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Behavior

Flypub इथेनॉल प्रेरित व्यवहार निषेध और संवेदीकरण का अध्ययन करने के लिए

Published: May 18, 2020 doi: 10.3791/61123
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1
1Department of Biological Sciences, University of Texas at El Paso
* These authors contributed equally

Summary

फ्लाईपब परख उन व्यवहारों को मापता है जो फल उड़ते हैं ड्रोसोफिला मेलानोगैस्टर इथेनॉल के प्रभाव में प्रदर्शित होता है। परख आसानी से सभी स्तरों पर प्रयोगकर्ताओं द्वारा महारत हासिल की जा सकती है और मादक द्रव्यों के सेवन और लत अध्ययन की सुविधा, विभिन्न वाष्पीकृत उत्तेजनाओं के लिए लागू किया जा सकता है।

Abstract

शराब का उपयोग विकार (AUD) हमारे समाज में एक गंभीर समस्या बनी हुई है । लत के लिए प्रभावी हस्तक्षेप विकसित करने के लिए, अंतर्निहित न्यूरोबायोलॉजिकल तंत्र को समझना महत्वपूर्ण है, जिसके लिए विविध प्रयोगात्मक दृष्टिकोण और मॉडल सिस्टम की आवश्यकता है। मादक पेय पदार्थों का मुख्य घटक इथेनॉल है, जो पुरानी सेवन पर केंद्रीय तंत्रिका तंत्र और व्यवहार में अनुकूली परिवर्तन का कारण बनता है। व्यवहार संवेदीकरण (यानी, बढ़ी हुई प्रतिक्रियाएं) विशेष रूप से अंतर्निहित लत में एक प्रमुख अनुकूली परिवर्तन का प्रतिनिधित्व करती है। पशु मॉडल में अधिकांश इथेनॉल-प्रेरित व्यवहार संवेदीकरण अध्ययन इथेनॉल के लोकोमोटर सक्रिय प्रभाव पर आयोजित किए गए हैं। इथेनॉल का एक प्रमुख प्रभाव व्यवहार निषेध है। इथेनॉल के निषेध प्रभाव के लिए व्यवहार संवेदीकरण, हालांकि, कम प्रतिनिधित्व किया जाता है। इस मुद्दे को हल करने के लिए, हमने फ्लाईपब परख विकसित की है जो ड्रोसोफिला मेलानोगैस्टरमें आवर्ती इथेनॉल एक्सपोजर पर बाधा वाली प्रेमालाप गतिविधियों में बढ़ी हुई वृद्धि को मापने की अनुमति देता है। यहां, हम इथेनॉल एक्सपोजर कक्षों की असेंबली, परख स्टेशन की स्थापना, फ्लाई केयर और संग्रह के लिए मानदंड, इथेनॉल डिलीवरी, डिस्टेंस कोर्टशिप गतिविधियों की मात्रा, डेटा प्रोसेसिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण सहित कदम-दर-कदम Flypub परख की रिपोर्ट करते हैं। इसके अलावा प्रदान की गई है कि कैसे महत्वपूर्ण कदम ों को परेशान करना है, सीमाओं पर काबू पाने और अतिरिक्त इथेनॉल-प्रेरित व्यवहार का आकलन करने के लिए इसकी उपयोगिता का विस्तार करना है। ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में शक्तिशाली आनुवंशिक उपकरणों के संयोजन में फ्लाईपब परख इथेनॉल-प्रेरित व्यवहार संवेदीकरण अंतर्निहित तंत्र की खोज करने के कार्य को सुगम बनाएगा।

Introduction

शराब दुनिया में सबसे आसानी से उपलब्ध और व्यापक रूप से खपत दवाओं में से एक है । इसमें दुरुपयोग और लत की उच्च क्षमता है; हालांकि, इस प्रक्रिया में अंतर्निहित तंत्र को अधूरा समझा जाता है। इथेनॉल अकशेरुकी, उत्साह, संज्ञानात्मक हानि, अतिसक्रियता, मोटर नियंत्रण की हानि और कीड़े में विच्छेदन को प्रेरित करता है1,फल मक्खियों1,,2,,3,चूहे4,चूहे5 और मनुष्य6,आम न्यूरोबायोलॉजिकल घटकों को अकशेरुकी से मनुष्यों सहित स्तनधारियों के लिए इथेनॉल के प्रभाव की मध्यस्थता का संकेत देते हैं। क्रोनिक इथेनॉल का सेवन तंत्रिका अनुकूलन और व्यवहार संशोधनों का कारण बनता है जो AUD को रेखांकित करते हैं। अनुकूलन ों में से एक व्यवहार संवेदीकरण है जिसे इथेनॉल7,8,9 या अन्य नशे की लत वालेपदार्थों 10,,11,12के बार - बार अनुभवों के साथ संवर्धित प्रतिक्रिया के रूप में परिभाषित किया गया है ।

दशकों से, इथेनॉल-प्रेरित व्यवहार संवेदीकरण (एआईबीएस) पर अध्ययनों ने लोकोमोटर-उत्तेजक प्रभाव पर ध्यान केंद्रित किया है, जिसका उपयोग7,8,,9,,13पर एक जश्न प्रतिक्रिया के लिए प्रॉक्सी के रूप में किया जाता है।7 उदाहरण के लिए, चूहों या चूहों पर दोहराया (हर 24, 48 या 72 एच) इथेनॉल प्रशासन संवर्धित लोकोमोटर गतिविधि प्रदर्शित करता है जैसा कि गति8,,14,,,15,,16,17,,18,,19,,20,,21से मापा जाता है। इसी तरह, पहले एक्सपोजर के बाद इथेनॉल वाष्प 4 घंटे के दूसरे एक्सपोजर के अधीन फल मक्खियों ने बढ़ी हुई लोकोमोटर प्रतिक्रिया को गति के रूप में22चलने से मापा। जबकि फल मक्खियों में लोकोमोटर उत्तेजक प्रभाव के लिए एआईबीएस अंतर्निहित तंत्र पर कोई जानकारी उपलब्ध नहीं है, चूहों और चूहों में अध्ययनों ने आणविक और सिग्नलिंग घटकों (उदाहरण के लिए, डोपामाइन, ग्लूटामेट और गाबा सिस्टम) के साथ-साथ तंत्रिका सब्सट्रेट्स और सर्किट (उदाहरण के लिए, वेंट्रल टेगमेंटल क्षेत्र, नाभिक एक्यूबेन्स, एमिग्डाला और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स) का पर्दाफाश किया है जो ईबीबीएस6,,9,,23के लिए प्रमुख भूमिकानिभाते हैं।

अहिचक इथेनॉल का एक प्रमुख प्रभाव है और व्यवहार की अभिव्यक्ति की ओर जाता है जो आमतौर पर प्रतिबंधित होते हैं। यह प्रभाव मोटर, भावनात्मक, सामाजिक, यौन और संज्ञानात्मक कार्यों पर लगाया जाता है, जिससे मनुष्यों और पशु मॉडलों में अनुचित यौन व्यवहार, मौखिक या शारीरिक आक्रामकता और आवेगी कृत्य हो सकते हैं24,,25,,26,,27,,28,,29। मशीनी अध्ययन के लिए पशु मॉडलों में इथेनॉल-प्रेरित निषेध की जांच की गई है और उनमें कृंतक और बंदरों में मोटर आवेगशीलता और आक्रामकता के साथ - साथ कीड़े6,9,,24,,28,29,,30में अहिचक को फोर्जिंग करना शामिल है । हमने दिखा दिया है कि फल मक्खियों इथेनॉल31के प्रभाव में यौन व्यवहार को बाधित दिखाते हैं । विशेष रूप से, जंगली प्रकार के पुरुष इथेनॉल31 के बिना शायद ही कभी अन्य पुरुषों को अदालत में उड़ते हैं और जब वे करते हैं, तो दरबारी सक्रिय रूप से पुरुषों को प्रणय निवेदन अस्वीकार करते हैं। इथेनॉल के प्रभाव में, हालांकि, पुरुष मक्खियां अन्य पुरुषों की ओर अधिक प्रणय निवेदन दिखाती हैं और शिरीण कम अस्वीकृति का प्रदर्शन करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप समग्र रूप से बढ़ाया गया इंटरमाले प्रेमालाप होता है। विशेष रूप से, मक्खियों आवर्ती इथेनॉल एक्सपोजर पर अहिचक प्रभाव के लिए व्यवहार संवेदीकरण विकसित करते हैं, जो एआईबीएस31,,32का अध्ययन करने के लिए एक अनूठी प्रणाली के रूप में कार्य करता है।

इस रिपोर्ट में, हम फल मक्खी ड्रोसोफिला मेलानोगैस्टरमें इथेनॉल-प्रेरित निषेध और संवेदीकरण का अध्ययन करने के लिए फ्लाईपब परख और डेटा की स्थापना, प्रदर्शन, समस्या निवारण और विश्लेषण करने का वर्णन करते हैं। इसकी उपयोगिता और प्रभावशीलता प्रदान करने के लिए, हमने जंगली प्रकार के कैंटन-एस (सीएस;नियंत्रण फ्लाई स्ट्रेन) के साथ-साथ टायरामिन में कमी आने वाली मक्खियों के साथ परीक्षण किया। ओए अकशेरुकी33,34 में एक प्रमुख न्यूरोमॉड्यूलेटर है और मक्खियों22में इथेनॉल सहिष्णुता के विकास में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है । हम यहां पहली बार रिपोर्ट करते हैं कि एआईबीएस के लिए ओए महत्वपूर्ण है ।

Protocol

नोट: प्रोटोकॉल अनुभाग प्रारंभिक, Flypub परख और विश्लेषण कदम है कि (1) चैंबर की विधानसभा, (2) मक्खी देखभाल और संग्रह, (3) परख स्टेशन सेटअप, (4) इथेनॉल जोखिम, (5) प्रणय निवेदन स्कोरिंग और डेटा विश्लेषण, और (6) सांख्यिकीय विश्लेषण शामिल विवरण । Flypub परख और विश्लेषण के संचालन के लिए महत्वपूर्ण कदम एक कार्यप्रवाह(चित्रा 1)में चित्रित किया गया है ।

1. चैंबर की विधानसभा(चित्रा 2)

  1. रेजर ब्लेड का उपयोग करके 25 मिलील के निशान पर गोल ड्रोसोफिला बोतल के नीचे के हिस्से को काट लें।
  2. एक छेद, व्यास में 5 मिमी, एक गर्म टांका लोहे का उपयोग कर बोतल के 50 मीटर निशान पर बनाओ।
    नोट: यह पहुंच बिंदु है जहां मक्खियों को कक्ष में स्थानांतरित किया जाएगा।
  3. 75 मीटर के निशान पर ड्रोसोफिला बोतल में फिट होने के लिए एक सर्कल में एक जाल शीट काटें, व्यास में 54 मिमी।
  4. गर्म गोंद का उपयोग कर बोतल के 75 mL निशान पर जाल सुरक्षित।
  5. पॉली कार्बोनेट प्लास्टिक शीट को एक सर्कल में काट लें, व्यास में 70 मिमी।
  6. गर्म गोंद का उपयोग करके 25 मीटर के निशान (चरण 1.1 में बनाया गया नीचे खुला क्षेत्र) पर बोतल में पॉली कार्बोनेट प्लास्टिक शीट संलग्न करें।
  7. यह सुनिश्चित करने के लिए वजन का उपयोग करके दबाव कम करें कि पॉली कार्बोनेट दौर नीचे से दृढ़ता से जुड़ा हुआ है।
  8. किसी भी गंध को हटाने के लिए इथेनॉल के साथ पब धोएं और आसुत पानी चलाने के तहत उन्हें कई बार कुल्ला करें। अतिरिक्त पानी को हटाने के लिए पब को सख्ती से हिलाएं।
  9. कमरे के तापमान पर कागज तौलिए पर क्षैतिज रूप से नीचे बिछाने के द्वारा पब सूखी ।

2. फ्लाई केयर और संग्रह

  1. मक्खियों को मानक कॉर्नमील/आगर/चीनी/खमीर खाद्य माध्यम (https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/harvardfood.html) पर बनाए रखें ।
  2. कार्बन डाइऑक्साइड (सीओ2)संज्ञाहरण के तहत एक से दो दिन पुराने पुरुष मक्खियों को 33 के समूह में एकत्र करें, जो एक डेटा बिंदु का प्रतिनिधित्व करते हैं। बरकरार आकृति विज्ञान के साथ मक्खियों का चयन करने के लिए सुनिश्चित करें और उन्हें ठीक करने के लिए एक खाद्य शीशी में डाल दिया।
    नोट: प्रति समूह दो या तीन कम मक्खियां सहनीय हैं। व्यवहार प्रयोगात्मक सेटिंग्स के प्रति संवेदनशील हो सकता है इस प्रकार प्रति पब कुल फ्लाई नंबर को नियंत्रण फ्लाई लाइन के साथ समायोजित करने की आवश्यकता हो सकती है।
    नोट: सुनिश्चित करें कि भोजन शीशी पक्ष पर रखी गई है ताकि एनेस्थेटाइज्ड मक्खियां भोजन के लिए अटक न जाएं।
  3. मक्खियों को कम से कम 50% सापेक्ष आर्द्रता और इथेनॉल एक्सपोजर से पहले 2 दिनों के लिए 12 घंटे का प्रकाश/
    नोट: सीओ2 क्लीयरेंस किसी भी सीओ2-प्रेरितशारीरिक या व्यवहार प्रभावों को खत्म करने के लिए महत्वपूर्ण है जो इथेनॉल-प्रेरित प्रतिक्रियाओं को बदल सकता है।
  4. इथेनॉल एक्सपोजर और स्कोरिंग प्रेमालाप व्यवहार करने वाले प्रयोगकर्ताओं को ब्लाइंड फ्लाई जीनोटाइप या उपचार की स्थिति के लिए कोड का उपयोग करें।
    नोट: ब्लाइंड परीक्षण प्रयोगात्मक पूर्वाग्रह को खत्म करने में मदद करते हैं।

3. परख स्टेशन की स्थापना(चित्रा 3A)

  1. एक अच्छी तरह से हवादार कमरे में एक बेंच शीर्ष पर एक संलग्न केंद्र हाथ के साथ एक प्रतिलिपि स्टैंड स्थापित करें ।
    नोट: कॉपी स्टैंड अनिवार्य नहीं है। कोई भी मचान उपकरण जो स्तर का मंच प्रदान करता है, पर्याप्त है।
  2. स्टैंड के लिए दो पार्श्व हथियारों को क्लैंप करें, प्रत्येक हाथ के साथ स्टैंड के केंद्र से लगभग 18 सेमी बाहर।
  3. स्टैंड के प्रत्येक हाथ पर एक फ्लोरोसेंट लाइट और बीच में एक रखें।
  4. आधार के केंद्र के ऊपर लगभग 38 सेमी, केंद्र हाथ करने के लिए वीडियो रिकॉर्डर संलग्न करें। यह एक शीर्ष दृश्य से पब रिकॉर्ड होगा ।
  5. सफेद कागज के साथ स्टैंड के आधार को कवर करें, जो इसके विपरीत बनाने के लिए काले रंग की मक्खियों की कल्पना करने में मदद करता है।
  6. एक्सपोजर के दिन के दौरान फ्लोरोसेंट लाइट्स और वीडियो कैमरा से जुड़ा कंप्यूटर चालू करें जो कॉपी स्टैंड(चित्रा 3ए)से जुड़ा हुआ है।
    नोट: प्रकाश तीव्रता 2100-2200 लक्स स्कोरिंग के लिए दर्ज व्यवहार की अच्छी गुणवत्ता प्रदान करता है । हालांकि, प्रयोगशाला में परिवेश प्रकाश की स्थिति इथेनॉल-प्रेरित प्रणय गतिविधियों का निरीक्षण करने के लिए पर्याप्त हैं।
  7. चित्रा 3 बीमें चित्रित इथेनॉल एक्सपोजर के लिए उपयोग की जाने वाली वस्तुओं को तैयार करें।
  8. प्रयोगों के एक सेट के लिए छह साफ, इकट्ठे पब इकट्ठा और उन्हें 6 के माध्यम से कोड 1 के साथ लेबल।
    नोट: फ्लाई जीनोटाइप या उपचार की स्थिति पर यादृच्छिक कोड रखना सुनिश्चित करें।

4. इथेनॉल एक्सपोजर (चित्रा 3)

  1. धीरे से एक छोटे से कीप का उपयोग कर 50 मीटर निशान पर छेद के माध्यम से एक Flypub कक्ष में 33 पुरुषों के एक समूह को स्थानांतरित करें।
    नोट: मक्खियों के लिए यांत्रिक तनाव को कम करने के लिए, हस्तांतरण के दौरान पब के नीचे माउस पैड या किसी भी तकिया सामग्री रखें।
  2. छेद को टेप से ढक दें।
    नोट: टेप छेद बंद करने के लिए प्रयोग किया जाता है, पब से बाहर भागने से मक्खियों को रोकने ।
  3. 1 से 6 तक मंच पर पब संरेखित करें।
  4. 10 मिन(चित्रा 3 डी)के लिए कक्ष में मक्खियों को acclimate ।
  5. फोकस, ज़ूम और चमक सहित कैमरा सेटिंग्स को समायोजित करें, और एक बेसल प्रेमालाप स्तर को मापने के लिए अनुकूलन के अंतिम 5 मिन को रिकॉर्ड करें।
    नोट: एक पब से प्रकाश प्रतिबिंब द्वारा उत्पन्न चकाचौंध को खत्म करने के लिए, कोण को समायोजित करने के लिए पब के तल पर प्रयोगशाला पोंछे (आमतौर पर 4 परतें या 1 मिमी मोटाई से कम) रखें।
  6. साफ कैंची के साथ चार बराबर चतुर्भुज में एक पैड काटकर इथेनॉल वितरण के लिए कपास पैड तैयार करें और फिर कोनों को ट्रिम करें ताकि इसे अनुकूलन के दौरान पेट्री डिश में फिट किया जा सके(चित्रा 3 C)।
    नोट: कॉटन पैड को संभालने के लिए नंगे हाथों का इस्तेमाल न करें। गंध के किसी भी संभावित हस्तांतरण से बचने के लिए कपास पैड को संभालने के लिए संदंश का उपयोग करें।
  7. प्रत्येक पेट्री डिश में एक कॉटन पैड जोड़ें।
  8. प्रत्येक कपास पैड में 95% इथेनॉल का 1 मिलील जोड़ें, पैड के पूरे क्षेत्र पर समान रूप से वितरित किए जाने वाले इथेनॉल समाधान के लिए सुनिश्चित करें।
  9. तेजी से इथेनॉल वाष्पीकरण से बचने के लिए डबल-स्तरित प्रयोगशाला पोंछे के साथ कवर करें।
  10. इथेनॉल से लथपथ कॉटन पैड और डबल स्तरित लैब युक्त छोटे पेट्री डिश को एक्सिजन के बाद पब के बॉटम ओपनिंग के जरिए वाइप्स रखें ।
  11. मंच पर पब संरेखित करें, रिकॉर्डिंग शुरू करें और साथ ही एक टाइमर शुरू करें।
  12. इथेनॉल एक्सपोजर के दौरान मक्खियों वाले पब को रिकॉर्ड करें जब तक कि मक्खियां सेडेशन के कारण प्रणय निवेदन या आगे बढ़ने से न रोक दें।
  13. प्रत्येक पब से इथेनॉल युक्त पेट्री डिश को एक स्पैटुला के साथ निकालें जब 90% से अधिक मक्खियों को सेडेट किया जाता है।
  14. धीरे स्थानांतरण पब में ५० mL निशान पर छेद के माध्यम से अपने सौंपा शीशियों को वापस मक्खियों ।
    नोट: हस्तांतरण में सहायता करने के लिए भोजन शीशियों के शीर्ष पर एक कीप रखें। भोजन की शीशियों के किनारे सेसित मक्खियों को भोजन में फंसने से रोकने के लिए सुनिश्चित करें।
  15. किसी भी गंध को दूर करने के लिए इथेनॉल के साथ पब को साफ करें और आसुत पानी चलाने के तहत उन्हें कई बार कुल्ला करें। अतिरिक्त पानी को हटाने के लिए पब को सख्ती से हिलाएं।
  16. कमरे के तापमान पर कागज तौलिए पर क्षैतिज रूप से नीचे बिछाने के द्वारा पब सूखी ।
  17. मक्खियों को 25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में कम से ५०% सापेक्ष आर्द्रता और 12 घंटे प्रकाश/12 एच डार्क साइकिल के साथ रखें ।
  18. लगातार छह दिनों तक हर 24 घंटे के चरणों को दोहराएं और किसी भी सर्कैडियन प्रभाव से बचने के लिए दिन के एक ही समय में इथेनॉल एक्सपोजर का संचालन करना सुनिश्चित करें।
    नोट: स्वस्थ मक्खियों को बनाए रखने के लिए हर 2 - 3 दिनों में भोजन की शीशियों को बदलें।

5. प्रणय निवेदन स्कोरिंग और डेटा विश्लेषण(चित्रा4-6)

  1. रिकॉर्ड किए गए वीडियो को मीडिया प्लेयर (उदाहरण के लिए, वीएलसी) का उपयोग करके खोलें और वीडियो में ज़ूम करें ताकि स्पष्ट रूप से स्कोर करने के लिए मक्खियों का निरीक्षण किया जा सके(चित्र4A)।
  2. वीडियो(चित्रा 4B)के लिए समय कोड संलग्न करें ।
  3. निम्नलिखित, एकतरफा विंग विस्तार, प्रेमालाप श्रृंखला, प्रेमालाप सर्कल, पेट झुकने और हर 10 एस समय ब्लॉक31 (चित्रा 5)के लिए बढ़ते सहित प्रणय गतिविधियों में लगे पुरुषों की संख्या की गणना करें।
  4. हर 10 एस टाइम ब्लॉक के लिए प्रेमालाप प्रदर्शित करने वाले पुरुषों की संख्या को वर्कशीट(चित्रा 6A)में दर्ज करें।
  5. एक प्रतिनिधि डेटा बिंदु(चित्रा 6B)के रूप में लगातार तीन 10 एस समय ब्लॉकों में पुरुषों प्रणय निवेदन की अधिकतम संख्या का उपयोग करें ।
  6. उच्चतम मूल्य वाले लगातार 10 डेटा बिंदुओं के औसत की गणना करें(चित्रा 6 C)और यह प्रति पब इंटरमाले प्रेमालाप(चित्रा 6A)के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है।

6. सांख्यिकीय विश्लेषण (पूरक चित्रा 1)

  1. ओपन स्टैटिस्टिकल एनालिसिस सॉफ्टवेयर (जैसे, मिनिटैब 17) और वर्कशीट में प्रेमालाप डेटा जोड़ें।
    नोट: किसी भी सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जा सकता है।
  2. डेटा के वितरण (या तो सामान्य या गैर-सामान्य वितरण) का निर्धारण करने के लिए, स्टेट टैब पर जाएं, बुनियादी सांख्यिकी काचयन करें, और सामान्यता परीक्षण विकल्प(पूरक चित्रा 1Ai)पर क्लिक करें।
  3. वेरिएबलमें, अलग-अलग कॉलम (अध्ययन के तहत जीनोटाइप या उपचार के डेटा सेट का प्रतिनिधित्व करने वाला प्रत्येक कॉलम) चुनें, एंडरसन-डार्लिंग परीक्षण चुनें, और ओके (पूरक चित्रा 1Aii)पर क्लिक करें।
    नोट: सामान्यता संभावना प्लॉट गणना पी-वैल्यू दिखाएगा: यदि पी-वैल्यू 0.05 से अधिक है, तो डेटा सामान्य रूप से वितरित किया जाता है। यदि पी-वैल्यू 0.05 से कम है, तो डेटा गैर-सामान्य रूप से वितरित किया जाता है(पूरक चित्रा 1Aiii)।
  4. कई समूहों की तुलना के लिए, डेटा टैब पर क्लिक करके तुलना करने के लिए कॉलम को ढेर करें, स्टैकका चयन करें, और फिर कॉलम (पूरक चित्रा 1Bi)।
  5. स्टैक कॉलम विंडो में, स्टैक किए जाने के लिए डेटा कॉलम का चयन करें, उपस्क्रिप्ट (जैसे, डेटा समूह पहचान) को निरूपित करने के लिए नामित अगले कॉलम के साथ नई वर्कशीट या वर्तमान वर्कशीट के कॉलम में किए गए स्टैकिंग का चयन करें; पूरक चित्रा 1Bii-1Biii)।
  6. स्टेट टैब पर क्लिक करें, ANOVA परीक्षण का चयन करें, जनरल लीनियर मॉडल का चयन करें और फिर फिट जनरल लीनियर मॉडल (पूरक चित्रा 1Ci)पर क्लिक करें ।
  7. सामान्य लीनियर मॉडल विंडो में, प्रतिक्रियाओं बॉक्स में तुलना किए जाने वाले स्तंभों का चयन करें, कारक बॉक्स में सबस्क्रिप्ट के साथ कॉलम का चयन करें और ओकेक्लिक करें, जो सांख्यिकीय विश्लेषण परिणामों(पूरक चित्रा 1Cii-1Ciii)की ओर जाता है।
  8. सामान्य रूप से वितरित डेटा वाले दो समूहों की तुलना के लिए, स्टेट टैब पर क्लिक करें, बुनियादी सांख्यिकीका चयन करें, और 2-नमूना टी-टेस्ट (पूरक चित्रा 1Di)का चयन करें।
  9. मतलब विंडो के लिए 2-नमूना टी में, प्रत्येक नमूना काचयन अपने कॉलम में है, एक ड्रॉपडाउन बॉक्स से, नमूना 1 और नमूना 2 बक्से में तुलना करने के लिए दो समूहों का चयन करें और फिर ओकेपर क्लिक करें, जो सांख्यिकीय विश्लेषण परिणामों(पूरक चित्रा 1Dii-1Diii)की ओर जाता है।
  10. गैर-सामान्य रूप से वितरित डेटा वाले दो समूहों की तुलना के लिए, स्टेट टैब पर जाएं, नॉनपैरामेट्रिक्स का चयन करें और क्लिक करें मान-व्हिटनी (पूरक चित्रा 1Ei)
  11. मान-व्हिटनी विंडो में, पहले नमूना और दूसरे नमूना बक्से में तुलना करने के लिए दो समूहों का चयन करें और फिर ओकेपर क्लिक करें, जो सांख्यिकीय विश्लेषण परिणामों(पूरक चित्रा 1Eii-1Eiii)की ओर जाता है।
  12. गैर-सामान्य रूप से वितरित डेटा के तीन या अधिक समूहों की तुलना के लिए, स्टेट टैब पर जाएं, नॉनपैरामेट्रिक्सका चयन करें, और फिर क्रुस्कल-वालिस परीक्षण (पूरक चित्रा 1Fi)पर क्लिक करें।
  13. क्रुस्कल-वालिस विंडो में, रिस्पांस बॉक्स में तुलना किए जाने वाले कॉलम का चयन करें, फैक्टर बॉक्स में सबस्क्रिप्ट के साथ कॉलम का चयन करें और ओकेक्लिक करें, जो सांख्यिकीय विश्लेषण परिणामों(पूरक चित्रा 1Fii-1Fiii)की ओर जाता है।

Representative Results

यह अनुभाग एक प्रतिनिधि Flypub प्रयोग के परिणामों को दर्शाता है। ड्रोसोफिला पुरुष शायद ही कभी अन्य पुरुषों को35,36पर दरबार लगाते हैं . पहले इथेनॉल एक्सपोजर के दौरान, जंगली प्रकार कैंटन-एस (सीएस)पुरुषों ने बाधा वाले इंटरमाले प्रेमालाप31 (चित्रा 7A)में एक छोटी लेकिन तुच्छ वृद्धि का प्रदर्शन किया। हालांकि, सीएस पुरुषों ने बाद में इथेनॉल एक्सपोजर (ANOVA GLM, सीएस: आर2=83, एफ(5,66) = 65.21, पी एंड एलटी; 0.0001) में बाधा वाली प्रेमालाप गतिविधि में बढ़ी हुई वृद्धि दिखाई; n = 12; चित्रा 7A),जो इथेनॉल के निषेध प्रभाव के लिए व्यवहार संवेदीकरण इंगित करता है। हमने पहले दिखाया है कि इस प्रकार के एआईबीएस को मशरूम न्यूरॉन्स31,32में डोपामाइन और डोपामाइन रिसेप्टर डोपईसीआर की आवश्यकता होती है ।

यह पहचानने के लिए कि क्या एआईबीएस में अतिरिक्त न्यूरोमोडुलाटर्स शामिल हैं, हमने मक्खियों का परीक्षण करके ओए की भूमिका की जांच की(टीएच; एनएम18 नल एलील)37,,38 कमी टायरामिन हाइड्रोक्साइल, ओए बायोसिंथेसिस में दर-सीमित एंजाइम, इस प्रकार ओए बायोसिंथेसिस में कमी। सीएस जेनेटिक बैकग्राउंड में टीएएच पुरुष (जर्मनी के लीपजिग विश्वविद्यालय के डॉ एंड्रियास थम से एक तरह का उपहार) ने दैनिक इथेनॉल एक्सपोजर (एनोवा जीएलएम, टीएच: आर2=0.67, एफ(5,66) = 27.60, पी एंड एलटी; 0.0001) पर संवेदनशील डिबेट्ड प्रेमालाप प्रतिक्रिया प्रदर्शित की; n = 12; चित्रा 7B) लेकिन सीएस (ANOVAGLM, इंटरैक्शन इफेक्ट: एफ = 2.50, पी एंड एलटी;0.034) की तुलना में कम स्तर पर। पोस्ट हॉक विश्लेषण पर, टीएच पुरुषों ने प्रत्येक एक्सपोजर पर इंटरमाले प्रेमालाप के निचले स्तर का प्रदर्शन किया जो सीएस (दो-नमूना टी-टेस्ट: पी एंड एलटी; EXP4 में पी एंड एलटी; 0.002, EXP5 में पी एंड एलटी; 0.004, पी एंड एलटी; EXP6 में 0.021) की तुलना में छठे इथेनॉल एक्सपोजर के माध्यम से चौथे के दौरान सबसे स्पष्ट है; n = 12; चित्रा 7C)। एक साथ, इन परिणामों से संकेत मिलता है कि ओए इथेनॉल के निषेध प्रभाव के लिए EIBS में एक भूमिका निभा सकता है । इससे भी महत्वपूर्ण बात, ये डेटा सेट स्पष्ट रूप से इथेनॉल-प्रेरित निषेध और संवेदीकरण का अध्ययन करने में फ्लाईपब परख की उपयोगिता और प्रभावशीलता को प्रदर्शित करते हैं।

Figure 1
चित्रा 1: Flypub परख कार्यप्रवाह । फ्लाईपब परख के संचालन के लिए महत्वपूर्ण चरणों को रेखांकित करते हुए एक वर्कफ़्लो आरेख। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: Flypub चैंबर सामग्री और विधानसभा। (A)फ्लाईपब चैंबर बनाने के लिए आवश्यक सामग्री में शामिल है(i)गर्म गोंद बंदूक गोंद छड़ी,(ii)गर्म गोंद बंदूक,(iii)रेजर ब्लेड,(iv)टांका लोहा,(v)शासक,(vi)जाल,(सातवीं)पॉलीकार्बोनेट प्लास्टिक शीट, और(आठवीं)गोल-नीचे ड्रोसोफिला बोतल। (ख)फ्लाईपब चैंबर असेंबली का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: इथेनॉल एक्सपोजर। (A)एक पूरी तरह से इकट्ठे Flypub स्टेशन । (ख)इथेनॉल एक्सपोजर के लिए आवश्यक सामग्री में शामिल हैं(i)P1000 माइक्रोपाइपेट,(ii)टेप,(iii)कॉटन पैड,(iv)पेट्री डिश,(v)लैब वाइप्स,(vi)छोटी कीप,(vi)टाइमर,(आठवीं)मिड-साइज कीप,(नौवीं)माउस पैड,(एक्सी)कैंची,(ग्यारहवीं)95% इथेनॉल,(बारहवीं)संदंश और(xiii)स्पैटुल। (ग)कपास पैड में कटौती करने के तरीके पर कदम । (D)मंच पर गठबंधन पब की शीर्ष दृश्य छवि । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: व्यवहार स्कोरिंग के लिए वीडियो सेटअप। दिखाया गया हैकिवीडियो पर ज़ूम इन करने के तरीके पर स्टेप-बाय-स्टेप गाइड है और(बी)व्यवहार स्कोरिंग के लिए वीएलसी मीडिया प्लेयर में टाइमकोड फ़ाइल को कैसे डालें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5: पुरुष प्रणय निवेदन व्यवहार । प्रतिनिधि छवियां(ए)प्रेमालाप गीत,(बी)प्रेमालाप श्रृंखला,(सी)प्रेमालाप सर्कल(डी)पेट झुकने और(ई)बढ़ते के लिए निम्नलिखित और एकतरफा पंख विस्तार सहित ड्रोसोफिला पुरुष प्रणय व्यवहार को दर्शाती हैं जो व्यवहार स्कोरिंग के लिए उपयोग की जाती हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6: डेटा इनपुट और विश्लेषण। (A)हर 10 एस टाइम ब्लॉक में प्रेमालाप में लगे पुरुषों की संख्या को वर्कशीट में लिखा जाता है । लगातार तीन 10 एस समय ब्लॉक (हरे तीर) के प्रणय पुरुषों की सबसे अधिक संख्या एक प्रतिनिधि डेटा बिंदु के रूप में प्रयोग किया जाता है । अधिकतम मूल्य वाले लगातार 10 डेटा अंक (ब्लू या ऑरेंज ब्रैकेट) का औसत प्रति पब अंतर-पुरुष प्रेमालाप के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है [नारंगी ब्रैकेट; मैक्स (औसत), काला तीर]। (बी, सी) वर्कशीट सूत्र अधिकतम प्रतिनिधि डेटा बिंदु और प्रति पब लगातार 10 प्रतिनिधि डेटा अंक के अधिकतम औसत की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 7
चित्रा 7: इथेनॉल प्रेरित व्यवहार निषेध और सीएस और टीमेंसंवेदीकरण। (ए, बी) सीएस और tटीएच पुरुषों ने दोहराया इथेनॉल एक्सपोजर (ANOVA GLM, सीएस: R2=0.83, एफ(5,66)= 65.21, पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.0001) के साथ संवेदनशील प्रेमालाप निषेध प्रदर्शित किया; टीएच: आर2=0.67, एफ(5,66)= 27.60, पी एंड एलटी; 0.0001; n = 12) । (ग) टीएच पुरुषों ने सीएस (एन = 12) की तुलना में कम बाधा दिखाई। पोस्ट हॉक विश्लेषण ों के पी मान लाइन के ऊपर दिखाए जाते हैं। प्रत्येक इथेनॉल एक्सपोजर के लिए उत्पन्न वीडियो से इंटरमाले प्रेमालाप गतिविधि का विश्लेषण किया गया था। सभी डेटा मतलब के साधन ± मानक त्रुटि के रूप में सूचित कर रहे हैं । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

पूरक चित्रा 1: सांख्यिकीय विश्लेषण। मिनीटैब 17 सॉफ्टवेयर में कदम कैसे प्रदर्शन करने के लिए(A)सामान्यता परीक्षण,(बी)डेटा स्टैकिंग,(C)जनरल रैखिक मॉडल ANOVA परीक्षण,(डी)दो नमूना टी परीक्षण,(ई)मान व्हिटनी परीक्षण और(एफ)Kruskal-Wallis परीक्षण । कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

इस रिपोर्ट में, हमने फ्लाईपब परख के सेटअप और विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन किया है; एक उपन्यास विधि को मापने के लिए कैसे आवर्ती इथेनॉल जोखिम बाधा प्रणय निवेदन और व्यवहार संवेदीकरण से चलाता है । हालांकि Flypub परख अपेक्षाकृत सीधा है, कई कदम विश्वसनीय परिणाम सुनिश्चित करने के लिए देखभाल और ध्यान की आवश्यकता है । सबसे पहले, परीक्षण के लिए मक्खियों को पूरी तरह से वर्णित किया जाना चाहिए (यानी, पूरी तरह से विकसित वयस्क मक्खियां), स्वस्थ और बरकरार। विकृति या नुकसान विशेष रूप से उनके पंखों या पैरों में पुरुष की अदालत की क्षमता को प्रभावित कर सकते हैं । दूसरे, फ्लाई एज महत्वपूर्ण है और नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों के बीच मिलान किया जाना चाहिए (इष्टतम आयु: इथेनॉल एक्सपोजर 1 में 3-5 दिन पुरानी)। दो सप्ताह और पुराने जंगली प्रकार के पुरुष मक्खियों31disinhibited प्रणय निवेदन के ऊंचा स्तर प्रदर्शित करते हैं । इस प्रकार, परिवर्तनीय परिणामों से बचने के लिए अध्ययन के तहत मक्खियों की उचित आयु-मिलान आवश्यक है। तीसरे, पब प्रति फ्लाई नंबर महत्वपूर्ण है (इष्टतम: 33 प्रति पब)। पब प्रति कम या उच्च फ्लाई संख्या बहुत प्रेमालाप स्कोर (डेटा नहीं दिखाया) तिरछा कर सकते हैं। चौथा, फ्लाईपब कक्षों को चित्रा 2 Bमें सचित्र समान मात्रा की आवश्यकता होती है। यह सुनिश्चित करता है कि मक्खियों को इथेनॉल वाष्प समकालिक रूप से प्राप्त होता है और प्राप्त व्यवहार सुसंगत होते हैं। पांचवां, स्पष्ट वीडियो रिकॉर्डिंग और सटीक प्रणय निवेदन स्कोरिंग आवश्यक हैं । यह प्रोटोकॉल भारी व्यवहार टिप्पणियों पर निर्भर करता है, इसलिए मानकीकृत प्रेमालाप स्कोरिंग प्रोटोकॉल का सावधानीपूर्वक पालन असंगत परिणामों को कम करने के लिए मौलिक है। अंत में, यह अत्यधिक अनुशंसा की जाती है कि इथेनॉल एक्सपोजर और प्रेमालाप स्कोरिंग चरणों दोनों को आंख बंद करके किया जाए, जहां एक प्रयोगकर्ता फ्लाई जीनोटाइप या प्रयोगात्मक उपचार से अनजान है, जिससे प्रयोगात्मक पूर्वाग्रह को रोका जा सके।

Flypub परख के कई फायदे हैं। सबसे पहले, मक्खियों के कई समूहों का परीक्षण और तुलना एक साथ की जा सकती है। दूसरे, यह सस्ती है, सेटअप करने के लिए सरल और सीखने के लिए आसान है, यह उच्च विद्यालय, स्नातक और स्नातक छात्रों, postdocs और संकाय के साथ ही सीमित अंतरिक्ष और बजट के साथ शिक्षण प्रयोगशालाओं के माध्यम से प्राथमिक सहित सभी स्तरों पर प्रयोगकर्ताओं के लिए अत्यधिक उत्तरदायी बना रही है । तीसरा, इसका उपयोग अतिरिक्त व्यवहारों को मापने के लिए किया जा सकता है जैसे कि मादा मक्खियों का अपहिचक प्रणय निवेदन और प्रारंभिक संवेदनशीलता और सहिष्णुता विकास और रखरखाव31,,32का आकलन करने के लिए इथेनॉल या अन्य शामक के शामक प्रभाव। साथ में, फ्लाईपब AUD की विविध विशेषताओं का अध्ययन करने के लिए एक बहुमुखी विधि है।

Flypub परख की प्रमुख सीमा कठोर और श्रमसाध्य प्रणय निवेदन आहार स्कोरिंग है । इथेनॉल के प्रभाव में प्रेमालाप व्यवहार इस तरीके से अत्यधिक गतिशील है कि प्रणय अवधि एक सेकंड से कम से कई मिनट तक होती है और प्रेमालाप में लगी मक्खियां अक्सर बदल जाती हैं। यहां प्रस्तुत स्कोरिंग शासन को इस गतिशील प्रकृति को शामिल करने और दिए गए जीनोटाइप31,32के लिए व्यक्तिगत इथेनॉल एक्सपोजर पर लगातार स्कोर प्रदान करने के लिए विकसित किया गया था । जैसा कि प्रोटोकॉल में उल्लेख किया गया है, प्रेमालाप गतिविधि मैन्युअल रूप से अर्जित की जाती है, जो समय लेने वाली होती है। निष्पक्ष उच्च-थ्रूपुट व्यवहार स्क्रीनिंग की सुविधा के लिए कई स्वचालित स्कोरिंग कार्यक्रम विकसित किए गए हैं और जिनमें से सभी व्यक्तिगत मक्खियों के आंदोलनों और,स्थानों39,40,,41,,42,43,,44,,45पर भरोसा करते हैं।, हमने स्वचालित रूप से प्रेमालाप गतिविधि को गिनने के लिए एक कंप्यूटर सॉफ्टवेयर विकसित करने का प्रयास किया लेकिन सुसंगत और विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने में असमर्थ थे। यह इस तथ्य के कारण हो सकता है कि व्यवहार स्कोरिंग में कई प्रेमालाप चरण (यानी, निम्नलिखित, एकतरफा पंख विस्तार, पेट झुकने और बढ़ते)35,,36,,46 एक बार में कई मक्खियों शामिल हैं। यहां तक कि इस सीमा के साथ, पर्याप्त प्रशिक्षण के साथ एक प्रयोगकर्ता को स्थिरता और सटीकता के साथ इथेनॉल-प्रेरित प्रेमालाप व्यवहार की मात्रा निर्धारित करने में सक्षम होना चाहिए। फिर भी, मशीन लर्निंग या अन्य उन्नत एल्गोरिदम को अनुवर्ती के रूप में अपनाना बहुत मदद और महत्व होगा।

कृंतक मॉडल के समान, फ्लाई मॉडल में इथेनॉल पर अध्ययन ने काफी हद तक इथेनॉल के लोकोमोटर उत्तेजक और शामक प्रभावों पर ध्यान केंद्रित किया है। हालांकि, फ्लाईपब परख, प्रेमालाप को बाधित करता है, जो एक प्रकार का संज्ञानात्मक निषेध है जो उपन्यास31,32है। इसलिए, Flypub आणविक खिलाड़ियों, सेलुलर रास्तों और तंत्रिका सर्किट के साथ-साथ जोखिम कारकों (जैसे, उम्र, नींद, आहार या सामाजिक वातावरण) को व्यवहार निषेध और संवेदीकरण के लिए महत्वपूर्ण स्पष्ट करने में सहायता कर सकता है। हमने पहले यह दर्शाया है कि एआईबीएस के लिए डोपामाइन सिग्नलिंग की आवश्यकता है, जो कृंतक मॉडल ों और मानव विषयों6,,9,,31में निष्कर्षों के अनुरूप है । इसके अलावा अवधारणा के सबूत के रूप में, हमने ओए (नोरेपिनेफ्रीन के अकशेरुकी समकक्ष) की कमी वाले टीएच उत्परिवर्ती की जांच की और पाया कि ओए इथेनॉल के निषेध प्रभाव के व्यवहार संवेदीकरण के लिए भी महत्वपूर्ण है, हालांकि इसका योगदान डोपामाइन31की तुलना में अपेक्षाकृत छोटा है। यह निष्कर्ष शोल्ज़47 के अवलोकन के विपरीत है कि टीएच उत्परिवर्ती मक्खियां इथेनॉल के लोकोमोटर सक्रिय प्रभाव47को संवेदीकरण में कोई स्पष्ट हानि नहीं देती हैं। यह अलग आणविक, सेलुलर और तंत्रिका मार्ग ों को लोकोमोटर सक्रियण बनाम अहिचक के व्यवहार संवेदीकरण में मध्यस्थता करने का सुझाव देता है। अनुवर्ती अध्ययनों को इस धारणा को और सहयोग करना चाहिए ।

संक्षेप में, Flypub इथेनॉल, विशेष रूप से अहिचक और व्यवहार संवेदीकरण के व्यवहार प्रतिक्रियाओं की जांच करने के लिए एक कम लागत, बहुआयामी और प्रभावी तरीका है, जो AUD की हमारी समझ को आगे बढ़ाने और इस पुरानी विकार के लिए प्रभावी हस्तक्षेप में अंतर्दृष्टि प्रदान करने में मदद कर सकता है।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम को NIAAA 1R15AA020996, NIMH R21MH109953, मस्तिष्क और व्यवहार अनुसंधान फाउंडेशन NARSAD, और NIMHD 2G12MD007592 NMD क्लस्टर अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था । हम एनएमडी और सीएमएस का समर्थन करने के लिए एनआईएच-वित्त पोषित राइज प्रोग्राम (एनआईआईएमएस 5R25GM069621) के आभारी भी हैं, एनएमडी का समर्थन करने के लिए यूटीईपी कोउरी-पार कार्यक्रम, एनआईडीएच-वित्त पोषित मार्क कार्यक्रम (एए का समर्थन करने के लिए एनआईएच 2T34GM08048-31) और ईबीएस का समर्थन करने के लिए डॉ कीलुंग हांग ग्रेजुएट फेलोशिप। हम बहुत UTEP संचार विभाग की सराहना करते हैं: डार्लीन Barajas, क्रिश्चियन रिवेरा, करीना मोरेनो, जोस लोया फर्नांडीज और संगीत विभाग: स्टीफन ए हद्दाद वीडियो और आवाज पर उत्पादन में उनकी मदद के लिए । अंत में, हम नियंत्रण कैंटन-एस मक्खियों के साथ कैंटन-एस पृष्ठभूमि में टीएच उत्परिवर्ती साझा करने के लिए डॉ एंड्रियास थम के बहुत आभारी हैं; और जेसिका Burciaga ऑक्टोपामाइन और चर्चा और समर्थन के लिए हान लैब के सदस्यों पर प्रारंभिक अध्ययन के लिए उसे मूल्यवान योगदान के लिए ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
95 % Ethanol VWR Chemicals BDH1158-4LP
Canton-S - - wild-type strain used as a control
Copy stand with arms Kaiser 205411 model RS 2-XA, with one central arm and two lateral arms; to set up a flypub station
Cotton rounds Swisspers COT-027 to deliver ethanol
Excel Microsoft - to analyze data; any worksheet or spreadsheet software can be used
Fluorescent light bulb Lights of America 7108N maximum (120 V-70 W Max.); to illuminate the flypub station
Microsoft LifeCam software Microsoft - version 3.60; to videotape flypubs
Microsoft LifeCam Studio Microsoft Q2F-00013 1080P HD sensor; to videotape flypubs
Minitab 17 Minitab - version 17; to conduct statistical analysis; any statistical analysis software can be used
Nylon mesh sheet Sefar Nitex - model B0043D1TVY, opaque white, 200 microns mesh; to make a flypub
Petri dishes Falcon 08-757-100A 35 x 10 mm; to deliever ethanol
Plastic funnel - mid size Fisher scientific 10-348A 65 mm diameter and 67 mm height; to transfer sedated flies from a flypub into a food vial
Plastic funnel - small Fisher scientific 07-202-121 4 mm diameter and 46 mm height; to transfer flies from a vial into a flypub
Polycarbonate sheet Lexan - 0.762 mm thickness, clear, 610 x 1220 mm Nominal; to make a flypub
Round-bottom bottle Fisher scientific AS115 polypropylene, 103 mm height, 60 mm diameter and 177 ml capacity; to make a flypub
Soldering iron Weller WES51 to make a hole in a flypub
Time code - - .smi file, a subtitle ticking timecode created in Han lab; to monitor time during courtship scoring; any time subtitles may be used
Tyramine β hydroxylase (tβh) - - mutant fly strain (nM18 null allele)deficient in tβh in the wild-type Canton-S background ; obtained from Dr. Andreas Thum (University of Leipzig, Leipzeig, Germany)
VLC media player VideoLAN - version 3.0.8; any media player can be used to score courtship

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Delgado, N. M., Sierra, C. M.,… More

Delgado, N. M., Sierra, C. M., Arzola, A., Saldes, E. B., Han, K. A., Sabandal, P. R. Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization. J. Vis. Exp. (159), e61123, doi:10.3791/61123 (2020).

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