Summary
Qui, descriviamo la radiosintesi di 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano, un agente di imaging tomografico ad emissione di positroni per studiare il metabolismo del triptofano, utilizzando una strategia one-pot, in due fasi in un sistema di sintesi radiochimica con buone rese radiochimiche, alto eccesso enantiomerico e alta affidabilità.
Abstract
La via della chinurenina (KP) è una via primaria per il metabolismo del triptofano. L'evidenza suggerisce fortemente che i metaboliti del KP svolgono un ruolo vitale nella proliferazione tumorale, nell'epilessia, nelle malattie neurodegenerative e nelle malattie psichiatriche a causa dei loro effetti immunomodulatori, neuromodulatori e neurotossici. L'agente più ampiamente utilizzato per la tomografia ad emissione di positroni (PET) per la mappatura del metabolismo del triptofano, α-[11C]metil-L-triptofano ([11C]AMT), ha una breve emivita di 20 minuti con laboriose procedure di radiosintesi. È necessario un ciclotrone in loco per radiosintetizzare [11C]AMT. Solo un numero limitato di centri produce [11C]AMT per studi preclinici e indagini cliniche. Quindi, è urgentemente necessario lo sviluppo di un agente di imaging alternativo che abbia un'emivita più lunga, una cinetica in vivo favorevole ed è facile da automatizzare. L'utilità e il valore di 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano, un analogo del triptofano marcato con fluoro-18, è stato riportato in applicazioni precliniche in xenotrapianti derivati dalla linea cellulare, xenotrapianti derivati dal paziente e modelli tumorali transgenici.
Questo documento presenta un protocollo per la radiosintesi di 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano utilizzando una strategia one-pot, two-step. Utilizzando questo protocollo, il radiotracciante può essere prodotto in una resa radiochimica del 20 ± 5% (decadimento corretto al termine della sintesi, n > 20), con purezza radiochimica ed eccesso enantiomerico di oltre il 95%. Il protocollo presenta una piccola quantità di precursore con non più di 0,5 mL di solvente di reazione in ogni fase, un basso carico di 4,7,13,16,21,24-esaooxa-1,10-diazabiciclo potenzialmente tossico[8.8.8]esacosano (K222) e una fase mobile ecologicamente benigna e iniettabile per la purificazione. Il protocollo può essere facilmente configurato per produrre 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano per l'indagine clinica in un modulo disponibile in commercio.
Introduction
Nell'uomo, il triptofano è un componente essenziale della dieta quotidiana. Il triptofano viene metabolizzato principalmente attraverso la via della chinurenina (KP). Il KP è catalizzato da due enzimi limitanti la velocità, indoleamina 2, 3-diossigenasi (IDO) e triptofano 2, 3-diossigenasi (TDO). Più del 95% del triptofano viene convertito in chinurenina e nei suoi metaboliti a valle, generando in definitiva nicotinamide adenina dinucleotide, che è essenziale per la trasduzione dell'energia cellulare. Il KP è un regolatore chiave del sistema immunitario e un importante regolatore della neuroplasticità e degli effetti neurotossici1,2. Il metabolismo anormale del triptofano è implicato in vari disturbi neurologici, oncologici, psichiatrici e metabolici; pertanto, gli analoghi del triptofano radiomarcati sono stati ampiamente utilizzati nelle indagini cliniche. I due radiotraccianti di triptofano clinicamente studiati più comuni sono 11C-α-metil-L-triptofano ([11C]AMT) e 11C-5-idrossitriptofano (11C-5-HTP)3.
Nel 1990, 11C-5-HTP è stato utilizzato per visualizzare i tumori neuroendocrini secernenti serotonina4 e per diagnosticare e monitorare la terapia dell'adenocarcinoma prostatico refrattario all'ormone metastatico5. Successivamente, è stato utilizzato come strumento di imaging per la quantificazione del sistema serotoninergico nel pancreas endocrino6. 11 anni C-5-HTP è stato anche un tracciante promettente per il rilevamento non invasivo di isole vitali nel trapianto di isole intraportali e diabete di tipo 27,8. Negli ultimi due decenni, molti amminoacidi radiomarcati sono passati all'indagine clinica9,10. In particolare, l'analogo del triptofano marcato con carbonio-11 [11C]AMT ha ricevuto ampia attenzione per la mappatura della sintesi della serotonina cerebrale11,12,13,14 e per la localizzazione di focolai epilettici, tumori epilettogeni, complesso di sclerosi tuberosa, gliomi e tumori al seno15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24,25,26. [11C] L'AMT ha anche un elevato assorbimento in vari tumori di basso e alto grado nei bambini27. Inoltre, l'analisi cinetica del tracciante di [11C]AMT in soggetti umani è stata utilizzata per differenziare e classificare vari tumori e differenziare il glioma dal danno tissutale indotto dalle radiazioni15. [11C] L'imaging guidato da AMT mostra significativi benefici clinici nei disturbi cerebrali3,25. Tuttavia, a causa della breve emivita del carbonio-11 (20 min) e delle laboriose procedure di radiosintesi, l'uso di [11C]AMT è limitato ai pochi centri PET con un ciclotrone in loco e una struttura di radiochimica.
Fluorine-18 ha un'emivita favorevole di 109,8 min, rispetto all'emivita di 20 min del carbonio-11. Sempre più spesso, gli sforzi si sono concentrati sullo sviluppo di radiotraccianti marcati con fluoro-18 per il metabolismo del triptofano3,28. Un totale di 15 unici radiotraccianti di triptofano con fluoro-18 sono stati riportati in termini di radioetichettatura, meccanismi di trasporto, stabilità in vitro e in vivo, biodistribuzione e assorbimento tumorale negli xenotrapianti. Tuttavia, è stata osservata una rapida defluorurazione in vivo per diversi traccianti, tra cui 4-, 5-, e 6-[18F]fluorotriptofano, precludendo un'ulteriore traduzione clinica29. 5-[18F]Fluoro-α-metiltriptofano (5-[18F]FAMT) e 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano (L-[18F]FETrp, noto anche come acido (S)-2-ammino-3-(1-(2-[18F]fluoroetil)-1H-indol-3-il)propanoico, peso molecolare 249,28 g/mole), sono i due radiotraccianti più promettenti con cinetica in vivo favorevole nei modelli animali e grande potenziale di superamento [11 C]AMT per la valutazione delle condizioni cliniche con metabolismo del triptofano deregolato28. 5-[18F]FAMT ha mostrato un elevato assorbimento negli xenotrapianti tumorali IDO1-positivi di topi immunocompromessi ed è più specifico per l'imaging del KP rispetto a [11C]AMT28,30. Tuttavia, la stabilità in vivo di 5-[18F]FAMT rimane una potenziale preoccupazione in quanto non sono stati riportati dati di defluorurazione in vivo oltre 30 minuti dopo l'iniezione del tracer30.
Uno studio preclinico in un modello murino di medulloblastoma geneticamente modificato ha mostrato che, rispetto al 18F-fluorodesossiglucosio (18F-FDG), L-[18F]FETrp aveva un elevato accumulo nei tumori cerebrali, una defluorizzazione in vivo trascurabile e un basso assorbimento di fondo, dimostrando un rapporto target-non target superiore31,32. Gli studi di dosimetria delle radiazioni nei topi hanno indicato che L-[18F]FETrp aveva un'esposizione dosimetrica favorevole inferiore di circa il 20% rispetto al tracciante clinico 18F-FDG PET33. In accordo con le scoperte di altri ricercatori, i dati degli studi preclinici forniscono prove sostanziali a sostegno della traduzione clinica di L-[18F]FETrp per lo studio del metabolismo anormale del triptofano negli esseri umani con disturbi cerebrali come epilessia, neuro-oncologia, autismo e sclerosi tuberosa28,31,32,33,34,35,36 . Un confronto complessivo tra i tre traccianti più ampiamente studiati per il metabolismo del triptofano, 11C-5-HTP, [11C]AMT e L-[18F]FETrp, è mostrato nella Tabella 1. Sia 11C-5-HTP e [11C]AMT hanno una breve emivita e laboriose procedure di radioelabazione. Un protocollo per la radiosintesi di L-[18F]FETrp utilizzando un approccio one-pot, two-step è descritto qui. Il protocollo prevede l'uso di una piccola quantità di precursore di radioetichettatura, un piccolo volume di solventi di reazione, un basso carico di K222 tossico e una fase mobile ecologicamente benigna e iniettabile per la purificazione e la facile formulazione.
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Protocol
ATTENZIONE: Il protocollo coinvolge materiali radioattivi. Qualsiasi dose aggiuntiva di materiali radioattivi potrebbe portare ad un aumento proporzionale della possibilità di effetti avversi sulla salute come il cancro. I ricercatori devono seguire le pratiche di dose "il più basso ragionevolmente ottenibile" (ALARA) per guidare il protocollo di radiosintesi con un'adeguata protezione nella cella calda o nel cappuccio di piombo. Ridurre al minimo il tempo di contatto diretto, utilizzare uno scudo di piombo e mantenere la massima distanza per qualsiasi fase di esposizione alle radiazioni nel processo di radiosintesi sono essenziali. Indossa un badge di dosimetria delle radiazioni e anelli di monitoraggio delle mani durante l'intero esperimento e monitora frequentemente superfici potenzialmente contaminate come guanti, maniche e piedi. La Nuclear Regulatory Commission (NRC), i regolamenti locali e istituzionali devono essere seguiti per l'uso, la spedizione e lo smaltimento di qualsiasi materiale radioattivo.
1. Preparativi iniziali
- Preparare il 10% di etanolo in 50 mM di acetato di sodio/acido acetico in fase mobile per cromatografia liquida semipreparata ad alte prestazioni (HPLC).
- Introdurre 3 ml di acido acetico glaciale in un matraccio tarato pulito da 1000 ml. Aggiungere 900 ml di acqua ultrapura (resistività di 18 milioni di ohm-cm a 25 °C) nel matraccio volumetrico; aggiungere circa 8 mL di soluzione di idrossido di sodio 6 M e regolare il pH a 5,5 utilizzando un pHmetro calibrato e una striscia di pH. Dopo che la soluzione si è raffreddata a temperatura ambiente, portare il volume a 1000 ml con acqua ultrapura per preparare la soluzione di acetato di sodio/acido acetico da 50 mM (pH 5,5).
- Filtrare sotto vuoto la soluzione attraverso un filtro a membrana da 0,2 μm e trasferire la soluzione in due flaconi di solvente da 500 ml.
- Introdurre circa 250 mL del tampone di cui sopra in un matraccio tarato da 500 ml. Utilizzare un cilindro graduato per misurare 50 ml di etanolo della Farmacopea degli Stati Uniti (USP) e aggiungere l'etanolo al pallone volumetrico. Portare il volume a 500 mL con 50 mM di acetato di sodio/acido acetico e misurare il valore del pH con una striscia di pH.
- Preparare soluzioni di controllo qualità (QC) per un test di idoneità del sistema.
- Riempire le bottiglie di solvente HPLC con acqua fresca ultrapura (solvente A) ed etanolo (solvente B). Innescare la pompa HPLC e caricare il programma HPLC con una portata di 1 mL/min composta per il 30% da solvente A e per il 70% da solvente B (v/v).
- Creare una soluzione di controllo (soluzione vuota) per il controllo qualità. Aggiungere 5 mL di cloruro di sodio allo 0,9% in un flaconcino di vetro da 20 mL. Aggiungere 0,15 ml di cloruro di sodio al 23,4% nella soluzione di cui sopra. Aggiungere 6 mL di fase mobile HPLC semipreparante preparata nella fase 1.1.3 (10% di etanolo in 50 mM di acetato di sodio/acido acetico, pH 5,5) al flaconcino di vetro.
- Preparare 1 μg/mL di L-FETrp non irradiato e 5 μg/mL di miscele racemiche L-FETrp e D-FETrp (soluzioni standard).
- Costruire una curva di calibrazione utilizzando soluzioni standard L-FETrp (0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1,0 μg/mL, 10 μg/mL, 100 μg/mL).
- Impostare la sequenza HPLC. Assicurarsi che la sequenza includa una serie della soluzione campione in bianco, due serie di L-FETrp standard (1 μg/mL), una serie delle miscele racemiche L-FETrp e D-FETrp (5 μg/mL) e una corsa del radiofarmaco finale.
- Eseguire la sequenza HPLC parziale per testare l'idoneità del sistema prima di analizzare i campioni radioattivi utilizzando una colonna HPLC analitica (250 x 4,6 mm).
- Eseguire un campione vuoto e assicurarsi che il cromatogramma del campione vuoto non mostri picchi o insignificanti tra il volume vuoto e 10 minuti del cromatogramma.
- Eseguire due repliche della soluzione standard (contiene 1 μg/mL di L-FETrp). Assicurarsi che le aree di L-FETrp nelle due repliche siano entro ±5% del valore medio.
- Eseguire un campione delle miscele L-FETrp e D-FETrp (5 μg/mL di L-FETrp e D-EFTrp, rispettivamente). Assicurarsi che L-FETrp e D-FETrp possano essere identificati sul cromatogramma e che il basale sia risolto.
- Preparare le soluzioni di radioelabazione e altri materiali di consumo.
- Aggiungere le seguenti soluzioni a cinque flaconcini a forma di V da 1,5 ml, rispettivamente. Flaconcino 1: 1 mL di soluzione di carbonato di potassio (K2CO3)/K222 (5 mg/mL K222 e 1 mg/mL K2CO3 in una soluzione di acqua/acetonitrile, 1/99, v/v) per l'eluizione di [18F]fluoruro; Flaconcino 2: 0,4 mL di acetonitrile anidro per l'essiccazione al fluoruro [18F]; Flaconcino 3: precursore radioetichettatore in acetonitrile anidro (1-2 mg in 0,5 mL di acetonitrile anidro) per incorporazione di [18F]fluoruro; Flaconcino 4: acido cloridrico (2 M, 0,25 mL) in acetonitrile (0,25 mL) per acidolisi; Flaconcino 5: idrossido di sodio 2 M (0,25 mL) per la neutralizzazione delle miscele di reazione.
- Attivare una cartuccia luminosa di metilammonio quaternario (QMA) passando prima attraverso 10 mL di soluzione satura di bicarbonato di sodio, seguita da 10 mL di acqua ultrapura, quindi sciacquando la cartuccia con un flusso di azoto. Condizionare una cartuccia C8 leggera e una cartuccia di ossido di alluminio neutro passando attraverso 10 ml di etanolo, seguiti da 10 ml di acqua ultrapura.
- Aggiungere 0,15 mL di cloruro di sodio al 23,4% e 5 mL di cloruro di sodio allo 0,9% a un flaconcino di formulazione sterile da 30 mL per regolare la tonicità e diluire la frazione HPLC.
- Preparare una soluzione (1 mL di tampone acetato di sodio/acido acetico, 50 mM, pH = 5,5 preparato nella fase 1.1.1, 1 mL di etanolo e 0,5 mL di acqua [totale 2,5 mL]) in una siringa per il risciacquo del recipiente di reazione; caricare in un flaconcino sterile da 10 ml.
2. Assemblare le forniture di radioetichettatura e radiosintetizzare L-[18F]FETrp
- Assemblare i materiali di alimentazione per la radioetichettatura.
- Accendere l'alimentazione del modulo, l'anidride carbonica, l'aria compressa, le linee di argon e l'alimentazione del controllore logico programmabile (PLC). Fare clic sul pulsante mod_pscf18 per attivare il programma del sistema di sintesi radiochimica. Inizializza l'MVP di input, output e formulazione e assicurati che gli MVP si trovino rispettivamente nelle posizioni 4, 1, 1.
- Assicurarsi che il loop HPLC sia in posizione Diject e che la cartuccia luminosa QMA nella posizione di intrappolamento del fluoruro [18F].
- Installare il flacone di fase mobile HPLC semipreparatore (contenente la soluzione preparata al punto 1.1.3). Equilibrare il sistema HPLC facendo passare la fase mobile attraverso la colonna HPLC chirale (250 x 10 mm) e la colonna C18 (100 x 10 mm) a una portata di 2 mL/min per almeno 30 min, quindi commutare la valvola di deviazione, lasciare che il cellulare HPLC passi solo attraverso la colonna HPLC chirale e aumentare la portata a 3 mL/min.
- Installare la cartuccia luminosa QMA nella linea di intrappolamento/rilascio del fluoruro [18F]. Installare le cartucce di allumina/C8 impilate tra la posizione MVP di ingresso 6 e il flaconcino intermedio, che è un flaconcino a forma di V da 10 mL collegato al loop di campionamento HPLC. Installare un flaconcino vuoto da 10 mL (flaconcino di sfiato) nella posizione MVP di uscita 4 con un altro ago attaccato al flaconcino come sfiato. Installare i flaconcini del reagente 1-5 nelle posizioni MVP di ingresso 1-5, rispettivamente.
- Installare il flaconcino contenente la soluzione di risciacquo preparata al punto 1.3.4 nella posizione MVP di uscita 6.
- Installare una bottiglia da 500 ml (per raccogliere i rifiuti HPLC passando attraverso entrambe le colonne chirali e C18) alla formulazione MVP posizione 1. Installare un'altra bottiglia da 500 ml (per raccogliere i rifiuti HPLC che passano attraverso la colonna chirale) all'estremità di raccolta dei rifiuti della valvola a due posizioni a quattro porte.
- Collegare il flaconcino di raccolta delle frazioni (soluzione preriempita preparata al punto 1.3.3) alla formulazione MVP posizione 2. Collegare l'uscita MVP posizione 3 (linea del gas) e la linea di consegna del prodotto finale alla formulazione MVP posizione 2 fiale per recuperare il prodotto finale formulato. Installare un flaconcino sterile vuoto da 10 mL nella formulazione MVP posizione 3, che verrà utilizzato come flaconcino di backup per la raccolta della frazione target.
- Installare la colonna corta C18 tra la valvola di deviazione a quattro porte e due posizioni e la formulazione MVP.
NOTA: durante l'installazione del reagente e dei flaconcini di formulazione, assicurarsi che l'alimentazione di argon nel pannello di controllo sia disattivata e che la pressione dell'argon sia pari a zero per evitare qualsiasi trasferimento imprevisto di liquido durante l'assemblaggio del flaconcino. Ricontrollare tutte le connessioni degli aghi, le posizioni dei flaconcini e le posizioni MVP per la radiosintesi riproducibile.
- Radiosintesi di L-[18F]FETrp
- Ricevere e rilevare [18F]fluoruro.
- Quando si riceve la soluzione di fluoruro [18F] (15 ± 3 gigabecquerel (GBq) all'inizio della sintesi, vedere la tabella dei materiali), esaminare la scatola di piombo sulla superficie e a 1 m per registrare i tassi massimi di esposizione alle radiazioni. Fai un test di pulizia per assicurarti che la scatola di spedizione non sia contaminata. Registrare la dose e il tempo di [18F]fluoruro.
- Trasferire [18F]fluoruro.
- Trasferire la radioattività al sistema di sintesi radiochimica.
- Collegare la linea di argon con un ago corto e la linea di trasferimento del fluoruro [18F] con un ago lungo al flaconcino di fluoruro [18F]. Chiudere la porta a vetri a celle calde e la porta di piombo.
ATTENZIONE: utilizzare un morsetto lungo per spingere verso il basso entrambi gli aghi; assicurarsi che la punta lunga dell'ago si trovi sul fondo del flaconcino di fluoruro [18F] in modo che tutto il fluoruro [18F] possa essere trasferito. In genere, viene richiesto un flaconcino a forma di V per la somministrazione di [18F]fluoruro.
- Trappola, eluire e azeotropicamente secco [18F] fluoruro.
- Fare clic su Ar Supply per attivare la linea di alimentazione dell'argon, aumentare la pressione dell'argon, attivare la linea di spinta del fluoruro [18F] e spingere il fluoruro acquoso [18F] attraverso la cartuccia luminosa QMA. Dopo che tutta la radioattività è intrappolata nella cartuccia luminosa QMA e la lettura del rilevatore di radioattività è costante, aumentare la pressione dell'argon e soffiare l'argon attraverso la cartuccia per altri 5 minuti per rimuovere l'acqua in eccesso.
- Spegnere la linea di spinta del fluoruro [18F], ridurre la pressione dell'argon a zero, commutare la valvola a due posizioni a sei porte dalla posizione di intrappolamento del fluoruro [18F] alla posizione di eluizione. Aprire il flaconcino di reazione, accendere la linea di argon MVP posizione 1 in ingresso, spingere la soluzione K222/K2CO3 nel flaconcino mvp posizione 1 in ingresso attraverso la cartuccia luminosa QMA per eluire la radioattività nel flaconcino di reazione. Commutare la posizione di eluizione del fluoruro [18F] nella posizione di intrappolamento.
- Fare clic sul pulsante Calore per riscaldare il reattore a 110 °C, attivare la linea di argon MVP posizione 4 di uscita (linea di spazzamento) che si collega al reattore ed evaporare il solvente nel flaconcino di uscita MVP posizione 4.
- Fare clic sul pulsante Freddo per raffreddare il reattore a temperatura ambiente con anidride carbonica compressa, spegnere la linea di spazzamento, commutare la posizione MVP di ingresso 1 in posizione 2 e aggiungere l'acetonitrile anidro nel flaconcino 2. Accendere la linea di spazzamento e il riscaldatore al fluoro azeotropicamente secco [18F] a 110 °C.
- Aggiungere il precursore della radioetichettatura e incorporare [18F]fluoruro.
- Raffreddare il reattore a temperatura ambiente, spegnere la linea di spazzamento, commutare la posizione MVP di ingresso 2 in posizione 3 e aggiungere il precursore di radioetichettatura tosilato nel flaconcino 3. Chiudere il reattore e riscaldare le miscele di reazione a 100 °C per 10 minuti.
- Evaporare il solvente di reazione e acidolisi.
- Raffreddare e aprire il reattore, accendere la linea di spazzamento ed evaporare il solvente di reazione a 100 °C.
- Raffreddare il reattore, spegnere la linea di spazzamento, commutare la posizione MVP di ingresso 3 alla posizione 4 e aggiungere la miscela acido cloridrico/acetonitrile (0,5 mL, 1/1, v/v). Riscaldare la reazione a 100 °C per 10 minuti per deproteggere i gruppi di protezione terz-butile e terz-butilossicarbonile nel precursore della radioetichettatura.
- Neutralizzare la reazione.
- Raffreddare il reattore a temperatura ambiente e commutare la posizione MVP di ingresso 4 in posizione 5 per aggiungere idrossido di sodio 2 M per neutralizzare la miscela di reazione. Disattivare la linea di argon MVP di ingresso.
- Trasferire la miscela di reazione al flaconcino intermedio.
- Fare clic sul pulsante F nell'MVP di uscita per passare l'MVP di uscita dalla posizione di sfiato 4 alla posizione 5, quindi fare clic sul pulsante F nell'MVP di ingresso per passare l'MVP di ingresso dalla posizione 5 alla posizione 6. Attivare la linea di argon MVP di uscita. Spingere la miscela di reazione attraverso le cartucce di ossido di alluminio neutro e C8 impilate fino al flaconcino intermedio installato prima del ciclo di campionamento HPLC.
- Risciacquare il reattore e trasferire la soluzione.
- Commutare la posizione MVP di uscita 5 in posizione 6, spingere la soluzione di risciacquo nel flaconcino di uscita MVP posizione 6 attraverso il flaconcino di reazione e le cartucce al flaconcino intermedio, successivamente. Si noti che il volume della miscela combinata è di circa 3,5 ml. Chiudere il recipiente di reazione.
- Caricare la miscela combinata sul circuito HPLC e purificare la miscela.
- Commutare il loop HPLC dalla posizione di iniezione alla posizione di carico, attivare la linea di argon MVP in ingresso e caricare le miscele nel loop HPLC da 5 mL. Al termine del carico, impostare il pulsante di caricamento per l'iniezione e fare clic su Inietta HPLC per avviare il cromatogramma HPLC a una portata di 3 ml/min. Fare clic sul pulsante del monitor HPLC per accedere al cromatogramma HPLC in tempo reale.
- Deviare la frazione target sulla colonna C18.
- Fare clic sul pulsante MVP di deviazione per deviare la frazione HPLC di destinazione sulla colonna C18 corta a circa 12 minuti.
- Lavare la colonna HPLC chirale e purificare la frazione nella colonna C18.
- Dopo che la radioattività target è stata raccolta nella colonna C18 (e la fase mobile HPLC scorre nella bottiglia di scarico della formulazione MVP posizione 1), commutare la valvola di deviazione a due posizioni a quattro porte nella posizione di raccolta dei rifiuti. Lavare la colonna chirale a 4 mL/min per 6 min per rimuovere l'enantiomero minore D-[18F]FETrp e altre impurità ultraviolette (UV).
- Fare clic sul pulsante MVP di deviazione per deviare la fase mobile HPLC verso la posizione MVP 1 della formulazione a una portata di 3 ml / min. Osservate che la fase mobile passa attraverso la colonna chirale e la colonna C18 per purificare L-[18F]FETrp trattenuto nella colonna C18.
- Raccogliere la frazione target.
- Raccogliere l'eluente a circa 32-34 minuti nel flaconcino di posizione 2 della formulazione MVP.
NOTA: In genere, viene raccolta una frazione HPLC di 2 minuti e il volume totale più la soluzione di cloruro di sodio preriempita è di 8-15 ml.
- Raccogliere l'eluente a circa 32-34 minuti nel flaconcino di posizione 2 della formulazione MVP.
- Somministrare la dose a un flaconcino sterile del prodotto finale.
- Spingere la soluzione nel flaconcino MVP posizione 2 della formulazione attraverso la linea di erogazione e il filtro sterile nel flaconcino della dose finale (tramite l'ago del filtro di sfiato sterile preinstallato).
NOTA: i passaggi del protocollo 2.2.9-2.2.13 sono passaggi utilizzati per la purificazione HPLC di L-[18F]FETrp.
- Spingere la soluzione nel flaconcino MVP posizione 2 della formulazione attraverso la linea di erogazione e il filtro sterile nel flaconcino della dose finale (tramite l'ago del filtro di sfiato sterile preinstallato).
- Analizzare la radioattività e il volume della dose.
- Rimuovere il filtro sterile e valutare l'attività e il volume della dose finale.
- Lavare il sistema con acqua ultrapura seguita da etanolo a 4 ml/min per almeno 15 minuti ciascuno. Spegnere la pompa HPLC e la scatola PLC; chiudere il programma; arrestare la linea dell'aria compressa, la linea dell'argon e la linea dell'anidride carbonica; e spegnere l'alimentazione principale del modulo.
- Prelevare la dose QC ed eseguire i campioni QC.
- Prelevare circa 0,1 mL della dose finale in un inserto da 0,2 mL di un flaconcino qc. Eseguire l'esempio a caldo come programma di "sequenza parziale" seguendo il test di idoneità del sistema descritto nel passaggio 1.2.6 .
- Analizzare i dati QC e rilasciare la dose.
- Calcolare le purezze chimiche e radiochimiche, l'eccesso di valore enantiomerico e l'attività molare; determinare il valore del pH.
- Rilasciare la dose se tutti i risultati dei test superano l'intervallo accettabile.
- Ricevere e rilevare [18F]fluoruro.
3. Sistema post-esecuzione pulito
- Esaminare il modulo di radioelabazione utilizzando un misuratore di rilevamento Geiger-Mueller (GM) per garantire che la radioattività sia adeguatamente decomposta (almeno 24 ore) prima che il sistema sia pulito.
- Accendere il modulo di radioetichettatura di alimentazione e l'alimentazione della scatola PLC; attivare il programma del sistema di sintesi radiochimica; e inizializzare l'MVP di input, l'MVP di output e l'MVP di formulazione. Impostare il selettore di colonne sulla posizione di bypass.
- Staccare la luce QMA, l'allumina e le cartucce C8.
- Lavare prima tutti i flaconcini e le linee con acqua ultrapura, seguita da etanolo. Asciugare i flaconcini e le linee con argon ad alta purezza.
- Sigillare ogni sfiato di linea usando un ago sterile con un cappuccio. Sostituire i flaconcini del reagente e il recipiente di reazione rispettivamente con flaconcini bruciati in forno e recipiente di reazione.
- Spegnere la pompa HPLC e la scatola PLC; chiudere il programma; arrestare la linea dell'aria compressa, la linea dell'argon e la linea dell'anidride carbonica; e spegnere l'alimentazione principale del modulo.
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Representative Results
Lo schema di reazione è mostrato nella Figura 1. La radioetichettatura comprende le seguenti due fasi: 1) la reazione del precursore della radioetichettatura tosilato con il fluoruro [18F] fornisce l'intermedio marcato 18F e 2) la deprotezione dei gruppi terz-butilossicarbonile e terz-butil-protettivo nell'intermedio offre il prodotto finale L-[18F]FETrp. Entrambe le fasi di reazione continuano a 100 °C per 10 minuti.
Prima di ricevere [18F]fluoruro dal fornitore commerciale, assemblare i flaconcini di reagente, i flaconcini di formulazione e le cartucce; equilibrare i sistemi semi-preparativi, QC; ed eseguire un test di idoneità del sistema QC. Il flusso di lavoro dettagliato per la radiosintesi di L-[18F]FETrp è descritto nella Figura 2. In breve, la radioattività viene rilevata e trasferita al sistema di sintesi radiochimica e il fluoruro [18F] viene essiccato azeotropicamente nel recipiente di reazione dopo le fasi di intrappolamento / rilascio. Dopo l'incorporazione del fluoruro [18F] nella prima fase, l'acido viene aggiunto per deproteggere i due gruppi funzionali, seguito dalla neutralizzazione della base. La miscela di reazione viene trasferita in un flaconcino intermedio e il recipiente di reazione viene risciacquato con una soluzione mista. La miscela combinata viene caricata sul circuito HPLC per la purificazione. Una combinazione di colonne HPLC chirali e C18 viene utilizzata per rimuovere le impurità chimiche. La frazione target viene raccolta in un flaconcino di formulazione preriempito con cloruro di sodio per regolare la concentrazione della dose e la tonicità. Il prodotto finale viene filtrato sterile in un flaconcino a dose finale, dosato e aliquotato per il controllo di qualità prima che le dosi vengano rilasciate.
Il diagramma schematico dell'installazione del sistema è illustrato nella Figura 3. Il modulo è costituito dai seguenti componenti principali: 1) MVP di ingresso per l'aggiunta di reagenti, 2) MVP di uscita per lo sfiato e il risciacquo del reattore, 3) MVP di formulazione per la raccolta della frazione HPLC e la formulazione della dose, 4) [18F] intrappolamento del fluoruro e rilascio mvp e 5) sistema di purificazione HPLC. Le tendenze per la radioattività, la temperatura di reazione e la pressione possono essere monitorate in tempo reale attraverso il pannello di controllo. Un tipico cromatogramma HPLC semipreparativo è mostrato nella Figura 4. La frazione target contenente impurità UV viene deviata su una breve colonna C18 (la traccia nera sovrapposta alla traccia UV rossa, Figura 4). Le impurità nel componente target possono essere rimosse facendo passare la frazione attraverso una colonna C18. La frazione HPLC purificata eluita dalla colonna C18 viene raccolta nel flaconcino di formulazione. La dose viene misurata e aliquotata per la QC.
I cromatogrammi HPLC rappresentativi per qc sono mostrati nella Figura 5. Il cromatogramma del campione bianco mostra picchi insignificanti tra il volume del vuoto e 10 minuti del programma. Il riferimento standard non irradiato L-FETrp mostra un singolo isomero, ben separato dal riferimento standard della sua controparte D. La dose finale di L-[18F]FETrp mostra un'elevata purezza chimica e purezza radiochimica. I test di stabilità del prodotto finale alla massima concentrazione di dose fino a 8 ore mostrano che L-[18F]FETrp è stabile in termini di purezza chimica, purezza radiochimica, eccesso enantiomerico e valore del pH (Tabella 2)37. Questo protocollo per la radiosintesi one-pot, two-step di L-[18F]FET richiede circa 100 min. La resa corretta per il decadimento è del 20 ± del 5%, con purezze chimiche e radiochimiche superiori al 95%. A partire da 12-18 GBq di [18F]fluoruro, l'attività molare di L-[18F]FET è 88-118 GBq/μmol. La concentrazione di massa è tipicamente inferiore a 0,5 μg/mL, con una concentrazione di dose compresa tra 37 e 185 MBq/mL.
Figura 1: Schema di reazione per la radiosintesi a una pentola e due fasi di L-[18F]FETrp. Abbreviazioni: MeCN = acetonitrile; L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano; K222 = 4,7,13,16,21,24-esaoxa-1,10-diazabiciclo[8.8.8]esacosano. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Panoramica del flusso di lavoro di radiosintesi L-[18F]FETrp. *Un controllo di qualità completo secondo USP823, USP797 sarà seguito per l'uso umano di L-[18F]FETrp. Abbreviazioni: QC = controllo qualità; MeCN = acetonitrile; L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Produzione di L-[18F]FETrp. Schema schematico di setup (a sinistra) e fotografia della piattaforma di radiosintesi (a destra). L'installazione include i seguenti componenti principali: 1. MVP di input; 2. MVP di uscita; 3. Formulazione MVP; 4. [18F] MVP che intrappola/rilascia fluoro; 5. Cartuccia QMA; 6. Flaconcino intermedio; 7. Cartucce di allumina / C8; 8. Reattore; 9. Colonna HPLC chirale; 10, colonna C18; 11. Bottiglia di rifiuti HPLC alla colonna chirale; 12. MVP della deviazione; 13. Bottiglia di scarico HPLC alle colonne chirali e C18; 14. Flaconcino di formulazione; 15. Eseguire il backup del flaconcino. Abbreviazioni: L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano; MVP = posizionatore modulare del flaconcino; QMA = metilammonio quaternario. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: Cromatogramma semipreparatologico tipico per la purificazione di L-[18F]FETrp. Traccia rossa, canale UV a 254 nm. Traccia nera, canale di radioattività. Le frecce 1, 2 indicano rispettivamente l'inizio e la fine della deviazione della frazione radioattiva contenente L-[18F]FETrp verso la colonna C18. Le frecce 3, 4 indicano l'inizio e la fine della raccolta della frazione target purificata L-[18F]FETrp eluita dalla colonna C18, rispettivamente. Abbreviazione: L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5: Cromatogramma HPLC analitico tipico per il controllo di qualità di L-[18F]FETrp. 1) Soluzione in bianco, 2) soluzione standard di L-FETrp, 3) soluzione standard di miscele L-FETrp e D-FETrp, 4) traccia UV di L-FETrp a 230 nm, 4) traccia di radioattività della formulazione L-[18F]FETrp. Abbreviazione: L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano; L-FETrp = 1-(2-fluoroetil)-L-triptofano; D-FETrp = 1-(2-fluoroetil)-D-triptofano. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Tracciante | Indagini cliniche | Principali indicazioni | Pro | Contro | |||
| 11 anni C-5-HTP | Sì | Imaging di tumori neuroendocrini che producono serotonina, malattie neuropsichiatriche | Sensibile nel rilevare piccoli tumori neuroendocrini | Hai bisogno di un ciclotrone in loco, breve emivita, procedure laboriose, radiosintesi multienzimatica, sensibile alla concentrazione precursore e al pH della soluzione, assorbimento aspecifico in aree dopaminergiche e noradrenergiche | |||
| [11C] AMT | Sì | Localizzazione di tessuti epilettogeni e tumori cerebrali basata su forti attivazioni della via della chinurenina | Produzione di cGMP disponibile, non incorporata nella sintesi proteica | Hai bisogno di un ciclotrone in loco, breve emivita, procedure laboriose, quantificazione complicata in condizioni patologiche | |||
| L-[18F]FETrp | No | Imaging della via della chinurenina inclusi focolai epilettici, tumori cerebrali e rilevamento di anomalie neuroinfiammatorie associate all'epilessia | Emivita favorevole, disponibile per la consegna satellitare, radiosintesi cGMP, elevata stabilità verso la defluorurazione e dosimetria di radiazione favorevole | Assorbimento facilitato sia dal trasportatore di L-amminoacidi che dal trasportatore di alanina-serina-cisteina, nessuna indagine umana ancora | |||
Tabella 1: Confronto tra 11C-5-HTP, [11C]AMT e L-[18F]FETrp. Abbreviazioni: cGMP = attuali buone pratiche di fabbricazione; α-[11C]metil-L-triptofano; L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano; 11 anni C-5-HTP = 11C-5-idrossitriptofano.
| Ore dopo la fine della sintesi del test | Purezza radiochimica mediante HPLC (%) | Purezza chimica (%) | Eccesso enantiomerico (%) | Ph |
| 0 | 99 | >95 | 98 | 5.5 |
| 1 | 99 | >95 | 99 | 5.5 |
| 2 | 99 | >95 | 99 | 5.5 |
| 4 | 99 | >95 | 98 | 5.5 |
| 6 | 98 | >95 | 98 | 5.5 |
| 8 | 97 | >95 | 97 | 5.5 |
Tabella 2: Test di stabilità di L-[18F]FETrp in un lotto tipico alla massima concentrazione di dose. Abbreviazione: L-[18F]FETrp = 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano.
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Discussion
Il triptofano è un aminoacido essenziale per l'uomo. Svolge un ruolo importante nella regolazione dell'umore, della funzione cognitiva e del comportamento. I derivati del triptofano radiomarcati, in particolare il carbon-11-labeled [11C]AMT, sono stati ampiamente studiati grazie al loro ruolo unico nella mappatura della sintesi della serotonina38,39, nel rilevamento e nella classificazione dei tumori40, nella guida della chirurgia dell'epilessia41,42 e nella valutazione della risposta al trattamento nel diabete43. Tuttavia, la breve emivita e le laboriose procedure di radioetichettatura limitano l'applicazione diffusa di [11C]AMT. Sono in corso sforzi per sviluppare agenti marcati con fluoro-18 per il metabolismo del triptofano. Due recenti articoli di revisione riassumono le proprietà di sviluppo e imaging degli agenti di imaging del triptofano marcati con fluoro3,28.
Rispetto al suo predecessore marcato 11C, L-[18F]FETrp dimostra proprietà di imaging in vivo favorevoli, buona stabilità metabolica e resistenza alla defluorurazione33. Inoltre, L-[18F]FETrp dimostra un profilo dosimetrico favorevole rispetto a 18F-FDG ed è stato proposto come promettente agente di imaging del triptofano per la traduzione clinica32,33. La metodologia qui descritta utilizza una strategia one-pot, due step per la radiosintesi di L-[18F]FETrp in un sistema di sintesi radiochimica. L-[18F]FETrp è stato prodotto con elevata purezza chimica, purezza radiochimica ed eccesso enantiomerico. La massa totale di L-FETrp non irradiato nella dose finale non è superiore a 5 μg e il contenuto di etanolo non è superiore al 10%. L-[18F]FETrp è prodotto di routine nel centro PET per l'imaging del metabolismo del triptofano in un modello transgenico di tumore cerebrale del topo medulloblastoma e ha mostrato risultati di imaging favorevoli32. Se confrontato con il metodo riportato per L-[18F]FETrp, il protocollo attuale include i vantaggi dettagliati di seguito.
In primo luogo, per la radioetichettatura vengono utilizzati un piccolo recipiente di reazione e meno solventi precursori e di reazione rispetto ad altri moduli e metodi di radioetichettatura segnalati (in cui sono stati utilizzati 9 mg di precursore in 1,1 mL di solvente)35 e solo 1-2 mg di precursore di radioetichettatura in 0,5 mL di solvente vengono aggiunti alla reazione ma con una resa molto più elevata dell'enantiomero. È stata riportata una resa inferiore all'1% per una radiosintesi a due vasi e tre fasi di L-[18F]FETrp senza alcuna segnalazione del valore in eccesso enantiomerico44.
In secondo luogo, viene utilizzata la quantità più bassa di K222 tossico, rispetto alle procedure riportate per L-[18F]FETrp o racemico [18F]FETrp. In genere vengono utilizzati 4-5 mg di K222 rispetto ai 37,5 mg utilizzati da altri35. K222 è un catalizzatore a trasferimento di fase frequentemente utilizzato nella radiosintesi di traccianti PET marcati con 18F. Il limite specificato nell'USP per K222 è inferiore a 50 μg/mL. Un test delle macchie di colore per il rilevamento della concentrazione residua di K222 deve essere eseguito per soddisfare i criteri prima di rilasciare la dose finale per uso clinico45.
In terzo luogo, solo l'1% di acqua viene introdotto nella soluzione K2CO3/K222 per l'eluizione di [18F]fluoruro, che accelera il processo di essiccazione del fluoruro acquoso [18F]. Gli anioni [18F]fluoruro sono fortemente idratati e diventano chimicamente inerti in mezzi acquosi46. Pertanto, per l'incorporazione di fluoruro [18F] è necessario migliorare la nucleofilia desolvendo il fluoruro [18F] e l'essiccazione azeotropica della soluzione acquosa. L'acqua competerà anche con il fluoruro [18F] per idrolizzare invece della sostituzione nucleofila al fluoruro [18F] desiderata del precursore della radioetichettatura.
In quarto luogo, una fase mobile iniettabile viene utilizzata per la purificazione di L-[18F]FETrp. Il dieci percento di etanolo in 50 mM di acetato di sodio / acido acetico, pH 5,5, viene utilizzato come fase mobile per purificare il radiotracciante, portando prontamente il contenuto di etanolo a meno del 10% nella dose finale per uso clinico. Mentre il 90% di etanolo in acqua è stato segnalato per risolvere gli enantiomeri, ci vuole più tempo per evaporare il contenuto di etanolo a meno del 10% a 78 ° C34.
Lo studio preclinico di L-[18F]FETrp in un modello murino di medulloblastoma transgenico mostra che 1-L-[18F]FETrp aveva un elevato accumulo di tumore cerebrale con cinetica favorevole, defluorizzazione in vivo trascurabile e basso assorbimento di fondo32. 1-L-[18F]FETrp mostra anche un rapporto target-to-nontarget superiore a 18F-FDG31. Inoltre, il protocollo è facile da configurare per la produzione di L-[18F]FETrp per l'indagine clinica37. Ulteriori test di controllo qualità completi, tra cui integrità del filtro, purezza radionuclidica, livelli residui di solvente, concentrazione di K222, livello di endotossina batterica e test di sterilità, possono essere prontamente eseguiti per la dose finale del radiofarmaco. Il processo di approvazione normativa per l'utilizzo clinico di L-[18F]FETrp in soggetti umani è attivamente in corso.
Il metodo ha alcune limitazioni. Due colonne HPLC sono utilizzate per ottenere un'adeguata purezza chimica e un eccesso enantiomerico di L-[18F]FETrp. Per la purificazione viene utilizzata una portata della fase mobile a 3 ml/min. Una portata più elevata si traduce in un'elevata contropressione, mentre una portata inferiore porta a tempi prolungati per la purificazione e una scarsa risoluzione di base dei picchi. Colonne HPLC alternative compatibili con la fase mobile e che mostrano una migliore selettività verso gli enantiomeri e una buona risoluzione sulle impurità possono semplificare le fasi di purificazione.
Il modulo di sintesi radiochimica è un sistema non commerciale. La radiosintesi completamente automatizzata di [18F]FETrp racemico è stata riportata in un sintetizzatore commerciale GE FASTlab. La separazione chirale degli enantiomeri viene eseguita con una colonna HPLC analitica chirale; gli isomeri L e D finali sono formulati su una seconda cassetta FASTLab35. Xin e Cai34 hanno riportato la radiosintesi automatica di L-[18F]FETrp otticamente puro utilizzando un sistema GE FX-N. Mentre i due enantiomeri possono essere facilmente separati con la colonna HPLC chirale semipreparata, la fase mobile con un alto contenuto di etanolo (90% di etanolo in acqua) non è adatta per l'iniezione umana diretta34. L'uso di un radiosintetizzatore commerciale e di una fase mobile iniettabile per L-[18F]FETrp con elevato eccesso enantiomerico è altamente auspicabile per una facile indagine clinica.
In conclusione, un analogo del triptofano marcato con fluoro-18 L-[18F]FETrp è stato sintetizzato in un sistema di sintesi radiochimica utilizzando un approccio one-pot, a due fasi con elevata affidabilità e riproducibilità. La radiosintesi presenta piccole quantità di precursori e solventi di radioetichettatura, una fase mobile iniettabile e una facile implementazione per la produzione clinica di L-[18F]FETrp per uso umano. Il protocollo faciliterà l'utilizzo più diffuso di questo radiotracciante per disturbi neurologici e tumori implicati con il metabolismo del triptofano.
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Disclosures
Gli autori dichiarano che non esistono interessi finanziari concorrenti.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato supportato dal Diagnostic & Research PET/MRI Center e dai Dipartimenti di Ricerca Biomedica e Radiologia del Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Children.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| [18F]Fluoride in [18O]H2O | PETNET Solutions Inc. | N/A | |
| 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane | ACROS | 291950010 | Kryptofix 222 or K222, 98% |
| Acetic acid | ACROS | 222142500 | 99.8% |
| Acetonitrile | Sigma-Aldrich | 271004 | anhydrous, 99.8% |
| Agilent 1260 HPLC system | Agilent Technologies | Agilent 1260 | Agilent 1260 series |
| Analytcial chiral HPLC column | Sigma-Aldrich | 12024AST | Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm × 4.6 mm |
| Carbon dioxide, 60 LBS | Airgas | REFR744R200S | 99.99% |
| D-FETrp standard reference | Affinity Research Chemicals Inc | N/A | Custom synthesis |
| Empty sterile vial | Jubilant HollisterStier | 7515 | 20 mm closure, 10 mL |
| Ethanol | Decon Labs | 2716 | 200 proof, USP grade. ≥99.9% |
| Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 µm, PVDF, sterile | Fisher Scientific | 09-720-3 | |
| Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich | 30721 | ≥37% |
| Isopropanol | Decon Labs | 8316 | 70%, sterile |
| L-[18F]FETrp radiolabeling precursor | Affinity Research Chemicals Inc | N/A | Custom synthesis |
| L-FETrp standard reference | Affinity Research Chemicals Inc | N/A | Custom synthesis |
| Light C8 cartridge | Waters | WAT036770 | Sep-Pak C8 plus light cartridge |
| Needle, 20 G x 1 | Becton-Dickinson & Co. | 305175 | |
| Needle, 20 G x 1 ½ | Becton-Dickinson & Co. | 305176 | |
| Needle, 21 G x 2 | Becton-Dickinson & Co. | 305129 | |
| Neutral aluminum oxide | Waters | WAT023561 | Sep-Pak alumina N plus light |
| Nylon membrane (0.20 µm ) | MilliPore | GNWP04700 | 47 mm |
| Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter | Pall Corporation | 4907 | |
| PETCHEM radiochemistry synthesis system | PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI | N/A | Radiosynthesizer |
| pH strips 2.0 - 9.0 | EMD Millipore | 1.09584.0001 | |
| Potassium carbonate | Sigma-Aldrich | 367877 | 99.995% |
| Quaternary methylammonium light cartridge | Waters | 186004051 | Sep-Pak QMA light |
| Semi-preparative C18 HPLC column | Phenomenex | 00D-4253-N0 | 100 × 10 mm |
| Semi-preparative chiral HPLC column | Sigma-Aldrich | 12034AST | Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm × 10 mm |
| Sodium chloride injection 23.4% | APP Pharmaceutical, LLC | 18730 | USP grade |
| Sodium chloridei injection 0.9% | Hospira | NDC 0409-4888-10 | USP grade |
| Sodium hydroxide | Honeywell | 306576 | 99.99% |
| Spinal needle, 20 G x 3 ½ | Becton-Dickinson & Co. | 405182 | |
| Sterile alcohol prep pads | BioMed Resource Inc. | PC661 | |
| Sterile empty vials, 2 mL | Hollister Stier | 7505ZA | 13 mm closure |
| Sterile empty vials, 30 mL | Jubilant HollisterStier | 7520ZA | 20 mm closure |
| Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock | Air-Tite | 4020-X00V0 | |
| Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock | Becton-Dickinson & Co. | 309646 | |
| Syringe, PP/PE, 10 mL, NORM-JECT | Air-Tite | 4100-000V0 | |
| Syringe, 1 mL, Luer Slip | Becton-Dickinson & Co. | 309659 | |
| Syringe, 3 mL, Luer-Lock | Becton-Dickinson & Co. | 309657 | |
| Ultra high purity argon | Airgas | AR UHP300 | 99.999% |
| Ultrapure water | MilliporeSigma | ZRQSVP300 | Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system |
References
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![Radiosintesi di 1-(2-[<sup>18F</sup>]Fluoroetil)-L-triptofano utilizzando un protocollo One-pot, Two-step](https://cloudfront.jove.com/CDNSource/teasers/63025.jpg)
