinil inşası için bir iletişim kuralı mevcut.

Abstract

Burada, intramolecular/cins thiol KD-Tarih-reçine hydrothiolation kullanarak thioether hayvan zinciri peptidler hazırlanması için detaylı bir protokol açıklayın. Ayrıca, bu iletişim kuralını intramolecular thiol yne-çözüm hydrothiolation alkene/alkin yan zincirleri sahip amino acids ve sistein kalıntıları arasında kullanarak ben, ben + 4 pozisyonlar vinil sülfür gergin peptidler hazırlanması açıklar. Doğrusal peptidler bir standart Fmoc tabanlı katı fazlı peptid sentez (SPP'ler) kullanarak sentez. Thiol-Güney hydrothiolation intramolecular thio-Doğu reaksiyon veya peptid uzunluğu bağlı olarak bir cins thio-Doğu reaksiyon kullanılarak yapılır. Bu araştırmada, intramolecular thio-Doğu reaksiyon reçine üzerinde deprotection sistein kalıntıları doğrusal peptid tam sentezi takip trityl grupları kullanarak daha kısa peptidler söz konusu olduğunda gerçekleşir. Reçine sonra photoinitiator 4-methoxyacetophenone (Harita) ve 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP) kullanarak UV ışınlama için ayarlanır. Cins thiol-Doğu tepki bir N, N- dimethylformamide (DMF) çözücü Fmoc-Cys-OH çözülerek yapılır. Bu o zaman alkene taşıyan kalıntı bağlı kullanarak peptid ile tepki. Bundan sonra macrolactamization harekete geçirmek reaktif reçine tarih olarak benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBop), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt) ve 4-Methylmorpholine (NMM) kullanarak yapılır. Peptid sentez macrolactamization devam standart SPP'ler kullanarak. Thio-yne hydrothiolation söz konusu olduğunda doğrusal peptid reçine--dan i ciddi, kurutulmuş ve daha sonra degassed DMF içinde çözünmüş. Bu o zaman UV ışığı photoinitiator 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone ile (DMPA) kullanarak ışınlanmış. Reaksiyon, DMF buharlaşmış ve ham kalıntı çöktürülmüş ve yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) kullanarak saf. Bu yöntemler thioether hayvan zinciri döngüsel peptidler üstün fonksiyonel grup hoşgörü ve iyi verim sahiptir thio-KD/yne tıklayın Kimya kullanımı nedeniyle nesil basitleştirmek için işlev olabilir. Thioether tahvil giriş peptidler içine sistein kalıntıları nükleofilik doğa yararlanır ve redoks-hareketsiz disülfür bağları göre.

Introduction

Protein-protein etkileşimleri (PPIs) modüle ligandlar geliştirmesi modern ilaç keşfi için çekici bir yaklaşım sağlar. Böylece, büyük bir çaba bu verimli PPIs1,2,3modüle Eğitim Roman kimyasal yöntemleri yatırdı. PPIs genellikle sığ, büyük ve/veya üretilmiyor etkileşen yüzeylerin oluşur ve küçük moleküller genelde PPIs4,5modülasyon için uygun olmayan ligandlar olarak kabul edilir. Bir uygun maruz etkileşen yüzey alanı ile bu sorun6,7gidermek için ideal aday protein arabirimleri yapısal özelliklerini taklit kısa peptidler temsil eder. Ancak, kısa peptidler genellikle sulu bir çözüm yapılandırılmamış. Gerçeğini peptid omurga ve iyi tanımlanmış biçimler oluşan intramolecular hidrojen bağı ağ ile rekabet su molekülleri su8' entropically olumsuz nedeni bu. Buna ek olarak, peptidler doğal olarak istikrar düşük ve hücre geçirgenlik özelliklerini büyük ölçüde onların biyolojik uygulamalar9,10sınırla. Protein veri Bankası (PDB) Analize göre > PPIs % 50'si kısa α-helix etkileşimleri11içerir. Böylece, farklı kimyasal yöntemler helix istikrar açısından geliştirdik. Bunlar arasında disülfit/thioether bağ oluşumu12,13,14, yüzük-kapanış sentezde15, laktam halkası oluşumu16, "Kimya17, eklenmesi tıklayın" perfluoroarenes18,19ve vinil-sülfür oluşumu20.

Stabilize helisel peptidler yaygın p53, dahil olmak üzere çeşitli hücre içi hedefleri için kullanılan östrojen reseptörleri, Ras, BCL-2 ailesi proteinler ve diğerleri21,22,23,24. ALRN-6924, bir all-hidrokarbon peptid çift inhibitörü olan MDM2 ve MDMX zımbalanmış, klinik araştırma25için kullanılıyor. Son birkaç yıl içinde bizim grup roman peptid sabitleme yöntemleri thiol-Doğu ve thiol yne reaksiyonlar26,27,28kullanarak geliştirme üzerinde odaklanmıştır. Genel olarak, doğal olarak bol miktarda sistein kullanıldığında bu fotoğraf tarafından başlatılan tepkiler hafif koşullar altında verimli göstermiştir. Buna ek olarak, biz bu tepkiler bir mükemmel fonksiyonel grup hoşgörü, biyo-dik ve peptid ve protein değişiklikler29için geçerli olduğu kanıtlanmış göstermiştir. Elde edilen thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler büyük ölçüde kısıtlaması peptidler kimyasal alanı artırmak bir değişken urgan üzerinde değişiklik merkezi sağlamak ve çok sayıda biyolojik uygulamalar30 kullandığı için geçerli olduğu kanıtlanmıştır ,31,32. Bugüne kadar yalnızca sınırlı raporlar thiol-KD/thiol-yne peptid cyclization ile ilgili tarif edilmistir. Anseth ve ark. tarafından 2009 yılında yayınlanan bir çalışmada, bir reçine üzerinde intramolecular thiol-Doğu Sistein ile harekete geçirmek alkenes arasında peptid cyclization için gösterdiği33tepkiydi. 2015 yılında, Chou ve ark. bir iki radikal başlatılan thiol-Doğu tepki peptid34 ve bir sonraki, sıralı thiol-yne/Doğu kaplin tepki35Zımbalama için nitelendirdi. Son zamanlarda, bir dizi thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler20,26,27tarihinde alan iş tanımladı. Bu iletişim kuralı yukarıda belirtilen thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler daha geniş araştırma toplum için yararlı olacak umuduyla detaylı bir sentezi açıklar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. ekipman hazırlık

  1. El ile peptid sentez cihazları için vakum manifold (Tablo reçetesi) bir verimli duman mahallede yerleştirin. Daha sonra Üçlü Kesme muslukları vakum manifold üzerine yerleştirin ve onları bir azot veya argon gaz hattı bağlayın. Kauçuk septa kullanarak tüm kullanılmayan girişleri kap.
  2. Reçine kaplı sütunları (0.8 x 4 cm, 10 mL rezervuar, bkz: Malzemeler tablo) üç yönlü Kesme muslukları (Şekil 1) kullanarak manifold bağlayın. Yükseltme tarafından vakum filtrasyon veya kauçuk pipet ampul bir vakum sistemine bağlı bir pompa çözücü sütunları kaldırmak için kullanın.
  3. Kullanım photoreactor (resim 2), UV ışınlama için on 350 nm lambalar (Malzemeler tablo) ile donatılmıştır. Bu bir argon gaz tankı argon gazı öncesinde ve sırasında photoreactions photoreactor dolu emin olmak için photoreactor hava giriş üzerinden bağlanır.
  4. Photoreactor UV lamba değiştirmeden önce ışınlama UV ışık diye photoreactor kapağının kapalı olduğundan emin olun.

2. reçine hazırlık

Not: genel olarak, peptid yüzeylerde inşaat Fmoc tabanlı katı fazlı peptid sentez protokolleri kullanılarak yapılır. Bunlar bir C-terminal Amid kalan aşağıdaki peptid bölünme bırakıyor pisti Amid reçine kullanılarak yapılmaktadır. Bu iletişim kuralı kağıt kullanılır.

Dikkat: N, N- dimethylformamide (DMF), diklorometan (DCM), 4-methylmorpholine (NMM) ve N, N- diisoproylethylamine (DIPEA) zehirli ve zararlı inhalasyon, yenmesi veya Ciltle temas vardır. Dietil eter çok kolay alevlenebilir. Trifluoroacetic asit (TFA) aşındırıcı. 1,2-ethanedithiol (EDT) son derece kötü kokulu. Bu nedenle, tüm organik çözücüler ve kimyasallar olmalı uygun kişisel koruyucu ekipman ile (nitril eldiven, önlük ve koruyucu gözlük) ele ve kimyasal duman çuval içinde ele.

  1. Aşağıdaki formülü kullanarak gerekli reçine miktarı Hesapla:
    ölçek (mmol) / (yükleme kapasitesi (mmol/g) 1.000 (mg/g) reçine) reçine (mg) kütlesi =
    Örn, pisti Amid MBHA reçine (0.5 mmol/g) 25 µmol miktarı = 0.025 mmol / (0.5 mmol/g 1000 mg/g) = 50 mg. Ardından, reçine 50 mg bir sütunda tartmak ve üçlü Kesme muslukları kullanarak vakum manifold üzerinde ayarlayın.
  2. 1-2 mL DCM reçine (0.8 x 4 cm, 10 mL rezervuar) bir sütun ekleyin. Reçine şişmeye, yavaşça 10 dakikadır azot ve argon akışı kullanarak kışkırtmak. Ardından, vakum filtrasyon kullanarak solvent kaldırın.

3. N-terminal Fmoc Deprotection ve yıkama

  1. Çözüm deprotecting N-terminal Fmoc hazırlamak: % 50 (v/v) morpholine DMF bir cam şişe içinde yeterli bir hacmi (200 mL) hazırlamak.
  2. 1-2 mL deprotection çözüm için reçine ekleyin, yavaşça 10 dakikadır kışkırtmak ve bir vakum kullanma çözüm drenaj. DMF (1-2 mL) ve DCM (1-2 mL) o sırada kullanarak, reçine ve 3 x Toplam reaksiyon damar iyice yıkayın. Daha sonra tekrar deprotection ve yıkama işlemleri 1 x.

4. Fmoc korumalı Amino asit kaplin

  1. Alanin kalıntı kaplin 25 µmol ölçekli el ile sentezi, durumunda bir örnek olarak kullanarak tartmak Fmoc-Ala-OH (5 eşdeğeri, 41.4 mg), 2-(6-chloro-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate (HCTU; 4.9 eşdeğeri, 50,5 mg) içinde bir Polipropilen konteyner ve DMF (0.5 mL) çözülür.
  2. DIPEA ekleyin (10 eşdeğeri, 43,5 µl) 0,25 M oluşturmak için çözüm amino asit (Tablo 1) aktif. Bir yaklaşık 1 dk pre-harekete geçirmek, çözüm için reçine ekleyin ve sonra kabarcık bu N2 yaklaşık 1-2 h için.
  3. Bu adımdaki peptid zincirindeki her amino asit adımları dizisi dahil: ilk deprotection N-terminal Fmoc-grup ve çamaşır HCTU kullanarak harekete geçirmek yolu ile amino asit kaplin tarafından takip.
    Not: Bir bağlantı daha uzun (e.g., 2 h) tavsiye edilir eğer sterically engel amino asit tortu kaplin [Örneğin., Fmoc-Thr (tBu) - OH, Fmoc-Cys (Trt) - OH, Fmoc O'nun (Trt) - OH, Fmoc-Arg (Pbf) - OH]. Un doğal amino asitler taşıyan alkene/alkin yerine 5 3 eşdeğerleri kullanılır ve 3 h tepki için yaptı.
  4. Kaiser veya chloranil testler Arora vd tarafından açıklandığı gibi kullanarak peptid sentez ilerlemesini izlemek 36 nitel değerlendirmeler varlığı veya yokluğunu ücretsiz birincil ve ikincil aminlerin bu testler sağlar. Alternatif olarak, yaklaşık 2-3 mg peptid reçine--dan i ciddi ve LC-MS tarafından analiz.

5. thiol-Batı Hydrothiolation ve Thiol yne Cyclization

  1. Thioether bağlayıcı reçine olarak cyclization (Şekil 3) aracılığıyla oluşturmak.
    1. Yaklaşık 50 mL Trt deprotection çözeltisi (TFA/TIS/DCM 0.03/0.06/1.0) hazırlayın. Cys - ve mS5tedavi-reçine taşıyan [NH2-R-mS5-A-A-A-Cys (Trt)-R'-reçine, 50 mg] 1-2 mL Trt deprotection çözeltisi 10 mL sütun ile. Yavaşça 10 dk N2kullanarak için çözüm tahrik. Son olarak, DCM ile yıkayın (1-2 mL) 3 x Toplam.
      Not: alkylene taşıyan yapı taşı (bkz: Şekil 6' tasvir yapısı) peptid kaplin ve thio-Doğu cyclization38için kullanılan MS5 temsil eder.
    2. Yukarıda yaklaşık 6 x Toplam için çözüm renk sarı olana sistein, trityl koruma grubunu kaldırmak için açıklanan yordamı yineleyin.
    3. N2ile bubbled, R-mS5- A-A-A-Cys(-SH)-R yıka '-reçine [ücretsiz thio ile sistein (-SH)] DMF (1-2 mL) ve DCM (1-2 mL) o sırada. Metanol (1-2 mL) 2 min için kullanarak reçine küçültmek ve filtrasyon kullanarak solvent kaldırın. Daha sonra sırayla bir buhar N2 gaz için yaklaşık 5 dakika içinde sütun altında reçine kuru.
    4. Degassed DMF önceden, bir ağız şişesi içinde köpüren azot gazı çözücü uzanan uzun bir iğne aracılığıyla yaklaşık 1 h için hazırlayın.
    5. Reçine tartmak kağıt üzerinden bir 10 mL yuvarlak popolu şişesi içine aktarın. Buna ek olarak 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone photoinitiator tarafından takip degassed DMF 2 ml reçine askıya (MMP; 1 eşdeğeri, 5.6 mg), 4-methoxyacetophenone (harita; 1 eşdeğeri, 3.8 mg).
    6. Bir heyecan eklemek balonun çubuk (0,3 cm) ve şişeye bir uygun lastik fiş ile kap sonra balonun havada bir yağ pompası kullanarak azot gazı ile yerinden.
      Not: İnert atmosfer üzerinde katı bir aşama etkili thio-Batı photoreaction için kesinlikle gerekli değildir. Ancak, bu çözüm aşamasında Şekil 5' te thio-yne photoreaction için çok gereklidir. Aksi takdirde, kükürt UV ışınlama sırasında okside.
    7. Reaksiyon balonun photoreactor ayarla ve reçine için 1 h UV ışınlama altında oda sıcaklığında (Şekil 2) ilave edin.
      Dikkat: photoreactor UV lambası geçiş öncesinde, UV ışık zararlı radyasyon vermeliyiz diye photoreactor kapağının kapalı olduğundan emin olun.
      Not: ürünün aynı moleküler ağırlıklı doğrusal peptid habercisi olduğu gibi sık sık tepki karışımı sırasında photoreactions örnekleme yeni diziler için tavsiye edilir. Genel olarak, doğrusal ve döngüsel peptidler önemli ölçüde farklı hydrophilicity görüntüler. Bu kolayca HPLC kullanarak seçkin. Alternatif olarak, 5, 5' - dithiobis-(2-nitrobenzoic asit) (DTNB) reaktif ücretsiz thiol37varlığı eğitim için de kullanılabilir.
    8. Reçine balonun sütuna aktarmak ve vakum filtrasyon kullanarak solvent kaldırın. Yıkama ve reçine 5.1.3. adımda açıklandığı gibi kuru.
    9. Yaklaşık 10 mL dekolte kokteyl (TFA/ipuçları/EDT/H2O 94/1/2.5/2.5) duman başlıklı hazırlayın.
    10. Reçine 2 mL polipropilen konteyner içine aktarmak, dekolte kokteyl (TFA/ipuçları/EDT/H2O 94/1/2.5/2.5) 1 mL kapsayıcıya Ekle ve sıkı bir şekilde kullanarak bir vidalı kapak konteyner mühür. Sonra yavaşça kapsayıcıda izinleri duman başlıklı 60 rpm hızında bir orbital çalkalayıcı 1.5-2 h için tahrik.
      Dikkat: TFA son derece korozif. Koruyucu giysi giyin ve verimli duman mahallede çalışma. EDT son derece kötü kokulu bir maddedir ve verimli duman mahallede ele alınması gerekir.
    11. TFA kokteyl buharlaşma bir N2 gaz akışı duman Hood altında çıkarın. Daha sonra soğuk dietil eter (1 mL) kullanarak kalıntı çökelti 30 s ve izole etmek için bu yolu ile Santrifüjü 12.000 x g 2 min için de. Santrifüjü yavaşça eter bileşen dökmek. Çökelti ve Santrifüjü adımları 2 x için yineleyin. Kalıntı kuruluk için buharlaşır.
    12. Son olarak, kalıntı 1 mL H2O/Asetonitril (2:1) dağıtılması ve HPLC C18 analitik sütun kullanarak tarafından arındırmak (4.6 x 250 mm, akış oranı 1.0 mL/dk). Kullanım H2O (% 0,1 içeren TFA) ve % 20 den 2%/min doğrusal gradyan için UV 280 nm ve 220 nm dalga boyu (Tablo 2) kullanarak 25 dk. monitör HPLC spectra üzerinden % 70 Asetonitril çözücüler olarak saf Asetonitril.
  2. Thioether bağlayıcı cins thio-Doğu tepki ve cyclize peptid macrolactamization (Şekil 4) tarafından inşa.
    1. Doğrusal peptid H2N-A-A-A-mS5taşıyan alkylene kalıntı sentez (2-R'')-R'-standart Fmoc tabanlı katı fazlı peptid sentez (SPP'ler) kullanarak reçine (50 mg) açıklandığı gibi adım 2-4. Daha sonra yıkama ve reçine 5.1.3. adımda açıklandığı gibi kuru.
    2. 5.1.4. adımda açıklandığı gibi degassed DMF 2 mL içeren bir 10 mL yuvarlak popolu şişesi reçine askıya alma.
    3. Photoinitiator ekleyin MMP ve harita (MMP: 1 eşdeğeri, 5.6 mg; HARİTA: 1 eşdeğeri, 3.8 mg), Fmoc-Cys-OH (3 eşdeğeri, 25.7 mg) ve heyecan balonun çubuk (0,3 cm). Uygun kauçuk fişi kullanarak şişesi kap ve yağ pompası balonun havada azot ile değiştirmek için kullanın.
    4. Reaksiyon balonun photoreactor ayarlayın. 1-2 h UV ışınlama, oda sıcaklığında (Şekil 2) altında için karıştırın.
    5. LC-MS Analizi altında tepki izlemek: 2-3 mg bölünme kokteyl kullanarak reçine ayırmak. Kalıntı soğuk dietil eter (300 µL) ile çökelti, kalıntı Santrifüjü tarafından ayırma ve kuruluk için kalıntı 5.1.11. adımda açıklandığı gibi buharlaşır. Bundan sonra H2O/Asetonitril (2:1) 100 µL kalıntı geçiyoruz. 0,22-µm gözenekli film kullanarak peptid çözüm filtrate ve electrospray iyonlaşma (ESI) iyonize ve olumlu modunda işletilen bileşik ile LC-MS kullanarak çözümleyebilirsiniz.
    6. 5.2.2 - gerekli, tekrar adım atarsa 5.2.4'ten tepki emin olmak için tamamlanması için yapılır.
    7. Bitimini takiben fotoğraf-reaksiyon reçine balonun sütuna aktarmak ve vakum filtrasyon kullanarak solvent kaldırın. Yıkama ve reçine 5.1.3. adımda açıklandığı gibi kuru.
    8. Benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate DMF çözüm ekleyin (PyBob; 2.4 eşdeğeri, 31.2 mg), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt; 2.4 eşdeğeri, 8.1 mg) ve NMM (4 eşdeğeri, 11 µL) reçine sütun için macrolactamization için. Bu çözüm için 2 h N2 ile kabarcık.
      1. Buna ek olarak, LC-MS 5.2.3. adımda açıklandığı gibi kullanarak bu bağlantı reaksiyon izleyin. Gerekirse, tepki emin olmak için bu adımı için tamamlanma yürütülen yineleyin.
    9. Standart Fmoc tabanlı SPP'ler 3 ve 4 numaralı adımlarda açıklandığı gibi kullanarak peptid uzamış.
    10. Derleme amino asit kalıntıları üzerine peptid reçine 5.1.10 ve 5.1.11 adımlarda açıklandığı gibi ayırmak ve 5.1.12 adımda anlatıldığı gibi arındırmak.
  3. Vinil sülfat bağlayıcı çözüm aşamasında (Şekil 5) oluşturun.
    1. Standart Fmoc tabanlı SPP'ler 2-4 adımda açıklandığı gibi kullanarak doğrusal peptid taşıyan alkin kalıntı sentez. Bir önceki çalışma20içinde açıklandığı gibi köklü bir protokolüne göre amino asit taşıyan alkin sentez.
    2. Peptid reçine ayırmak ve soğuk dietil eter adımlarda 5.1.9 - 5.1.11 açıklandığı gibi kullanarak çökelti. Bölünme ve yağış reçine 2 min için de 12.000 x g Santrifüjü kullanarak peptid toplamak.
    3. Bir vakum elde edilen kalıntı kuru. 0,5 mM son bir konsantrasyon ulaşmak için kalıntı yuvarlak popolu bir 100 mL şişe içinde degassed DMF (50 mL) içinde erimesi (reçine, 0.025 mmol yüklenmesini dayalı (1000 mL/L / 0.5 mmol/L) 50 mL =).
      1. Photoinitiator DMPA (0.5 eşdeğeri, 3.2 mg) ekleyin ve 10 dakika çözüm içine uzanan uzun bir iğne aracılığıyla N2 kullanarak tepki çözüm degas. Ardından, UV ışığı 0.5 - 1 h ajitasyon olmadan için oda sıcaklığında altında örnek ışınlatayım.
    4. Yüksek vakum altında DMF kaldırmak ve onun organik yan dağıtılması amacıyla dietil eter ekleyerek ham kalıntı çökelti. Sonra 2 min için de 12.000 x g Santrifüjü kullanarak kalıntı izole et. Santrifüjü yavaşça eter bileşen dökmek. Kalıntı kuruluk için buharlaşır. Son olarak, kalıntı H2O/Asetonitril (2:1) 1 ml dağıtılması ve 5.1.7 adımda anlatıldığı gibi HPLC kullanarak arındırmak.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

HPLC ve MS spectra peptid Ac-YmS5AAAC-NH2 ve cyclized ürün Ac - Y-(siklo-1,5)-[mS5AAAC] - Tarih-reçine intramolecular thiol-Doğu photoreaction kullanarak oluşturulan NH2 figürü tasvir 6B. döngüsel peptid doğrusal onun öncü göre özdeş bir moleküler ağırlığa sahip bulundu. Ancak, onun HPLC tutma zamanı yaklaşık 2 dakika daha önce onun öncüleri aynı ayrımı koşullar altında daha olmak gözlendi. Farklı serileri ile kısa peptidler tüm iyi bir dönüşüm için Şekil 6Ciçinde tasvir tespit edildi.

Tarama süreci thio-yne photoreaction koşulları için Şekil 7Btasvir edilir ve izomer dönüşüm ve oranı ters fazlı HPLC entegrasyonu kullanılarak belirlenmiştir. Peptid 2c yalnızca izleme düzeylerini UV ışınlama takip tespit edildi. Bu thiyl N-terminus adlı radikal bir yakalama sırasında 20-membered macrocycle sözleşme adıma için konformasyon tercih nedeniyle muhtemeldir. Peptidler 1a ve 1b bir 8 üyeli vinil sülfür crosslink ile iki izomerler oluşturmak için bulunamadı. Peptid 1a oluşturulan, peptidler 2a-A ve 2a-B, sergilenen ayrı tutma hem de farklı UV ışınlama kez (0 - 30 dk.) için farklı oranlar (Şekil 7C). Bunlar 1H-NMR spektroskopisi (Şekil 7 d) çift bağ proton sinyalleri nedeniyle E/Z izomerler olarak atanmıştır. Peptidler 2d-2f söz konusu olduğunda, Z-izomer baskın ürün bulundu. Bu 8 üyeli vinil sülfür crosslink göre kompakt bir yapı inşaatı nedeniyle konformasyon tercih olasılığı bulunuyor. Şekil 7E, dairesel dichroism (CD) spektrum göre tasvir gibi rasgele bir bobin, peptid ise sergi peptidler 2a-A/B ve 2b-A/B 8 üyeli vinil sülfür crosslink sahip 7 üyeli vinil sahiptir 2B sülfür crosslink sergileyen bir Helisel biçimi. Özetle, Z-izomer vinil sülfür Bond tercihen oluşturulmasına izin bulundu ve daha iyi bir sarmal indüksiyon görüntülenir.

Figure 1
Şekil 1: katı faz peptid sentez için el ile peptid sentez aleti. Sütunlar üzerinde üç yönlü Kesme muslukları ile vakum manifold yerleştirildi ve aparatı köpüren için bir azot veya argon gazı hattına bağlı kaldı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2: photoreactions için kullanılan photoreactor cihaz. Cihazın on 350 nm lambalar (Malzemeler tablo) ile UV ışınlama ve bir argon gaz tankı için photoreactor argon gazı öncesinde ve sırasında photoreactions ile dolu olduğunu emin olmak için donatılmıştı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: Tarih-reçine intramolecular thiol-Doğu tepki söz konusu olduğunda daha kısa peptidler. Bu reaksiyon bir reçine üzerinde deprotection sistein kalıntıları doğrusal peptid tam sentezi takip trityl grupları kullanılarak yapılan ve reçine photoinitiators harita ve MMP kullanarak UV ışınlama ayarlayın. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: Tarih-reçine cins thio-Doğu tepki. Bu reaksiyon DMF solvent Fmoc-Cys-OH çözülerek yürütülen ve daha sonra üzerinde PyBop, HoBt ve NMM harekete geçirmek reaktifler kullanarak bir macrolactamization ardından reçine, alkene taşıyan peptid kalıntı ile ışınlanmış. Peptid sentez devam edildi sonra standart bir SPP'ler kullanarak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: çözüm aşamasında Intramolecular thiol-yne tepki. Bu reaksiyon sonra doğrusal peptid degassed DMF dağıldı ve UV ışığı kullanarak photoinitiator DMPA ile ışınlanmış doğrusal peptid tam sentezi takip çözüm aşamasında gerçekleştirilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6: Thioether hayvan zinciri-reçine intramolecular thiol-Doğu reaksiyon kullanılarak oluşturulan döngüsel peptidler. A. Bu panel düzeni-reçine intramolecular thio-Doğu tepki gösterir. mS5: "m" temsil eden mono yerine olenic amino asitler, "S" temsil eden S yapılandırılmış amino asit ve "5" yan zinciri atomlar38sayısını ifade eder. B. bu paneller peptid Ac-YmS5AAAC-NH2 öncesinde ve sonrasında kendi cyclization HPLC ve MS spectra gösterir. C. Bu panel döngüsel peptidler farklı serileri ile dönüşüm gösterir. Bu rakam Zhao, B. ve ark.28 değiştirildi Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7: peptid fotoğraf kaynaklı thiol-yne hydrothiolation ile zımbalama. A. bu intramolecular thiol-yne hydrothiolation şematik bir örnektir. B. Bu panel Bu çalışmada değerlendirilen peptid dizileri gösterir. Başlatıcı: (I) 0.5 EQ DMPA, 1 h; (II) hiçbir Başlatıcı, 1 h; (III) 0.5 EQ DMPA, 0.5 EQ harita, 1 h; (IV) 0.5 EQ MMP, 0,5 h. C. Bu panel peptid 1a ile farklı UV ışınlama kez tepki karışımı HPLC izleri gösterir ve 220 izlenen nm. D. Bu panel 1H-NMR spectra 1a, 2a-A, ve 2a-B (DMSO-d6 400 MHz cinsinden) gösterir. Yıldız işaretlerini UV ışınlama takip vinil sülfür çift bağ oluşumu gösterir. E. Bu panel peptidler vinil sülfür çapraz bağlantıları ile dairesel dichroism spectra gösterir. Bu rakam Tian, Y. ve ark. değiştirildi 44 Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Malzemeleri MW N(0.5mmol / g reçine × 0. 0 5 g × 5eq.) M(Amino asit) (mg)
(Da) (mmol)
Fmoc-Gly-OH 297 0,125 37.1
Fmoc-Ala-OH 331 0,125 41,4
Fmoc-Val-OH 339 0,125 42.4
Fmoc-Leu-OH 353 0,125 44,1
Fmoc-Ile-OH 353 0,125 44,1
Fmoc-Pro-OH 337 0,125 42,1
Fmoc-Phe-OH 387 0,125 48,4
Fmoc-Tyr (tBu)-OH 460 0,125 57.5
Fmoc-Trp (Boc)-OH 527 0,125 65.9
Fmoc-Ser (tBu)-OH 384 0,125 48
Fmoc-Thr (tBu)-OH 398 0,125 49,8
Fmoc-Cys (Trt)-OH 586 0,125 73.3
Fmoc-bir araya geldi-OH 372 0,125 46.5
Fmoc-Asn (Trt)-OH 597 0,125 74,6
Fmoc-Gln (Trt)-OH 611 0,125 76.4
Fmoc-Asp (OtBu)-OH 412 0,125 51.5
Fmoc-Glu (OtBu)-OH 426 0,125 53.3
Fmoc-Lys (Boc)-OH 469 0,125 58.6
Fmoc-Arg (Pbf)-OH 617 0,125 77,1
Fmoc O'nun (Trt)-OH 620 0,125 77.5
HCTU 414 0.122 50,5
DIPEA 129 0,25 43.5(μL)
DMF 0.5 mL

Tablo 1: Bağlantı koşulları miktarda.

Sütun Zorbax SB-Aq sütun, 4,6 × 250 mm (gözenek boyutu 80 Å, parçacık boyutu 5 mikron)
Çözücüler Re: su, % 0,1 (vol/vol) TFA; B: Asetonitril
Akış hızı 1 mL/dk
Gradyan 20-%70 (vol/vol) B 25 min; % 70-% 98'i 5 min; %98 5min;
Enjeksiyon hacmi 30 – 500 μL
Dalga boyu (nm) 280 (için peptidler) Fmoc-, Trp - veya Tyr içeren, ya da 494 (peptidler FITC etiketli) veya 220 (diğerleri için)

Tablo 2: Yüksek performanslı sıvı kromatografi koşulları.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Şekil 3' te açıklanan-reçine intramolecular thio-Doğu cyclization içinde sistein kalıntı trityl grup kaldırılması sonraki photoreaction için önemli bir adım olduğu anlaşıldı. Buna ek olarak, peptid molekül ağırlığı öncesinde ve sonrasında tepki olarak aynı olması için bulundu Şekil 6Btasvir. Bu nedenle, HPLC kimlik veya DTNB tahlil tepki izlemek için gereklidir. Şekil 4' te açıklanan cins thio-Doğu tepki söz konusu olduğunda, izleme MS gereklidir. Bir adım laktam kaplin thioether urgan İnşaat için gerekli bulundu iken, bu iletişim kuralı için uzun peptidler genel olarak daha yüksek bir verim elde etmek için kullanılacak öneririz.

Thio-yne photoreaction tarafından üretilen vinil sülfür bond reçine bölünme için kullanılan güçlü asidik TFA çözümde istikrarlı değildi. Bu nedenle, thio-yne photoreaction kullanımı çözüm aşamasında kabul edilmiştir. Bu tepkime potansiyel cins tarafından-reaksiyonları önlemek için düşük bir konsantrasyon (0.5 mM) düşürülmüştü. Photoreactions sırasında ürün oksidasyon önlemek için çözücü degas de aynı derecede önemlidir. Reaksiyon organik çözücü DMF vakum buharlaşma da dikkatle peptid oksidasyon/bozulma ya da makine amortisman önlemek için yapılmalıdır. Şekil 5 ' te tasvir thio-yne cyclization tepki sonrası peptid sentez değişiklik35için bir mekanizma sağlar.

İntramolecular thiol-Doğu tepki başarıyla kaşif balonlu keşif thioether peptidler iyi dönüşüm ile oluşturulan iken, basit thioether kullandığında peptidler istenen helisel uyum sınırlamak başarısız oldu. Bu urgan üzerinde değişiklik stratejisi üzerinde bağlı olarak, bir urgan kiral merkezi indüklenen peptid helicity kavramı geliştirilmiştir, nerede γ peptid R konfigürasyonunu grubuyla yerine C-terminal peptid'ın sarmal uyum ( ikna başardı Şekil 4)39,40. Kısıtlamadır bu yaklaşım ile ilişkili iki kiral merkezleri (α (S), γ(R))41,42. ile enantiyomerik saf doğal olmayan amino asit sentezi

Bu araştırma thio-yne tepki iyi dönüşüm, helisel bir uyum içine peptid kısıtlayabilirsiniz 7E rakamtasvir gibi gösterdi. Helisel peptidler inşaat açısından, thio-yne photoreaction helisel peptidler inşası için öneririz. -Reçine intramolecular thio-Doğu cyclization uzun peptidler etkili cyclization emin olmak için çok esnek olduğu durumlarda kısa thioether urgan peptidler (az 15) yapımı için uygun olarak gösterilmiştir. Buna ek olarak, tarih-reçine cins thio-Doğu cyclization uzun peptid cyclization için tavsiye edilir.

Özet olarak, bir dizi kimyasal protokol thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler kullanımı ile photoinduced thio-KD/thio-yne tıklayın Kimya inşası için geliştirdik. Reaksiyon verimli, metal katalizör-alerjik, manipülasyonlar için uygun ve gösterdiği üstün fonksiyonel grup tolerans sahip olmak ve biyo-ortogonal olmuştur. Ayrıca, bu yöntem diğer peptid ikincil yapılar gibi bir β-saç tokası43,44stabilize etmek amacıyla geliştirilmiştir. Bu kağıt thioether urgan traceless modifikasyon sitesi sağlar gösterir. Bu büyük ölçüde peptid sentez değişiklik aşağıdaki kimyasal alanı genişler. Ayrıca, bir azaltılmış membran toksisite hidrokarbon zımba peptidler göre sergilenen alifatik thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler gösterdiği iyi bioactivity ile farklı biyolojik uygulamalarında uygulanır ve bioavailability45,46.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Yazarlar kabul mali desteği Çin hibe doğal Bilim Vakfı (No 21372023, 21778009 ve 81701818); Bakanlığı Bilim ve teknoloji-in Halk Cumhuriyeti Çin (No. 2015DFA31590); Shenzhen bilim ve teknoloji yenilik Komitesi (No. JCYJ20170412150719814, JCYJ20170412150609690, JCYJ20150403101146313, JCYJ20160301111338144, JCYJ20160331115853521, JSGG20160301095829250 ve GJHS20170310093122365); ve Çin doktora sonrası Bilim Vakfı (No. 2017 M 610704).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rink Amide MBHA resin(0.53 mmol/g) HECHENG GRM50407
Standard Fmoc-protected amino acids GL Biochem (Shanghai) Ltd.
N-Methyl-2-pyrrolidinone Shenzhen endi Biotechnology Co.Ltd. 3230 skin harmful
N,N-Dimethyl formamide Energy B020051 skin harmful
Dichloromethane Energy W330229 skin harmful
N,N-Diisoproylethylamine Aldrich 9578 irritant
Trifluoroacetic acid J&K 101398 corrosive
Triisopropylsilane J&K 973821
1,2-Ethanedithiol J&K 248897 Stench
2-(6-Chloro-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate  GL Biochem (Shanghai) Ltd. 851012
Morpholine Aldrich M109062 irritant
Diethyl ether Aldrich 673811 flammable
Acetonitrile Aldrich 9758 toxicity
Methanol Aldrich 9758 toxicity
2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone Energy A050035
4-methoxyacetophenone Energy A050098
2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone Energy D070132
5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) J&K 281281
Benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate Energy E020172
1-Hydroxybenzotriazole Energy D050256
4-Methylmorpholine Energy W320038
High Performance Liquid Chromatography SHIMADZU LC-30AD
Electrospray Ionization Mass SHIMADZU LCMS-8030
Lyophilizer Labconco FreeZone
SpeedVac concentration system Thermo Savant
vacuum manifold promega A7231
three-way stopcocks Bio-Rad 7328107
poly-prep chromatography columns  Bio-Rad 7311550

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pelay-Gimeno, M., Glas, A., Koch, O., Grossmann, T. N. Structure-based design of inhibitors of protein-protein interactions: mimicking peptide binding epitopes. Angewandte Chemie International Edition. 54 (31), 8896-8927 (2015).
  2. Passioura, T., Katoh, T., Goto, Y., Suga, H. Selection-based discovery of druglike macrocyclic peptides. Annual Review of Biochemistry. 83, 727-752 (2014).
  3. Gonzalez, M. W., Kann, M. G. Protein interactions and disease. PLoS Computational Biology. 8 (12), 1-11 (2012).
  4. Wilson, A. J. Inhibition of protein-protein interactions using designed molecules. Chemical Society Reviews. 38 (12), 3289-3300 (2009).
  5. Teresa, A. F. C., Alessio, C. Cyclic and macrocyclic peptides as chemical tools to recognise protein surfaces and probe protein-protein interactions. ChemMedChem. 11 (8), 787-794 (2016).
  6. Craik, D. J., Fairlie, D. P., Liras, S., Price, D. The future of peptide-based drugs. Chemical Biology & Drug Design. 81 (1), 136-147 (2013).
  7. Cromm, P. M., Spiegel, J., Grossmann, T. N. Hydrocarbon stapled peptides as modulators of biological function. ACS Chemical Biology. 10 (6), 1362-1375 (2015).
  8. Zhang, Q. Z., Tian, Y., Lao, Y. Z., Li, Z. G. Peptides-staple method development and its application in cancer therapy. Current Medicinal Chemistry. 21 (21), 2438-2452 (2014).
  9. Cromm, P. M., Spiegel, J., Grossmann, T. N. Hydrocarbon stapled peptides as modulators of biological function. ACS Chemical Biology. 10 (6), 1362-1375 (2015).
  10. Wang, D., Liao, W., Arora, P. S. Enhanced metabolic stability and protein-binding properties of artificial alpha helices derived from a hydrogen-bond surrogate: application to Bcl-xL. Angewandte Chemie International Edition. 44 (40), 6525-6529 (2005).
  11. Bullock, B. N., Jochim, A. L., Arora, P. S. Assessing helical protein interfaces for inhibitor design. Journal of the American Chemical Society. 133, 14220-14223 (2011).
  12. Jackson, D. Y., King, D. S., Chmielewski, J., Singh, S., Schultz, P. G. General approach to the synthesis of short α-helical peptides. Journal of the American Chemical Society. 113 (24), 9391-9392 (1991).
  13. Timmerman, P., Beld, J., Puijk, W. C., Meloen, R. H. Rapid and quantitative cyclization of multiple peptide loops onto synthetic scaffolds for structural mimicry of protein surfaces. ChemBioChem. 6 (5), 821-824 (2005).
  14. Muppidi, A., Wang, Z., Li, X., Chen, J., Lin, Q. Achieving cell penetration with distance-matching cysteine cross-linkers: a facile route to cell-permeable peptide dual inhibitors of Mdm2/Mdmx. Chemical Communications. 47 (33), 9396-9398 (2011).
  15. Schafmeister, C. E., Po, J., Verdine, G. L. An all-hydrocarbon cross-linking system for enhancing the helicity and metabolic stability of peptides. Journal of the American Chemical Society. 122 (24), 5891-5892 (2000).
  16. Osapay, G., Taylor, J. W. Multicyclic polypeptide model compounds. 1. synthesis of a tricyclic amphiphilic alpha-helical peptide using an oxime resin, segment-condensation approach. Journal of the American Chemical Society. 112 (16), 6046-6051 (1990).
  17. Lau, Y. H., Andrade, dP., Wu, Y., Spring, D. R. Peptide stapling techniques based on different macrocyclisation chemistries. Chemical Society Reviews. 44 (1), 91-102 (2015).
  18. Spokoyny, A. M., Zou, Y., Ling, J. J., Yu, H., Lin, Y. S., Pentelute, B. L. A perfluoroaryl-cysteine S(N)Ar chemistry approach to unprotected peptide stapling. Journal of the American Chemical Society. 135 (16), 5946-5949 (2013).
  19. Lautrette, G., Touti, F., Lee, H. G., Dai, P., Pentelute, B. L. Nitrogen arylation for macrocyclization of unprotected peptides. Journal of the American Chemical Society. 138 (27), 8340-8343 (2016).
  20. Tian, Y., et al. Stapling of unprotected helical peptides via photoinduced intramolecular thiol-yne hydrothiolation. Chemical Science. 7 (5), 3325-3330 (2016).
  21. Chang, Y. S., et al. Stapled α-helical peptide drug development: a potent dual inhibitor of MDM2 and MDMX for p53-dependent cancer therapy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (36), 3445-3454 (2013).
  22. Zhao, H., et al. Crosslinked aspartic acids as helix-nucleating templates. Angewandte Chemie International Edition. 55 (39), 12088-12093 (2016).
  23. Leshchiner, E. S., et al. Direct inhibition of oncogenic KRAS by hydrocarbon-stapled SOS1 helices. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (6), 1761-1766 (2015).
  24. Wang, D., Qin, X., Zhao, H., Li, Z. N-cap helix nucleation: methods and their applications. Science China Chemistry. 60 (6), 689-700 (2017).
  25. Zorzi, A., Deyle, K., Heinis, C. Cyclic peptide therapeutics: past, present and future. Current Opinion in Chemical Biology. 38, 24-29 (2017).
  26. Hu, K., et al. An in-tether chiral center modulates the helicity, cell permeability, and target binding affinity of a peptide. Angewandte Chemie International Edition. 55 (28), 8013-8017 (2016).
  27. Lin, H., Jiang, Y., Zhang, Q., Hu, K., Li, Z. An in-tether sulfilimine chiral center induces helicity in short peptides. Chemical Communications. 52 (68), 10389-10391 (2016).
  28. Zhao, B., Zhang, Q., Li, Z. Constructing thioether-tethered cyclic peptides via on-resin intra-molecular thiol-ene reaction. Journal of Peptide Science. 22 (8), 540-544 (2016).
  29. Dondoni, A., Massi, A., Nanni, P., Roda, A. A new ligation strategy for peptide and protein glycosylation: photoinduced thiol-ene coupling. Chemistry. 15 (43), 11444-11449 (2009).
  30. Hu, K., Sun, C., Li, Z. Reversible and versatile on-tether modification of chiral-center-induced helical peptides. Bioconjugate Chemistry. 28 (7), 2001-2007 (2017).
  31. Shi, X., Jiang, Y., Yang, D., Zhao, H., Tian, Y., Li, Z. Reversibly switching the conformation of short peptide through in-tether chiral sulfonium auxiliary. Chinese Chemical Letters. , In Press (2017).
  32. Jiang, Y., et al. Switching substitution groups on the in-tether chiral centre influences backbone peptides' permeability and target binding affinity. Organic & Biomolecular Chemistry. 15 (3), 541-544 (2017).
  33. Aimetti, A. A., Shoemaker, R. K., Lin, C. C., Anseth, K. S. On-resin peptide macrocyclization using thiol-ene click chemistry. Chemical Communications. 46 (23), 4061-4063 (2010).
  34. Wang, Y. X., Chou, D. H. C. A thiol-ene coupling approach to native peptide stapling and macrocyclization. Angewandte Chemie International Edition. 54 (37), 10931-10934 (2015).
  35. Wang, Y., et al. Application of thiol-yne/thiol-ene reactions for peptide and protein macrocyclizations. Chemistry. 23 (29), 7087-7092 (2017).
  36. Patgiri, A., Menzenski, M. Z., Mahon, A. B., Arora, P. S. Solid-phase synthesis of short α-helices stabilized by the hydrogen bond surrogate approach. Nature Protocols. 5 (11), 1857-1865 (2010).
  37. Ozyurek, M., Baki, S., Gungor, N., Celik, S. E., Guclu, K., Apak, R. Determination of biothiols by a novel on-line HPLC-DTNB assay with post-column detection. Analytica Chimica Acta. 750, 173-181 (2012).
  38. Zhang, Q. Z., et al. Chiral sulfoxide-induced single turn peptide α-helicity. Scientific Reports. 6, 38573 (2016).
  39. Lin, H., et al. An in-tether sulfilimine chiral center induces beta-turn conformation in short peptides. Organic & Biomolecular Chemistry. 14 (42), 9993-9999 (2016).
  40. Hu, K., Li, W., Yu, M., Sun, C., Li, Z. Investigation of cellular uptakes of the in-tether chiral-center-induced helical pentapeptides. Bioconjugate Chemistry. 27 (12), 2824-2827 (2016).
  41. Hu, K., et al. A precisely positioned chiral center in an i, i + 7 tether modulates the helicity of the backbone peptide. Chemical Communications. 53 (50), 6728-6731 (2017).
  42. Li, J., et al. An in-tether chiral center modulates the proapoptotic activity of the KLA peptide. Chemical Communications. 53 (75), 10452-10455 (2017).
  43. Zhao, B., et al. A thioether-stabilized-D-proline-L-proline-induced β-hairpin peptide of defensin segment increases its anti-Candida albicans ability. ChemBioChem. 17 (15), 1416-1420 (2016).
  44. Tian, Y., Yang, D., Ye, X., Li, Z. Thioether-derived macrocycle for peptide secondary structure fixation. The Chemical Record. 17 (9), 874-885 (2017).
  45. Hu, K., Yin, F., Yu, M., Sun, C., Li, J., Liang, Y., Li, W., Xie, M., Lao, Y., Liang, W., Li, Z. G. In-tether chiral center induced helical peptide modulators target p53-MDM2/MDMX and inhibit tumor growth in stem-like cancer cell. Theranostics. 7 (18), 4566-4576 (2017).
  46. Tian, Y., Jiang, Y., Li, J., Wang, D., Zhao, H., Li, Z. Effect of stapling architecture on physiochemical properties and cell permeability of stapled α-helical peptides: a comparative study. ChemBioChem. 18 (21), 2087-2093 (2017).

Tags

Kimya sayı 138 Thio-KD/yne tepki fotoğraf kaynaklı sistein thioether istikrar helisel peptidler protein-protein etkileşimler
Thioether/vinil sülfür-gergin helisel peptidler fotoğraf yolu ile indüklenen Thiol-KD/yne Hydrothiolation oluşturmak
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Shi, X., Liu, Y., Zhao, R., Li, Z.… More

Shi, X., Liu, Y., Zhao, R., Li, Z. Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation. J. Vis. Exp. (138), e57356, doi:10.3791/57356 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter