Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

التحليل الرقمي للتلطيخ المناعي للبروتين المتفاعل ZW10 في أنسجة الرئة البشرية

Published: May 1, 2019 doi: 10.3791/58551
Automatic Translation
1, 2, 3, 1, 4, 4, 5, 6, 4, 4, 4, 1
1Department of Hematology, Zhongnan Hospital of Wuhan University, 2Department of Thoracic Surgery, Renmin Hospital of Wuhan University, 3Department of Human Anatomy, Histology and Embryology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences, School of Basic Medicine, Peking Union Medical College, 4Department of Immunology, School of Basic Medical Sciences, Wuhan University, 5Department of Gastroenterology, Central Hospital of Wuhan, 6Department of Transfusion, Zhongnan Hospital of Wuhan University

Summary

يشارك البروتين المتفاعل ZW10 (ZWINT) في نقطة التفتيش المغزل الميتوميووووووومرض السرطاني. هنا، نقدم منهجية لتلطيخ المناعة من ZWINT في أنسجة سرطان الرئة البشرية، تليها المسح الرقمي للشرائح بأكملها وتحليل الصور. ويمكن لهذه المنهجية أن توفر صورا رقمية عالية الجودة ونتائج موثوقة.

Abstract

الغرض من هذه الدراسة هو إدخال منهجية لتلطيخ المناعة من أنسجة الرئة البشرية، تليها المسح الرقمي الكامل الشريحة وتحليل الصور. المسح الرقمي هو وسيلة سريعة لمسح كومة من الشرائح وإنتاج الصور الرقمية ذات جودة عالية. يمكن أن تنتج نتائج متوافقة مع الفحص المجهري الضوء التقليدية (CLM) من قبل علماء الأمراض. وعلاوة على ذلك، فإن توافر الصور الرقمية يجعل من الممكن أن نفس الشريحة يمكن ملاحظتها في وقت واحد من قبل عدة أشخاص. وعلاوة على ذلك، يمكن تخزين الصور الرقمية للشرائح في قاعدة بيانات، مما يعني تجنب التدهور الطويل الأجل للشرائح الزجاجية. القيود المفروضة على هذه التقنية هي كما يلي. أولا، فإنه يحتاج إلى الأنسجة عالية الجودة المعدة والكيمياء المناعية الأصلية (IHC) الشرائح دون أي ضرر أو بقايا تسرب الزائدة. ثانيا، يجب تحديد مناطق الورم أو غير الأورام من قبل علماء الأمراض ذوي الخبرة قبل التحليل باستخدام البرمجيات، من أجل تجنب أي التباس حول مناطق الورم أو غير الورم أثناء التسجيل. ثالثاً، يحتاج المشغل إلى التحكم في استنساخ الألوان خلال عملية الرقمنة في تصوير الشريحة الكاملة.

Introduction

ZW10 تفاعل البروتين (ZWINT) هو عنصر ضروري من مجمع kinetochore الذي يشارك في نقطة التفتيش المغزل الميتوميك1،2،3. وقد أفيد أن استنفاد ZWINT يؤدي إلى فصل الكروموسوم المبكر الشاذ1،2،3. وقد أشارت الدراسات الحديثة إلى أن ZWINT تشارك في مسببات الأمراض من الأورام المتعددة من خلال تعزيز انتشار الخلايا السرطانية4،5. أبلغنا سابقا الإفراط في التعبير عن ZWINT في سرطان الرئة5. وقد كان من المقبول على نطاق واسع أن تحليل الشرائح من قبلعلماء الأمراض باستخدام CLM هو مضيعة للوقت وليس كميا 6،7،8. وعلاوة على ذلك، فإن تدهور الشرائح الزجاجية المخزنة قد يجعل من المستحيل سحب الشرائح التي تم إنشاؤها مسبقًا. قد تتغلب الطريقة الناشئة للتصوير الرقمي الكامل للشرائح المستندة إلى الكمبيوتر (WSI) على هذه القيود6و7و8 .

ولهذا الغرض، نقوم بوصف منهجية لوصم ة مناعية من ZWINT في أنسجة سرطان الرئة البشرية، إلى جانب المسح الرقمي الكامل الشريحة وتحليل الصور المستندة إلى البرامج. والميزة الرئيسية لهذه المنهجية هي إنتاج نتائج متوافقة مع CLM. ويمكن استخدام هذه التكنولوجيا على نطاق واسع في مجالات التهديف المرضية من تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوسين (H&E) وIHC، الفلورة في موقع التهجين (FISH)، microarrays الأنسجة (TMA)، واكتشاف المخدرات وتطويرها.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الطرق الموصوفة هنا من قبل اللجنة الأخلاقية لمستشفى تشونغنان بجامعة ووهان ومستشفى رينمين بجامعة ووهان.

1. إعداد الشرائح IHC

  1. إصلاح عينة أنسجة الرئة عن طريق غمر جزء أنسجة الرئة البشرية (حوالي 3 × 3 سم) في 4٪ paraformaldehyde في الفوسفات المخزنة المالحة (PBS) لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT).
  2. تجفيف الأنسجة في 80٪، 95٪، و 100٪ الإيثانول لمدة 15 دقيقة، 20 دقيقة، و 20 دقيقة، على التوالي، في درجة حرارة الغرفة. وأخيرا، تزج الأنسجة في 100٪ إكسيلين 3X لمدة 20 دقيقة لكل منهما في درجة حرارة الغرفة.
  3. للدمج، تزج الأنسجة في البارافين (63 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة. وأخيرا، تغيير البارافين مرة أخرى وتزج الأنسجة في ذلك لمدة 1 ساعة إضافية.
  4. استخدام microtome دوارة لقطع الأنسجة إلى 5 أقسام ميكرومتر سميكة ووضعها على 20 ميكروغرام / مل بولي-L-يسين المغلفة الشرائح.
  5. لإزالة الصبح، ضع الشرائح في فرن 65 درجة مئوية لمدة 2 ساعة، ثم اغمر المقاطع في ثنائي ميثيل البنزين لمدة 15 دقيقة، تليها نقع في 100٪ إكسيلين لمدة 15 دقيقة.
  6. ترطيب الشرائح مع أقسام الأنسجة 2X لمدة 5 دقائق في 100٪ الإيثانول، تليها علاج مع الإيثانول المخفف تسلسليا من 5 دقائق في الإيثانول 95٪، 5 دقيقة في الإيثانول 80٪، 5 دقيقة في 70٪ الإيثانول، و 5 دقيقة في الإيثانول 50٪.
  7. إجراء إصلاح مستضد.
    1. تمييع حامض الستريك إصلاح السائل (20X) إلى 1X مع مزدوج المقطر H2O (ddH2O).
    2. ضع الشرائح مع أقسام الأنسجة و1X حامض الستريك إصلاح السائل (300 مل) في مربع إصلاح مستضد، ومن ثم، تسخينها في فرن الميكروويف في قوة عالية لمدة 2 دقيقة، تليها التدفئة في الطاقة المنخفضة للحفاظ على الغليان لمدة 6 دقائق.
    3. السماح للأقسام لتبرد بشكل طبيعي إلى درجة حرارة الغرفة.
    4. استبدال السائل إصلاح حامض الستريك مع 0.01 M PBS، وغسل أقسام 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، في شاكر الدوارة في درجة حرارة الغرفة.
  8. القضاء على بيروكسيداز الذاتية.
    1. تخفيف 30٪ من H2O2 إلى 3٪ مع ddH2O، إضافته إلى الشرائح (تأكد من أنه يغطي جميع الأنسجة)، واحتضان الشرائح في مربع الرطب في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: الصندوق الرطب هو مربع من البلاستيك من 10 × 15 سم ويمكن أن تحتوي على الماء.
    2. غسل الشرائح 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، مع 0.01 M PBS في شاكر دوارة في درجة حرارة الغرفة.
  9. حظر مستضد غير محدد.
    1. تمييع مصل الماعز الطبيعي المركز إلى 10٪ مصل الماعز مع PBS مع 0.1٪ توين 20 (PBST).
    2. أضف 10% من مصل الماعز إلى الشرائح واحتضنها في المربع الرطب عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: يجب أن يغطي مصل الماعز جميع الأنسجة في الشرائح.
  10. وصمة عار الأنسجة.
    1. احتضان الشرائح مع الأرنب المضادة للإنسان المضادة للجسم المضاد ZWINT (1:50) في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
    2. غسل الشرائح 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، مع 0.01 M PBST (1 مل من 0.1٪ توين 20 في 1000 مل PBS) في شاكر الدوارة في درجة حرارة الغرفة.
    3. احتضان الشرائح مع الأجسام المضادة الثانوية (نظام الكشف عن الأرانب، 1:200) لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية.
    4. غسل الشرائح 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، مع 0.01 M PBST في شاكر الدوارة.
  11. لتصور تلطيخ المناعة، أضف الشرائح إلى 300 ميكرولتر من 3,3-diaminobenzidine الطازجة، وبعد ذلك، غسل الشرائح مع مياه الصنبور في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: يتم رصد درجة الصباغة تحت المجهر (التكبير 10X - 40X).
  12. وصمة عار مضادة للأنسجة. وصمة عار الشرائح مع محلول تلطيخ الهيماتوإكسلين لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك، وغسل الشرائح مع مياه الصنبور لمدة 15 دقيقة.
    ملاحظة: تظهر النواة باللون الأزرق تحت المجهر (التكبير 10X - 40X). إذا كانت درجة تلطيخ الأزرق هو أكثر فعالية، يمكن استخدام التمايز الكحول الهيدروكلوريك لمدة 3- 5 ثانية، تليها الرينة الأنسجة مرة أخرى إلى اللون الأزرق مع مياه الصنبور لمدة 15 دقيقة لتسهيل تلطيخ بارز من الأنسجة.
  13. تجفيف الشرائح لمدة 5 دقائق في 50٪ الإيثانول، 5 دقيقة في 70٪ الإيثانول، 2X في 80٪ الإيثانول لمدة 5 دقائق، 5 دقيقة في 95٪ الإيثانول، وأخيرا، 2X لمدة 5 دقائق لكل في 100٪ الإيثانول في درجة حرارة الغرفة.
  14. للشفافية، تزج أقسام الأنسجة في خزان يحتوي على 100٪ إكسيلين لمدة 15 دقيقة ونقل المقاطع إلى خزان آخر يحتوي على 100٪ إكسيلين لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  15. لختم، واتخاذ 50 - 100 درجة مئوية من اللثة محايدة وإضافة 5٪ إكسيلين إلى الخليط (تجنب الخلط في فقاعات). إضافة 15 درجة مئوية من الخليط المذكور أعلاه إلى أقسام أنسجة الرئة. ختم الفيلم مع الزجاج غطاء واضغط بلطف فقاعات بها.

2. التلقائي كامل الشريحة المسح الضوئي من الشرائح IHC

  1. السماح للشرائح مختومة لتجف لمدة 12 ساعة في درجة حرارة الغرفة لdesiccate لهم.
  2. حدد الخيار حقل مشرق يدويًا وأدخل واجهة المسح اليدوي.
  3. قم بمراجعة اسم الشرائح وحدد مسار تخزين للصور.
  4. قم بتعيين منطقة المسح واختيار نماذج المسح الضوئي الخيار باستخدام عتبات مجموعة المستخدم. العتبة حوالي 50 مع مساحة المسح الضوئي توسيع قيمة 200 ميكرومتر.
  5. قم بتعيين قيمة تركيز التركيز المسحي، وحدد التركيز تلقائيًا — حيث يتراوح من 1050 إلى 2650 — وأخيراً، حدد وضع طبقة واحدة.
  6. قم بتحميل شرائح IHC على محطة العمل وابدأ المسح الضوئي التلقائي.
    ملاحظة: تأكد من عدم تلف الشرائح. الحفاظ على الشرائح نظيفة وشفافة وتجنب الغبار، حلويات، وبقايا مانع التسرب الزائد على الشرائح. يجب أن تكون الشريحة الزجاجية وغطاء الغلاف خالية من العلامات. لا تقم بتنظيف الشرائح باستخدام الزيلين. يتم إعطاء حجم الشرائح في الجدول 1.
  7. قم بالمسح الضوئي تلقائيًا إلى مقطع الأنسجة بأكمله على شريحة بتكبير 20X أو 40X أو 100X.
  8. جمع وتخزين الصور في نهاية المسح الضوئي الشريحة كاملة.

3. تحليل الشرائح عن طريق برامج التصوير

  1. بدء تشغيل برنامج تحليل الصور الأنسجة المرضية وحدد الكمبيوتر المحلي.
  2. افتح الملف الذي يقوم بتخزين بيانات المسح الضوئي.
  3. حدد مستوى التكبير/التصغير المناسب من النطاق 2X إلى 40X.
  4. ضبط اللون لتعيين التباين الأمثل عن طريق تبديل ضبطاللون.
  5. دائرة يدويا وتسمية أجزاء من الاهتمام على كل صورة.
    ملاحظة: على سبيل المثال، يمكنك دائرة منطقة واحدة وتسميتها منطقة الورم.
  6. حدد الإضافات ومراقبة الجودة. في هذا الوقت، منشئ السيناريو للملوثات العضوية الثابتة.
  7. حدد كمية الكثافة وقم بضبط شريط الكشف.
    ملاحظة: ينبغي تنفيذ هذه العملية بعناية. يتم استخدام شريط التسامح الأزرق لضبط لون النواة الخلوية. يتم استخدام شريط التسامح براون لضبط تشبع لون التعبئة في الصورة. وينبغي أن تكون نتائج الصور بعد التعديلات متسقة مع النظراء الأصليين.
  8. ضبط مستويات نقاط لجعل كثافة تلطيخ المناطق الدائرة مماثلة لتلك التي من الصور الأصلية.
    ملاحظة: البني الداكن يشير إلى إيجابية قوية، أصفر بني إيجابي معتدل، أصفر فاتح إيجابي ضعيف، والأبيض سلبي.
  9. تخزين وتسمية الطراز كملف. تطبيق النموذج على شرائح أخرى وحدد التعليق التوضيحي المحدد".
  10. دع البرنامج يقوم بحساب درجة H تلقائيًا للمناطق الدائرية في الصورة.

4. القياس الكمي للدرجات باستخدام نظامH-التهديف 9،10

  1. حساب النسبة المئوية للتلطيخ المناعي وكثافة تلطيخ (0: سلبي، 1 +: ضعيف، 2 +: معتدل، 3+: قوي).
  2. استخدام نظام التهديف (H-درجة) لحساب التهديف المرضية للورم والمناطق غير الورم المجاورة.
    ملاحظة: H-درجة = (٪ من الخلايا مع ضعف كثافة × 1) + (٪ من الخلايا مع كثافة معتدلة × 2) + (٪ من الخلايا مع كثافة قوية × 3). لذلك، الحد الأقصى H-درجة هو 300 إذا تم كمي 100٪ من الخلايا مع كثافة قوية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

قمنا بقياس مستويات التعبير من ZWINT في 28 زوجا من سرطان الرئة غير الخلايا الصغيرة (NSCLC) عينات (الورم والأنسجة غير الورم المجاورة)، بما في ذلك 14 سرطان الخلايا الحرشفية (SCCs) و 14 سرطان الغدة الدرقية (ADCs)، من قبل IHC. المسح الرقمي الكامل للشرائح يوفر صور رقمية ذات جودة عالية (الشكل1A). وأظهرت النتائج أن درجة H من سرطان الرئة كانت أعلى بكثير من تلك التي من الأنسجة غير السرطانية المجاورة (P < 0.0001, اثنين من الذيل t-اختبار) (الشكل1A و 1B). بالإضافة إلى ذلك، وجدنا أن مستوى التعبير من ZWINT في SCCs كان أعلى بكثير من ذلك في ADCs (الشكل1C).

Figure 1
الشكل 1 تلطيخ الأنسجة المناعية لأنسجة سرطان الرئة. وقد تم تعديل هذا الرقم من يوان وآخرون. 5 بإذن من الصحافة حمامة. (أ) يعرض هذا الفريق صوراً تمثيلية مناعية لمرضى سرطان الرئة (التكبير: 10X و40X). (ب) هذا الفريق يظهر H-درجة من سرطان الرئة والأنسجة غير السرطانية المجاورة. (C) هذه اللوحة يظهر H-درجة من ADCs وSCCs. تشير أشرطة الخطأ إلى الانحراف المعياري. * P < 0.05; P < 0.001. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الحد الأدنى (مم) ماكس (مم)
عرض 25 26
طول 75 76
سمك 0.9 1.2

الجدول 1: أحجام الشرائح.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

مسح كامل الشريحة أصبح موضوعا ساخنا لمسحها قوية وإنتاج صور عالية الجودة لأغراض السريرية والبحث11،12،13. يمكن إنتاج الصور بواسطة المجاهر المسح الضوئي الشريحة في غضون دقائق11،12،13. من خلال تطبيق هذه المنهجية، حصلنا على صور عالية الجودة لشرائح ZWINT IHC وقارننا درجة H بين الأنسجة السرطانية وغير الورمية. في البروتوكول المعروض هنا، فإن أهم الخطوات هي إعداد الشرائح عالية الجودة IHC، والحصول على صورة، ومواصفات مناطق الورم وغير الورم قبل تسجيل المرضية13،14 , 15 , 16.

الأسلوب الحالي لديه بعض المزايا بالمقارنة مع (CLM). المسح الرقمي سريع بما فيه الكفاية (~ 20 شريحة/ساعة) لمسح كومة من الشرائح وإنتاج صور رقمية عالية الجودة. يمكن أن تنتج نتائج متوافقة مع CLM ولكن يأخذ وقتا أقل نسبيا. توافر الصور الرقمية يجعل من الممكن أن نفس الشريحة يمكن أن يلاحظها أشخاص متعددون في نفس الوقت. يمكن تخزين الصور الرقمية للشرائح في قاعدة بيانات، مما يعني تجنب التدهور طويل الأجل للشرائح الزجاجية.

وتشمل قيود هذه التقنية الحاجة إلى أنسجة عالية الجودة والشرائح IHC6و8و11 والخبرة الفنية لتحديد عينات الأنسجة الورم أو غير الورم قبل التحليل باستخدام برامج التصوير ، من أجل تجنب أي التباس حول مناطق الورم أو غير الورم أثناء تسجيل6،7. يحتاج المشغل أيضًا إلى مراقبة إعادة إنتاج الألوان خلال عملية الرقمنة في التصوير الكامل للشرائح17.

ويمكن تطبيق هذه الطريقة بنشاط في FISH، TMA، واكتشاف المخدرات والتنمية6،18. وقد بحثت Tabata وآخرون استخدام WSI في التشخيصات المرضية الأولية19. قاموا بتحليل 1070 عينة من WSI بأثر رجعي من تسعة مستشفيات في اليابان وأكدوا التحقق من صحة استخدام WSI في التشخيصات الأولية. واحدة من المزايا الرئيسية لWSI هو أنه يسمح عرض في وقت واحد من الشرائح من قبل طلاب متعددة20. ولذلك، فإن التحقق من صحة الصور المسحي الكامل للشرائح قد يسهم في تطوير التشخيص الرقمي للأغراض التعليمية والبحثية6و18و21.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgments

وقد تم دعم هذا المشروع من قبل المؤسسة الطبيعية الوطنية الصينية (رقم 81500151 و81400121 و81270607 و81541027 و81501352) والمؤسسة الطبيعية لمقاطعة هوبي (الصين) (رقم 2017CFB631). ويعرب المؤلفون عن تقديرهم لغو تشين، وتشانغ مين، ولي هوي، وزملائهم في شركة ووهان للتكنولوجيا البيولوجية المحدودة على دعمهم التقني. كما يشكر المؤلفون محمد جمال على تحرير اللغة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Pannoramic MIDI 3D HISTECH Cat: PMIDI-040709 An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more.
QuantCenter 3D HISTECH Downloaded from the official website of the company The framework for 3DHISTCH's image analysis applications.
LEICA RM2235 Leica Microsystems Cat: 14050038604 The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation.
Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody Abcam Cat: ab197794 Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue.
Anti-rabbit secondary antibody Wuhan Goodbio Technology Cat:GB23303-1 Secondary antibody for IHC staining.
Phosphate-buffered saline Wuhan Goodbio Technology Cat:G0002 A solution containing a phosphate buffer.
OLYMPUS CX23 OLYMPUS Cat:6M87620 Microscope for detection of H&E or IHC slides.
Dimethylbenzene Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Cat:1330-20-7 A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study.
Hematoxylin Staining Solution Wuhan Servicebio technology Cat:G1039 It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue.
Tween 20 Baitg Cat:2005-64-5 It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications.
Citric acid repair liquid Wuhan Servicebio technology Cat:G1202 Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure.
LEICA ASP200s Leica Cat: 14048043626 It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes.
LEICA Arcadia H Leica Cat: 14039354103 It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability.
LEICA Arcadia C Leica Cat: 14039354102 It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6°C.
CaseViewer Software 3DHISTECH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation. The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).
  2. Wang, H., et al. Human Zwint-1 specifies localization of Zeste White 10 to kinetochores and is essential for mitotic checkpoint signaling. Journal of Biological Chemistry. 279 (52), 54590-54598 (2004).
  3. Lin, Y. T., Chen, Y., Wu, G., Lee, W. H. Hec1 sequentially recruits Zwint-1 and ZW10 to kinetochores for faithful chromosome segregation and spindle checkpoint control. Oncogene. 25 (52), 6901-6914 (2006).
  4. Ying, H., et al. Overexpression of Zwint predicts poor prognosis and promotes the proliferation of hepatocellular carcinoma by regulating cell-cycle-related proteins. OncoTargets and Therapy. 11, 689-702 (2018).
  5. Yuan, W., et al. Bioinformatic analysis of prognostic value of ZW10 interacting protein in lung cancer. OncoTargets and Therapy. 11, 1683-1695 (2018).
  6. Higgins, C. Applications and challenges of digital pathology and whole slide imaging. Biotechnic & Histochemistry. 90 (5), 341-347 (2015).
  7. Webster, J. D., Dunstan, R. W. Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology. Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).
  8. Al-Janabi, S., Huisman, A., van Diest, P. J. Digital pathology: current status and future perspectives. Histopathology. 61 (1), 1-9 (2012).
  9. Bonomi, P. D., et al. Predictive biomarkers for response to EGFR-directed monoclonal antibodies for advanced squamous cell lung cancer. Annals of Oncology. 29 (8), 1701-1709 (2018).
  10. Villalobos, M., et al. ERCC1 assessment in upfront treatment with and without cisplatin-based chemotherapy in stage IIIB/IV non-squamous non-small cell. Medical Oncology. 35 (7), 106 (2018).
  11. Griffin, J., Treanor, D. Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back? Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).
  12. Huisman, A., Looijen, A., van den Brink, S. M., van Diest, P. J. Creation of a fully digital pathology slide archive by high-volume tissue slide scanning. Human Pathology. 41 (5), 751-775 (2010).
  13. Gray, A., Wright, A., Jackson, P., Hale, M., Treanor, D. Quantification of histochemical stains using whole slide imaging: development of a method and demonstration of its usefulness in laboratory quality control. Journal of Clinical Pathology. 68 (3), 192-199 (2015).
  14. Hofman, F. M., Taylor, C. R. Immunohistochemistry. Current Protocols in Immunology. 103, Unit 21.4 (2013).
  15. Ramos-Vara, J. A. Principles and Methods of Immunohistochemistry. Methods in Molecular Biology. 1641, 115-128 (2017).
  16. Otali, D., Fredenburgh, J., Oelschlager, D. K., Grizzle, W. E. A standard tissue as a control for histochemical and immunohistochemical staining. Biotechnic & Histochemistry. 91 (5), 309-326 (2016).
  17. Clarke, E. L., Treanor, D. Colour in digital pathology: a review. Histopathology. 70 (2), 153-163 (2017).
  18. Potts, S. J. Digital pathology in drug discovery and development: multisite integration. Drug Discovery Today. 14 (19-20), 935-941 (2009).
  19. Tabata, K., et al. Whole-slide imaging at primary pathological diagnosis: Validation of whole-slide imaging-based primary pathological diagnosis at twelve Japanese academic institutes. Pathology International. 67 (11), 547-554 (2017).
  20. Saco, A., Bombi, J. A., Garcia, A., Ramírez, J., Ordi, J. Current Status of Whole-Slide Imaging in Education. Pathobiology. 83 (2-3), 79-88 (2016).
  21. Griffin, J., Treanor, D. Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back? Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).

Tags

أبحاث السرطان، العدد 147، التقنية الرقمية التلقائية، سرطان الرئة، ZW10 البروتين المتفاعل، تلطيخ المناعة، التصوير الرقمي الكامل الشريحة، H-score
التحليل الرقمي للتلطيخ المناعي للبروتين المتفاعل ZW10 في أنسجة الرئة البشرية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wen, Y., Song-ping, X., Pan, L.,… More

Wen, Y., Song-ping, X., Pan, L., Xiao-yan, L., Shan, P., Qian, Y., Meng, S., Xiao-xing, H., Rui-jing, X., Jie, X., Qiu-ping, Z., Liang, S. Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues. J. Vis. Exp. (147), e58551, doi:10.3791/58551 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter