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방법 논문

후기 무척추 동물에서 심박수의 최소 침습 측정을 위한 임피던스 폐색술

5.5K 조회수

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DOI:

10.3791/61096

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2020년 4월 4일

 ,  , 

이 논문에서

요약

열 도전 중 심박수를 측정하면 급성 환경 변화의 결과로 생물의 생리적 반응에 대한 통찰력을 제공합니다. 모델 유기체로 미국 랍스터(Homarus americanus)를사용하여,이 프로토콜은 후기 무척추 동물에서 심장 박동을 측정하기 위해 상대적으로 비 침습적이고 비치명적인 접근법으로 임피던스 폐포의 사용을 설명합니다.

초록

바다의 온도는 세계 기후의 광범위한 변화의 결과로 급속하게 증가하고 있습니다. 생물 생리학은 환경 온도에 의해 크게 영향을, 이것은 해양 생물의 다양한 열 생리적 성능을 변경할 수있는 잠재력을 가지고있다. 모델 유기체로 미국 랍스터(Homarus americanus)를사용하여,이 프로토콜은 급성 열 스트레스에서 후기 무척추 동물의 심장 성능이 어떻게 변경되는지 이해하기 위해 임피던스 폐렴의 사용을 설명합니다. 이 프로토콜은 온도 램핑 실험 중에 심박수를 실시간으로 수집할 수 있는 최소 침습 기술을 제공합니다. 데이터를 쉽게 조작하여 아레니우스 브레이크 온도(ABT)를 계산하는 데 사용되는 아레니우스 플롯을 생성하며, 이는 온도가 증가함에 따라 심박수가 감소하기 시작하는 온도입니다. 이 기술은 다양한 후기 무척추 동물 (즉, 게, 홍합 또는 새우)에서 사용될 수 있습니다. 이 프로토콜은 온도가 심장 성능에 미치는 영향에만 초점을 맞추고 있지만, 생리적 성능에 영향을 미치기 위해 온도와 상호 작용하는 추가 스트레스(예: 저산소증 또는 과다증)의 가능성을 이해하도록 수정할 수 있습니다. 따라서, 이 방법은 해양 무척추 동물이 환경의 급격한 변화에 어떻게 반응하는지 더 잘 이해할 수 있는 광범위한 응용 분야에 대한 잠재력을 가지고 있다.

서론

최근 수십 년 동안 온실 가스(즉, 이산화탄소, 메탄 및 아산화질소)가 대기중으로 투입되면서 환경 변화의 광범위한 패턴이 발생했습니다1. 세계의 바다는 급속하게 온난화2,,3,생물 생리학에 심각한 영향을 미칠 수있는 추세. 온도는 생리적 속도에 크게 영향을 미치며, 유기체는 성능4,,5,,6에대한 최적의 온도 범위를 가지고 있습니다. 이와 같이, 개인 온도이 범위를 벗어난 조직에 적절 한 산소 전달을 유지 에 어려움을 발생할 수 있습니다. 이는 온난화된 해양 온도5,,7에직면하여 호기성 성능 저하로 이어질 가능성이 있다.

실험실 환경에서 환경 변화의 생리적 영향을 이해하는 방법은 열 스트레스의 맥락에서 심장 성능을 검사하는 것입니다. 이것은 예측 된 온난화 조건에 노출이 성능 곡선5,<....

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프로토콜

1. 장비 설정

  1. 직경 약 8-10cm, 길이 40-70cm의 열 교환 코일을 만들기 위해 투명하고 가단성 튜브를 감싸십시오. 전기 테이프를 사용하여 코일을 고정합니다.
  2. 열 교환 코일을 외부 공급 장치에 부착하고 냉각/가열 순환 수조의 반품 피팅을 부착합니다. 호스 클램프를 사용하여 연결이 안전한지 확인합니다.
  3. 역삼투(RO) 물로 냉각/가열 순환 수조의 우물을 채우고 전원 코드를 콘센트에 연결합니다. 수조를 켜고 열 교환 코일과 관련하여 누출이 없는지 확인하십시오.
  4. 블랙 BNC 케이블을 장치의 AC 출력에 연결하고 채널 1 포트를 사용하여 데이터 로거(재료표)에연결하여 임피던스 컨버터를 설정합니다.
  5. 열전대 프로브(온도 레코더)를 T 형 포드에 연결한 다음 T 형 포드를 데이터 로거의 채널 2 포트에 연결합니다.
  6. 데이터 로거의 전원 코드를 전원 공급 장치에 연결하고 USB 케이블 커넥터를 사용하여 데이터 로거를 PC 컴퓨터에 연결합니다.
  7. 인공 해수 7.5 L로 적응 챔버 및 실험 경기장을 채웁니다 (염분 = 35 ppt, pH = 8.1, 온도 = ~ ....

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결과

이 프로토콜은 임피던스 폐포를 사용하여 온도 램핑 실험 중에 심박수(전압) 및 온도에 대한 실시간 데이터를 얻는 방법을 설명합니다. 이 기술을 천공할 때 기록된 전압 및 온도의 진폭은 실험 설계 및 초점 종에 따라 달라집니다. 그러나 실시간으로 표시되는 전압 출력은 프로토콜이 올바르게 구현될 때 일반 사위 분포를 따릅니다(그림1A). 경기장의 온도가 증가함에 따라 전압 피크의 증가 된 주파수 (즉, 심장 박동)를 반영하기 위해 전압 변화의 실시간 분포; 그림 1B)를참조하십시오. 경기장 온도가 시험 대상자의 최적 성능 창 외부 수준으로 계속 증가함에 따라 분포는 산발적 피크 및/또는 "플랫 라이닝"(그림1C)의모멘트에 의해 중단된 사위 모양의 전압 피크의 감소된 주파수를 묘사하는 분포를 변화시바꿉니다.

LabChart 소.......

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토론

이 프로토콜은 온도 램핑 실험 동안 후기 무척추 동물의 심박수 변화를 측정하기 위해 임피던스 폐포를 사용하는 방법을 설명합니다. 이 기술의 주요 이점은 다른 실험실 기반9접근법9,10,,11에 비해 최소 침습적이며 외골격의 주요 외과 적 조작을 포함하지 않으므로 실험 전에 필요한 회복 시간의 양을 줄이는 것입니다. 또한 장비는 사용하기 쉽고 결과 데이터는 제안 된 소프트웨어 프로그램에서 간단하게 조작하고 해석 할 수 있습니다. 미국 산 랍스터는 여기에서 모델 주제로 사용되지만,이 기술은 청홍합(Mytilus spp.14)에서성공적으로 구현되었으며 다른 후기 무척추 동물 (즉, 게, 새우 및 기타 바이 밸브)에서 사용하기 위해 쉽게 변형 될 수 있습니다.

이.......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없다.

감사의 글

저자는 실험실 지원과 국립 과학 재단 상 IIA-1355457 장비를 구입하는 자금메인 대학에서 메인 EPSCoR에 폴 로슨 감사. 이 프로젝트는 USDA 국립 식량 농업 연구소, 해치 프로젝트 번호 MEO-21811 메인 농업 및 산림 실험 스테이션뿐만 아니라 NOAA 국립 해양 수산 서비스 살톤스톨 케네디 그랜트 #18GAR039-136에 의해 지원되었다. 저자는 또한이 원고의 이전 버전에 대한 자신의 의견에 대한 세 익명의 검토자에게 감사드립니다. 메인 농업 및 산림 실험 역 출판 번호 3733.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1.6mm(1/16인치) 드릴 비트Home Depot의 Milwaukee Tool1001294900이것은 1.6mm(1/16인치) 직경의 드릴 비트용입니다. 이 품목은 대부분의 주택 개조 상점에서 찾을 수 있습니다.
38 AWG 구리 자석 와이어TEMCoMW0093이 와이어는 테스트 대상에 이식되는 와이어 전극 리드를 만드는 데 사용됩니다. 이 목록은 38게이지 자석선의 4 oz 코일에 대한 것입니다. TemCo는 또한 와이어 전극을 구성하는 데 사용하기에 적합한 36 게이지 자기 와이어를 가지고 있습니다.
Cyanoacrylate glueLoctite852882이 제품에는 브러시 팁이 포함되어 있어 갑각에 전극을 고정하는 데 사용되는 접착제의 양을 쉽게 제어할 수 있습니다.
에탄올, 70% 용액, 분자 생물학 등급Fisher BioReagentsBP82931GAL이 시약은 전극 이식 전에 갑각을 소독하기 위해 멸균 면봉과 함께 사용됩니다.
엑셀MicrosoftN/A이 프로그램은 데이터를 구성, 조작 및 분석하기 위한 프로토콜에 사용됩니다. PC 및 Mac 운영 체제와 모두 호환됩니다.
Fisherbrand 8-피스 해부 키트Fisher Scientific08-855이 키트에는 프로토콜의 전극 이식 단계를 수행하는 데 필요한 집게, 가위, 해부 칼(및 블레이드) 및 해부 바늘이 포함되어 있습니다.
Fisherbrand Isotemp 냉장/가열식 수조 순환기: 5.4-6.5L, 115V/60HzFisher Scientific13-874-180이것은 침수 순환기와 수조로 구성된 완전한 시스템입니다. 온도 조절 수조로 사용하거나 유체를 응용 분야 외부로 순환시키는 데 사용할 수 있습니다. 이 수조의 온도 범위는 -20에서 +100 °입니다. C, 장치는 빠르게 가열/냉각되며 사용 종료 시 배수가 용이합니다.
Fisherbrand 멸균 면봉Fisher Scientific22-456-885이 면봉은 전극 이식 전에 갑각을 소독하는 데 사용하기 전에 70% 에탄올에 담가야 합니다.
포크 단자, 빨간색 비닐, 버티드 솔기, 22 - 16 AWG, 100 PKGrainger5WHE6단자는 와이어 전극을 구성하기 위해 자기 와이어에 납땜됩니다. 이들은 다양한 주택 개조 업체에서 구입할 수 있습니다.
임피던스 컨버터UFI모델 29910.2옴에서 5옴 이상에 이르는 매우 작은 전압 변화와 관련된 임피던스 변화를 측정합니다. 이 모델은 저항, 커패시턴스 또는 인덕턴스 변화에서 비롯되는 임피던스 변화뿐만 아니라 이 세 가지 모두의 조합으로 변환할 수 있습니다.
LabChart 소프트웨어ADInstrumentsN/APowerLab 데이터 로거 구매에는 LabChart 소프트웨어가 포함되지만 소프트웨어 라이선스는 온라인에서 직접 다운로드할 수도 있습니다. LabChart를 사용하면 데이터를 기록하고, LabChart 파일을 열고 읽고, 데이터를 분석하고, 파일을 저장 및 내보낼 수 있습니다. 소프트웨어의 무료 버전 인 LabChart Reader가 있지만 사용자는 LabChart 파일을 열고 읽고 분석 할 수 만 있습니다 (즉, 데이터 파일을 기록, 저장 또는 내보내는 데 사용할 수 없음). 교육 목적으로 사용할 수 있는 LabChart 교육 모듈이 포함된 LabChart Pro를 선택할 수도 있습니다.
LED 납땜 인두Grainger28EA35이것은 와이어 전극을 생성하기 위해 마그네틱 와이어를 포크 단자에 납땜하는 데 사용할 수 있는 일반 납땜 인두입니다.
PowerLab 데이터 로거ADInstrumentsML826PowerLab에는 다양한 모델이 있습니다. 이 카탈로그 번호는 2개의 아날로그 입력 채널, 독립적으로 선택 가능한 입력 감도, 자극 또는 펄스 생성을 위한 2개의 독립적인 아날로그 출력 및 트리거 입력이 있는 2채널, 16비트 해상도 레코더인 2/26 모델용입니다. PowerLab은 다양한 저역 통과 필터, AC 또는 DC 커플링 및 적응형 주전원 필터를 갖추고 있습니다. 이 장치에는 Windows 또는 Mac OS 컴퓨터에 연결하기 위한 USB 인터페이스와 s가 있습니다.amp채널당 100,000초의 링 속도.
Prism8GraphPadN/A이 프로그램은 " 세그먼트 선형 회귀" 데이터 분석 옵션. 이 프로그램은 프로그래밍이 필요하지 않으며 Mac 및 Windows 운영 체제와 모두 호환됩니다.
RR ProjectN/A이것은 UNIX 플랫폼, Windows 및 Mac 운영 체제와 호환되는 통계 컴퓨팅을 위한 무료 소프트웨어입니다. 이 프로그램은 "를 사용하여 Arrhenius 파괴 온도를 계산하는 데에도 사용할 수 있습니다. 세그먼트화" 패키지. r-project.org 웹 사이트를 통해 온라인으로 사용할 수 있는 다양한 자습서 및 사용자 가이드가 있습니다.
로진 코어 솔더그레인저331856이 제품은 직경이 0.031인치(0.76mm)이며 스피커 와이어(전극에 사용되는 자기 와이어와 유사한 게이지)를 납땜하는 데 사용하기에 이상적입니다.
SASSAS InstituteN/A이 프로그램은 Arrhenius 파괴 온도를 계산하기 위한 추가 옵션을 제공합니다. 그러나 프로그래밍이 필요하며 Mac 운영 체제와 호환되지 않습니다.
SigmaPlot시스템 소프트웨어, Inc.N/A이것은 Arrhenius 파괴 온도의 통계적 측정을 위해 저자가 선호하는 프로그램입니다. 그만큼 " 회귀 마법사" 사용하기 쉽고 프로그래밍이 필요하지 않습니다. 구매하기 전에 30일 무료 평가판 라이선스를 얻을 수 있습니다. 그러나 PC 컴퓨터와만 호환됩니다.
T 형 포드ADInstrumentsML3120-50 °C의 온도 측정에 적합합니다. C는 T형 열전대를 사용합니다.
T형 열전대 프로브AD MLT1401연결을 위해 T형 포드와 호환됩니다. 최대 150 °의 온도를 측정합니다. C, 다양한 용액, 반고체 및 조직 (이식 용 바늘 포함)에 담그기에 적합합니다. 이 제품은 내화학성 테프론으로 피복되어 있고 리드 길이가 1.0m인 직경 0.6mm의 절연 프로브입니다.
UV 케이블 타이, 블랙홈 디포295813이것은 8인치(20.32cm), 검은색 케이블 타이 100팩용입니다. 그러나 테스트 대상의 크기에 따라 더 작거나 더 큰 케이블 타이가 필요할 수 있습니다. 이 품목 및 이와 유사한 다른 품목은 모든 주택 개조 상점에서 구입할 수 있습니다.

참고문헌

  1. Stocker, T. F., et al. Climate Change 2013: The Physical Basis. Contribution of Working Group I to the Fifth Assessment Report of the Intergovernmental Panel on Climate Change. , Cambridge University Press. Cambridge, UK, and New York, NY, USA. (2013).
  2. Pershing, A. J., et al.

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