Summary
यहां, हम एक प्रोटोकॉल के लिए तेल अनुभाग में सुधार पेश करते हैं । इस विधि को जोड़ती है काटने और एक सरल थर्मोस्टेट चैंबर का उपयोग कर अस्थाई हस्तांतरण पारंपरिक विधि द्वारा आवश्यक प्रक्रिया से बचने के । नतीजतन, दक्षता और बरकरार आयल वर्गों की संख्या में काफी सुधार हुआ ।
Abstract
आयल-एंबेडेड ऊतक के अनुभाग व्यापक रूप से प्रोटोकॉल और विकृति विज्ञान में प्रयोग किया जाता है । हालांकि, यह दूभर है । इस विधि में सुधार करने के लिए, कई वाणिज्यिक कंपनियों जटिल अनुभाग हस्तांतरण तरल पदार्थ पानी का उपयोग प्रणालियों तैयार किया है । इस तकनीक को सरल बनाने के लिए, हम एक सरल घर का बना उपकरण है कि काटने और एक सरल थर्मोस्टेट चैंबर के भीतर तैर जोड़ का उपयोग कर विधि बनाया; इसलिए, वर्गों स्वचालित रूप से पानी की सतह पर पानी स्नान दर्ज करें । वयस्क माउस दिमाग से हिप्पोकैम्पस, वयस्क माउस गुर्दे, भ्रूण माउस दिमाग, और वयस्क zebrafish आंखों दोनों पारंपरिक तेल खोदी और तुलना के लिए प्रस्तुत विधि का उपयोग काट रहे थे । सांख्यिकीय विश्लेषण से पता चलता है कि हमारी बेहतर विधि समय बचाया और उच्च गुणवत्ता वर्गों का उत्पादन किया । इसके अलावा, एक कम समय में एक पूरे नमूना के तेल खोदी जूनियर ऑपरेटरों के लिए आसान है ।
Introduction
रूपात्मक अध्ययन जैविक अनुसंधान में महत्वपूर्ण है । हालांकि नई तकनीक शोधकर्ताओं ने अपने लक्ष्य का पालन करने की अनुमति दी है सीधे पूरे ऊतक या जीवों1,2,3, पतले वर्गों में नमूना काटने, धुंधला द्वारा पीछा किया, प्राथमिक रहता है विधि fornot केवल ऊतक आकृति विज्ञान लेकिन यह भी प्रोटीन सीधे ऊतक में लक्ष्यीकरण । आयल, फ्रोजन, और semithin: प्रकाश माइक्रोस्कोपी तीन अनुभाग प्रकार का उपयोग करता है । हालांकि cryosectioning ऊतक antigenicity की रक्षा के लिए आम है, और नमूना तैयारी सरल है, बरकरार ऊतक आकृति विज्ञान गरीब और पतली अनुभाग4,5के लिए अनुपयुक्त है । आयल खोदी अच्छी तरह से संरक्षित आकृति विज्ञान के प्रदर्शन के लिए सबसे अक्सर इस्तेमाल किया विधि है । नमूनों के रूप में पूरी तरह से निर्जलित और मोम में एंबेडेड हैं, आयल ब्लॉक अनिश्चित काल तक संग्रहित किया जा सकता है । इसके अलावा, आयल खोदी पतली वर्गों है कि आगे के प्रयोगों में जैविक जांच का उपयोग में सुधार लाने और जेड दिशा में सेल परत ओवरले को कम करता है ।
हालांकि, पारंपरिक आयल सेक्शनिंग थकाऊ और मांगों ऑपरेटर कौशल है । आयल वर्गों निर्धारण, निर्जलीकरण, embedding, काटने, और तैर से गुजरना । महत्वपूर्ण बात, चाकू धारक से पानी स्नान के लिए धारा रिबन स्थानांतरित करना आवश्यक है, लेकिन जूनियर ऑपरेटरों के लिए मुश्किल है । शुष्क हवा में विशेष रूप से, धारा रिबन स्थैतिक बिजली के कारण मोड़ और गर्म पानी की सतह पर प्रकट करना मुश्किल हो जाएगा । अनुभाग की गुणवत्ता में सुधार करने के लिए, microtome ब्लेड गुजरता के बीच उजागर ऊतक की सतह को गीला करना, बर्फ के पानी में डुबोकर मोम ब्लॉकों को ठंडा करना, या microtome के पास humidifier के साथ आर्द्रता बढ़ाना6,7 की सिफारिश कर रहे हैं . आयल धारा में सुधार के लिए नए तरीके हाइब्रिड आयल embedding, cryosectioning8, और वाणिज्यिक अनुभाग अंतरण प्रणाली सहायता9शामिल हैं । हालांकि इन तरीकों को आंशिक रूप से तेल अनुभाग की गति और गुणवत्ता में सुधार, वे और अधिक बोझिल अनुभाग बनाना, और वाणिज्यिक अनुभाग हस्तांतरण प्रणाली महंगी हैं ।
इस प्रोटोकॉल में, हम प्रदर्शन कैसे सरल, सस्ते और लचीला कदम से कदम है, जो एक रोटरी microtome के ब्लेड धारक को जोड़ा जा सकता है उपकरण बनाने के लिए । इस उपकरण के एक अनुभाग चैनल, एक पानी के स्नान के शामिल है, और एक तापमान का पता लगाने स्विच के साथ एक हीटर । काटने के बाद, वर्गों के दर्जनों अनुभाग चैनल में प्रवाह और पानी स्नान सीधे दर्ज करें, इस प्रकार स्वचालित रूप से खुलासा । यह तेल अनुभागीकरण की क्षमता में सुधार और इस तकनीक को और अधिक सुविधाजनक बनाता है । इस विधि का प्रयोग, अधिक वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस वर्गों, वयस्क माउस गुर्दे वर्गों, भ्रूण १५.५ दिन पुरानी (ई 15.5) माउस मस्तिष्क वर्गों, और वयस्क zebrafish नेत्र वर्गों कम समय में काटा गया और अधिक बरकरार आकृति विज्ञान रहे थे । इस विधि भी अंय ऊतक नमूने है कि त्वरित तेल अनुभाग की आवश्यकता होती है जबकि अनुभाग भेद के नुकसान से परहेज के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
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Protocol
यहां बताए गए सभी तरीकों को नानचांग यूनिवर्सिटी की एनिमल केयर एंड फीमेल कमेटी ने मंजूरी दी है ।
1. उपकरण इकट्ठा और Microtome कनेक्ट
- (अनुपूरक आंकड़ा 1) आवश्यकताओं के अनुसार पैरामीटर डिजाइन ।
- एक स्थानीय कारखाने में जमा करने के लिए पैरामीटर एक्रिलिक बोर्डों का निर्माण ।
- अनुक्रम में सभी भागों को इकट्ठा: उपयोग क्लोरोफॉर्म एक अनुभाग चैनल और पानी के स्नान के साथ एक टैंक में 7 वाणिज्यिक एक्रिलिक बोर्डों गठबंधन (1 चित्रा) ।
चेतावनी: क्लोरोफॉर्म विषाक्त पदार्थों का उत्पादन जब यह प्रकाश और ऑक्सीजन मिलता है । एक धुएं डाकू में उपकरण इकट्ठा । - ऐक्रेलिक बोर्ड #1 (चित्रा 2a, arrowhead) में छेद के माध्यम से ट्यूबलर बिजली हीटिंग तत्व स्थापित करें ।
- तापमान नियंत्रक स्थापित करने के लिए, एक इलेक्ट्रिक ड्रिल का उपयोग #2 एक्रिलिक बोर्ड पर एक छोटा सा छेद बनाने के लिए, और तापमान डिटेक्टर (चित्रा 2a, तीर) स्थापित करें । टैंक (चित्रा 2a) पर एक डिजिटल थर्मोस्टेट स्थापित करें ।
नोट: तापमान डिटेक्टर पानी की सतह के नीचे 1 सेमी के भीतर होना चाहिए । - बिजली का उपयोग प्रदान करने के लिए, उपकरण पर मोड़ से पहले 24 वी नीचे वोल्टेज समायोजित करें ।
- अनुभाग अपशिष्ट ट्रे microtome से निकालें ।
- microtome ब्लेड धारक के साथ तटस्थ सिलिकॉन सीलेंट (चित्रा बी) के साथ वर्गों चैनल लिंक ।
नोट: पुराने ब्लेड आसानी से प्रतिस्थापित होता है इतना है कि ब्लेड के शीर्ष के ऊपर किसी भी तटस्थ सिलिकॉन सीलेंट धब्बा नहीं है । - क्लोरोफॉर्म और तटस्थ सिलिकॉन सीलेंट समय जमना करने की अनुमति देने के लिए रात भर सूखी ।
- ब्लेड धारक को ब्लेड स्थापित करें । पानी में नहाने के लिए पानी डालो (चित्रा 2c) । पानी की सतह सिर्फ ब्लेड के ऊपर (चित्रा 2d, तीर सिर) छूना चाहिए ।
2. आयल खोदी
नोट: मलबे अक्सर मोम ब्लॉक के ऊपरी या निचले किनारों और पानी की सतह पर जमा । इस मलबे को नियमित रूप से साफ करना चाहिए ।
-
प्रदर्शन पारंपरिक आयल धारा१०।
- एक रोटरी microtome पर आयल एंबेडेड नमूना दबाना और एक ब्लेड धारक में ब्लेड जगह है ।
- handwheel और धारा नमूना बारी है ।
- ३८.५ ° c गर्म पानी के स्नान के लिए आयल खोदी रिबन स्थानांतरण ।
- खुलासा करने के बाद पानी की सतह से माइक्रोस्कोप स्लाइड पर वर्गों उठाओ ।
- रात भर ४२ ° c में एक ओवन में स्लाइड सूखी ।
-
सुधारित आयल खोदी (figure 3)
- उपकरण चालू करें ।
- तापमान का पता लगाने के साथ हीटर खोलो स्विच और ३८.० डिग्री सेल्सियस के बीच लक्षित तापमान सेट करने के लिए 1 घंटे के लिए ४०.० डिग्री सेल्सियस के लिए पानी गर्म करने के लिए अग्रिम ।
- आयल embedding द्वारा अधिग्रहीत तेल ब्लॉक को संशोधित करें; तो microtome के कैसेट दबाना पर आयल ब्लॉक प्लेस और यह ताला ।
नोट: आयल ब्लॉक के सुपीरियर और अवर सीमाओं क्षैतिज संशोधित किया जाना चाहिए एक चाप बनाने से अनुभाग रिबन को रोकने के लिए और संकीर्ण वर्गों चैनल के माध्यम से प्रवाह करने में असमर्थ बनने । - जल्दी से मोटा वर्गों को काटने के द्वारा नमूना दृष्टिकोण ।
- एक उपयुक्त अनुभाग मोटाई (वयस्क माउस दिमाग, वयस्क माउस गुर्दे, और भ्रूण माउस दिमाग, zebrafish आंखों के लिए 4 µm के लिए 10 µm) को समायोजित करें । handwheel बारी और वर्गों स्वचालित रूप से वर्गों चैनल और स्नान में प्रवेश करेंगे ।
- धारा एक धीमी और वर्दी काटने स्ट्रोक में नमूना (3 ए आंकड़ा) ।
नोट: handwheel के कुछ मिनटों के लिए रोक दिए जाने के बाद पहले सेक्शन के Thethickness को बदल दिया जाएगा । प्रयोज्य ब्लेड जब वर्गों लगातार खरोंच है प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए । - स्नान कक्ष में गाइड वर्गों के लिए एक पंक्ति में फ्लोट (चित्र3बी) ।
नोट: यदि सिर अनुभाग कक्ष दीवार का पालन करता है, यह तैर रखने के लिए एक ब्रश गाइड का उपयोग करें । - माइक्रोस्कोप स्लाइड पर वर्गों का पालन । वर्गों के बाद पूरी तरह से पानी स्नान में सामने आया, चिमटी के साथ कई वर्गों को अलग । तो उंहें लेने के पानी स्नान से माइक्रोस्कोप स्लाइड पर (चित्रा 3 डी) ।
नोट: अनुभाग पानी स्नान के पीछे से उठाया जाना चाहिए, वर्गों चैनल में उन लोगों के रूप में और पानी के स्नान के पूर्वकाल अभी तक पूरी तरह से सामने नहीं होगा । - उन्हें एक ४२ डिग्री सेल्सियस ओवन में रात भर रखकर स्लाइड सूखी । इसके बाद स्लाइड्स को अनिश्चित काल के कमरे के तापमान पर संग्रहित किया जा सकता है ।
- Hematoxylin का प्रयोग करें-Eosin (वह) सुधार विधि8के मूल्यांकन के लिए धुंधला ।
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Representative Results
सुधार विधि बरकरार आयल वर्गों की संख्या में वृद्धि हुई । हम वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस ऊतक, वयस्क माउस गुर्दे, भ्रूण माउस दिमाग, और zebrafish आंखों पर इस नई विधि का परीक्षण किया । पानी के टैंक में जोड़ा गया था, और पानी के तापमान ३८.० डिग्री सेल्सियस से ४०.० डिग्री सेल्सियस के बीच बनाए रखा गया था । एक प्रश्नपत्र तैयार करने के बाद ऊतक के नमूनों को वे खोदी गईं और परम्परागत सेक्शनिंग की तुलना में. नई विधि अनुभाग हानि से बचा और वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस, वयस्क माउस गुर्दे, ई 15.5 माउस दिमाग, और वयस्क zebrafish आंखें (चित्रा 4a, 4c, 4E, 4g) में बरकरार वर्गों के अनुपात में वृद्धि हुई । अंत में, हमारे विधि अनुभाग नुकसान को रोकने और नमूना प्रति अधिक बरकरार वर्गों कटाई द्वारा अनुभागीकरण में सुधार ।
सुधार विधि प्रति नमूना खर्च समय में कमी आई । पारंपरिक विधि और हमारे बेहतर विधि के बीच लिया समय की तुलना में, हम पूरे प्रदर्शन श्रृंखला (पहले खंड से एक अंग के अंतिम खंड के लिए) वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस पर, वयस्क माउस गुर्दे, ई 15.5 माउस दिमाग, और वयस्क zebrafish आँखें. परिणाम सुझाव है कि बेहतर विधि सभी परीक्षण नमूनों में तेल की धारा की गति में तेजी लाने (चित्रा 4B, 4d, 4F, 4H) । सामांय में, हमारे विधि तेजी से उच्च गुणवत्ता वाले तेल की खोदी के लिए अनुमति दी ।
zebrafish ऑप्टिक रेटिना की श्रृंखला वर्गों एच और ई धुंधला द्वारा मनाया गया । श्रृंखला zebrafish रेटिना के ऑप्टिक डिस्क खंड के अनुभाग के लिए, सुधार विधि से काटा वर्गों बेहतर पारंपरिक तेल अनुभाग विधि (चित्र 5, 5B) से उन लोगों से बेहतर अखंडता है रहे थे । अधिकांश संचयन अनुभागों (चित्र 5C, 5d) की गुणवत्ता के संबंध में इन दो पद्धतियों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था । कभी-कभार, पारंपरिक पद्धति से काटी गई अनुभागों की गुणवत्ता अपेक्षाकृत कम थी (फिगर 5E, 5F).
चित्रा 1: एक टैंक में 7 वाणिज्यिक एक्रिलिक बोर्डों कोडांतरण के लिए प्रक्रिया । (क) 7 एक्रिलिक बोर्डों के समग्र दृष्टिकोण । (बी-जी) बोर्ड से टैंक के Stepwise विधानसभा # 1 बोर्ड #7 के लिए । (ज) विधानसभा के बाद प्राथमिक टैंक । (I) जनरल टैंक का आकार; टैंक की सतह पर सुरक्षात्मक झिल्ली आगे स्थापना के लिए हटा दिया गया था । एल = ४०० मिमी, एल ' = २२० मिमी, एच = १२२ मिमी, डब्ल्यू = २०० मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: उचित रूप से इकट्ठे उपकरणों के उपयोग के लिए तैयार है । (क) रोटरी microtome से जुड़े होने के बाद यथावत उपकरण. तीर संकेत, तापमान डिटेक्टर इलेक्ट्रिक ड्रिल द्वारा छोटे छेद के माध्यम से स्थापित किया गया है । तीर सिर, हीटर (ट्यूबलर विद्युत हीटिंग तत्व) बोर्ड #1 में छेद के माध्यम से स्थापित किया गया है । (ख) एक में परिवर्धित धराशायी क्षेत्र, microtome ब्लेड धारक और वर्गों चैनल के बीच कनेक्शन की सुविधा । तीर सिर, ब्लेड धारक और वर्गों चैनल तटस्थ सिलिकॉन सीलेंट से जुड़े हुए हैं । (ग) बी के रूप में, पानी डाला और ब्लेड स्थापित के साथ । (घ) सी. एरो हैड में धराशायी हुए क्षेत्र का साइड व्यू, पानी की सतह ब्लेड एज के करीब है । VT: वोल्टेज ट्रांसफॉर्मर; पश्चिम बंगाल: जल स्नान; डीटी: डिजिटल थर्मोस्टेट; ख: ब्लेड; बिहार: ब्लेड धारक; SC: अनुभाग चैनल. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: सुधारित आयल खोदी प्रक्रिया । निचले बाएँ कोने पर स्थित आंकड़े ए-डी में क्रमशः परिवर्धित धराशायी क्षेत्र हैं. तीर संकेत, पहले खंड । (a, a ') अनुभाग तुरंत और काटने के बाद सीधे वर्गों चैनल में प्रवेश करती है । (b, b ') अनुभाग रिबन अनुभागों चैनल और जल स्नान के बीच बॉर्डर को काटता है । (ग, ग ') वर्गों पानी स्नान के पीछे करने के लिए नाव और पूरी तरह से सामने आया है । (डी, डी ') वर्गों माइक्रोस्कोप स्लाइड द्वारा उठाया जब वे पानी स्नान के पीछे तक पहुंच रहे है और पूरी तरह से सामने आया है । SC: अनुभाग चैनल; पश्चिम बंगाल, जल स्नान । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 4: बेहतर अनुभाग विधि पूरी श्रृंखला वर्गों के लिए दक्षता और उपज दर में काफी सुधार हुआ. उपज दर सभी कट वर्गों में बरकरार वर्गों के अनुपात के बराबर है । डेटा मतलब ± SEM के रूप में दिखाया और एक ही ऑपरेटर द्वारा अधिग्रहीत कर रहे हैं । (ए, सी, ई, जी) बेहतर विधि रोका खंड वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस की हानि (९१.०४ ± १.४२९% N = 3, बनाम ९७.६३ ± ०.४८६४% n = 3, p = ०.०१२०), वयस्क माउस गुर्दे (९२.३० ± ०.५६८९% n = 3, बनाम ९५.९९ ± ०.७०५५% n = 3, पी = ०.०१५३), ई 15.5 माउस मस्तिष्क (९०.६७ ± १.५४९%, N = 3 बनाम ९७.०१ ± ०.२८१६%, n = 3, पी = ०.०१५८), और वयस्क zebrafish आंखें (९१.२७ ± ०.९७३४% n = 4 बनाम ९६.३२ ± ०.७२१७% n = 4, पी = ०.००५९) । (B, D, F, H) सुधारित विधि वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस के लिए पारंपरिक विधि के साथ तुलना में समय बचाया (१२६.० ± ३.६०६ मिन बनाम ७९.६७ ± १.८५६ मिनट, एन = 3, पी = ०.०००३), वयस्क माउस गुर्दे (६६.६७ ± १.७६४ मिनट बनाम ४१.३३ ± २.१८६ मिनट, N = 3, पी = ०.०००८), ई 15.5 माउस br (९९.६७ ± ३.४८० मिनट बनाम ५२.३३ ± ४.३३३ मिनट, एन = 3, पी = ०.००१०), और वयस्क zebrafish आंखें (४८.०० ± २.१६० मिनट बनाम ३०.७५ ± १.७९७ मिनट, n = 4, पी = ०.०००९) । * p < ०.०५, * * p < ०.०१, * * * p < ०.००५ । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5: एच और zebrafish पारंपरिक तरीकों से अधिग्रहीत की आंखों के ऑप्टिक डिस्क खंड के पूरे श्रृंखला वर्गों के दाग और एक ही ऑपरेटर द्वारा बेहतर है आयल अनुभाग की तुलना ई । (A) परम्परागत आयल सेक्शनिंग (21 sections). (B) सुधारित आयल सेक्शनिंग (24 sections). (C) A6 का डैश्ड क्षेत्र. (घ) B7 का धराशायी क्षेत्र. (ङ) A17 का धराशायी क्षेत्र. (च) B19 का धराशायी क्षेत्र. तारक, अपेक्षाकृत खराब गुणवत्ता के साथ वर्गों । तीर सिर, ऑप्टिक डिस्क; तीर, रेटिना के ऊतकों के गंभीर आंसू. स्केल बार = २०० µm (A और B); स्केल बार = ५० µm (C, D, E, F). कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
अनुपूरक चित्रा 1:7 वाणिज्यिक एक्रिलिक बोर्डों के आयाम मापदंडों । संख्या इसी बोर्ड मार्जिन की लंबाई का प्रतिनिधित्व करता है । इकाइयों: मिमी कृपया यहां क्लिक करें इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए ।
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Discussion
तेल अनुभाग आकृति विज्ञान में सुधार और पारंपरिक तेल अनुभागीकरण के दौरान व्यर्थ समय की समस्या को हल करने के लिए, हम काटने और खुलासा जोड़ती है कि एक बेहतर आयल खोदी विधि बनाया । इस विधि में सुधार सरल उपकरण है कि एक अनुभाग चैनल, एक पानी के स्नान और एक तापमान का पता लगाने स्विच के साथ एक हीटर शामिल पर निर्भर करता है । अनुभाग रिबन अनुभाग चैनल के माध्यम से पानी स्नान में प्रवेश करती है और काटने के दौरान स्वचालित रूप से करेंगी । इसलिए, इस विधि के तेल अनुभाग गुणवत्ता और दक्षता है, जो वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस, वयस्क माउस गुर्दे, ई 15.5 माउस दिमाग के तेल अनुभाग द्वारा सत्यापित किया गया है, और वयस्क zebrafish आंखों में सुधार ।
पारंपरिक तेल अनुभागीकरण के दौरान कर्लिंग अनुभाग से बचने के लिए, कई समायोजन किया गया है, ऊतक सतह भिगोने के रूप में, मोम ब्लॉक ठंडा, आर्द्रता बढ़ रही है, और6,7cryosectioning के संयोजन, 8; हालांकि, इन समायोजनों और अधिक थकाऊ तेल खोदी बनाते हैं । एक वाणिज्यिक अनुभाग हस्तांतरण प्रणाली है कि तरल पदार्थ पानी पर निर्भर करता है और अधिक सफल रहा है । इस प्रणाली में, अनुभाग संपर्क काटने के बाद तुरंत पानी की सतह, और बिजली की मोटर चालित जल धारा ब्लेड धारक से वर्गों के निचले गर्म पानी स्नान9स्थानांतरण । इसके तंत्र के कारण, स्थैतिक बिजली खंड को बाधित नहीं करता है, जिसके परिणामस्वरूप खंड की गुणवत्ता में सुधार हुआ है । इसके अलावा, इस प्रणाली के रूप में मैंयुअल रूप से बचा जाता है ब्लेड धारक से पानी के स्नान के लिए वर्गों के हस्तांतरण, आसानी से कमजोर वर्गों हानिकारक, यह भी उच्च गुणवत्ता पतले वर्गों को प्राप्त करने में मदद करता है ।
हमारे बेहतर विधि के साथ, सरल उपकरण कुछ फायदे के साथ वाणिज्यिक अनुभाग हस्तांतरण प्रणाली के अनुभव पर ड्रॉ । सबसे पहले, उपकरण सस्ता है, जो विकासशील क्षेत्रों में प्रयोगशालाओं में इस पद्धति को लोकप्रिय बनाने और वाणिज्यिक अनुभाग हस्तांतरण प्रणाली के पूरक हो सकता है । दूसरा, उपकरण में पानी स्थिर है और वर्गों परेशान कभी नहीं, यह पतले वर्गों के अधिग्रहण के लिए संभव बना रही है । हम लगातार 2 µm मोटाई में सुधार विधि का उपयोग कर zebrafish आंखें खोदी, और अधिग्रहीत वर्गों उच्च गुणवत्ता के थे । तीसरा, एक बड़ा पानी स्नान टैंक उपकरण है, जो कम ४० वर्गों के लिए एक साथ खोलना और एक साथ नाव परमिट, दो ऑपरेटरों सहयोग करने की अनुमति में प्रयोग किया जाता है । एक व्यक्ति ऊतक नमूना लगातार कटौती कर सकते हैं और अन्य वर्गों को सीधे मछली कर सकते हैं. यह अनुभागों को प्रकट करने के लिए प्रतीक्षा करने का समय घटाता है । एक समान काटने स्ट्रोक के साथ लगातार काटने भी अनुभाग की गुणवत्ता में सुधार ।
संरचना और हमारे सरल उपकरणों की उपस्थिति में सुधार की आवश्यकता है । उदाहरण के लिए, घटकों, जैसे बिजली, एक हीटर, और एक तापमान नियंत्रक, इस उपकरण को और अधिक अभिंन और पोर्टेबल बनाने के लिए एकीकृत किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, वाणिज्यिक रोटरी microtomes अलग आकार है । अंय microtomes से कनेक्ट करने के लिए, इस उपकरण के कोण और ऊंचाई समायोजित किया जाना चाहिए । तेल अंय आणविक तकनीकों के साथ संयुक्त खोदी व्यापक रूप से तंत्रिका जीव विज्ञान, ऊतक आकृति विज्ञान और अंय अनुसंधान क्षेत्रों11,12,13में प्रयोग किया जाता है । संभावित, इस विधि नैदानिक निरीक्षण क्षमता में सुधार कर सकते हैं14,15 और अन्य जैविक नमूनों यहाँ इस्तेमाल तीन ऊतक प्रकार से परे.
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Disclosures
लेखकों इस उपकरण पर एक पेटेंट है और कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा ।
Acknowledgments
इस काम को चीन की राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (ग्रांट No. ३१४००९३६, ३१४६०२६०) और चीन के Jiangxi प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (20171BAB215020) ने समर्थन दिया था । हम इस काम के समर्थन के लिए नानचांग विश्वविद्यालय और लंदन की क्वीन मैरी यूनिवर्सिटी के बीच संयुक्त कार्यक्रम का भी शुक्रिया अदा करते हैं ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12 V 200 W) | |||
| Temperature controller(12 V 120 W) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
References
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