Summary
صحة الأسماك البرية يمكن استخدامها كمؤشر لصحة النظم الإيكولوجية المائية. تقييمات الصحة الأسماك المستندة إلى نيكروبسي تقديم الوثائق من آفات مرئية أو شذوذ، والبيانات المستخدمة في حساب الأرقام القياسية للشرط، فضلا عن فرصة لجمع الأنسجة للتقييم المجهري والتعبير الجيني وأخرى أكثر عمقاً التحليلات.
Abstract
التأثيرات الاصطناعية من زيادة المغذيات والملوثات الكيميائية، إلى التعديلات الموئل وتغير المناخ، يمكن أن تكون لها آثار على التجمعات السمكية. الآثار السلبية الرصد واستخدام المؤشرات الحيوية من العضوي على المستوى الجزيئي، يمكن استخدامها لتقييم الآثار التراكمية على الأسماك والكائنات الحية الأخرى. وقد استخدمت صحة الأسماك في جميع أنحاء العالم كمؤشر لصحة النظم الإيكولوجية المائية. تقييم صحة الأسماك المستندة إلى نيكروبسي يوفر بيانات عن مؤشرات الشرط وأورجانوسوماتيك تشوهات وآفات، الطفيليات، مرئية. ويمكن مقارنة هذه بالموقع، والموسم، والجنس، وكذلك وقتيا، وثيقة التغيير على مر الزمن. يمكن تعيين تصنيفات الخطورة إلى ملاحظات مختلفة لحساب مؤشر صحة أسماك لمزيد من التقييم الكمي. عيب التقييم القائم على نيكروبسي هو أنه يستند إلى الملاحظات البصرية والشرط من العوامل التي ليست حساسة الأنسجة والمؤشرات الحيوية سوبسيلولار لآثار المقاسة. بالإضافة إلى ذلك، من الممكن إلا نادراً للتعرف على أسباب أو عوامل الخطر المرتبطة بشذوذ ملاحظتها. لذا، على سبيل المثال آثار إصابة أو "ورم" على الزعانف أو الشفاه أو سطح الجسم قد يكون الأورام. ومع ذلك، يمكن أيضا استجابة إلى الطفيلي أو التهاب مزمن أو تضخم الخلايا العادية في الاستجابة إلى مصدر إزعاج. على العكس من ذلك، الأورام وبعض الطفيليات والعوامل المعدية الأخرى والعديد من الأنسجة التغييرات غير مرئية وحتى يمكن الاستهانة. ومع ذلك، خلال التقييم القائم على نيكروبسي، والدم (البلازما)، الأنسجة للتشريح المرضى (علم الأمراض المجهرية)، يمكن جمعها الجينوم وغيرها من التحليلات الجزيئية، وأوتوليثس للشيخوخة. هذه التحليلات المصب، جنبا إلى جنب مع التحليلات الجغرافية المكانية، تقييمات الموئل، تحليلات نوعية وملوث المياه كل يمكن هامة في تقييم النظام الإيكولوجي الشامل.
Introduction
الأنشطة البشرية آثار سلبية عديدة على البيئات المائية. الأسماك تسكن مختلف هيئات المياه أن يجسد في السكان، وكثيراً ما يستخدم كمصدر لمياه الشرب، وبالتالي فهي مؤشرات هامة لصحة البيئة المائية. وتتعرض الأسماك البرية التي تعيش وتتكاثر في موطن معين طوال حياتهم لعوامل الإجهاد المختلفة بما في ذلك العوامل الممرضة والطفيليات، وسوء نوعية المياه والملوثات الكيميائية. أدخل الآلاف من المواد الكيميائية ممراتنا عن طريق مياه الفضلات الصناعية والبشرية والعواصف الضواحي الحضرية والزراعية في جولة الإعادة. يمكن أن يكون هذه الخلائط المعقدة للمواد الكيميائية المضافة، والتآزر أو آثار معادية على تعرض الكائنات الحية1،،من23. وباﻹضافة إلى ذلك، عوامل الإجهاد البيئي الأخرى مرتفعة مثل المواد الغذائية، ودرجة حرارة مرتفعة، منخفضة الأكسجين الذائب أو تقلبات الأس الهيدروجيني يمكن أن تؤدي إلى تفاقم آثار الملوثات الكيميائية4،5. عوامل الإجهاد البيئي يمكن أن تؤثر أيضا على الأمراض المعدية نتائج مباشرة بزيادة عدد العوامل المعدية6، زيادة الفوعة من مسببات الأمراض الانتهازية7 أو قمع استجابة مناعية والمرض المقاومة للمضيف8،،من910. لهذه الأسباب، هناك اهتمام متزايد في الآثار البيولوجية أو سلبية رصد11،12،،من1314، الاستفادة من الأسماك والكائنات المائية الأخرى لتحديد السكان والنظم الإيكولوجية المعرضة للخطر.
وتستخدم الآثار الضارة رصد المؤشرات الحيوية على مختلف مستويات المنظمة، من العضوي إلى سوبسيلولار أو الجزيئية، لتحديد الآثار المقاسة والتي قد تؤثر على السكان ويكون مؤشرا للتعرض لعوامل الإجهاد المختلفة. وتشمل مؤشرات على مستوى الكائن الحي شذوذ مرئية والظروف. يتم حساب مؤشرات الشرط على أساس الطول والوزن لتقييم رفاه أو اللياقة البدنية للتجمعات السمكية. الأكثر شيوعاً هو حالة العوامل في فولتون (K) = (الوزن/الطول3) 15. وهناك مؤشر آخر هو وجود تشوهات مرئية. استخدمت مجموعة متنوعة من الأساليب في الدراسات الفردية وبرامج الرصد لتقييم، وثيقة، وتشوهات مرئية. التقييم يستند فقط إلى تشوهات خارجية، أي أن نسبة الأفراد الذين يعانون من المرض والضرر زعنفة، والأورام والتشوهات الهيكلية، هو واحد من المقاييس للفهرس للسلامة الأحيائية (IBI) التي يقيمها المجتمع الصحي16. وقد استخدمت أيضا تقييم مماثل يسمى DELTs (تشوهات، تقرحات، والآفات، والأورام) لتقييم صحة المجتمعات المحلية الأسماك17. ومع ذلك، هذه الأساليب فقط تقييم التشوهات البصرية الخارجية والآفات الداخلية لا أو المؤشرات المقاسة المبكر.
التقييمات المستندة إلى نيكروبسي تشمل الملاحظات الخارجية والداخلية، والسماح لقياس مؤشرات الشرط الإضافي. فهرس هيباتوسوماتيك (وزن الكبد/إجمالي وزن الجسم) قد استخدمت أيضا كمؤشر للياقة البدنية أو احتياطيات الطاقة15 الذي يبين قيمة مؤشر أعلى الأسماك أكثر صحة. ومع ذلك، أظهرت عدد من الدراسات أن تضخم أو زيادة في حجم الكبد يحدث نتيجة التعرض للملوثات المختلفة استقلاب الكبد18،،من1920. في هذه الحالة سيكون أعلى مؤشر يدل على التعرض لبعض فئات كيميائية. فهرس جونادوسوماتيك (وزن الجسم الوزن إلى مجموع الغدد التناسلية) مؤشر شرط آخر موجها نحو الصحة الإنجابية21. يمكن استخدام الملاحظات التي أبديت أثناء التقييم القائم على نيكروبسي لمقارنة مدى انتشار أنواع الآفة الفردية أو النسبة المئوية للأشخاص الطبيعيين. ومع ذلك، يمكن استخدامها في صحة تقييم22،أكثر من كمية23أيضا.
تقييم موحدة على أساس نيكروبسي الموصوفة هنا يمكن استخدامها لزيادة تقييم صارخ مرئية بطرق متعددة اعتماداً على السؤال (ق) الإجابة عليها والخبرات وغيرها من الموارد المتاحة. هو نهجنا روتينية جمع البيانات البيومترية (الطول، الوزن، وزن الكبد، والغدد التناسلية الوزن)، والدم للحفاظ على قطعة من الأجهزة للتحاليل المجهرية تحليلات المصل/بلازما، وثيقة شذوذ المرئية الخارجية والداخلية، وجمع أوتوليثس تحليل العمر. التقييم القائم على نيكروبسي بالإضافة إلى تحليل العمر والتشريح المرضى من مختلف الأجهزة، يسمح بحساب ومقارنة مختلف الأرقام القياسية للشرط، وانتشار تشوهات مرئية، فضلا عن التغييرات الأنسجة المجهرية، حسب الجنس، والعمر، والموقع و فترة أخذ العينات. ويمكن إجراء مجموعات الأنسجة إضافية للعديد من التحليلات الأخرى بما في ذلك المجهر الإلكتروني، علم الجراثيم، وعلم الفيروسات، وعلم الطفيليات وتركيزات المواد الكيميائية. هذه الطرق يمكن أيضا أن تكون جزءا من تحليلات متعمقة أكثر تستخدم لتشخيص سبب الأسماك يقتل24 أو نفوق لإكثار أسماك25. ويوضح أساليب لجمع الأنسجة لتحليلات إضافية اثنين والتعبير الجيني وتحليلات الحصانة الوظيفية.
Protocol
الأساليب الموصوفة هنا أقرها مركز العلوم ليتون رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة.
1. جمع الأسماك
- جمع الأسماك الحية مع حد أدنى من الإجهاد. استخدام electrofishing قارب أو على ظهره، هوك، والخط أو شبكات.
- عقد الأسماك في الآبار الحية أو حاويات الرغوة حتى أخذ العينات.
ملاحظة: "جمعية المصايد الأمريكية" قد نشرت عددا من أدلة لجمع الأسماك والمناولة والتخدير/القتل الرحيم26،،من2728. ارتداء القفازات عند التعامل مع الأسماك.
2-الأسماك نيكروبسي
-
Euthanize من أسماك.
- ضع السمك في المخدر حتى يتوقف عن الحركة أوبيركولار والسمك يفقد التوازن. وبعد آخر 2 – 10 دقيقة سوف تكون euthanized الأسماك؛ ومع ذلك، وهذا قد تختلف أيضا حسب الأنواع.
ملاحظة: يمكن أن euthanized الأسماك مع عدد من المسكنات (انظر الجدول للمواد الأكثر استخداماً). أسلوب القتل الرحيم سيتوقف على القياسات المختبرية التي ستجري في29من الأنسجة التي تم جمعها.
- ضع السمك في المخدر حتى يتوقف عن الحركة أوبيركولار والسمك يفقد التوازن. وبعد آخر 2 – 10 دقيقة سوف تكون euthanized الأسماك؛ ومع ذلك، وهذا قد تختلف أيضا حسب الأنواع.
-
قياس الخصائص البيولوجية.
- وزن الأسماك بالغرام أقرب.
- قياس طول الأسماك إلى ملليمتر أقرب.
- قياس الطول الكلي من غيض من الآنف مع الفم مغلق إلى نهاية الذيل عندما يقرص معا.
- قياس طول تفرع من تفرع في الذيل إلى الطرف الآنف، وطول قياسي من الطرف الآنف إلى نهاية الجسم (بداية الذيل).
- حساب معامل الشرط باستخدام الصيغة التالية:
عامل الحالة = (مجموع الوزن-وزن الغدد التناسلية)/إجمالي طولها3.
ملاحظة: يتم طرح وزن الغدد التناسلية من وزن الجسم الكلي منذ الغدد التناسلية يمكن أن تسهم إلى حد كبير في وزن الجسم الكلي، لا سيما في الأسماك الإناث بريسباون.
-
الحصول على عينة دم.
ملاحظة: الدم الأكثر شيوعاً هي مأخوذة من المنطلق والذيلية ولكن يمكن أيضا سحب من الشريان الاورطي الظهرية أو بالقلب ثقب30.- استخراج عينة دم من الوريد والذيلية بإبرة ز 22 أو 23 في حقنه 1 إلى 5 مل، تبعاً لحجم الأسماك. أدخل الإبرة عرفت منطقة والذيلية تحت الخط الجانبي (الشكل 1A و 1B). زاوية أنه صعودا حتى تصل إلى العمود الفقري وثم سحب قليلاً. وعلى المنوال البطني للعمود الفقري السطحية.
ملاحظة: إذا كان سيجري مسحات الدم أو المصل مطلوب، يتم استخدام لا تخثر. في معظم الحالات، سيتم تجميع البلازما، و ومن ثم تستخدم لمعطف الإبر والمحاقن تخثر الدم مثل الهيبارين الصوديوم، يدتا أو الليثيوم وهو أيضا في أنابيب جمع الدم (مثلاً، فاكوتينير). - إزالة الإبرة ووضع في حاوية التخلص من الأدوات الحادة قبل وضع الدم في أنبوب جمع.
ملاحظة: يمكن عقد الدم على الجليد ولكن اعتماداً على التحاليل اللاحقة ينبغي أن يكون فصل أقرب وقت ممكن30. - إذا كان سيتم تقييم شذوذ النووية أو تعداد الدم التفاضلية، فورا وضع قطره دم على الشرائح الزجاجية النظيفة مكررة المجهر. مرة أخرى شريحة ثانية بزاوية 45 درجة في الانخفاض، مما يسترعى ثم عبر السطح بعمل شعري. واسمحوا أن أيردري31.
- الطرد المركزي الدم في 1,500 – 2,500 س ز لمدة 15 دقيقة للرواسب في الخلايا. إزالة المصل/بلازما مع بيبيت نقل عقيمة، الكوة في قارورة المبردة، وتخزينها في-80 درجة مئوية.
- استخراج عينة دم من الوريد والذيلية بإبرة ز 22 أو 23 في حقنه 1 إلى 5 مل، تبعاً لحجم الأسماك. أدخل الإبرة عرفت منطقة والذيلية تحت الخط الجانبي (الشكل 1A و 1B). زاوية أنه صعودا حتى تصل إلى العمود الفقري وثم سحب قليلاً. وعلى المنوال البطني للعمود الفقري السطحية.
الشكل 1 : الحصول على عينة دم من أسماك. وضعت الأسماك (A) A euthanized مؤخرا على جانبها والخط الجانبي الموجود. (ب) إبرة هو البطني المدرج إلى الوحشي خط (السهم)، الزاوية إلى الأعلى حتى يلامس إبرة في العمود الفقري. ثم يتم سحب قليلاً، وبدأت الشفط بسحب الدم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
-
إجراء تقييم صحة القائم على نيكروبسي على كل الأسماك.
ملاحظة: يتم إصدار عدد من المنشورات التي توضح وتصف آفات وتشوهات المتاحة32،33،،من3435.- شذوذ المستند الخارجي بما في ذلك الآفات على سطح الجسم والزعانف (الشكل 2)، والعيون والخياشيم (الشكل 3)، الطفيليات الخارجية مثل المستنزفون (الشكل 2D) أو اليرقات أو الخراجات ميتاسيركاريال تريماتودي (الشكل 2D، 3B) وجيل الطفيليات (3D الشكل). الوثيقة نوع وموقع وحجم الشذوذ الملحوظ في أوراق البيانات، كذلك، فوتوغرافيا، إذا كان ذلك ممكناً.
- فتح تجويف البطن (الشكل 4 أ) استخدام مقص عن طريق قطع من منطقة الشرج إلى أوبيركولوم ثم إزالة رفرف العضلات لكشف الأجهزة الداخلية.
ملاحظة: إذا كان سيتم جمعها الكلي الأمامي للمناعة تعمل (راجع الخطوة 5 أدناه) أو العينات التي تم جمعها للجراثيم أو الفيروسات، يجب تطهير سطح الجسم الخارجي بالكحول 70% وينبغي الحصول على تلك العينات قبل إجراء نيكروبسي. إذا أنسجة تستخدم فقط للملاحظات البصرية والتحليلات البلازما والأنسجة المعقمة تقنية ليست ضرورية. - وثيقة شذوذ الداخلية (الشكل 4) بما في ذلك تغيير الألوان العامة أو تنسيق مختلف الأجهزة (الشكل 4 باء-4D)، وجود آثار المناطق (4E الشكل)، والخراجات، والطفيليات، وحجم (شذوذ الموسع، وأصابها الجمود).
الشكل 2 : لاحظ الأمثلة من آفات مرئية على سطح الجسم، وزعانف الأسماك- (A) A صغيرة، وتآكل قليلاً الآفة (السهم) على سطح الجسم الأفقي. (ب) محمر مساحة كبيرة (السهم) التي تنطوي على سطح الجسم والذيلية. (ج) المجمعة، آفات الأسود (الأسهم) على سطح الجسم والزعانف. (د) المستنزفون (السهم الأبيض) والبقع السوداء الصغيرة (الأسهم السوداء) على fin. شريط المقياس = 3 مم. (ﻫ) A التي أثيرت، الآفة مفصصة، وبالي (السهم) على سطح الجسم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : أمثلة من آفات مرئية من الخياشيم وعيون الأسماك- (A) A شاحب منطقة (سهم) في عدسة العين. شريط المقياس = 5 ملم. (ب) البيضاء الخراجات (الأسهم البيضاء) والبقع السوداء الصغيرة (الأسهم السوداء) الناجمة عن الطفيليات تريماتودي على أوبيركولوم تغطي الخياشيم (أ). مقياس بار = 1 سم. (ج) الشاحب، ويتسبب في تآكل منطقة (السهم) على جيل (أ). شريط المقياس = 5 مم-(د) الخيشومية التي تم إزالة عرض الطفيليات (الأسهم) تعلق بخيوط جيل. شريط مقياس = 2 مم- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
4 الرقم: أمثلة نيكروبسي والتشوهات الداخلية للأسماك- (أ) خلال نيكروبسي الأسماك يتم قطع مفتوحة (على طول السهم الأبيض) وإزالة رفرفة العضلات (السهم الأسود) لفضح الغدد التناسلية (أ) والطحال، تحتجزهم ملقط ومقص. (ب) مرقش الكبد (أ)، والخصيتين (ب (، الأمعاء محاطة الدهنية الدهون (ج) والمعدة (د). شريط المقياس = 5 ملم. (ج) الكبد (أ) مع منطقة أحمر داكن (سهم) والمبيض (ب) والأمعاء (ج). شريط المقياس = 5 مم-(د) الكبد مع المناطق مشوه مخضر (الأسهم). مقياس بار = 1 سم. (ﻫ) مثال العادية (أ) وغير طبيعية (ب) الخصيتين مع رفع العقيدات. مقياس بار = 1 سم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
-
الحصول على مؤشر هيباتوسوماتيك (HSI).
- إزالة الكبد بقطع الشريان الكبدي والنسيج الضام من النهاية الأمامية. أرفع برفق بينما الالتصاقات التشذيب والاتصالات الأخرى إلى الأمعاء، والدهون الدهنية. الحرص على عدم ثقب المرارة. وزن الكبد.
ملاحظة: لا تملك بعض الأسماك مثل الكارب، الكبد منفصلة ولكن بل كبدي الأنسجة الملتفة حول الأمعاء والأجهزة الأخرى. لهذه الأنواع، فإنه قد لا تكون ممكنة للحصول على أوزان الكبد. - حساب مؤشر هيباتوسوماتيك (HSI) باستخدام الصيغة:
الجمعيتان = مجموع وزن الكبد من وزن الجسم
- إزالة الكبد بقطع الشريان الكبدي والنسيج الضام من النهاية الأمامية. أرفع برفق بينما الالتصاقات التشذيب والاتصالات الأخرى إلى الأمعاء، والدهون الدهنية. الحرص على عدم ثقب المرارة. وزن الكبد.
-
حساب مؤشر جونادوسوماتيك.
- إزالة الغدد التناسلية وتزن عليه.
- حساب مؤشر جونادوسوماتيك (GSI) باستخدام الصيغة:
GSI = وزن الجسم الوزن إلى مجموع الغدد التناسلية
3-الحفاظ على الأنسجة لعلم الأمراض المجهرية
ملاحظة: يمكن استخدام عدد من المصفف بما في ذلك 10% فورمالين مخزنة محايدة و Z--فيكس، مثبت على أساس الفورمالين مع الزنك، للحفاظ على النسيج في الحقل. هذا الأخير المفضل إذا كان يمكن استخدام أساليب مثل التهجين في الموقع أو تلطيخ جسم الفلورسنت.
- بعناية وقطع لكن لم تسحب عينات الأنسجة. إبقاء قطع الأنسجة الفردية < 2 سم في الحجم و < 5 مم للتثبيت الصحيح. وكقاعدة عامة، استخدم حوالي 10 x مثبت أكثر من حيث الحجم من الأنسجة للحفاظ على السليم. ضع جميع عينات الأنسجة من الأسماك واحد في نفس الحاوية مانعة للتسرب من الحجم المناسب، تبعاً لحجم الأسماك يتم أخذ عينات.
- ضع قطعة من أي شذوذ الخارجية في حاوية مثبت. وتشمل أيضا، قطعة المتاخمة لانسجة طبيعية.
ملاحظة: يمكن أن يسبب سوء التعامل مع مثل ضغط أو غيرها من الأضرار الميكانيكية، التعرض الطويل للهواء أو أشعة الشمس، وتجميد التحف. - قطع مالا يقل عن خمسة ملم 3 – 4 قطعة سميكة من الكبد من مختلف المناطق ووضع في حاوية مثبت. وتشمل المناطق العادية وغير العادية، إذا لاحظت.
- اعتماداً على حجم ومكان الغدد التناسلية كاملة أو أجزاء متعددة على طول أحد الغدد التناسلية في الوعاء مثبت.
- ضع أجهزة كاملة، إذا كانت صغيرة، أو قطعة من الأجهزة الأخرى (الطحال، والكلى الأمامي والخلفي، والخياشيم، والقلب والأمعاء والمعدة) في حاوية مثبت. إذا لوحظ أنسجة غير طبيعية، الحفاظ على قطعة المتاخمة لانسجة طبيعية كذلك.
4. لإزالة أوتوليثس تحليلات العمر
ملاحظة: يمكن أن يكون العمر متغيراً هاما في دراسات الصحة المرض والسمك الأسماك. بينما عدد من الهياكل، بما في ذلك جداول والاشواك، استخدمت لتحديد العمر، وجدت معظم الدراسات المقارنة بين هياكل أوتوليثس لإعطاء نتائج أفضل36،37. أسماك تيليوست لها ثلاثة أزواج من أوتوليثس-الحراسة و sagitta وأستيريسكوس. عموما، يتم تجميع أوتوليثس السهمي أو الحراسة للشيخوخة بالرغم من أنه قد تختلف حسب الأنواع. تقنيات إزالة والشيخوخة قد تم وصفه سابقا38.
- قطع طريق البرزخ جيل، وينحني الرأس مرة أخرى. قطاع بعيداً الضام والعضلي الأنسجة حول أجزاء أقل شأنا من نيوروكرانيوم لتحديد موقع بروتيتش الفقاعات، منطقة العظمية التي آثارها.
- نقاط أو قطع مع قطع العظام والكراك لفضح أوتوليثس. أنها يمكن أن ينظر إليه بالعين المجردة.
- ضع أوتوليثس في قنينة المسمى أو المغلف العملة وتخزين في درجة حرارة الغرفة حتى تحليلها للسن بواسطة عد حلقات أو زيادات38. إذا وضع في قنينة، فتح غطاء مرة واحدة وعاد إلى المختبر والسماح لدقة الجاف قبل التخزين.
الشكل 5 : إزالة أوتوليثس- (أ) قطع البرزخ والعضلات والنسيج الضام سحبت بعيداً لفضح قاعدة منطقة العمود الفقري ونيوروسبينال. (ب) العظم متصدع لفضح أوتوليثس. تتم إزالة أوتوليثس لأبيلار (ج). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
5-الحصول على أنسجة لفحوصات وظيفة المناعة
ملاحظة: الكلي الأمامي هو الهيئة الرئيسية المكونة للدم، ومصدرا للخلايا الليمفاوية والضامة لفحوصات الوظيفية، ويجب إزالة أسيبتيكالي إذا كان سوف استزراع الخلايا لفحوصات الوظيفية، مثل ميتوجينيسيس، متجولة وقدرة قتل الضامة39،40.
- رش السطح الخارجي للأسماك مع الإيثانول 70%. استخدام مقص العقيمة، والمبضع، والملقط لفتح التجويف البطني وإزالة أنسجة الكلي الأمامي، وجهاز أحمر داكن الموقع عرفت المثانة السباحة.
- ضع العينة الكلي الأمامي في وسائل الإعلام (L-15 ليبوفيتشمثلاً ) للحفاظ على الخلايا على قيد الحياة. مجانسة عينات الكلي مع طاحونة عقيمة أنسجة باليد (مثلاً، تينبروك نسيج مطحنة) إلى تعليق خلية مفردة. اضغط على الجليد الرطب حتى عاد إلى المختبر.
6-الحفاظ على الأنسجة لإجراء تحاليل الحمض النووي
ملاحظة: إذا كان سيجري تحليل الجزيئي المتلقين للمعلومات، مثل التعبير الجيني باستخدام نسخة وفرة41 أو PCR الكمي42 (تفاعل البوليميراز المتسلسل)، ضع قطعة الأنسجة إلى تقييم في حافظة مناسبة ( مثل، رنالاتير الاستقرار الحل) أسرع.
- للحفاظ على الجيش الملكي النيبالي، وضع القطع الصغيرة (2 – 3 ملم) اثنين إلى ثلاثة في حافظة مناسبة بنسبة 10:1 من حجم حافظة للأنسجة.
ملاحظة: ينبغي أن تحمي من أشعة الشمس أو الحرارة المفرطة عينات ونقلها على الجليد الرطب. - للحفاظ على الحمض النووي، وضع ثلاث قطع صغيرة من الأنسجة إلى إيثانول 95% (10:1 الإيثانول للأنسجة من حيث الحجم). ثم اضغط العينات على الجليد الرطب ومن ثم تخزين في-20 درجة مئوية.
Representative Results
مناطق البحيرات الكبرى للقلق (AOC) هي المناطق الجغرافية التي تم تحديدها بسبب ضعف لمختلف الاستعمالات المفيدة. واحد من الاستخدام المفيد العاهات (BUIs) في كثير من شركة الزيت العربية هو الأورام الأسماك أو تشوهات أخرى. قد أنفقت ملايين الدولارات للإصلاح والتجديد لكل من هذه المجالات بغية تعهداتها بإخراج BUIs المختلفة، وفي نهاية المطاف شركة الزيت العربية43. معايير الرفع الورم الأسماك بوي يختلف من دولة إلى أخرى (انظر epa.ohio.gov/portals/35/lakeerie/ohio_AOC_delisting_guidance.pdf و dnr.wi.gov/topic/GreatLakes/documents/SheboyganRiverFinalReport2008.pdf)؛ ومع ذلك، كما ذكر في وثائق الرفع من القائمة، هناك شرط تحديد مدى انتشار أورام الكبد وفي بعض حالات الأورام الجلدية. في كثير من الحالات، تتم مقارنة الانتشار موقع مرجع غير شركة الزيت العربية.
تم تقييم الورم الأسماك بوي AOCs الثلاثة (نهر سانت لويس، ميلووكي نهر ونهر شيبويجان) وموقع مرجع غير شركة الزيت العربية (نهر كيوان) في ولاية ميشيغان، الاستفادة من إجراء تقييم على أساس نيكروبسي لأبيض مصاصة (كوميرسوني كاتوستوموس وبحيرات فائقة )، تليها أمراض مجهرية من الجلد وأنسجة الكبد. وجمعت الأسماك من الأنهار ميلووكي وشيبويجان كيوان في عام 2012 و 201344 ومن نهر سانت لويس في عام 2015 (بيانات غير منشورة). وقيمت حمقى الأبيض مائتي من ميلووكي، كيوان وسانت لويس، و 193 من شيبويجان.
بحكم التعريف، يمكن أن يكون ورم أي تورم أو آثار المنطقة، على الرغم من أن يعتبر عموما أن تورم نتيجة نمو غير طبيعي للأنسجة مع خلايا غير طبيعية هو أما الأورام الحميدة أو الخبيثة. مصاصة البيضاء التي تم جمعها من جميع مواقع عرضت مجموعة متنوعة من الآفات التي أثيرت الخارجية بما في ذلك البقع البيضاء الصغيرة والمنفصلة والآفات مخاطاني مرتفعة قليلاً وأكبر المناطق البيضاء مفصصة المجالات التي آثارها على سطح الجسم والشفاه (الشكل 6). وزن الأسماك وقياس للحصول على عامل شرط، تم توثيق حالات الشذوذ الداخلية والخارجية، وأنسجة الجلد والكبد وجمعت للأنسجة.
الرقم 6 : لاحظ الآفات الجلدية التي آثارها على مصاصة بيضاء من منطقة البحيرات الكبرى- (أ) بقعة بيضاء منفصلة على سطح الجسم. شريط المقياس = 5 ملم. (ب) مرتفعة قليلاً مخاطي (الأسهم) والآفات مفصصة (أ) على سطح الجسم الخلفي. مقياس بار = 1 سم. (ج) A كبيرة ومفصصة الآفة على سطح الجسم. مقياس بار = 1 سم. (د) العديد من الآفات متعددة مفصصة على الشفاه. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
% من الأسماك مع الأورام الخارجية أو آثار مشوه المجالات تتراوح من 15.5% في "الشركة سانت لويس" إلى 58.0% في "الشركة ميلووكي". وبصفة عامة، كانت البقع البيضاء المنفصلة الآفة البصرية أقل شيوعاً حين شفة مفصصة والآفات السطحية الهيئة الأكثر شيوعاً. وكان العدد الأسماك مع العقيدات الكبد يمكن ملاحظتها منخفضة، وتتراوح بين 1.5% في كيوان وسانت لويس إلى 2.5 في المائة في ميلووكي (الجدول 1).
| أنهار وأخذ عينات منها في العام | ||||
| آفات مرئية | كيوان 2013 | سانت لويس عام 2015 | شيبويجان 2012 | ميلووكي 2013 |
| البقع البيضاء المنفصلة | 16 | 3 | 3.1 | 5 |
| مخاطي | 20 | 9.5 | 9.8 | 30.5 |
| مفصصة | 22.5 | 3 | 29.5 | 40 |
| مجموع آثار الجلد شذوذ | 46 | 15.5 | 38.3 | 58 |
| تظهر العقيدات الكبد | 1.5 | 1.5 | 1.6 | 2.5 |
| أ العدد الإجمالي للأسماك مع الآفات التي أثيرت. وكان بعض الأسماك أنواع متعددة من التشوهات. | ||||
الجدول 1: جمع الملاحظات على أساس نيكروبسي من مصاصة بيضاء في مناطق البحيرات الكبرى المثيرة للقلق وموقع مرجعية (نهر كيوان)، قدمت كنسبة مئوية.
يمكن استخدام الفحص البصري للوثيقة في المئة من الأسماك بتشوهات مختلفة. ومع ذلك، لتشخيص نهائياً على الوجود ونوع نيوبلسا، الأنسجة يجب فحص مجهريا (الأنسجة). عند الفحص المجهري، ووجد أن لم تكن كلها من الآفات التي أثيرت الورمية. وكانت العديد من البقع البيضاء المنفصلة والآفات مخاطاني، لا سيما في كيوان، آفات (hyperplastic) بدلاً من نيوبلسا (الجدول 2). بالإضافة إلى ذلك، كانت جميع أورام الجلد ولاحظ كيوان وسانت لويس، الحليمية حميدة. في شيبويجان وميلووكي لوحظت الحليمية والخلايا الحرشفية، أورام الجلد الخبيثة، (الجدول 2).
| أنهار عينات | ||||
| نوع الأورام | كيواوني 2013 | سانت لويس عام 2015 | شيبويجان 2012 | ميلووكي 2013 |
| الورم الحليمي | 21 | 5.2 | 30.5 | 37.5 |
| الخلايا الحرشفية | 0 | 0 | 2.1 | 10.5 |
| الأورام الخبيثة في الجلد المجموع | 21 | 5.2 | 32.6 | 48 |
| القناة الصفراوية الأورام | 2.5 | 4 | 6.2 | 9.5 |
| الخلية الكبدية الأورامب | 1 | 0 | 2.1 | 8 |
| مجموع الكبد الأورام | 3.5 | 4 | 8.3 | 15.0c |
| أ وتشمل تشولانجيوما وتشولانجيوكارسينوما | ||||
| ب ويشمل الورم الحميد الخلية الكبدية وسرطان الخلية الكبدية | ||||
| ج وكان بعض الأسماك القناة الصفراوية والأورام الكبدية | ||||
الجدول 2: التحقق مجهريا من الآفات الورمية لمصاصة بيضاء جمعت في مناطق البحيرات الكبرى المثيرة للقلق وموقع مرجعية (نهر كيواوني)، قدمت كنسبة مئوية.
وحدد التحليل نسيجية أيضا أورام الكبد التي حددها لا الملاحظة البصرية. في حين كان 1.5 في المائة فقط من الأسماك التي جمعت من كيوان وسانت لويس تظهر العقيدات الكبد (الجدول 1)، 3.5% و 4.0 في المائة، على التوالي، مجهريا حددت الأورام (الجدول 2). واعتبر فرق أكبر في شيبويجان (1.6% تظهر مقابل 8.3% مجهرية) وميلووكي (2.5% تظهر مقابل 15.0% مجهرية). الفحص المجهري يوفر أيضا ريق الأورام الصفراوية مقابل أصل الخلية الكبدية (الجدول 2) وحميدة مقابل الأورام الخبيثة.
Discussion
التقييم القائم على نيكروبسي من صحة الأسماك يمكن أن تستخدم في أي أنواع الأسماك التي قد المحقق تفهماً لمظهر طبيعي للهياكل الداخلية والخارجية على حد سواء. باستخدام نهج موحد يسمح بإجراء مقارنات بين المواقع والأنواع، فضلا عن التغيرات الموسمية والزمانية في عدد سكان. يمكن استخدام النتائج لتحديد الآثار المرتبطة بمصادر الملوثات نقطة والفسفورية وإبلاغ إدارة الإجراءات. يمكن استخدامه أيضا لتتبع التحسينات بمجرد الشروع في الإجراءات التي تتخذها الإدارة. يمكن تعديل المنهجية لزيادة توثيق التشوهات البصرية الخارجية في مجموعة متنوعة من الطرق. التقييمات، استناداً إلى الملاحظات البصرية، إلا يمكن أن تكون غير قاتلة، وغير مكلفة نسبيا ويمكن توليد البيانات بسرعة لعدد كبير من الأفراد. ونتيجة لذلك، يمكن أن تكون مفيدة لتقييم الاستكشافية أو الأولية، لرصد التغير مع مرور الوقت، أو في تركيبة مع مؤشرات أخرى. إذا كان يتم قياس طول ووزن الأسماك خلال الملاحظات البصرية، يمكن أيضا حساب معامل الحالة. على الرغم من أن تقييمات استناداً فقط إلى الملاحظة البصرية لا تقدم معلومات عن السبب أو عوامل الخطر المرتبطة بها، الاتجاهات الطويلة الأجل لبعض تشوهات الجلد45 ومعلمات البيومترية46 أشارت إلى تحسن في بعض المجالات المرتبطة بتحسين نوعية المياه.
التقييم القائم على نيكروبسي الذي يوفر مزيد من المعلومات كما يتم أيضا فحص الأجهزة الداخلية ويمكن حساب عوامل حالة أخرى مثل جونادوسوماتيك ومؤشر هيباتوسوماتيك. غويدي وبارتون22 تطوير أسلوب نيكروبسي ميدانية التي شملت معلمات الدم، العوامل البيولوجية، والنسبة المئوية لحالات الشذوذ، وقيم الفهرس لتشوهات معينة. وشملت صقل الأسلوب درجة خطورته لبعض المتغيرات التي سمحت لحساب مؤشر تقييم الصحة التي يمكن أن تكون المقارنة إحصائيا23. هذا مؤشر تقييم الصحة وقد استخدمت في الموقع الإقليمي مقارنات23،،من4748 وفي تركيبة مع المؤشرات البيولوجية الأخرى بما في ذلك البلازما وتحاليل نسيجية في "الجيولوجي الأمريكي" دراسة استقصائية للرصد البيولوجي للأحوال البيئية والاتجاهات برنامج تقييم الآثار المحتملة للتعرض للملوثات في الأنهار الكبيرة على الصعيد الوطني49،،من5051. مؤشر مرض الأسماك استناداً إلى مرئية خارجياً من الأمراض والطفيليات وتظهر الأورام الكبد وسائر هيستوباثولوجيكالي الكشف عن وضعت آفات الكبد ويستخدم على نطاق واسع في بحر الشمال، بحر البلطيق، وخارج أيسلندا. تم العثور على هذا الفهرس يكون أداة هامة ك مؤشر صحة النظام الإيكولوجي52.
هناك بعض العوامل الحاسمة في إجراء التقييم على أساس نيكروبسي على الأسماك. أولاً، يجب إجراء تقييمات على الأسماك مباشرة بعد الموت. يمكن أن تحدث تغييرات في لون الجهاز واتساق سريعاً بعد الموت. بالإضافة إلى ذلك، قد تترك بعض الطفيليات المضيف قريبا بعد الموت. ثانيا، من المهم أن نعرف ما هو الطبيعي بالنسبة لهذا نوع الاهتمام. على سبيل المثال، بعض الأسماك عادة ما يكون الدهنية وشاحب الكبد، ونتيجة لذلك، بينما كبد شاحب سيكون غير طبيعي لمعظم الأنواع. من المهم أيضا الاعتراف بالتغيرات الموسمية التي تحدث طبيعيا. بعض الأسماك سوف يتغير لون أو تطوير تربية درنات خلال موسم التفريخ.
وتشمل القيود المفروضة على التقييم القائم على نيكروبسي كوسيلة لتقييم صحة الأسماك عجز 1) استمرار تحديد "سبب" آفات محددة و 2) تحديد الآثار التي قد لا تكون مرئية بالعين المجردة. يمكن التغلب على هذه العيوب بالإضافة إلى الأنسجة، تحديد مسببات الأمراض والطفيليات، والتعبير الجيني الجزيئي أو الثقافية. على سبيل المثال، وجود "ورم" أو الآفة التي آثارها (تورم) قد تكون نيوبلسا الفعلية أو قد يكون الطفيليات، والتهاب، وذمة أو تضخم (زيادة في عدد الخلايا الطبيعية)، الناجمة عن التعرض للمواد الكيميائية، والعوامل المعدية أو المهيجات الأخرى. كما هو موضح في نتائج تمثيلية، يتطلب الورم نهائي أو التشخيص نيوبلسا الباثولوجيا المجهري لتحديد نوع الآفة وشدة (أي، حميدة أو خبيثة). تقييم خارجي مصاصة بيضاء "الأورام" بالملاحظة البصرية المبالغة في تقدير الانتشار، لا سيما في موقع المرجع. العديد من الآفات التي أثيرت لم تكن الأورام ولكن الآفات (hyperplastic) بدلاً من ذلك. حاليا أنه لا يعرف ما إذا كانت هذه الآفات (hyperplastic) الورمية مسبقاً أم لا. على العكس من ذلك، مراقبة العقيدات التي أثيرت في الكبد التقليل إلى حد كبير انتشار الأورام الخبيثة في الكبد. ومن ثم، كان جمع الأنسجة لعلم الأمراض المجهرية اللازمة للتصدي على نحو كاف إمكانات للرفع من القوائم.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
تم تمويل هذا العمل بالنظم الإيكولوجية "المسح الجيولوجي" في الولايات المتحدة (خليج تشيسابيك البيئات ومصائد الأسماك) وبرامج "الصحة البيئية" (الملوثات بيولوجيا) وإدارة الموارد الطبيعية في ولاية فرجينيا الغربية. استخدام الأسماء التجارية لأغراض التعريف فقط ولا يعني تأييد الحكومة الأمريكية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Folding tables | Any | ||
| Folding chairs | Any | ||
| Dissecting boards | Any | ||
| Measuring board (mm) | Any | ||
| Battery powered scale (g) for fish weight | Any | ||
| Battery powered scale (mg) for organ weights | Any | ||
| Dissecting forceps | Any | ||
| Bone cutters | Any | ||
| Scalpel and blades | Any | ||
| Disposable gloves | Any | ||
| Buckets | Any | ||
| Leak-proof Nalgene bottles (250 mL) | ThermoFischer Scientific | 02-924-5C | |
| Vacutainer tubes with sodium heparin | ThermoFischer Scientific | 02-689-6 | For blood collection |
| Disposable 3 mL syringes with 23 G needle | ThermoFischer Scientific | 14-826-11 | |
| 1 – 2 mL cryovials | Any | Used for plasma and RNAlater samples | |
| Invitrogen RNAlater Stabilization solution | ThermoFischer Scientific | AM7021 | |
| Z-Fix Formaldehyde Zinc fixative | Anatech LTD | SKU-174 | |
| Tricaine-S (MS-222) | Syndel USA | fish anesthetic | |
| Coin Envelopes | Any | for otoliths | |
| Pencils and pens | Any | ||
| 70% alcohol | Any | ||
| Data sheets | Any |
References
- Celander, M. C. Cocktail effects on biomarker responses in fish. Aquatic Toxicology. (105 Supplement), 72-77 (2011).
- Liney, K. E., et al. Health effects in fish of long-term exposure to effluents from wastewater treatment works. Environmental Health Perspectives. 114, 81-89 (2006).
- Silva, E., Rajapakse, N., Kortenkamp, A. Something from "nothing" - eight weak estrogenic chemicals combined at concentrations below NOECs produce significant mixture effects. Environmental Science & Technology. 36, 1751-1756 (2002).
- Noyes, P. D., et al. The toxicology of climate change: environmental contaminants ina warming world. Environment International. 35, 971-986 (2009).
- Witeska, M., Jezierska, B. The effect of environmental factors on metal toxicity to fish. Fresenius Environmental Bulletin. 12, 824-829 (2003).
- Wedekind, C., Gessner, M. O., Vazquez, F., Maerki, M., Steiner, D. Elevated resource availability sufficient to turn opportunistic into virulent fish pathogens. Ecology. 91, 1251-1256 (2010).
- Penttinen, R., Kinnula, H., Lipponen, A., Bamford, J. K. H., Sundberg, L. R. High nutrient concentration can induce virulence factor expression and cause higher virulence in an environmentally transmitted pathogen. Microbial Ecology. 72, 955-964 (2016).
- Bols, N. C., Brubacher, J. L., Ganassin, R. C., Lee, L. E. J. Ecotoxicology and innate immunity in fish. Developmental & Comparative Immunology. 25, 853-873 (2001).
- Dunier, M., Siwicki, A. K. Effect of pesticides and other organic pollutants in the aquatic environment on immunity of fish: a review. Fish and Shellfish Immunology. 3, 423-438 (1993).
- Milla, S., Depiereux, S., Kestemont, P. The effects of estrogenic and androgenic endocrine disruptors on the immune system of fish: a review. Ecotoxicology. 20, 305-319 (2011).
- Connon, R. E., Geist, J., Werner, I. Effect-based tools for monitoring and predicting the ecotoxicological effects of chemicals in the aquatic environment. Sensors. 12, 12741-12771 (2012).
- Eckman, D. R., et al. Biological effects-based tools for monitoring impacted surface waters in the Great Lakes: A multiagency program in support of the Great Lakes restoration initiative. Environmental Practice. 15, 409-426 (2013).
- Khan, M. Z., Law, F. C. P. Adverse effects of pesticides and related chemicals on enzyme and hormone systems of fish, amphibians and reptiles: A review. Proceedings of the Pakistan Academy of Sciences. 42, 315-323 (2005).
- Wernersson, A. S., et al. The European technical report on aquatic effect-based monitoring tools under the water framework directive. Environmental Sciences Europe. 27, (2015).
- Bolger, T., Connolly, P. L. The selection of suitable indices for the measurement and analysis of fish condition. Journal of Fish Biology. 34, 171-182 (1989).
- Karr, J. R. Biological integrity: A long-neglected aspect of water resource management. Ecological Applications. 1, 66-84 (1991).
- Sanders, R. E., Miltner, R. J., Yoder, C. O., Rankin, E. T. The use of external deformities, erosions, lesions, and tumors (DELT anomalies) in fish assemblages for characterizing aquatic resources: a case study of seven Ohio stream. Assessing the sustainability and biological integrity of water resources using fish communities. Simon, I. nT. P. , CRC Press. Florida. 225-246 (1999).
- Bervoets, L., et al. Bioaccumulation of micropollutants and biomarker responses in caged carp (Cyprinus carpio). Ecotoxicology and Environmental Safety. 72, 720-728 (2009).
- Schulte-Hermann, R. Adaptive liver growth induced by xenobiotic compounds: its nature and mechanism. Archives of Toxicology. Supplement. 2, 113-124 (1979).
- Slooff, W., van Kreijl, C. F., Baars, A. J. Relative liver weights and xenobiotic-metabolizing enzymes of fish from polluted surface waters in the Netherlands. Aquatic Toxicology. 4, 1-14 (1983).
- Brewer, S. K., Rabeni, C. F., Papoulias, D. M. Comparing histology and gonadosomatic index for determining spawning condition of small-bodied riverine fishes. Ecology of Freshwater Fish. 17, 54-58 (2003).
- Goede, R. W., Barton, B. A. Organismic indices and an autopsy-based assessment as health and condition of fish. American Fisheries Society Symposium. 8, 93-108 (1990).
- Adams, S. M., Brown, A. M., Goede, R. W. A quantitative health assessment index for rapid evaluation of fish condition in the field. Transactions of the American Fisheries Society. 122, 63-73 (1993).
- Kane, A. S., et al. Field sampling and necropsy examination of fish. Virginia journal of science. 50, 345-363 (1999).
- Yanong, R. P. E. Necropsy techniques for fish. Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 12, 89-105 (2003).
- American Fisheries Society (AFS) Use of Fishes in Research Committee, American Institute of Fishery Research Biologists and the Society of Ichthyologists and Herpetologists. Guidelines for the Use of Fishes in Research. , American Fisheries Society. Bethesda, Maryland. (2004).
- Bonar, S. A., Hubert, W. A., Willis, D. W. Standard methods for sampling North American freshwater fishes. , American Fisheries Society. Bethesda, Maryland. (2009).
- Zale, A. V., Parrish, D. L., Sutton, T. M. Fisheries Techniques, third edition. , American Fisheries Society. Bethesda, Maryland. 1009 (2013).
- Neiffer, D. L., Stamper, M. A. Fish sedation, anesthesia, analgesia, and euthanasia: considerations, methods, and types of drugs. Institute for Laboratory Animal Research. , 343-360 (2009).
- Clark, T. D., et al. The efficacy of field techniques for obtaining and storing blood samples from fishes. Journal of Fish Biology. 795, 1322-1333 (2011).
- Adewoyin, A. S., Nwogoh, B. Peripheral blood film - a review. Annals of Ibadan Postgraduate Medicine. 12, 71-79 (2014).
- Smith, S. B., et al. Illustrated field guide for assessing external and internal anomalies in fish. Information and Technology Report USGS/BRD/ITR. 2002-007, 46 (2002).
- Kane, A. S. Descriptive guide to observing fish lesions. , Available at http://aquaticpath.phhp.ufl.edu/Lesionguide/Lesionguide.pdf (2005).
- Rafferty, S. D., Grazio, J. Field manual for assessing internal and external anomalies in brown bullhead (Ameiurus nebulosus). , Pennsylvania Sea Grant. Erie, PA. Available at: https://seagrant.psu.edu/sites/default/files/Bullhead%20field%20manual.pdf (2018).
- European Association of Fish Pathologists. Necropsy manual. , Available at www.necropsymanual.net (2018).
- Buckmeier, D. L., Irwin, E. R., Betsill, R. K., Prentice, J. A. Validity of otoliths and pectoral spines for estimating ages of channel catfish. North American Journal of Fisheries Management. 22, 934-942 (2002).
- Maceina, M. J., Sammons, S. M. An evaluation of different structures to age freshwater fish from a northeastern US river. Fisheries Management and Ecology. 13, 237-242 (2006).
- Secor, D. H., Dean, J. M., Laban, E. H. Otolith removal and preparation for microstructural examination. Otolith Microstructure Examination and Analysis. Stevenson, D. K., Campana, S. E. 117, Canadian Special Publication of Fisheries and Aquatic Sciences. 19-57 (1992).
- Gauthier, D. T., Cartwrwight, D. D., Densmore, C. L., Blazer, V. S., Ottinger, C. A. Measurement of in vitro leucocyte mitogenesis in fish: ELISA based detection of the thymidine analogue 5'-bromo-2'-deoxyuridine. Fish and Shellfish Immunology. 14, 279-288 (2003).
- Zelikoff, J. T., et al. Biomarkers of immunotoxicity in fish:from the lab to the ocean. Toxicology Letters. , 325-331 (2000).
- Hahn, C. M., Iwanowicz, L. R., Corman, R. S., Mazik, P. M., Blazer, V. S. Transcriptome discovery in non-model wild fish species for the development of quantitiative transcript abundance assays. Comparative Biochemistry and Physiology - Part D: Genomics and Proteomics. 20, 27-40 (2016).
- Harms, C. A., et al. Quantitative polymerase chain reaction for transforming growth factor-B applied to a field study of fish health in Chesapeake Bay tributaries. Environmental Health Perspectives. 108, 1-6 (2000).
- Braden, J. B., et al. Economic benefits of remediating the Sheboygan River, Wisconsin Area of Concern. Journal of Great Lakes Research. 34, 649-660 (2008).
- Blazer, V. S., et al. Tumours in white suckers from Lake Michigan tributaries: pathology and prevalence. Journal of Fish Diseases. 40, 377-393 (2017).
- Vethaak, A. D., Jol, J. G., Pieters, J. P. F. Long-term trends in the prevalence of cancer and other major diseases among flatfish in the southeastern North Sea as indicators of changing ecosystem health. Environmental Science & Technology. 43, 2151-2158 (2009).
- Teubner, D., Paulus, M., Veith, M., Klein, R. Biometric parameters of the bream (Abramis brama) as indicators for long-term changes in fish health and environmental quality - data from the German ESB. Environmental Science and Pollution Research. 22, 1620-1627 (2015).
- Schleiger, S. L. Fish health assessment index study of four reservoirs in north-central Georgia. North American Journal of Fisheries Management. 24, 1173-1180 (2004).
- Sutton, R. J., Caldwell, C. A., Blazer, V. S. Health assessment of a tailwater trout fishery associated with a reduced winter flow. North American Journal of Fisheries Management. 20, 267-275 (2000).
- Blazer, V. S. The necropsy-based fish health assessment. Biomonitoring of environmental status and trends (BEST) program: selected methods for monitoring chemical contaminants and their effects in aquatic ecosystems. Schmitt, C. J., Dethloff, G. M. , U.S. Geological Survey Information and Technology Report USGS/BRD-2000-005 18-21 (2000).
- Schmitt, C. J. Biomonitoring of environmental status and trends (BEST) program: Environmental contaminants and their effects on fish in the Mississippi River basin. Biological Science Report USGS/BRD/BSR. 2002-0004, 241 (2002).
- Hinck, J. E., et al. Chemical contaminants, health indicators, and reproductive biomarker responses in fish from rivers in the Southeastern United States. Science of the Total Environment. 390, 538-557 (2008).
- Lang, T., et al. Diseases of dab (Limanda limanda): Analysis and assessment of data on externally visible diseases, macroscopic liver neoplasms and liver histopathology in the North Sea, Baltic Sea and off Iceland. Marine Environmental Research. 124, 61-69 (2017).
