Summary
这里描述的是使用几个自制的工具转移,冷却,杀死成年果蝇,以及清洁玻璃养殖瓶和收集鸡蛋。这些工具易于制作,在处理果蝇方面相当有效。
Abstract
果蝇,果蝇黑色素,在生物学研究和生物学教育中被广泛应用。处理成年苍蝇是常见的,但在实践中很难,因为成年苍蝇飞行。这里演示的是如何使一些简单和具有成本效益的工具,以解决在处理果蝇的难题。泡沫塞中的孔被制成,移液器尖端或漏斗插入孔中。苍蝇然后只向一个方向移动到移液器尖端/漏斗组合,允许有效控制成人果蝇进入或流出小瓶。现有的协议已经修改,通过在碎冰中冷却并转移到寒冷、坚硬的冰袋表面来冷却苍蝇。冰袋上覆盖着一块医用纱布,在立体显微镜下检查时,使固定苍蝇远离冷凝水。苍蝇最终被安乐死以计数和分类,或被丢弃微摇。还开发了用于收集鸡蛋的瓶形笼子,以及用于清洁玻璃培养瓶的省力装置和附带的协议。
Introduction
果蝇,果蝇黑色素,是一种模型生物,广泛用于生物研究和生物学教育研究的广泛课题1,2。处理果蝇的基本问题是成年人从小瓶转移到小瓶和苍蝇的固定,使他们更容易处理,因为所有成年人(除了一些突变体3,4)可以飞行。
按照惯例,研究人员通过拿着两个小瓶口对口,轻击苍蝇或让苍蝇飞到另一个小瓶,然后分离和重新插入两个小瓶4,将苍蝇从一个小瓶转移到另一个小瓶。显然,这需要打开两个直径相同的小瓶,并且很难控制转移的苍蝇数量。同时,这需要快速的双手来完成工作,而逃避流浪苍蝇可能导致实验室或教室出现问题。在果蝇实验中,将特级处女苍蝇或雄蝇添加到已经准备好的十字架上是另一项例行任务。按照惯例,在添加额外的苍蝇之前,苍蝇必须固定在十字架小瓶中。
成人果蝇通常用醚、CO2或冷却5麻醉。与醚和CO2接触相比,冷却剂是固定成年果蝇的最经济有效的剂,对苍蝇和研究人员(尤其是年轻学生)的危害最小6,7。然而,在寒冷的表面或室内持续凝结的水会使苍蝇变湿。很难确定湿苍蝇的表型,在操作8、9中很容易损坏。这阻止了冷却方法得到更广泛的接受。
飞转工具和飞行冷却方法已经描述之前10。据报道,一种经过改良的冷却麻醉技术对果蝇实验是安全、可靠和可行的。本文还介绍了 1) 杀死成年人计数、分类或丢弃的方法,2) 清洁玻璃培养瓶的省力设备和规程,以及 3) 收集鸡蛋的简单笼子。此处描述的易于设计和经济高效的工具可用于解决飞行处理的难题,这些方法已经过测试,并且被证明为经验丰富的新手研究人员可靠、可靠且易于操作。
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Protocol
1. 准备工具和附件
- 提示/漏斗塞
- 获得两个海绵插头(插头的直径必须略大于用于传输苍蝇的瓶的内径)。用加热的电焊铁在海绵塞的中心打一个洞。
- 获得两个 1 mL 移液器尖端,用锋利的刀横向将一个切成两半,然后丢弃尖端。然后,从第二个移液器尖端上切下 1.5 厘米的尖端。将两个移液器尖端的残余与多用途粘合剂粘合在一起,使移液器尖端拉长(图1A)。
- 将漏斗和拉长移液器尖端插入海绵塞中,以制作吸头和漏斗塞(以下简称 T-和 F 塞),用 100 μL 微离心管盖住移液器尖端(图 1A)。
注:漏斗杆的长度必须大于插头的高度。如果它短于或等于插头的高度,则苍蝇将从阀杆开口中逸出。漏斗杆的末端应位于培养基面或空小瓶底部至少 2 厘米处。小漏斗(例如,圆盘直径 <60 mm)的内部阀开口直径较小(<5 mm)。玻璃或塑料漏斗可用于制造 F 形塞。然而,塑料漏斗在生物学课上更可取,因为它们比玻璃漏斗更容易破碎。
- 微解剖针
- 获得手部感觉舒适的机械铅笔和与铅重新填充的直径相匹配的昆虫针脚(例如 0.5 mm、0.7 mm)。
- 用一对钳子切割昆虫销的宽端,并将切口平整。用销替换引线 (图 1B)。按下单击按钮,输入 0.5⁄1 厘米的针脚进行解剖。在解剖活动后,清洁销并将其完全推回铅笔轴中,使任何人能够安全操作。
注:微解剖针不仅可用于解剖器官,如幼虫唾液腺,而且用于计数和分类死亡的成年苍蝇。
- 硬冰袋
- 获得几个可再冷冻的硬冰袋(更可取的是大尺寸冰袋)。图 1C显示了一个工作良好的冰袋,其尺寸为 26.5 厘米 x 14.5 厘米 x 2.5 厘米,顶部和底部两侧完全平坦。
- 将医用纱布(非无菌)切成比其覆盖的冰袋的冰袋稍小的碎片。例如,一块略小于 26.5 厘米 x 14.5 厘米的医用纱布比覆盖图 1C所示的冰袋更可取。
注:这些冷藏工具的必要配件包括:一个冰盒(我们使用一个人的25厘米x15厘米的泡沫箱和37厘米x28厘米x20厘米的盒子,用于储存碎冰;一对细点钳子,用来抓住冰冷苍蝇的翅膀,并将其转移到小瓶中;一双保护工作手套,用于从-20°C冰柜中取出冰袋;和塑料薄膜,用于覆盖立体显微镜的阶段。
- 果蝇卵收集笼
注:许多生物技术公司11日都可以买到现成的果蝇蛋收集笼。这里描述的是一个小型丙烯酸瓶形鸡蛋收集笼60毫米培养皿(图1D左;笼子设计显示在中间)。它可以适应其他培养皿尺寸(例如,100 mm、35 mm)。这允许苍蝇轻松进入或离开笼子。可以按照以下方式准备一个简单的笼子。- 使用卡扣切割器将软塑料饮料瓶(500 mL,内部直径约 65 mm)切成近似 2:1(尖端:直端)比例,然后丢弃钝端。
- 用胶带将一张卡片纸包裹在苹果汁板(内径60毫米)周围[苹果汁板用于收集鸡蛋(图1E,右图)]。
- 无绳管刷驱动器
- 获取无绳钻驱动器(最大速度 = 500 rpm)。
- 获得沿其侧面和正面有刷毛的管刷。理想情况下,刷子的直径应略大于需要清洁的培养小瓶的直径。切割其手柄的末端,以便将其插入钻夹头(图 1D)。
注:这些清洁工具的必要附件包括不锈钢海绵和长袖口橡胶手套。
2. 将成人苍蝇从Vial A转移到Vial B
注:将成年苍蝇从一个小瓶转移到另一个小瓶是果蝇实验中最常见的做法[例如,将苍蝇从旧文化(A)转移到新鲜文化(B)或从十字瓶(A)转移到空小瓶(B)]进行麻醉。此处描述的协议可用于任何成人飞行传输活动。除非另有说明,本议定书用于将苍蝇从小瓶A转移到B瓶。
- 仔细检查 F 塞的漏斗杆和 T 塞的移液器尖端,然后用橡胶鼓风机清除留在塞子中的任何苍蝇。这一步至关重要,特别是当一组T-和F-塞用于连续传输不同的果蝇线时。
- 轻触小瓶 A 中的苍蝇,然后用 T 塞器更换其插头,然后用 F 塞将小瓶 B 插入。
- 将小瓶 A 倒置到小瓶 B 上,将 T 塞子的移液器尖端插入 F 塞的漏斗开口中,敲击倒置小瓶 A 的边缘,让苍蝇从移液器尖端滑出,穿过漏斗的杆,然后滴入小瓶 B。如果小瓶A中的任何旧食物变得不那么紧凑,当小瓶A倒置和敲打时,它可能会掉落。在这种情况下,将小瓶B倒置在小瓶A上,让苍蝇爬升到小瓶B中。
- 将 T 止步器与 F 止塞分开。如果剩余的苍蝇在小瓶A中需要暂时转移到其他小瓶中,则用200μL微离心管盖住T塞的移液器尖端;否则,拆下 T 塞并重新插入小瓶 A. 拆下 F 塞并重新插入小瓶 B。
3. 通过冷却来固定苍蝇
- 在使用前,将硬可再冷冻冰袋保存在-20°C冰柜中至少24小时。
- 在室温(RT)下放置一个冰冷的硬冰袋20分钟。用一些自来水稍微湿润一块非无菌医用纱布,让它紧紧地粘在冰袋表面。医用纱布可以在下一次飞行中重复使用。同时,在碎冰中冷却一个空小瓶。
- 将需要固定到冷藏空瓶 (CEV) 中的成年苍蝇转移。当两个转移小瓶分开时,用培养皿或插头盖住CEV,将CEV敲到碎冰上,将CEV敲到CEV中的所有苍蝇底部。重复此过程几次,直到所有苍蝇都固定不动。苍蝇将在30秒内固定。接下来,将 CEV 放入冰上 1 分钟。不建议一次转移太多的苍蝇进行麻醉。
- 将冰冷苍蝇倒入覆盖冰袋的医用纱布上。用画笔将重叠的苍蝇摊开,确保每只苍蝇都能被冰袋的冰袋冰面冷却。如果冰冷的硬冰袋稍微膨胀,将其放在毛巾上,放在平坦的一侧。
- 从立体显微镜中取出舞台夹,用一块塑料薄膜覆盖舞台,并将冰袋放在舞台上。打开顶灯(冷光源是可取的),聚焦立体显微镜并移动冰袋,直到能清楚地看到冰冷苍蝇。
4. 杀死成年苍蝇进行计数、排序或丢弃
- 转移成人飞入一个空小瓶,并覆盖它与培养皿。
- 倒置小瓶,在微波炉中加热1分钟~20秒,让死苍蝇掉进培养皿中。
- 戴上防护工作手套,将小瓶从微波炉中拿出来。将死苍蝇倒入白纸卡上,在立体显微镜下用微解剖针对苍蝇进行计数或检查,观察后将苍蝇尸体放在垃圾桶中。
- 要杀死不需要的苍蝇,在微波炉中加热苍蝇2~3分钟,然后将尸体放入垃圾桶。
注:不建议杀死一些翅膀突变菌株(例如,翼长突变体)进行检查,因为如果翅膀延伸到腹部尖端(在野生型苍蝇中可见),则很难从尸体上判断。
5. 将苍蝇移出瓶形鸡蛋收集笼
注:如上所述,T-和F-塞用于将苍蝇运入和移出鸡蛋收集笼。在整个过程中,苍蝇不需要麻醉。其他细节,如准备苹果汁介质,鸡蛋收集,和递解,可以在文献12中找到。
- 将鸡蛋收集笼插入苹果汁板,或将苹果汁板装入由软饮料瓶制成的笼子。用石蜡薄膜将两个部件周围的接头密封。
- 将尽可能多的苍蝇放入笼子,在转移苍蝇后用泡沫塞重新插入笼子。
- 要将笼子里的苍蝇的食物换出来,把笼子里的苍蝇转移到一个空小瓶里。
- 更换苹果汁板并重新密封,然后将苍蝇从小瓶移回笼子。
- 当鸡蛋收集结束时,将苍蝇转移到空小瓶中,然后转移到养殖小瓶中。
6. 清洁玻璃文化瓶
注:一般来说,一个古老的文化小瓶包含活苍蝇。在本文描述的协议中,这些苍蝇不需要在清洗前被杀死,除非它们是转基因苍蝇。
- 用湿不锈钢海绵从玻璃培养瓶中取出任何永久性标记油墨。
-
将文化小瓶浸泡在自来水中。
- 在实验室水槽中加水,将液体洗碗皂加入水中,然后混合。
- 将文化小瓶浸入水中,然后取出塞子,让水流入小瓶。水中的洗涤剂会使任何剩余的成年苍蝇沉入底部,并淹没在水中。
- 将旧文化小瓶浸入水中至少 30 分钟。
- 松开钻头的夹头,插入试管刷并重新拧紧夹头。检查旋转选择器的方向,并确保钻头顺时针旋转。调整速度触发器并确保最大转速小于 500 rpm。
-
清洁文化小瓶。
- 大致清洁文化小瓶。
- 将长袖口橡胶手套放在非主导手上,并将小瓶放在水中。
- 用裸露的双手握住无绳管刷驱动器,将刷子挤压到文化小瓶中,然后挤压扳机。
注:请勿将电池浸入水中。旋转的刷子将分解旧食物、pupa等,并清除95%以上的废物。 - 把垃圾扔进一个单独的垃圾桶。重复此过程,直到每个小瓶中的大部分废物被清理干净。
- 彻底清洁文化小瓶。
- 清洁管刷,排空并清洁水槽,然后用清水重新填充。
- 如第 6.4.1 节所述,清除每个培养瓶中剩余的废物。
- 大致清洁文化小瓶。
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Representative Results
T-和F-阻子被开发为一套简单的工具,可以调整和用于任何飞行转移活动。将苍蝇从旧文化转移到几种新鲜文化中,包括移除新鲜小瓶的插头,用F-塞器替换它们,然后轻敲旧小瓶中的苍蝇,快速取下其插头,并用T塞器替换。如果旧食物是紧凑的,那么重要的是翻转旧小瓶,并将T-止口的尖端插入F塞的开口,然后轻敲苍蝇进入新鲜的小瓶。然后,更换 T 和 F 塞器并重新插入小瓶。如果旧食物变得不那么紧凑,建议将新鲜小瓶翻转过来,将 F 塞安装到 T 塞上,让苍蝇爬入新鲜的小瓶中。
要向已准备好的十字架添加额外的苍蝇,必须向下轻敲十字瓶中的苍蝇,并将其插头更换为 F 塞。然后,实验者必须在立体显微镜下检查冰冷的苍蝇,用一对尖尖的钳子从它的翅膀上捡起一只想要的苍蝇,让它通过漏斗的茎滑入十字架小瓶。如果苍蝇被困在漏斗的茎上,建议用鼓风机轻轻吹它,让它滑入小瓶中。然后,在收集了足够的苍蝇以进行十字架时,需要更换 F 塞器并重新插入小瓶。T-和F-停止器于2010年推出13,14;到目前为止,已有1,200多名学生从这些飞行传输设备中受益。T-和F-s-ss也通过实验室指南15被介绍给教师和研究人员,该指南已被采用用于教学和研究实验室。
现有的冷麻醉方法已被修改,用于本研究。碎冰或冰水混合物用于冷却成年苍蝇,然后将固定苍蝇转移到冰袋的冰袋的冰袋上,上面覆盖着一块非无菌的医疗纱布。纱布纤维吸收冷凝水,在检查苍蝇时保持干燥。同时,翘尾/微线之间的小孔允许苍蝇接触冰袋的冷表面,使其无法移动(图2)。在室温为25°C时,冰袋表面的温度在20分钟内从-19°C到-2°C急剧上升,到达对老和新孵化苍蝇都安全的高原(图3)。冰袋在高原内工作得很好,冰冷的苍蝇在30秒内在室温下恢复意识。因为硬冰袋很薄,然后可以放在立体显微镜下检查苍蝇。这里描述的硬冰袋价格不到2美元;此外,每学期为100-150名学生的班级使用了60个硬冰袋,并且可以重复使用多年。三年前,这种令人心寒的麻醉技术被引入到特定的遗传学课上,其鲁棒性已经被300多名学生和其他大学的学生测试。
研究发现,微波介电加热是杀死成年苍蝇(如果观察后不再需要它们)的更快、更方便的剂,与过度氧化或深度冷冻等药物相比(表1)。微波介电加热需要比过度氧化或深度冷冻更短的时间杀死苍蝇。所有苍蝇在80秒内死亡,因此在短时间内对一大批苍蝇进行计数和分类是可行的。假设实验者需要杀死苍蝇20倍才能对实验进行计数和分批,分别需要3小时+20分钟和5小时才能杀死苍蝇;然而,只需使用微波炉只需27分钟。
与过度的苍蝇类似,微波苍蝇以与身体的直角伸展翅膀。一般来说,被微摇杀死的苍蝇尸体比被醚或冷气杀死的飞尸体要轻得多,但热量不会扭曲身体的形状,而且尸体也不会变得脆或浑浊。微波苍蝇的特征(例如体色、眼睛颜色和翼形)与被以太或冷冻杀死的苍蝇相似(图4),并且三种代理杀死的苍蝇的翅膀大小(面积、长度、宽度)没有显著差异(表 1)。因此,被微摆动杀死的苍蝇尸体可用于计数、分类和测量某些特征,如翅膀大小。微波加热也是杀死不需要的苍蝇并及时处理的好方法。此外,飞行停尸房(含有易燃乙醇、甲醇或肥皂溶液的瓶子),用于储存死苍蝇或丢弃的苍蝇,在飞行实验室或生物类3中不再需要。
为该协议设计了一个小型的瓶形鸡蛋收集笼。使用T-和F-塞,大量的苍蝇可以转移到或离开笼子,苹果汁介质板可以更轻松地改变。最后,苍蝇在收集卵子前后不需要麻醉。
还为该协议开发了用于清洁培养瓶的无绳管刷驱动器和协议。这种电池供电的管刷可以容易地分解旧食物和附着在玻璃培养瓶上的pupa,小瓶可以在30秒内清洗,清洁效率大大提高;因此,清洁大量的玻璃文化小瓶不再是一项乏味的任务。
图1:用于处理果蝇的工具。 (A) 显示的是飞行传输工具和必要的附件.它们是(从左到右)鼓风机(用于吹出留在漏斗杆中的成年苍蝇);T- 和 F 止动器(插入小瓶);和一个空小瓶覆盖与培养皿(36毫米,40毫米培养皿的下半部分)。泡沫塞块大于小瓶的开口,因此可用于不同开口尺寸的瓶。如有必要,可以更改此处描述的大小。(B) 所示是微解剖针所需的材料.(C) 所示是用来冷却苍蝇的硬冰袋.(D) 图所示为瓶形鸡蛋收集笼(左),其设计方案(中),以及由软饮料瓶(右) (E) 制成的简单鸡蛋收集笼(右) (E)所示,是无绳管刷驱动器所需的材料。可安装在钻杆上的白色圆形刷子用于清洁培养皿。请点击此处查看此图的较大版本。
图2:冰袋冷表面的冰蝇。冷凝水被医用纱布吸收,冷冻苍蝇保持干燥。请点击此处查看此图的较大版本。
图3:冰袋表面温度随时间的变化。这些数据是从5个硬冰袋中收集的,在冰袋中心的两个位置测量温度,红外温度计的RT为25°C,相对湿度为29%。冷冻温度为-24.5 °C。请点击此处查看此图的较大版本。
图4:用微摇杀死的苍蝇尸体与乙醚和深冰冻杀死的苍蝇尸体的比较。在立体显微镜下检查被微摆动杀死的苍蝇尸体时,在尸体上没有发现烧焦或变形,在身体颜色、眼睛颜色和翅膀形状上也没有明显差异。请点击此处查看此图的较大版本。
| 杀伤剂b | 用来杀死苍蝇的时间 | 重量(毫克/30只苍蝇) | 翼 ( 毫米或毫米2)d | ||||||
| 女性 | 男性 | 女性 | 男性 | ||||||
| 面积ns | 长度ns | 宽度 ns | 面积ns | 长度ns | 宽度 ns | ||||
| 热 | 1 分钟 20 秒 | 36.60±0.00 aa c | 22.65±0.95 a | 1.51±0.16 | 2.30±0.12 | 0.92±0.05 | 1.20±0.09 | 2.06±0.08 | 0.83±0.03 |
| 寒意 | 15分钟 | 41.20±0.10 b B | 25.70±1.00 ab A | 1.57±0.15 | 2.37±0.12 | 0.94±0.05 | 1.23±0.12 | 2.07±0.10 | 0.84±0.05 |
| 醚 | 10分钟 | 43.35±0.85 b B | 26.9±0.70 b A | 1.57±0.16 | 2.36±0.11 | 0.94±0.05 | 1.18±0.10 | 2.05±0.10 | 0.83±0.04 |
| a成人果蝇是野生型果蝇黑色素。它们在中国北京被捕获,并在我的实验室中保存了5年以上,并在玉米粉介质中保持在25°C。 | |||||||||
| b所用设备为热:1,300 W 微波炉;冷藏:冰箱(-30°C);以醚:2 mL醚,以醚的内部尺寸为170 mL。 | |||||||||
| c在每一列中,后跟相同字母的均值与 Duncan 的多范围测试没有显著差异,小写/大写字母表示 p = 0.05/0.01 | |||||||||
| d苍蝇是从同一文化小瓶中随机选择的。同一特工杀死的苍蝇中收集了20个同性别的右翅膀,并维持了两次复制。使用 ImagePro Plus 软件拍摄了每个机翼的数字照片,并测量了机翼尺寸 | |||||||||
| ns: p = 0.05 时不重要 | |||||||||
表1:三种杀灭剂对成年果蝇尸体重量和翼体的影响。
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Discussion
本文介绍了一些用于处理果蝇饲养和实验中涉及的基本活动的自制工具。这些工具很简单,但相当有效。实际上,任何实验室都可以轻松制作这些工具,而研究或教学实验室不需要找到现成的替代方案,而这种替代方案可能在当地不可用。
苍蝇转移是果蝇实验中最常见的做法和艰巨任务。不幸的是,到目前为止,还没有描述转移工具3,4,12,17在这里,T-和F-塞。这些简单的工具使转移苍蝇更容易,更容易控制,减少在转移过程中逃跑的苍蝇,近年来在遗传学类中很少发现流浪苍蝇就是明证。由于海绵塞是弹性的,它不需要小瓶的开口具有相同的内径。此外,一次只允许一只苍蝇通过移液器尖端的开口;因此,T-阻将停止防止苍蝇涌进小瓶,实验者可以很容易地停止这个过程,并控制转移的苍蝇的数量。T-止动器还可以防止旧食物掉落到新鲜的小瓶中。T-和F-s-s-s-stos易于制作和使用,即使是没有经验的处理程序也能快速轻松地完成飞行传输。
F-塞用于引导苍蝇进入一个新的小瓶。成年苍蝇往往在塞下结社,不会从漏斗的茎中逃脱。这使得一些工作更容易和可控(例如,将苍蝇从一个小瓶转移到另一个小瓶,或添加特级处女苍蝇或雄性苍蝇到准备的十字架)。研究发现,当小瓶在实验室放置相当长的时间(例如1小时)时,只有极少数苍蝇会从漏斗的茎中逃脱。
本文介绍了一种可行的苍蝇固定冷却方法。该方法是醚和CO2的一种很好的替代方法,可用于研究和教学实验室。这种方法对教学实验室特别友好,因为教师不需要像对学生潜在的健康风险那样担心,也不需要在拥挤的教学实验室中努力建造一个昂贵的临时区域。这种方法具有成本效益,因为冰袋价格低廉且可重复使用。研究人员或学生可以冷却和检查苍蝇任何地方,因为这个"冷垫"不连接到任何管道。这种方法不仅对人是安全的,而且对苍蝇也是安全的,因为系统在高于-2°C的温度下工作。苍蝇被轻轻击倒,只要它们停留在冰冷的表面上,并且不被杀死,它们就不会移动。苍蝇一旦回到室温,就会迅速恢复知觉。应用这种方法的人不需要训练期,也不存在麻醉浓度过高或不足的问题。然而,实验者应密切关注冰袋的大小,因为小型冰袋(例如,400-500 mL,约19厘米x11厘米x2.5厘米)不适合飞行冷却,因为它们在结冰时膨胀,在表面上工作变得很尴尬。
还为该协议开发了一个瓶形鸡蛋收集笼。利用T-和F-阻塞,可以添加或转移到笼子的大量苍蝇,而无需事先固定苍蝇。研究发现,微波加热是杀死苍蝇进行检查或丢弃的有效方法。还使用了机械铅笔型微解剖针和钻头清洗工具。所有这些工具都很简单,工作良好。
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Disclosures
提交人没有什么可透露的。
Acknowledgments
没有
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A pair of pliers | |||
| Cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| Electric soldering iron | |||
| File | |||
| Funnel | diameter of disk<60mm | ||
| Ice box | |||
| Insect pins | |||
| Infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| Long cuff rubber gloves | |||
| Mechanical pencils | |||
| Medical gauze | |||
| Microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| Microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| Peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| Pipette tips | 1 ml | ||
| Plastic film | |||
| Plastic Peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| Point tweezers | |||
| Protective work gloves | |||
| Re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| Rubber air blower | |||
| Snap cutter | |||
| Soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| Sponge stopper | |||
| Stainless steel sponges | |||
| Tube brush | |||
| Vial | Φ34 mm × 90 mm |
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