Behavior

المهمة السلوكية لاختيار ثلاث غرف باستخدام Zebrafish كنظام نموذجي

Published: April 14, 2021 doi: 10.3791/61934

Cassie J. Rowe^1,2, Mikayla Crowley-Perry^1,3, Elizabeth McCarthy¹, Terry L. Davidson^2,4, Victoria P. Connaughton^1,2

¹Department of Biology, American University, ²Center for Behavioral Neuroscience, American University, ³Department of Chemistry, American University, ⁴Department of Neuroscience, American University

Summary

نحن نقدم غرفة سلوكية مصممة لتقييم الأداء المعرفي. نحن نقدم بيانات تبين أنه بمجرد الحصول عليها ، تذكر حمار وحشي المهمة بعد 8 أسابيع. كما نظهر أن سمك الحمار الوحشي المفرط السكر في الدم قد غير الأداء المعرفي، مما يشير إلى أن هذا النموذج ينطبق على الدراسات التي تقيم الإدراك والذاكرة.

Abstract

الأمراض العصبية تعتمد على العمر، المنهكة، وغير قابلة للشفاء. وقد ربطت التقارير الأخيرة أيضا ارتفاع السكر في الدم مع التغيرات في الذاكرة و / أو ضعف الإدراك. لقد قمنا بتعديل وتطوير مهمة معرفية من ثلاث غرف مماثلة لتلك المستخدمة مع القوارض لاستخدامها مع سمك الحمار الوحشي المفرط السكر في الدم. تتكون غرفة الاختبار من غرفة انطلاق ذات موقع مركزي ومقصورتين للاختيار على كلا الجانبين ، مع مجموعة من التخصصات المستخدمة كمكافأة. نحن نقدم بيانات تبين أنه بمجرد الحصول عليها ، تذكر حمار وحشي المهمة بعد 8 أسابيع على الأقل. تشير بياناتنا إلى أن سمك الحمار الوحشي يستجيب بقوة لهذه المكافأة ، وقد حددنا العجز المعرفي في الأسماك المفرطة السكر في الدم بعد 4 أسابيع من العلاج. قد ينطبق هذا الفحص السلوكي أيضا على الدراسات الأخرى المتعلقة بالإدراك والذاكرة.

Introduction

الأمراض العصبية تعتمد على العمر، المنهكة، وغير قابلة للشفاء. وتتزايد هذه الأمراض انتشارا، مما يؤدي إلى الحاجة الملحة إلى تحسين وتطوير استراتيجيات علاجية جديدة. بداية وعرض كل مرض فريد من نوعه، حيث يؤثر بعضها على مناطق الدماغ اللغوية والحركية والاستقلالية، في حين أن البعض الآخر يسبب عجزا في التعلم وفقدان الذاكرة¹. أبرزها, العجز المعرفي و / أو ضعف هي المضاعفات الأكثر انتشارا في جميع الأمراض العصبية². أملا في تسليط الضوء على الآليات الكامنة الكامنة وراء هذه الأمراض العصبية التنكسية، تم استخدام العديد من النظم النموذجية المختلفة (بما في ذلك الكائنات وحيدة الخلية إلى دروسوفيلا إلى الفقاريات ذات الترتيب الأعلى مثل القوارض والبشر)؛ ومع ذلك ، فإن غالبية الأمراض العصبية لا تزال غير قابلة للشفاء.

التعلم والذاكرة هي عمليات حفظها للغاية بين الكائنات الحية والتغيرات المستمرة في البيئة تتطلب التكيف³. وقد ثبت ضعف في كل من الإدراك واللدونة متشابك في العديد من نماذج القوارض. على وجه التحديد، تستخدم المقايسات السلوكية الراسخة التعلم النقابي لتقييم التغيرات المعرفية بعد مختلف الأمراض والاضطرابات الناجمة عن ضعف^4. بالإضافة إلى ذلك، فإن انعكاس التمييز على النقيض من ذلك يقيم العجز المعرفي لأنه ينطوي على وظائف التعلم والذاكرة ذات الترتيب الأعلى، ويعتمد الانعكاس على تثبيط ارتباط تم تعلمه من قبل. مهمة اختيار ثلاث غرف المستخدمة على نطاق واسع يوضح العجز المحتمل في مسارات التعلم والذاكرة في الجهاز العصبي المركزي⁵^،⁶. في الآونة الأخيرة ، توسع هذا المجال ليشمل نماذج غير ثديية ، مثل سمك الحمار الوحشي(Danio rerio)، حيث تم تطوير العديد من النماذج لمجموعة من الأعمار من اليرقات إلى البالغين⁷^،⁸.

Zebrafish توفير توازن بين التعقيد والبساطة التي هي مفيدة لتقييم الإعاقات المعرفية مع التقنيات السلوكية. أولا، سمك الحمار الوحشي قابل للفحص السلوكي عالي الإنتاجية نظرا لصغر حجمه وطبيعته الإنجابية الغزيرة. ثانيا، تمتلك حمار وحشي هيكل، والباليوم الجانبي، وهو مماثل للقرن آمون الثدييات كما أن لديها علامات الخلايا العصبية مماثلة وأنواع الخلايا⁷. حمار وحشي هي أيضا قادرة على الحصول على وتذكر المعلومات المكانية⁹ و, مثل البشر, هي^{اليومية 10}. لذلك ، ليس من المستغرب أن يتم استخدام سمك الحمار الوحشي كنموذج للأمراض العصبية مع زيادة وتيرة. ومع ذلك، فإن غياب المقايسات السلوكية المناسبة جعل من الصعب تطبيق نموذج سمك الحمار الوحشي للتقييمات المعرفية. العمل المنشور باستخدام المقايسات السلوكية الخاصة لحمار الوحشي تشمل مهام التعلم النقابي¹¹، سلوك القلق¹²، الذاكرة¹³، التعرف على الكائن¹⁴، وتفضيل المكان المكيف¹⁵^،¹⁶^،¹⁷^،¹⁸^،¹⁹. على الرغم من أن هناك العديد من التطورات فيما يتعلق المقايسات السلوكية حمار وحشي, النظراء لبعض الاختبارات من الوظائف المعرفية في القوارض لم يتم تطويرها لاستخدامها مع حمار وحشي¹⁸.

بناء على الدراسات السابقة من مختبرنا ، قمنا بنمذجة / تطوير مهمة معرفية في سمك الحمار الوحشي استنادا إلى مهمة الاختيار من ثلاث غرف المستخدمة مع القوارض باستخدام التفاعل الاجتماعي كمكافأة. بالإضافة إلى ذلك ، توسعنا في جانب التعلم النقابي للمهمة السلوكية ودمجنا انعكاس التمييز على النقيض على أمل مواصلة تطوير هذه المهمة السلوكية لتقييم الضعف الإدراكي. وقد مكننا ذلك من دراسة كل من اكتساب التعلم من التمييز في البداية وما تلاه من تثبيط لذلك التعلم في مرحلة الانعكاس. في الدراسة الحالية، ونحن نثبت أن هذا الإجراء قدم طريقة موثوقة لتقييم الأداء المعرفي في حمار وحشي بعد الغمر الجلوكوز لمدة 4 أو 8 أسابيع.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه (IACUC) في الجامعة الأمريكية (البروتوكول رقم 1606، 19-02).

1. الحيوانات

تربية الحيوانات وصيانتها
1. الحصول على الكبار البرية نوع حمار وحشي (دانيو rerio) الذين تتراوح أعمارهم بين 4-11 أشهر والأجنة وتربيتها في المنزل.
2. الحفاظ على الأسماك في نظام الرف المائية في 28-29 درجة مئوية على ضوء 14 ساعة: 10 ساعة فوتوبريود الظلام.
3. إطعام الأسماك مرتين يوميا مع رقائق التجارية وتكملة مع Artemia الحية.
4. اختيار الأسماك عشوائيا من هذه الخزانات المخزون للتجارب السلوكية.
عند الانتهاء من التجربة، تخدير الحيوانات عن طريق الغمر في tricaine 0.02٪ لمدة 2 دقيقة أو حتى يكون هناك نقص في التنسيق الحركي وانخفاض معدل التنفس للتحليلات الجزيئية و / أو الكيميائية العصبية في وقت لاحق.

2. غرفة اختبار الاختيار من ثلاث غرف

ملاحظة: تم تعديل هذه التقنية السلوكية من Ruhl^{وآخرون.}

بناء غرفة
1. تعديل الغرفة السلوكية²⁶- حوض السمك 40 لتر (50 × 30 × 30 سم^3)—أن يكون غرفة مركزية أو بدءا (10 × 30 × 30 سم^3)،فصل من غرفتين الاختيار الجانبي (كل 20 × 30 × 30 سم³، الشكل 1A).
2. بناء المقصورات الثلاث باستخدام الألومنيوم "على شكل حرف U" قناة الملصقة على الجدران الزجاجية الداخلية مع تسرب الحوض، لفصل الخزان إلى ثلاث غرف.
3. بناء فواصل مبهمة، وارتفاع 10 سم، من ورقة PVC الرمادية تناسب قنوات الألومنيوم على جانبي. جعل كل مقسم من 2 قطعة، كل متساوية في الحجم: قطعة أسفل ثابتة شنت بشكل دائم داخل الخزان وقطعة أعلى تتحرك صعودا وهبوطا في مسارات الألومنيوم.
4. الغراء مقاطع الموثق خارج كبيرة إلى الجزء العلوي من أوراق PVC الرمادية لتكون بمثابة مقابض.
5. باستخدام علامة دائمة، رسم خطوط أفقية صغيرة 10 سم فوق أنبوب PVC الرمادية التي تم الالتزام بها على السطح الخارجي للدبابات.
  ملاحظة: هذه العلامة هي النقطة التي سيتم فتح ورقة PVC الرمادي العلوي للسماح بالوصول إلى أي من الجانبين.
6. إضافة التحكم (نظام) المياه إلى الخزان إلى مستوى 25 سم من أسفل إلى أعلى الخزان، أو ~ 30 L. مكان سخانات حوض السمك الزجاج في كل قسم من الغرفة لمدة 24 ساعة قبل الاختبار لجعل درجة الحرارة إلى 28.5 درجة مئوية.
  ملاحظة: إزالة سخانات في بداية جلسة السلوك وإجراء تبادل المياه الكامل بعد يومين من الاستخدام.
إعداد التمييز
1. لكل مهمة تمييز، ضع القطع الملونة بشكل فردي (بيج، أسود، أو أبيض) على الظهر الخارجي، الجانب، وأسفل غرف الاختيار باستخدام الفيلكرو(الشكل 1B-D).
  ملاحظة: يجب أن يكون الغرفة المركزية أي لون الخلفية المقترنة به.
كمكافأة، إنشاء مجموعة من الأنواع (الضحلة) عن طريق وضع 4 حمار وحشي الكبار، الذين لن تستخدم خلاف ذلك في الدراسة، في خزان صغير، واضحة في الزاوية الخلفية البعيدة من كل غرفة الاختيار (الشكل 1B-D).
ملاحظة: اختر أسماك المياه الضحلة عشوائيا من خزانات المخزون كل يوم، مع ذكر واحد على الأقل وأنثى واحدة من نفس عمر وحجم الأسماك التجريبية في كل خزان ضحل.

3. المهام السلوكية

التأقلم
ملاحظة: التأقلم مع غرفة السلوك يتكون من ثلاثة أيام من التدريب; يومين من التأقلم الجماعي يليه يوم واحد من التدريب الفردي.
التأقلم الجماعي
1. إرفاق البيج (محايدة) شعرت الخلفية إلى الخارج من كل من مقصورات الاختيار، وغمر خزان المياه الضحلة الحية في كل من مقصورات الاختيار(الشكل 1B).
2. أضف خمسة ستة حمار وحشي إلى غرفة البداية المركزية مع فتح كلا البابين المنزلقين ، والسماح للأسماك بالتجول بحرية لمدة 30 دقيقة.
  ملاحظة: يجب أن تكون سمكة الحمار الوحشي التجريبية قادرة على التفاعل والاختلاط مع هذه الأسماك الضحلة من خلال الخزان كمكافأة بعد العبور إلى مقصورة الاختيار أثناء التأقلم. وتعتبر سمكة قد دخلت واحدة من الغرف الجانبية عندما يدخل الجسم كله الغرفة.
3. كرر هذا الإجراء مع نفس السمك التجريبي لليوم الثاني (2 أيام من التأقلم الجماعي).
  ملاحظة: لا تحتفظ بنفس المجموعات من الأسماك.
التأقلم الفردي
1. إعداد الغرفة: إرفاق البيج (محايد) شعر الخلفية إلى الخارج من كل من مقصورات الاختيار، وغمر خزان المياه الضحلة الحية في كل من مقصورات الاختيار، كما هو الحال في التأقلم المجموعة(الشكل 1B، E).
  1. ضع سمكة حمار وحشي فردية في غرفة البداية المركزية لمدة دقيقتين مع إغلاق الأبواب المنزلقة ، وبعد فترة دقيقتين ، افتح كلا البابين في وقت واحد.
  2. تأكد من أن كل سمكة تسبح من الغرفة المركزية من خلال الباب لما مجموعه 10 مرات، بغض النظر عن أي جانب. مكافأة السمك في كل مرة يدخل واحدة من الغرف الجانبية (1 يوم من التأقلم الفردية).
    ملاحظة: إذا كانت السمكة غير قادرة على إكمال هذه المهمة 10 مرات في غضون فترة 30 دقيقة أو رفضت مغادرة غرفة البداية على الإطلاق، استبعدها من الدراسة.
2. الحصول على البيانات: سجل عدد المرات التي تسبح فيها الأسماك في أي من الجانبين وإجمالي الوقت الذي يستغرقه إكمال المهمة.
اقتناء
ملاحظة: بعد التأقلم، بدأت حمار وحشي مهمة اقتناء لمدة 3 أيام.
1. إعداد الغرفة: إرفاق قطعة شعر بيضاء إلى خارج مقصورة اختيار واحد وقطعة شعر أسود إلى خارج مقصورة الاختيار الأخرى(الشكل 1C, F).
  ملاحظة: بديل لون الخلفية من كل جانب يوميا باستخدام جدول pseudorandom³⁷.
  1. طوال هذه المرحلة من التدريب، ضع مكافأة ضحلة فقط في واحدة من مقصورات الاختيار؛ هذا يصبح الجانب المكافأ.
  2. للبدء في الاستحواذ، ضع سمكة تجريبية واحدة في غرفة البداية لمدة دقيقتين مع إغلاق مقصورات الاختيار.
  3. بعد التأقلم لمدة دقيقتين، افتح كلا البابين في نفس الوقت، مما يتيح الوصول إلى مقصورتي الاختيار، وابدأ ساعة التوقيت لتقييم زمن الوصول الاختياري.
  4. باستخدام تصميم متحيز، قم بتعيين السمك عشوائيا إما تفضيلا أبيض أو أسود (أي إما W+/B- أو B+/W-)، مما يعني أن المياه الضحلة توضع إما في مقصورة الاختيار الأسود (B+) أو الأبيض (W+).
2. دلالة على استجابة الاختيار
  1. بمجرد أن تقوم السمكة بالاختيار عن طريق دخول إحدى المقصورات الجانبية، أوقف المؤقت.
  2. إذا اختارت السمكة الجانب المفضل بشكل صحيح، أغلق الباب فورا بين الغرفة المركزية وذلك الجانب لتقييد السمكة إلى الجانب المفضل لمدة دقيقة واحدة، والسماح بمكافأتها بالتفاعل مع خزان المياه الضحلة (الشكل 1C، F). سجل هذه التجربة على أنها "C" ل "Correct" (مكافأة).
  3. إذا كانت الأسماك تسبح من خلال الباب غير صحيحة، ونقله مرة أخرى إلى الغرفة المركزية، وإغلاق كلا البابين، ويسجل المحاكمة باسم "أنا" ل "غير صحيحة" (غير مكافأة).
  4. إذا لم تتخذ السمكة قرارا في غضون دقيقتين بعد فتح الأبواب ، فانتقل بالسمكة إلى الجانب الصحيح لمدة دقيقة واحدة ، وسجل التجربة على أنها "M" ل "ملحوظ" (مكافأة بالقوة).
  5. عند نقل / نقل الأسماك مرة أخرى إلى غرفة البداية، وتوجيه بلطف الأسماك في الغرفة المركزية باستخدام شبكة السمك كأداة للرعاية.
    ملاحظة: لا تغرف السمكة من الماء وتستبدلها في غرفة البداية لأن هذا يمكن أن يؤثر على المقايسة السلوكية.
  6. بمجرد عودة السمك إلى الغرفة المركزية، انتظر لمدة دقيقة واحدة قبل أداء المهمة مرة أخرى. تأكد من أن كل سمكة تؤدي المهمة 8 مرات.
3. الحصول على البيانات
  1. لكل سمكة تجريبية، سجل الوقت إلى القرار الأول (أو زمن الاختيار) والدرجات الفردية (C أو I أو M) لكل تجربة من تجارب الاستحواذ ال 8 (القسم 3.4.2) بالترتيب.
  2. تم الإبلاغ عن نتائج هذه التجارب كمتوسطات جماعية لكل تجربة في كل يوم استحواذ.
  3. بمجرد الانتهاء من تجربة السمك، تصنيفه إما كسمكة "عالية الأداء" أو سمكة "منخفضة الأداء".
    ملاحظة: اعتبرت السمكة "عالية الأداء" إذا نجحت في اختيار الجانب الصحيح من الخزان في 6 تجارب على الأقل من إجمالي التجارب ال 8 لهذا اليوم. وأي سمكة لا تستوفي هذا المعيار هي "منخفضة الأداء".
  4. بمجرد تحديدها، منزل عالية الأداء ومنخفضة الأداء الأسماك بشكل منفصل.
  5. تصنيف الأسماك على أنها "عالية" أو "منخفضة الأداء" في كل يوم من أيام الاستحواذ الثلاثة، بعد أن تنتهي الأسماك من التجارب.
    ملاحظة: في نهاية اليوم الثالث من اكتساب الأسماك تبقى إما "عالية" أو "منخفضة الأداء" طوال مدة الدراسة.
    ملاحظة: بعض الأسماك التي كانت في البداية في مجموعة "منخفضة الأداء" تعلم المهمة في يوم الاستحواذ 2 أو 3. وعندما يحدث ذلك، يمكن نقل الأسماك الأولية "منخفضة الأداء" إلى المجموعة "عالية الأداء". لا تنقل السمكة بين المجموعات بهذه الطريقة بعد اليوم الثالث (نهاية الاستحواذ).

4. العلاج التجريبي

بعد فترة الاستحواذ ، عندما تظهر الأسماك القدرة على حل مهمة تمييز بسيطة بين الخلفية البيضاء والسوداء ، ابدأ نظام علاج سمك الحمار الوحشي التجريبي.
ملاحظة: لإظهار قابلية تطبيق هذه الطريقة، تظهر هذه الدراسة تصميمين تجريبيين:
1. دراسة طولية
  1. إعادة الأسماك التجريبية إلى خزانات عقد لمدة 8 أسابيع. الحفاظ على الأسماك في خزانات قياسية مع تغييرات المياه اليومية، وإطعامهم مرتين يوميا.
    ملاحظة: لا تقم بإجراء أي تدريب سلوكي خلال هذه الأسابيع 8 في خزانات عقد.
  2. إجراء تقييم انعكاس بعد هذه الفترة لتقييم ما إذا كان الحمار الوحشي يمكن حل مهمة عكس بعد 8 أسابيع دون تدريب.
2. فرط السكر في الدم: تعريض المجموعات التجريبية للمياه (التعامل مع السيطرة على الإجهاد)، مانيتول (1٪-3٪، والسيطرة التناضح)، أو الجلوكوز (1٪-3٪) لمدة 4 أو 8 أسابيع^22،²³.
  ملاحظة: لا تقم بإجراء أي تدريب سلوكي خلال هذه الأسابيع 4 أو 8.

5. عكس

ملاحظة: بعد التلاعب التجريبي (كما هو الحال في القسم 4.2)، يتم اختبار الأسماك في الجزء الأخير من نموذج الاختيار من 3 غرف - عكس. للقيام بذلك ، يتم عكس الجانب المكافأ (مقارنة بالاستحواذ) بحيث يتم الآن مكافأة الأسماك التي كانت تكافأ سابقا مع المياه الضحلة على الجانب الأبيض مع المياه الضحلة على الجانب الأسود والعكس بالعكس. وبهذه الطريقة، يقيم الانعكاس ما إذا كانت الأسماك قد تعلمت مكان المكافأة (الضحلة)، بغض النظر عن لون الخلفية.

إعداد الغرفة
1. إرفاق شعر أسود إلى الخارج من واحدة من غرف الاختيار وشعر الأبيض إلى الخارج من جهة أخرى، والتأكد من أن الجانبين الأسود والأبيض هي نفس الجوانب كما هو الحال في محاكمات الاستحواذ (القسم 3.4).
2. غمر خزان المياه الضحلة في الزاوية الخلفية البعيدة من الجانب الذي هو عكس غرفة الاختيار مكافأة سابقا (الشكل 1D, G).
  ملاحظة: وبعبارة أخرى، الأسماك التي كانت تكافأ سابقا على الجانب الأبيض يكافأ الآن على الجانب الأسود والعكس بالعكس.
3. اختبار الأسماك بشكل فردي كما هو الحال في القسم 3.5. ابدأ بوضع سمكة تجريبية واحدة في غرفة البداية لمدة دقيقتين، وإغلاق الوصول إلى مقصورات الاختيار.
4. في وقت واحد فتح كلا الجانبين من الغرفة.
  ملاحظة: أكمل ما مجموعه 8 تجارب كل يوم لمدة ثلاثة أيام علاج متتالية.
دلالة على استجابة الاختيار
1. إذا اختارت السمكة اللون المفضل بشكل صحيح، أغلق الباب مباشرة إلى الغرفة المركزية لمدة دقيقة واحدة، مما يسمح للأسماك بالتفاعل مع مكافأة المياه الضحلة. سجل هذه التجربة على أنها "C" ل "Correct" (مكافأة).
2. إذا كانت الأسماك تسبح من خلال الباب غير صحيحة، ونقله مرة أخرى إلى الغرفة المركزية، وإغلاق كلا البابين، ويسجل هذه المحاكمة باسم "أنا" ل "غير صحيحة" (غير مكافأة).
3. إذا لم تتخذ السمكة قرارا في غضون دقيقتين بعد فتح الأبواب ، فانتقل بالسمكة إلى الجانب الصحيح ، وسجل التجربة على أنها "M" ل "ملحوظ" (مكافأة بالقوة).
الحصول على البيانات
1. لكل حمار وحشي تجريبي، سجل زمن الاختيار والنتائج الفردية (C، I، M)، بالترتيب، لكل تجربة.
2. أبلغ عن نتائج هذه التجارب كمتوسطات جماعية لكل كتلة تجريبية في كل يوم من أيام الانعكاس ال 3.
3. الاحتفاظ ببيانات الأسماك عالية الأداء ومنخفضة الأداء منفصلة لتحديد ما إذا كانت تعرض نفس مستوى الأداء أثناء الانعكاس كما كانت تفعل أثناء الاستحواذ.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

التأقلم مع غرفة السلوك ينطوي على ثلاثة أيام من التدريب: 2 أيام من التأقلم الجماعي تليها 1 يوم من التأقلم الفردي. ومع ذلك ، لأننا لم نتمكن من التمييز بين سمك الحمار الوحشي الفردي عن بعضنا البعض ، تمكنا فقط من جمع البيانات أثناء التأقلم الفردي. في هذا الوقت، أخذت الحيوانات التجريبية (ن = 30)، مشروطة باستخدام مكافأة المياه الضحلة، في المتوسط 125.11 ق للوصول إلى قرارهم الأول(الشكل 2A)ومتوسط 725.34 s (12 دقيقة) لإكمال مهمة التأقلم الفردية بأكملها(الشكل 2B). لم يكن هناك تفضيل جانبي كبير أثناء التأقلم(الشكل 2C). كان عدد الأسماك المستبعدة ضئيلا بالمقارنة مع أنواع المكافآت الأخرى (الغذاء) التي قمنا بتقييمها سابقا في مختبرنا(الشكل 2C).

بعد التأقلم، بدأت حمار وحشي مرحلة الاستحواذ. وبما أن الأسماك تم اختبارها بشكل فردي، قمنا بجمع البيانات من كل سمكة في كل يوم من أيام الاستحواذ الثلاثة. وصنفت الأسماك إما على أنها "عالية الأداء أو منخفضة الأداء"، حيث استجاب "أصحاب الأداء العالي" بشكل أسرع وأكثر دقة، على الرغم من أن جميع الأسماك تعرضت لنفس التعرض السابق لغرفة الاختبار. تم تصنيف الأسماك التي اختارت مقصورة الاختيار المجزية في 6 تجارب على الأقل من التجارب ال 8 فقط على أنها "ذات أداء عالي". وكانت الأسماك التي لا تفي بهذا المعيار "منخفضة الأداء". وتم إيواء الأسماك عالية الأداء ومنخفضة الأداء بشكل منفصل للتمييز بين أدائها في جميع التجارب اللاحقة. ومن المثير للاهتمام، لاحظنا أن بعض الأسماك تغيرت فئة (أي، كانت في البداية 'الأداء المنخفض'، ولكن أصبحت 'الأداء العالي') خلال فترة الاستحواذ. في الواقع، زاد عدد الحيوانات عالية الأداء كل يوم، مع أكثر أداء الأسماك في يوم الاستحواذ 3 مقارنة باليوم 1(الشكل 3A). وبحلول اليوم الثالث، أصبح >50٪ من الأسماك "من أصحاب الأداء العالي". وعلاوة على ذلك، انخفض زمن الاختيار الأولي لجميع الأسماك خلال أيام الاستحواذ الثلاثة (A1-A3)، مما يشير إلى تحسن الأداء مع كل يوم من أيام الاستحواذ(الشكل 3B). كما شوهد نفس الاتجاه عندما تم النظر فقط في مجموعة الأسماك عالية الأداء: بحلول اليوم الثالث ، تحسن وقت اتخاذ القرار الأول (أصبح أسرع)(الشكل 3C).

تم حساب نسبة التمييز (التجارب المكافأة/(المكافأة + التجارب غير المحصلة) لكل كتلة تجريبية استحواذ (متوسط تجربتين/ سمكة) عبر أيام الاستحواذ الثلاثة (A1-A3) لجميع الحيوانات التجريبية (n = 30) لتحديد مدى دقة حل الأسماك (الحصول) على مهمة التمييز (أي الذهاب إلى الجانب المجزي من الخزان). وكشفت هذه النسبة أن النسبة المئوية للأسماك التي تنتقل إلى الجانب المكافأ خلال كل تجربة تزداد يوميا (أي عبر الكتل التجريبية في كل يوم على حدة) وبشكل عام (أي خلال أيام الاستحواذ الثلاثة) مما يؤدي إلى أداء جميع الأسماك فوق الصدفة بحلول نهاية الاستحواذ (الخط المنقط الممثل في الرسم البياني؛ (الشكل 4A) وإشارة إلى أن الأسماك قد تعلمت مهمة التمييز.

بعد اكتساب التعلم التمييز، اختبرنا كم من الوقت حمار وحشي سوف نتذكر هذه المهمة. للقيام بذلك، بقيت سمكة الحمار الوحشي المختبرة في خزانات الاحتجاز لمدة 8 أسابيع. بعد هذا الوقت، تم اختبار الأسماك على مهمة عكس التي استمرت 3 أيام (R1-R3). وجدنا أن الأسماك أظهرت سلوك انعكاس قوي وزيادة التمييز على مدى ثلاثة أيام من الانعكاس(الشكل 4B)،مما يشير إلى أنها كانت قادرة على (1) تذكر العلاقة بين لون الخزان والمكافأة و (2) تمنع ما تعلموه سابقا أثناء الاستحواذ وتعلم عكس / عكس النموذج. كما هو مبين في الشكل 4B، ذهب حمار وحشي في البداية إلى الجانب غير المكافأ من الخزان ، كما هو مبين في نسبة التمييز التي تقل عن الصدفة خلال المسارات الأولية في يوم الانعكاس 1. ومع ذلك، بحلول نهاية R1، زاد الأداء إلى أكثر من الصدفة، وهي النتيجة التي تم الحفاظ عليها على R2 و R3، مع أعلى درجات نسبة التمييز لوحظت على R3. وتظهر هذه البيانات مجتمعة أن الحيوانات التجريبية الساذجة قادرة على حل مهمة التمييز، على الرغم من أن السلوك الأولي تم الحصول عليه قبل 8 أسابيع، دون أي تدريب إضافي بين الدورات السلوكية.

يمكن تطبيق نموذج الاختيار من 3 غرف أيضا لفحص مضاعفات المرض. في دراستنا مع حمار وحشي مفرط السكر في الدم ، كان التأقلم والاستحواذ كما هو موضح ، وتم اختبار الانعكاس بعد 4 أو 8 أسابيع من فرط السكر في الدم. تم تحريض فرط السكر في الدم مع بروتوكول الغمر البديل (مكارثي وآخرون، 2020 - هذه المسألة)، بحيث حدث التدريب كل يومين، في أيام بعد أن كان حمار وحشي في حلول اختبار لمدة 24 ساعة. وأثناء عملية الحيازة، كان هناك أثر رئيسي ليوم التدريب على نسبة التمييز (واو (2، 239) = 4.457، ص = 0.012؛ الشكل 5 ألف)، مع نسبة على A1 يجري أقل بكثير مما كانت عليه على A3 (ع = 0.010)، مما يدل على أن الأسماك تحسين دقة اختيارهم مع مرور الوقت. أثناء الانعكاس ، كان هناك تأثير رئيسي كبير للعلاج (F (2 ، 326) = 3.057، ص = 0.048)، ولكن لا توجد آثار أو تفاعلات رئيسية هامة أخرى (يوم التدريب: (F (2، 326) = 1.602، ص = 0.203)؛ يوم التدريب x العلاج: (F (4، 326) = 0.661، ص = 0.620)؛ الشكل 5A). تم تخفيض استجابة الحيوانات المعالجة بالجلوكوز بشكل كبير مقارنة بالحيوانات المعالجة بالماء (p = 0.037) ، ولكن لم تكن هناك اختلافات كبيرة أخرى (control v. mannitol: p = 0.387 ؛ mannitol v. الجلوكوز: p = 0.524) ، مما يشير إلى تأثير محدد للجلوكوز. وبعد 8 أسابيع من فرط السكر في الدم، لم تلاحظ أي فروق إحصائية في نسب التمييز عبر التدريب على اكتساب الأجهزة (F (263 2) = 2.909، ص = 0.056؛ و 2.909، و 0.056؛ و 2.909، و 0.056؛ و 2.909، و 0.056؛ و 2.209، و 0.056؛ و 2.200، و 0.056؛ و 2.2000، و 0.056؛ و 2 الشكل 5ب). ومع ذلك، كانت هناك آثار رئيسية كبيرة في كل من يوم التدريب (F (2، 189) = 4.721، ص = 0.010) والعلاج (F (2، 189) = 7.940، ص = 0.000) على عكس، ولكن لا تفاعل كبير (يوم التدريب * العلاج = F (4، 189) = 0.869، ص = 0.484). حددت المقارنات اللاحقة الأقل أهمية (LSD) اختلافات كبيرة بين R1 و R3 (p = 0.022) وبين R2 و R3 (p = 0.003). كما كشفت مقارنات LSD pairwise عن اختلافات كبيرة بين مجموعة معالجة المياه ومجموعات معالجة الجلوكوز والمانيتول (الماء ضد مانيتول: p = 0.008؛ الماء ضد الجلوكوز: 0.000)؛ ومع ذلك، لم تختلف مجموعات الجلوكوز والمانيتول اختلافا كبيرا عن بعضها البعض (p = 0.265)، مما يشير إلى أن هذه الاختلافات في نسبة التمييز قد تكون بسبب الآثار التناضحية.

الشكل 1: غرفة اختبار الاختيار من ثلاث غرف وإعداد السلوك. (أ) تخطيطي من ثلاث غرف. تم تقييد الحيوانات التجريبية إلى غرفة الانطلاق المركزية لمدة دقيقتين ثم سمح لها بالوصول إلى جانبي الخزان في بداية التجربة. ولذلك، تم رفع النصف العلوي من كل قسم من القسمين لإنشاء مساحة 10 سم للأسماك للعبور إلى أي من المقصورتين الاختيار. (B, E) تم تنفيذ التأقلم باستخدام خلفية بيج وضحال من التخصصات كمكافأة. (C, F) وقد تم اقتناء باستخدام خلفيات بالأبيض والأسود على غرف الاختيار؛ كانت المكافأة تقع فقط على جانب واحد من الغرفة. (ز) تم عكس باستخدام خلفيات بالأبيض والأسود على مقصورات الاختيار؛ كانت المكافأة متاحة فقط على الجانب الآخر من الغرفة (مقابل الاستحواذ). (ح) صورة عن قرب لخزان المياه الضحلة المغمورة في إحدى مقصورات الاختيار. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: زمن الوصول وعدد التجارب المعلمة أثناء التأقلم الفردي. (أ) اختيار زمن اتخاذ القرار الأول. (ب) مجموع الوقت لإكمال التأقلم الفردي. (ج) لا يختلف عدد الإدخالات إلى الجانب الأيسر والأيار، مما يشير إلى عدم وجود تفضيل جانبي متأصل قبل بدء الاستحواذ. كما نبلغ عن العدد الإجمالي للتجارب التي تم وضع علامات عليها أثناء التأقلم الفردي. يتم الإبلاغ عن القيم على أنها متوسط ± SEM. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: النسبة المئوية للأسماك عالية الأداء وزمن الاختيار الأولي بين جميع الأسماك والأسماك عالية الأداء خلال أيام الاستحواذ الثلاثة. (أ) انتقلت الأسماك عالية الأداء من الغرفة المركزية إلى الجانب المكافأ من الغرفة في ما لا يقل عن 6 من أصل 8 تجارب كل يوم استحواذ (A1-A3). (ب) خلال ثلاثة أيام من التدريب على الاستحواذ (A1-A3)، انخفض زمن الاختيار الأولي العام؛ اتجاه واضح أيضا في الأسماك عالية الأداء (C). يتم الإبلاغ عن القيم على أنها متوسط ± SEM. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: أداء التمييز أثناء المحاكمات الخاصة بالاقتناء والنقض. (أ) نسبة التمييز (التجارب المكافأة/(المكافأة + التجارب غير المجزية) للأسماك عبر أيام الاستحواذ (A1-A3) و (B) أثناء التعلم العكسي بعد 8 أسابيع. كما تم تقييم الانعكاس لمدة 3 أيام (R1-R3). وفي كلتا المهمتين، كان على كل سمكة أن تكمل 8 تجارب، وتقدم النتائج في كتل من تجربتين (2، 4، 6، 8). وزادت الاستجابات الصحيحة أثناء كل من الاقتناء والاعكاس مع مرور الوقت، مع ملاحظة استجابة أسرع أثناء الانعكاس، مما يشير إلى أن الأسماك تعلمت وتذكرت المهمة. يتم الإبلاغ عن القيم على أنها متوسط ± SEM. يمثل الخط المنقط فرصة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5: اكتساب وعكس حمار وحشي مفرط السكر في الدم باستخدام المهمة السلوكية اختيار 3 غرف. (أ) قبل العلاج، حصلت سمكة الحمار الوحشي السذاجة على المهمة السلوكية لاختيار 3 غرف عبر ثلاثة أيام من التدريب السلوكي (الاستحواذ، A1-A3). وكان هناك فرق كبير بين نسب التمييز في A1 و A3 مما يشير إلى حدوث التعلم (ص = 0.012). بعد 4 أسابيع من العلاج (الرموز الملونة) كان هناك تأثير كبير للعلاج (p = 0.048) ، مع الحيوانات المعالجة بالجلوكوز التي تظهر نسب تمييز أقل بكثير مقارنة بالحيوانات المعالجة بالماء (p = 0.037). (ب) في تجربة منفصلة، تم تقييم السلوك قبل وبعد 8 أسابيع من فرط السكر في الدم. على الرغم من الزيادة المطردة في الأداء خلال كل يوم استحواذ، لم تكن هناك اختلافات كبيرة في نسبة التمييز عبر A1-A3. ومع ذلك ، بعد 8 أسابيع من العلاج (الرموز الملونة) ، كان هناك تأثير رئيسي للعلاج (p < 0.001) وتأثير رئيسي فردي ليوم التدريب (p = 0.010). وكشفت التحليلات اللاحقة لتكريس وجود فرق كبير بين المجموعة المعالجة بالمياه والمجموعات المعالجة بالمانيتول والجلوكوز، مما يشير إلى وجود تأثير تناضحي (الماء ضد مانيتول: p = 0.008؛ الماء ضد الجلوكوز: p < 0.001). * يدل على تأثير رئيسي كبير. تمثل نقاط البيانات متوسط المجموعة ± SEM، وتختلف نقاط البيانات ذات الحروف المختلفة بشكل كبير عن بعضها البعض. يمثل الخط المنقط فرصة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

على الرغم من أن هناك نموا هائلا في كمية ومتنوعة من البحوث في علم الأعصاب التي أجريت باستخدام حمار وحشي في السنوات ال 15 الماضية²⁴، لا توجد المقايسات السلوكية في هذا النوع مقارنة مع أنظمة نموذج الثدييات¹¹^،²⁵^،²⁶. هنا، نظهر أن مهمة اختيار من ثلاث غرف وضعت للاستخدام مع القوارض يمكن تكييفها لتقييم اكتساب وعكس التعلم التمييز البصري في حمار وحشي. باستخدام المياه الضحلة الحية كمكافأة ، قدمت هذه المهمة فحصا قويا يمكن تطبيقه على مجموعة متنوعة من الدراسات التي تدرس الأمراض المرتبطة سلوكيا مثل مضاعفات فرط السكر في الدم والسكري والزهايمر والخرف.

وقد ثبت سابقا أن حمار وحشي قادرة على تعلم وتخزين المعلومات كما هو مطلوب لاتخاذ قرارات ذات الصلة بيئيا وضرورية للبقاء على قيد الحياة في البرية³. تدعم بيانات الاستحواذ والاعكاس الخاصة بنا عبر دراسة طولية لمدة 8 أسابيع أدلة مسبقة على أن سمك الحمار الوحشي ، على الرغم من صغره ، قادر على تعلم وتذكر مهمة تمييز بسيطة ، وأن سمك الحمار الوحشي يمكن أن يمنع أيضا الاستجابات المكتسبة سابقا. وفي الدراسة الطولية التي استغرقت 8 أسابيع، انخفض عدد المكافآت القسرية، وزادت نسبة التمييز، مما يشير إلى أن الأسماك تتحسن في اختيار الجانب الصحيح والمكافأة وتعلمت المهمة. وفي حين أن هذه التغييرات لم تكن كبيرة، فقد شهدنا اتجاها تنازليا عاما في عدد المحاكمات التي تكافأ بالقوة أثناء الاقتناء وزيادة في نسبة التمييز. وعلاوة على ذلك، كشفت نتائج المهمة السلوكية لاختيار ثلاث غرف مع الأسماك المفرطة السكر في الدم عن إمكانية تطبيق الاختبار على الدراسات التي تدرس حالات فرط السكر في الدم وتشير إلى أن هذا النموذج يمكن استخدامه بالاشتراك مع التلاعب التجريبي الآخر، مثل التعرض للأدوية أو الخطوط المتحولة، لتقييم الآثار المحتملة على الإدراك.

ومن القيود الهامة لهذه الدراسة أننا لا نستطيع تحديد الأسماك الفردية مع مرور الوقت، وبالتالي يجب أن نعتمد على متوسطات المجموعة لتقييم البيانات. ويمكن أن يعالج تطوير طريقة لتتبع الأسماك بشكل فردي في مجموعات العلاج المختلفة، كما هو الحال في القوارض، هذه القضايا. وفي محاولة لحل هذه الاختلافات، قمنا بفرز الأسماك خلال مرحلة الاستحواذ على أساس أدائها، والتي تبين أنها فائدة غير متوقعة لمنهجيتنا. وسجلت "الأسماك عالية الأداء" ≥ 6/8 في كل يوم من أيام التدريب، في حين كانت الأسماك ذات الدرجات المنخفضة "أسماكا منخفضة الأداء". وعند احتساب عدد "أصحاب الأداء العالي" كل يوم، زاد عدد "أصحاب الأداء العالي" في المجموعة التي تكافأ على المياه الضحلة بحيث كان هناك بحلول اليوم الثالث عدد أكبر بكثير من الأسماك في هذه الفئة مقارنة بالعلاج الذي يكافأ على الأسماك. وتشبه اتجاهات الكمون الاختيارية الملاحظة في جميع الأسماك ("عالية + منخفضة الأداء") تلك التي لوحظت فقط في المجموعة "عالية الأداء"، مما يشير إلى أن الاستجابات القوية لهذه المجموعة كانت تقود الاستجابات الشاملة.

وخلاصة القول، تشير هذه النتائج إلى أن التعلم من التمييز القائم على المياه الضحلة في سمك الحمار الوحشي يوفر نموذجا مجديا وفعالا من حيث التكلفة لدراسة الأداء المعرفي العادي والضعيف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

Acknowledgments

نشكر سابرينا جونز على مساعدتها في تكييف نموذج اختيار القوارض من ثلاث غرف مع نموذج حمار وحشي وجيريمي بوبويتز وأليسون مورك لمساعدتهما في أيام جمع السلوك ، والمساعدة في تشغيل التجارب ، ورعاية الحيوانات ، وإعداد الدبابات. شكر خاص أيضا لجيمس م. فوربس (مهندس ميكانيكي) لمساعدته في تصميم خزان 3 غرف الاختيار والبناء.

التمويل: تلقت VPC و TLD منحة دعم أبحاث كلية مشتركة (FRSG) من كلية الآداب والعلوم في الجامعة الأمريكية. تلقى CJR الدعم من الجامعة الأمريكية كلية الآداب والعلوم دعم طلاب الدراسات العليا.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Champion Sports Stopwatch Timer Set: Waterproof, Handheld Digital Clock Sport Stopwatches with Large Display for Kids or Coach - Bright Colored 6 Pack	Amazon	N/A	https://www.amazon.com/Champion-Sports-910SET-Stopwatch-Timer/dp/B001CD9LJK/ref=sr_1_17?dchild=1&keywords=stopwatch+for+sports&qid=1597081570&sr=8-17 Recommend two of different colors; one for choice latency and one for time to completion
Coofficer Extra Large Binder Clips 2-Inch (24 Pack), Big Paper Clamps for Office Supplies, Black	Amazon	N/A	https://www.amazon.com/Coofficer-Binder-2-Inch-Clamps-Supplies/dp/B07C94YCR5/ref=sr_1_3_sspa?dchild=1&keywords=large+binder+clips&qid=1597081521&sr=8-3-spons&psc=1&spLa=ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVyPUExUENWUTRZVjlIWEVPJmVuY3J5cHRlZElkPUEwNDQ5NDU0MlpSREkwTFlLSThVQiZlbmNyeXB0ZWRBZElkPUEwMTg5NDI3MllRV1EzOUdWTVpSOCZ3aWRnZXROYW1lPXNwX2F0ZiZhY3Rpb249Y2xpY2tSZWRpcmVjdCZkb05vdExvZ0NsaWNrPXRydWU=
Marineland® Silicone Aquarium Sealant	Petsmart	Item #2431002
PVC (Polyvinyl Chloride) Sheet, Opaque Gray, Standard Tolerance, UL 94/ASTM D1784, 0.125" Thickness, 12" Width, 24" Length	Amazon	N/A	https://www.amazon.com/Polyvinyl-Chloride-Standard-Tolerance-Thickness/dp/B000MAMGEQ/ref=sr_1_2?dchild=1&keywords=grey+PVC+sheet&qid=1597081440&sr=8-2
Steelworks 1/4-in W x 8-ft L Mill Finished Aluminum Weldable Trim U-shaped Channel	Lowes	Item #55979Model #11377	https://www.lowes.com/pd/Steelworks-1-4-in-W-x-8-ft-L-Mill-Finished-Aluminum-Weldable-Trim-Channel/3058181
Tetra 10 Gallon Fish tank	Petsmart	Item #5271256
Top Fin Fine Mesh Fish Net (3 in)	Petsmart	Item #5175115

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

Gitler, A. D., Dhillon, P., Shorter, J. Neurodegenerative disease: models, mechanisms, and a new hope. Disease Models & Mechanisms. 10, 499-502 (2017).
Perry, R. J., Watson, P., Hodges, J. R. The nature and staging of attention dysfunction in early (minimal and mild) Alzheimer's disease: relationship to episodic and semantic memory impairment. Neuropsychologia. 38, 252-271 (2000).
Gerlai, R. Learning and memory in zebrafish (Danio rerio). Methods in Cell Biology. 134, Elsevier Ltd. (2016).
Davidson, T. L., et al. The effects of a high-energy diet on hippocampal-dependent discrimination performance and blood-brain barrier integrity differ for diet-induced obese and diet-resistant rats. Physiology and Behavior. 107, 26-33 (2012).
Yang, M., Silverman, J. L., Crawley, J. N. Automated three-chambered social approach task for mice. Current Protocols in Neuroscience. 56 (1), (2011).
Remmelink, E., Smit, A. B., Verhage, M., Loos, M. Measuring discrimination- and reversal learning in mouse models within 4 days and without prior food deprivation. Learning and Memory. 23, 660-667 (2016).
Salas, C., et al. Neuropsychology of learning and memory in teleost fish. Zebrafish. 3, 157-171 (2006).
Kalueff, A. V., et al. Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond. Zebrafish. 10, 70-86 (2013).
Luchiaria, A. C., Salajanb, D. C., Gerlai, R. Acute and chronic alcohol administration: Effects on performance of zebrafish in a latent learning task. Behavior Brain Research. 282, 76-83 (2015).
Fadool, J., Dowling, J. Zebrafish: A model system for the study of eye genetics. Progress in Retinal and Eye Research. 27, 89-110 (2008).
Fernandes, Y. M., Rampersad, M., Luchiari, A. C., Gerlai, R. Associative learning in the multichamber tank: A new learning paradigm for zebrafish. Behavioural Brain Research. 312, 279-284 (2016).
Reider, M., Connaughton, V. P. Developmental exposure to methimazole increases anxiety behavior in zebrafish. Behavioral Neuroscience. , (2015).
Capiotti, K. M., et al. Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio). Behavioural Brain Research. 274, 319-325 (2014).
May, Z., et al. Object recognition memory in zebrafish. Behavioural Brain Research. 296, 199-210 (2016).
Mathur, P., Lau, B., Guo, S. Conditioned place preference behavior in zebrafish. Nature Protocols. 6, 338-345 (2011).
Guo, S. Linking genes to brain, behavior and neurological diseases: What can we learn from zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 3, 63-74 (2004).
Kily, L. J. M., et al. Gene expression changes in a zebrafish model of drug dependency suggest conservation of neuro-adaptation pathways. Journal of Experimental Biology. 211, 1623-1634 (2008).
Webb, K. J., et al. Zebrafish reward mutants reveal novel transcripts mediating the behavioral effects of amphetamine. Genome Biology. 10, (2009).
Clayman, C. L., Malloy, E. J., Kearns, D. N., Connaughton, V. P. Differential behavioral effects of ethanol pre-exposure in male and female zebrafish (Danio rerio). Behavioural Brain Research. 335, 174-184 (2017).
Ruhl, T., et al. Acute administration of THC impairs spatial but not associative memory function in zebrafish. Psychopharmacology. 231, 3829-3842 (2014).
Gellermann, L. W. Chance orders of alternating stimuli in visual discrimination experiments. The Pedagogical Seminary and Journal of Genetic Psychology. 42, 206-208 (1933).
Gleeson, M., Connaughton, V., Arneson, L. S. Induction of hyperglycaemia in zebrafish (Danio rerio) leads to morphological changes in the retina. Acta Diabetologica. 44, 157-163 (2007).
Connaughton, V. P., Baker, C., Fonde, L., Gerardi, E., Slack, C. Alternate immersion in an external glucose solution differentially affects blood sugar values in older versus younger zebrafish adults. Zebrafish. 13, 87-94 (2016).
Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think small: Zebrafish as a model system of human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 817341 (2012).
Kalueff, A. V., Stewart, A. M., Gerlai, R., Court, P. Zebrafish as an emerging model for studying complex brain disorders. Trends in Pharmacological Sciences. 35, 63-75 (2014).
Gerlai, R. Associative learning in zebrafish (Danio rerio). Methods in cell biology. 101, 249-270 (2011).

Behavior

المهمة السلوكية لاختيار ثلاث غرف باستخدام Zebrafish كنظام نموذجي

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgments

Materials

References

Tags

Cite this Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgments

Materials

References

Tags

Cite this Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.