Summary
इस पांडुलिपि का उद्देश्य चूहों में एक हेटरोटोपिक लारेंजियल प्रत्यारोपण करने के लिए आवश्यक माइक्रोसर्जिकल चरणों का वर्णन करना है। लारेंजियल प्रत्यारोपण के अन्य पशु मॉडल की तुलना में इस माउस मॉडल के फायदे इसकी लागत-प्रभावशीलता और प्रतिरक्षाविज्ञानी परख और डेटा की उपलब्धता हैं।
Abstract
लारेंजियल हेटरोटोपिक प्रत्यारोपण, हालांकि एक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया है, अन्य पशु मॉडल की तुलना में अधिक वैज्ञानिक विश्लेषण और लागत लाभ प्रदान करता है। यद्यपि पहली बार 2009 में Shipchandler et al. द्वारा वर्णित किया गया था, इस तकनीक का व्यापक रूप से उपयोग नहीं किया जाता है, संभवतः माइक्रोसर्जिकल तकनीक सीखने में कठिनाइयों और इसे मास्टर करने के लिए आवश्यक समय के कारण। यह पेपर इस तकनीक के प्रभावी उपयोग को प्रोत्साहित करने के लिए शल्य चिकित्सा चरणों के साथ-साथ संभावित नुकसानों से बचने के लिए विस्तार से वर्णन करता है।
इस मॉडल में, दाता स्वरयंत्र की द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियों को प्राप्तकर्ता कैरोटिड धमनी और बाहरी जुगुलर नस से जोड़ा जाता है, जिससे ग्राफ्ट के माध्यम से रक्त प्रवाह की अनुमति मिलती है। ग्राफ्ट द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियों में रक्त भरने, ग्राफ्ट की थायरॉयड ग्रंथियों के लाल होने और ग्राफ्ट में सूक्ष्म वाहिकाओं से रक्तस्राव के दृश्य द्वारा रक्त प्रवाह की पुष्टि इंट्राऑपरेटिव रूप से की जा सकती है। सफलता के लिए महत्वपूर्ण तत्वों में ग्राफ्ट वाहिकाओं का नाजुक संरक्षण, सही आकार की धमनीटॉमी और वेनोटॉमी बनाना, और रिसाव के बिना वाहिकाओं को सुरक्षित करने और रोड़ा को रोकने के लिए धमनी-धमनी और धमनी-शिरापरक एनास्टोमोस पर उचित संख्या में सीवन का उपयोग करना शामिल है।
कोई भी पर्याप्त प्रशिक्षण के साथ इस मॉडल में कुशल हो सकता है और लगभग 3 घंटे में प्रक्रिया कर सकता है। यदि सफलतापूर्वक प्रदर्शन किया जाता है, तो यह मॉडल प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों को आसानी से और कम लागत पर करने की अनुमति देता है।
Introduction
अपूरणीय लारेंजियल क्षति या लारेंजियल कैंसर से पीड़ित रोगियों के लिए, कुल लैरींगेक्टोमी अक्सर एकमात्र विकल्पहोता है। कुल लैरींगेक्टोमी रोगियों को सामाजिक और मनोवैज्ञानिक संकट का अनुभव करने के अलावा, अपने दम पर सांस लेने और बोलने की क्षमता के बिना छोड़देता है। लारेंजियल कैंसर वाले रोगी जिन्हें कुल लैरींगेक्टोमी की आवश्यकता होती है, वे लारेंजियल प्रत्यारोपण के लिए उत्कृष्ट संभावित उम्मीदवार हैं। जबकि अपूरणीय लारेंजियल क्षति की सेटिंग में मानव लारेंजियल प्रत्यारोपण किया गया है, वर्तमान में ट्यूमर पुनरावृत्ति के डर, पुरानी अस्वीकृति की संभावना और दाता-व्युत्पन्न संक्रमण के डर से इन रोगियों में स्वरयंत्र के एलोट्रांसप्लांटेशन से बचाजाता है। इम्यूनोसप्रेशन इन चिंताओं का प्राथमिक कारण है। पारंपरिक इम्यूनोसप्रेसिव उपचार के बाद ट्यूमर पुनरावृत्ति के कारण पहले आंशिक लारेंजियल प्रत्यारोपण रोगी का नाटकीय नुकसान इस बात का सबूत है कि लारेंजियलकैंसर रोगियों में प्रत्यारोपण के लिए आगे के प्रयास करने से पहले एक उपयुक्त इम्यूनोसप्रेसिव आहार तैयार किया जाना चाहिए।
प्रत्यारोपित स्वरयंत्र के लिए मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बेहतर ढंग से समझने के लिए, चूहों में पहला लारेंजियल प्रत्यारोपण मॉडल 1992 में स्ट्रोम द्वारा विकसित किया गया था, और 2002 6,7 में सर्जिकल तकनीक में सुधार किया गया था। यद्यपि यह मॉडल लारेंजियल प्रत्यारोपण का अध्ययन करने के लिए प्रभावी है, चूहे-विशिष्ट इम्यूनोलॉजिकल एजेंटों की कमी और चूहे के मॉडल से जुड़ी उच्च लागत ने 2009 में लारेंजियल प्रत्यारोपण का अध्ययन करने के लिए एक नए माउस मॉडल के विकासका नेतृत्व किया।
वर्णित तकनीक का मुख्य अनुप्रयोग लारेंजियल प्रत्यारोपण में विभिन्न इम्यूनोसप्रेसिव दवा आहार का अध्ययन करना है। वर्तमान इम्यूनोसप्रेसिव थेरेपी में सुधार उम्मीदवार पूल को व्यापक बना सकता है और कैंसर रोगियों में सुरक्षित प्रत्यारोपण का कारण बन सकता है। इस माउस मॉडल के लाभ इसकी लागत-प्रभावशीलता और प्रतिरक्षाविज्ञानी डेटा और अभिकर्मकों की व्यापक उपलब्धता हैं।
लारेंजियल प्रत्यारोपण के लिए इम्यूनोसप्रेसिव उपचार आहार पर काम करने वाली टीमें बड़ी मात्रा में इम्यूनोलॉजिकल डेटा एकत्र करने के लिए इस विधि का उपयोग कर सकती हैं, और विभिन्न दवा आहारों का तेजी से परीक्षण और तुलना की जा सकती है। अन्य संभावित उपचार के तौर-तरीके जो प्रत्यारोपण के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को संशोधित कर सकते हैं, जैसे कि स्टेम सेल इंजेक्शन, इस मॉडल का उपयोग करके भी परीक्षण किया जा सकता है। अंत में, अनुवर्ती अवधि का विस्तार करके लारेंजियल प्रत्यारोपण के दीर्घकालिक प्रणालीगत प्रभावों का निरीक्षण करने के लिए प्रयोग तैयार किए जा सकते हैं।
यहां वर्णित तकनीक एक हेटेरोटोपिक स्वरयंत्र ग्राफ्ट में धमनी और शिरापरक प्रवाह प्रदान करने के लिए एंड-टू-साइड एनास्टोमोस का उपयोग करती है। ग्राफ्ट एक लैरींगोट्राचेओसोफेगल (एलटीई) कॉम्प्लेक्स है जिसमें स्वरयंत्र, थायरॉयड ग्रंथियां, पैराथायरायड ग्रंथियां, श्वासनली और दाता के अन्नप्रणाली शामिल हैं, जिसमें द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियां और पेडिकल्स बरकरार हैं। एक दाता कैरोटिड धमनी प्राप्तकर्ता कैरोटिड धमनी को एनास्टोमोस करती है और धमनी रक्त प्रवाह प्रदान करती है, जबकि दूसरी दाता कैरोटिड धमनी प्राप्तकर्ता के बाहरी जुगुलर नस को एनास्टोमोस करती है और शिरापरक रक्त प्रवाह प्रदान करती है (चित्रा 1)।
माउस मॉडल में सफलता सुनिश्चित करने के लिए चूहे मॉडल की सर्जिकल तकनीक में कई संशोधन किए गए थे। उदाहरण के लिए, संज्ञाहरण की गहराई पर नियंत्रण बढ़ाने और जटिलताओं को कम करने के लिए इंजेक्शन एजेंट के बजाय एक इनहेल्ड एनेस्थेटिक एजेंट का उपयोग किया गया था। चूहों में धमनी-धमनी एनास्टोमोसिस में निरंतर व्याख्यान का उपयोग किया जाता है; हालांकि, माउस जहाजों के छोटे आकार के कारण, यह तकनीकी रूप से मुश्किल है और पोत लुमेन 7 के संकुचन का कारण बनसकता है। नतीजतन, माउस मॉडल में बाधित सीवन का उपयोग किया जाता है और इसके परिणामस्वरूप बेहतर पोत पैटेंसी होती है। इसके अतिरिक्त, चूहे के मॉडल में, बेहतर थायरॉयड धमनी (एसटीए) पेडिकल को विच्छेदित और कल्पना की जाती है। चूहों में एसटीए के छोटे आकार को देखते हुए, इस विच्छेदन के परिणामस्वरूप एसटीए को नुकसान हो सकता है और यहां तक कि ट्रांससेक्शन भी हो सकता है। नतीजतन, यह माउस मॉडल में विच्छेदित नहीं है। इसके बजाय, पास के प्रावरणी को यह सुनिश्चित करने के लिए संरक्षित किया जाता है कि एसटीए को बरकरार रखा गया है।
इस तकनीक के प्रमुख संभावित नुकसानों में दाता एलटीई कॉम्प्लेक्स पेडिकल्स को नुकसान पहुंचाना, गलत आकार की धमनी या वेनोटॉमी बनाना, एनास्टोमोसिस साइटों पर पोत रोड़ा, या एनास्टोमोसिस साइटों पर अंतराल छोड़ना शामिल है जो रक्तस्राव का कारण बन सकता है। इन गलत कदमों से बचने के लिए, एसटीए पेडिकल के चारों ओर ऊतक का कफ छोड़कर दाता ग्राफ्ट प्राप्त करते समय सावधानी बरतनी चाहिए। धमनी और वेनोटोमी रक्त प्रवाह की अनुमति देने के लिए पर्याप्त बड़ा होना चाहिए लेकिन रिसाव को रोकने के लिए काफी छोटा होना चाहिए। एनास्टोमोस के लिए किसी भी अंतराल को बंद करने के लिए उपयुक्त संख्या में सीवन का उपयोग किया जाना चाहिए, लेकिन जहाजों को अवरुद्ध करने के लिए बहुत अधिक नहीं।
यदि माइक्रोसर्जिकल तकनीकों के साथ परिचितता प्राप्त की जाती है, तो यह प्रक्रिया लगभग 3 घंटे में की जा सकती है। इस लारेंजियल प्रत्यारोपण मॉडल को चूहों में मज़बूती से किया जा सकता है और संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन के बाद मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है।
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Protocol
यह शोध मेयो क्लिनिक संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) के अनुपालन में किया गया था। बालबीसी चूहों (10-12 सप्ताह पुराने) को दाताओं के रूप में इस्तेमाल किया गया था और सी 57 / बीएल 6 चूहों (10-12 सप्ताह पुराने) को प्राप्तकर्ताओं के रूप में इस्तेमाल किया गया था क्योंकि उनके प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स, एच -2 डीबी और एच -2 केबी, क्रमशः प्रतिरक्षात्मक रूप से असंगत हैं, और इसलिए ग्राफ्ट के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का आगे अध्ययन किया जा सकता है। सर्जरी के दौरान उपयोग किए जाने वाले सभी उपकरणों को निष्फल कर दिया गया था ( पूरक चित्रा एस 1 और पूरक चित्रा एस 2 देखें), और सर्जिकल क्षेत्र को आईएसीयूसी निर्देशों के अनुसार प्रोटोकॉल के दौरान बाँझ रखा गया था।
1. डोनर सर्जरी और ग्राफ्ट खरीद
- प्रक्रिया शुरू करने से 30 मिनट पहले दाता को विस्तारित-रिलीज ब्यूप्रेनोर्फिन (3.25 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन) के साथ इंजेक्ट करें। माउस को एनेस्थीसिया प्रेरण के लिए कृंतक संज्ञाहरण बॉक्स में 3% आइसोफ्लुरेन पर रखें जो 1 एल / मिन ओ 2 प्रवाह के साथ वितरित कियागया है। जानवर को पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड करने के बाद, माउस को शेविंग क्षेत्र में स्थानांतरित करें और संज्ञाहरण के रखरखाव के लिए 1 एल / मिन ओ2 प्रवाह के साथ 1.5% आइसोफ्लुरेन का प्रशासन करें। पैर की अंगुली की चुटकी के साथ संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें।
- माउस की छाती और गर्दन को जबड़े तक शेव करें और डेपिलेटरी क्रीम लगाएं। 30 सेकंड के बाद, क्रीम को पानी से गीले बाँझ धुंध पैड से पोंछ लें और माउस को सर्जिकल क्षेत्र में स्थानांतरित करें।
- माउस की आंखों पर आंख स्नेहक लागू करें। उचित शरीर के तापमान को सुनिश्चित करने के लिए माउस को एक लपेटा पूरक हीटिंग पैड पर रखें।
- माउस को स्थिर करें, सर्जिकल क्षेत्र को पोविडोन आयोडीन और अल्कोहल के साथ तीन बार तैयार करें, और फिर माउस को लपेटें।
नोट: पैर की अंगुली की चुटकी द्वारा संज्ञाहरण की गहराई की जांच करें और पूरी प्रक्रिया के दौरान फेस मास्क के माध्यम से 1.5% आइसोफ्लुरेन और 1 एल / मिन ओ2 प्रवाह पर संज्ञाहरण बनाए रखें। - एक छोटा क्षैतिज चीरा बनाएं जो सुप्रास्टर्नल नॉच से बेहतर है। बारीक कैंची का उपयोग करके, उस चीरे के माध्यम से त्वचा को द्विपक्षीय रूप से जबड़ा तक उठाएं। एक ट्रेपोज़ॉइड के आकार की त्वचा खंड का उत्पादन जिसके परिणामस्वरूप द्विपक्षीय लार ग्रंथियों, स्टर्नोमास्टोइड मांसपेशियों, डायगैस्ट्रिक मांसपेशियों और उरोस्थि के बेहतर पहलू के संपर्क में आते हैं (चित्रा 2 ए)।
- द्विपक्षीय लार ग्रंथियों को बेहतर भाग में काउटरी का उपयोग करके उत्पादित किया जाता है जहां ग्रंथि के माध्यम से यात्रा करने वाली एक छोटी नस की कल्पना की जाती है (चित्रा 2 ए)।
नोट: यदि ग्रंथि को हटाने से पहले पोत को व्यवस्थित करने के लिए देखभाल नहीं की जाती है, तो इस चरण में महत्वपूर्ण रक्तस्राव का सामना करना पड़ सकता है। - धीरे से लिम्फोइड और वसा ऊतकों को पार्श्व रूप से वापस लें ताकि स्टर्नोमास्टोइड और स्ट्रैप मांसपेशियों को उजागर किया जा सके। आसपास के ऊतकों से द्विपक्षीय स्टर्नोमास्टोइड मांसपेशियों को विच्छेदित करें और उन्हें वापस लेने वालों का उपयोग करके पार्श्व रूप से वापस लें।
नोट: यह पैंतरेबाज़ी पट्टा मांसपेशियों के साथ एलटीई कॉम्प्लेक्स को पूरी तरह से उजागर करेगी और कैरोटिड धमनियों (चित्रा 2 बी) के विच्छेदन के लिए एक आरामदायक कार्य स्थान प्रदान करेगी। - पट्टा की मांसपेशियों के बीच एक मध्य रेखा चीरा लगाएं और द्विपक्षीय रूप से उन्हें उत्पाद शुल्क दें, इस बात का ध्यान रखें कि अंतर्निहित थायरॉयड ग्रंथि को नुकसान न पहुंचे और इसे एलटीई कॉम्प्लेक्स पर छोड़ दिया जाए।
नोट: इस चरण के बाद, द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियों को दिखाई देना चाहिए (चित्रा 2 सी)। - परिधीय रूप से सामान्य कैरोटिड धमनियों को क्लैविकल के स्तर तक हीन रूप से और कैरोटिड विभाजन के स्तर तक बेहतर तरीके से विच्छेदित करता है। कैरोटिड धमनियों से वेगस तंत्रिका और आंतरिक जुगुलर नस को विच्छेदित करें। उन्हें खरीदे गए ग्राफ्ट में शामिल न करें।
नोट: बेहतर थायरॉयड धमनी को द्विभाजन से बेहतर देखा जा सकता है। इस बर्तन के चारों ओर पतली प्रावरणी को बरकरार रखें और इसे परिधीय रूप से विच्छेदित करने का प्रयास न करें। यह पोत एलटीई परिसर में रक्त प्रवाह की आपूर्ति करता है और प्रत्यारोपण के बाद पेडिकल के रूप में काम करेगा। इस पोत का संरक्षण अत्यंत महत्वपूर्ण है। - आंतरिक और बाहरी कैरोटिड धमनियों को इतना बेहतर तरीके से विच्छेदित करें कि वे लिगेट और विभाजित करने में सक्षम हो सकें। यदि वाहिकाओं के विज़ुअलाइज़ेशन में कठिनाई होती है, तो डायगैस्ट्रिक मांसपेशियों को पार्श्व रूप से वापस लेने के लिए एक अलग रिट्रैक्टर का उपयोग करें।
नोट: बेहतर थायरॉयड धमनी को किसी भी नुकसान को रोकने के लिए विभाजन के करीब बाहरी कैरोटिड धमनी को विच्छेदित करने से बचें। इस चरण में, ओसीसीपिटल धमनी, जो बाहरी कैरोटिड से शाखाएं और आंतरिक कैरोटिड धमनी के समानांतर अनुसरण करती है, का सामना किया जा सकता है और आंतरिक कैरोटिड धमनी के साथ भ्रमित नहीं किया जाना चाहिए, जो बड़ा है और गहरा पाया जाता है (चित्रा 2 डी)। - 8-0 का उपयोग करना नायलॉन सीवन, आंतरिक कैरोटिड धमनियों को कैरोटिड विभाजन से 2 से 3 मिमी बेहतर बनाते हैं। बाहरी कैरोटिड धमनियों को बेहतर थायरॉयड धमनी के शाखा बिंदु से कम से कम 3 मिमी बेहतर बनाया जाता है।
नोट: इन बंधावों के बाद, एलटीई कॉम्प्लेक्स को द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियों के लिए बेहतर थायरॉयड धमनियों के माध्यम से पेडिक किया जाएगा। - उरोस्थि के स्तर पर सामान्य कैरोटिड धमनियों को लाइगेट करें और सभी लिगेटेड वाहिकाओं को द्विपक्षीय रूप से काट दें। आगे विच्छेदन के दौरान आकस्मिक क्षति से बचने के लिए एलटीई कॉम्प्लेक्स के शीर्ष पर संवहनी पेडिकल्स रखें। किसी भी गैस रिसाव या एनेस्थीसिया के अनजाने नुकसान को रोकने के लिए, सुनिश्चित करें कि जानवर किसी भी वायुमार्ग कटौती करने से पहले समाप्त हो गया है।
- इन्फ्राहाइड मांसपेशियों को हाइइड के स्तर पर विभाजित करें। हाइइड से हीन एक पूर्ववर्ती ग्रसनीटॉमी बनाएं। एलटीई कॉम्प्लेक्स को बेहतर ढंग से मुक्त करने के लिए चीरा को प्रीवर्टेब्रल प्रावरणी तक ले जाएं।
- पांचवीं श्वासनली की अंगूठी के नीचे श्वासनली को सही करें और एलटीई कॉम्प्लेक्स को हीन रूप से मुक्त करने के लिए अन्नप्रणाली के माध्यम से चीरा को प्रीवर्टेब्रल प्रावरणी तक ले जाएं। श्वासनली और अन्नप्रणाली को अंतर्निहित प्रीवर्टेब्रल प्रावरणी से हीन से बेहतर दिशा से मुक्त करें।
नोट: आगे विच्छेदन के दौरान आकस्मिक क्षति से बचने के लिए एलटीई कॉम्प्लेक्स के शीर्ष पर संवहनी पेडिकल्स रखें। - हाइइड से हीन एक पूर्ववर्ती ग्रसनीटॉमी बनाएं। एलटीई कॉम्प्लेक्स को बेहतर ढंग से मुक्त करने के लिए चीरा को प्रीवर्टेब्रल प्रावरणी तक ले जाएं। एलटीई कॉम्प्लेक्स और आसपास के ऊतक के बीच किसी भी शेष लिम्फोइड या संयोजी ऊतक संलग्नक को विभाजित करें। ग्राफ्ट को हटा दें।
नोट: ग्राफ्ट में दाता स्वरयंत्र, श्वासनली, थायरॉयड ग्रंथियां, पैराथायरायड ग्रंथियां, अन्नप्रणाली और लारेंजियल मांसपेशियां एक समग्र इकाई के रूप में होती हैं (चित्रा 2 ई)।
2. ग्राफ्ट तैयारी
- खरीदे गए ग्राफ्ट को बाँझ पेट्री डिश में रखें और किसी भी रक्त के थक्कों से छुटकारा पाने के लिए इसे सामान्य खारा से धो लें। माइक्रो फोर्स का उपयोग करके, द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियों से रक्त और थक्कों को धीरे से दूध पिलाएं। 1 मिमी माइक्रोडिलेटर का उपयोग करके द्विपक्षीय कैरोटिड धमनियों को पतला करें।
- 30 ग्राम ब्लंट-टिप्ड सुई का उपयोग करके, ग्राफ्ट को फ्लश करने के लिए प्रत्येक कैरोटिड धमनी में लगभग 2 एमएल हेपरिनाइज्ड सेलाइन इंजेक्ट करें।
नोट: रक्त और खारा को कैरोटिड धमनी और छोटे मुक्त वाहिका सिरों से बाहर निकलते हुए देखा जा सकता है, जो बरकरार बेहतर थायरॉयड धमनियों की पुष्टि करता है। - धमनी सिरों से दूर एडवेंटिटिया का उत्पादन ताकि उनके पास एनास्टोमोसिस के लिए साफ किनारे हों।
नोट: ग्राफ्ट को हेपरिनाइज्ड खारा में छोड़ा जा सकता है और प्राप्तकर्ता9 में प्रत्यारोपण करने से पहले 3 घंटे तक एक छोटा ब्रेक लिया जा सकता है।
3. प्राप्तकर्ता सर्जरी और वाहिकाओं के एनास्टोमोसिस
- एनेस्थीसिया प्रेरण, शेविंग और सर्जिकल तैयारी चरणों के बाद दाता के लिए वर्णित तरीके से प्राप्तकर्ता माउस तैयार करें। सर्जरी शुरू होने से 30 मिनट पहले प्राप्तकर्ता माउस को विस्तारित-रिलीज़ एनाल्जेसिक चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें।
- एक स्केलपेल का उपयोग करके, जबड़े से उरोस्थि तक बेहतर रूप से विस्तारित एक मध्य रेखा गर्दन चीरा बनाएं। बाईं ओर की त्वचा को ऊपर उठाएं और इसे पार्श्व रूप से वापस लें।
- बाईं लार ग्रंथि का उत्पादन, बेहतर वाहिकाओं को व्यवस्थित करना जैसा कि पहले वर्णित है। किसी भी दृश्य वाहिकाओं को कम तापमान वाले कोटरी के साथ विभाजित करके वसा और लिम्फोइड ऊतक का उत्पादन करें, इस बात का ध्यान रखें कि अंतर्निहित बाहरी जुगुलर नस को नुकसान न पहुंचे (चित्रा 3 ए)।
- बाहरी जुगुलर नस को परिधीय रूप से विच्छेदित करें। एनास्टोमोसिस के लिए पोत की स्पष्ट लंबाई के कम से कम 5 मिमी का उपयोग करें। कम तापमान वाले कॉट्री या लिगेट का उपयोग करें और जुगुलर नस से शाखाओं वाली किसी भी अपेक्षाकृत बड़ी नसों को विभाजित करें।
- स्टर्नोमास्टोइड मांसपेशी को विच्छेदित करें और इसे पार्श्व रूप से वापस लें। रिट्रैक्टर के साथ सीधे संपर्क से बचने के लिए मांसपेशियों के पीछे विच्छेदित नस को संरक्षित रखें।
- प्राप्तकर्ता कैरोटिड धमनी तक पहुंच प्राप्त करने के लिए बाएं पट्टा मांसपेशियों का उत्पादन करें। सामान्य कैरोटिड धमनी को क्लैविकल से कैरोटिड द्विभाजन तक बेहतर रूप से विच्छेदित किया जाता है (चित्र 3 बी)।
- बाहरी जुगुलर नस के नीचे पृष्ठभूमि सामग्री को पास करें और डबल अनुमानित वी 3 पोत क्लैंप लागू करें।
- वांछित वेनोटॉमी के स्थान पर बाहरी जुगुलर नस की पूर्ववर्ती दीवार के माध्यम से 10-0 नायलॉन सीवन रखें और इस सीवन का उपयोग पूर्ववर्ती रूप से खींचने और पोत को तम्बू बनाने के लिए करें।
- माइक्रोसिसर के साथ सीवन में काटें, जो उचित आकार के सिंगल-स्लिट वेनोटॉमी बनाने के लिए पर्याप्त गहरा है और यह सुनिश्चित करता है कि कट पूरी तरह से शिरापरक दीवार के माध्यम से है।
- 30 ग्राम कुंद-टिप्ड सुई का उपयोग करके, हेपरिनाइज्ड खारा के साथ नस के अंदर फ्लश करें।
- दाता एलटीई कॉम्प्लेक्स को प्राप्तकर्ता के बाएं कैरोटिड धमनी और बाएं बाहरी जुगुलर नस के बीच रखें। दाता के बाएं कैरोटिड धमनी के मुक्त छोर को प्राप्तकर्ता की बाईं बाहरी जुगुलर नस की ओर संरेखित करें और तेज कैंची के साथ वाहिकाओं के सिरों को घुमाएं।
- चार 10-0 नायलॉन बाधित सीवन का उपयोग करके, दाता ने कैरोटिड धमनी को छोड़ दिया और प्राप्तकर्ता ने बाहरी जुगुलर नस को एंड-टू-साइड तरीके से छोड़ दिया।
- प्राप्तकर्ता सामान्य कैरोटिड धमनी के नीचे पृष्ठभूमि सामग्री को स्लाइड करें और प्राप्तकर्ता सामान्य कैरोटिड धमनी पर डबल अनुमानित ए 3 पोत क्लैंप रखें। वेनोटॉमी के समान तरीके से एक धमनीटॉमी बनाएं।
नोट: सुनिश्चित करें कि धमनीटॉमी दाता कैरोटिड धमनी के लुमेन के समान आकार है। यदि यह बहुत बड़ा है, तो क्लैंप को हटाने के बाद अत्यधिक रक्तस्राव होगा। यदि यह बहुत छोटा है, तो ग्राफ्ट में रक्त का प्रवाह बाधित होगा। - छह 10-0 नायलॉन बाधित सीवन का उपयोग करके प्राप्तकर्ता के बाएं कैरोटिड धमनी में दाता दाईं कैरोटिड धमनी को एनास्टोमोज़ करें।
नोट: पोत एनास्टोमोसिस में सही माइक्रोवस्कुलर तकनीक का सम्मान किया जाना चाहिए। बैकवॉल से गुजरने से रक्त प्रवाह काफी संकुचित हो जाता है, जिससे ग्राफ्ट का अस्तित्व खतरे में पड़ जाता है। जहाजों के छोटे आकार के कारण, सीवन को फिर से बनाने की कोशिश करना बहुत मुश्किल है। - शिरापरक पक्ष पर क्लैंप हटा दें। यदि रक्तस्राव का सामना करना पड़ता है, तो कपास युक्तियों के साथ कोमल दबाव लागू करें।
- धमनी पर क्लैंप को हटा दें और तुरंत कपास युक्तियों के साथ कोमल दबाव लागू करें।
नोट: इस चरण में कुछ रक्तस्राव की उम्मीद है, जो आमतौर पर कोमल दबाव के साथ 1 मिनट के बाद बंद हो जाता है। - धमनी और नस में रक्त प्रवाह की अखंडता की जांच करें।
नोट: बरकरार धमनी प्रवाह के साथ, दाता कैरोटिड धमनी का स्पंदन आमतौर पर देखा जाता है, और दाता थायरॉयड ग्रंथि अपने फ्लश किए गए पारदर्शी रंग से अपने मूल लाल रंग में बदल जाती है। एलटीई परिसर पर छोटे जहाजों का लाल रंग भी देखा जा सकता है। - हेपरिनाइज्ड सेलाइन के साथ सर्जिकल क्षेत्र की सिंचाई करें और त्वचा के चीरे को 5-0 मोनोफिलामेंट सीवन के साथ चालू फैशन में बंद करें। चीरे पर एंटीबायोटिक मरहम या त्वचा चिपकने वाला लागू करें।
- सर्जरी के दौरान तरल पदार्थ के नुकसान के लिए चमड़े के नीचे 1 एमएल गर्म खारा इंजेक्ट करें।
- संज्ञाहरण को रोकें और माउस को रिकवरी पिंजरे में स्थानांतरित करें। हाइपोथर्मिया से बचने के लिए माउस को हीटिंग पैड पर तब तक देखें जब तक कि यह पूरी तरह से जाग न जाए।
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Representative Results
सफल प्रत्यारोपण की पुष्टि
ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करके, पोत क्लैंप को हटाने के बाद दाता कैरोटिड धमनी के स्पंदन को देखकर एलटीई परिसर में रक्त प्रवाह का आकलन करना संभव है। स्पंदन आमतौर पर दिखाई देता है, और दाता धमनी का तत्काल लाल रंग सक्रिय रक्त प्रवाह की पुष्टि करता है (चित्रा 4 ए)। यदि एनास्टोमोसिस प्रभावी नहीं है, तो धमनी में स्पंदन नहीं होगा, आंशिक रूप से ढह जाएगा, और रंग में पीला होगा (चित्रा 4 बी)।
धमनी पैटेंसी की पुष्टि करने के लिए एक और तकनीक क्लैंप को हटाने के बाद दाता थायरॉयड ग्रंथि पर रंग परिवर्तन की तलाश करना है; थायराइड ग्रंथि का रंग पीला से लाल होने का परिवर्तन मिनटों के भीतर दिखाई देता है। दाता थायरॉयड ग्रंथि का दाहिना लोब भी धमनी प्रवाह के साथ लाल हो जाता है। इसके विपरीत, बाएं लोब, जो धमनी पक्ष से दूर है, उचित प्रवाह प्राप्त करने में अधिक समय लेता है। दाता एलटीई कॉम्प्लेक्स पर छोटे मुक्त वाहिका के माध्यम से रक्त प्रवाह को अतिरिक्त पुष्टि के रूप में देखा जा सकता है।
प्रत्यारोपित लैरींगोट्राचेल कॉम्प्लेक्स की खरीद
15 दिनों के बाद, प्राप्तकर्ता और प्रत्यारोपित एलटीई परिसरों की कटाई की जाती है। एनास्टोमोसेड धमनी की पैटेंसी का आकलन आसपास के प्राप्तकर्ता ऊतक से मुक्त एलटीई कॉम्प्लेक्स को विच्छेदित करके और एंड-टू-साइड एनास्टोमोसिस (चित्रा 4 ए) की कल्पना करके किया जा सकता है। प्रत्यारोपित एलटीई कॉम्प्लेक्स को आम तौर पर इस समय फाइब्रोटिक ऊतक की एक परत में समझाया जाता है। फाइब्रोटिक कैप्सूल गठन (चित्रा 5 ए) के कारण देशी स्वरयंत्र की तुलना में उत्पादित बेमेल एलोग्राफ्ट आमतौर पर बड़ा होता है। इम्यूनोसप्रेशन की अनुपस्थिति में 15 दिनों के बाद एलोग्राफ्ट अस्वीकृति की स्थापना में, प्राप्तकर्ताओं में प्रत्यारोपित एलोग्राफ्ट10 में अनुपस्थित रक्त प्रवाह होने की संभावना है।
प्रत्यारोपित स्वरयंत्र का हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन
पहले से विकसित माउस लारेंजियल प्रत्यारोपण अस्वीकृति ग्रेडिंग प्रणाली के अनुसार, इम्यूनोसप्रेशन की अनुपस्थिति में प्रत्यारोपित स्वरयंत्र की पूर्ण अस्वीकृति आमतौर पर 1510 वें दिन देखी जाती है। लारेंजियल कार्टिलेज ज्यादातर स्पष्ट रूप से कम सेलुलरिटी के साथ अवक्रमित होते हैं। वसा और मांसपेशियों के ऊतकों में न्यूक्लियेटेड सेल घनत्व भी कम हो जाता है। लिम्फोसाइटिक घुसपैठ को स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है, जबकि प्रत्यारोपित एलोग्राफ्ट में थायरॉयड रोम अनुपस्थित हैं। पूरक चित्रा एस 3 15 वें दिन अस्वीकृत प्रत्यारोपित स्वरयंत्र की तुलना में ताजा उत्पादित देशी स्वरयंत्र हिस्टोलॉजी दिखाता है।
चित्र 1: दाता स्वरयंत्र प्राप्तकर्ता स्वरयंत्र के साथ मिलकर प्रत्यारोपित किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 2: लैरींगोट्राचेल जटिल शरीर रचना विज्ञान और खरीद चरण। (ए) सतही गर्दन विच्छेदन दिखाता है कि लार ग्रंथियां पार्श्व रूप से पीछे हट जाती हैं और मांसपेशियों को बांधती हैं। (बी) दाहिने स्टर्नोमास्टोइड मांसपेशियों का वापसी स्ट्रैप मांसपेशियों और अंतर्निहित एलटीई कॉम्प्लेक्स तक आसान पहुंच प्रदान करता है। (सी) पट्टा की मांसपेशियों को हटाने के बाद, स्वरयंत्र, श्वासनली, द्विपक्षीय थायरॉयड ग्रंथियां और कैरोटिड म्यान संरचनाएं दिखाई देती हैं। (डी) दाईं ओसीसीपटल धमनी बाहरी कैरोटिड धमनी से उत्पन्न होती है और पीछे की ओर यात्रा करती है। (ई) स्वरयंत्र, श्वासनली, द्विपक्षीय थायरॉयड ग्रंथियों, कैरोटिड धमनियों और अन्नप्रणाली के साथ एक्साइज्ड डोनर एलटीई कॉम्प्लेक्स। संक्षेप: सीसीए = सामान्य कैरोटिड धमनी; डीआई = डायगैस्ट्रिक मांसपेशी; ईसीए = बाहरी कैरोटिड धमनी; एसो = अन्नप्रणाली; हाय = हाइइड हड्डी; आईसीए = आंतरिक कैरोटिड धमनी; आईजेवी = आंतरिक जुगुलर नस; एल = स्वरयंत्र; ओए = ओसीसीपटल धमनी; एस = लार ग्रंथि; एसएम = स्टर्नोमास्टोइड मांसपेशी; एसटी = स्ट्रैप मांसपेशियां; एसटीए = बेहतर थायरॉयड धमनी; टी = श्वासनली; थाई = थायरॉयड ग्रंथि; वी = लार ग्रंथि के माध्यम से यात्रा करने वाली वाहिकाएं; वीजी = वेगस तंत्रिका। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 3: प्राप्तकर्ता गर्दन की शारीरिक रचना और प्रत्यारोपण की सही स्थिति। (ए) वसा और लिम्फोइड ऊतकों के विच्छेदन के बाद बाएं बाहरी जुगुलर नस को उजागर किया गया। (बी) परिधीय रूप से विच्छेदित बाईं कैरोटिड धमनी को वेगस तंत्रिका और आंतरिक जुगुलर नस के साथ पार्श्व रूप से वापस लिया जाता है। संक्षेप: सीसीए = सामान्य कैरोटिड धमनी; ईजेवी = बाहरी जुगुलर नस; आईजेवी = आंतरिक जुगुलर नस; एल = स्वरयंत्र; एस = लार ग्रंथि; एसएम = स्टर्नोमास्टोइड मांसपेशी; एसटी = स्ट्रैप मांसपेशियां; टी = श्वासनली; वीजी = वेगस तंत्रिका। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
(ए) सकारात्मक परिणाम: एक कार्यशील धमनी एनास्टोमोसिस के साथ दाता स्वरयंत्र, दाता सामान्य कैरोटिड धमनी का उज्ज्वल लाल रंग, और पोत की दीवारों का कोई पतन नहीं (नीला तीर)। (बी) नकारात्मक परिणाम: सामान्य कैरोटिड धमनी, जिसमें एक समझौता धमनी एनास्टोमोसिस और कोई रक्त प्रवाह नहीं होता है, पीला और आंशिक रूप से ढह जाता है (नीला तीर)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
(ए) सर्जरी के 15 दिन बाद दाता बाएं कैरोटिड धमनी से प्राप्तकर्ता दाईं कैरोटिड धमनी तक एंड-टू-साइड एनास्टोमोसिस का सकल मूल्यांकन। प्रत्यारोपण के बाद 15 वें दिन (काला तीर) दिखाई देने वाले एंड-टू-साइड एनास्टोमोसिस की छवि। प्रत्यारोपित स्वरयंत्र फाइब्रोटिक कैप्सूल (नीले तीर) से घिरे रिट्रेक्टर के बगल में भी दिखाई देता है। (बी) देशी स्वरयंत्र के साथ प्रत्यारोपित एलटीई कॉम्प्लेक्स एलोग्राफ्ट की सकल तुलना। दाईं ओर 15 वें दिन इम्यूनोसप्रेशन की अनुपस्थिति में प्रत्यारोपित स्वरयंत्र है और बाईं ओर प्राप्तकर्ता का मूल स्वरयंत्र है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
पूरक चित्रा एस 1: दाता सर्जिकल उपकरण। (1) 8-0 नायलॉन सीवन। (2) बाँझ कपास युक्तियाँ। (3) पेपरक्लिप्स से बने और निष्फल किए गए रिट्रेक्टर। (4) 35 मिमी बाँझ, डिस्पोजेबल पेट्री डिश। (5) बाँझ पट्टियाँ। (6) बाँझ धुंध पैड। (7) कम तापमान माइक्रो फाइन टिप कॉटरी। (8) एडसन ऊतक बल। (9) बारीक कैंची। (10) सुई धारक। (11) वन्नास पैटर्न कैंची-घुमावदार, 7 मिमी अत्याधुनिक। (12) एडवेंटिटिया कैंची-स्ट्रेट, 19 मिमी अत्याधुनिक। (13) वन्नास स्प्रिंग कैंची-घुमावदार, 3 मिमी अत्याधुनिक। (14) पोत डायलेटर -0.1 मिमी व्यास। (15) सीधे सूक्ष्म बल। (16) कोण वाले सूक्ष्म बल। (17) बाँझ विच्छेदन बोर्ड। (18) 25 ग्राम सटीक ग्लाइड सुई। (19) 30 जी मानक कुंद सुई। (20) 3 एमएल ल्यूर-लॉक टिप सिरिंज। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्रा एस 2: प्राप्तकर्ता सर्जिकल उपकरण। (1) 35 मिमी बाँझ, डिस्पोजेबल पेट्री डिश। (2) बाँझ कपास युक्तियाँ। (3) माइक्रोवैस्कुलर अनुमानित क्लैंप-0.4-1 मिमी पोत व्यास। (4) एकल मिनी पोत क्लैंप। (5) मिनी त्वचा गोंद। (6) कम तापमान माइक्रो फाइन टिप कॉटरी। (7) 30 जी मानक कुंद सुई। (8) 3 एमएल ल्यूर-लॉक टिप सिरिंज। (9) 5-0 मोनोक्रिल सीवन। (10) 10-0 नायलॉन सीवन। (11) मर्कियन दृश्यता पृष्ठभूमि सामग्री-आवश्यक भाग काट दिया जाता है। (12) बाँझ पट्टियाँ। (13) बाँझ धुंध पैड। (14) पेपरक्लिप्स से बने और स्टरलाइज़ किए गए रिट्रैक्टर। (15) डेबेके फोर्स। (16) सुई धारक। (17) बारीक कैंची। (18) बल लागू करने वाले क्लैंप। (19) ऊतक बल। (20) वन्नास पैटर्न कैंची-घुमावदार, 7 मिमी अत्याधुनिक। (21) एडवेंटिटिया कैंची-स्ट्रेट, 19 मिमी अत्याधुनिक। (22) वन्नास स्प्रिंग कैंची-घुमावदार, 3 मिमी अत्याधुनिक। (23) सीधे सूक्ष्म बल। (24) पोत डायलेटर -0.3 मिमी व्यास। (25) पोत डायलेटर -0.1 मिमी व्यास। (26) कोण ीकृत सूक्ष्म बल। (27) बाँझ विच्छेदन बोर्ड। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्रा एस 3: सर्जरी के 15 दिन बाद एच एंड ई धुंधला का उपयोग करके दाता और प्राप्तकर्ता लैरींग्स का हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन। (ए) मूल निवासी ताजा उत्पादित स्वरयंत्र और (बी) दाईं ओर 15 वें दिन प्रत्यारोपित स्वरयंत्र। उपास्थि स्पष्ट रूप से कम सेलुलरिटी (नीले तीर) दिखाती है। मांसपेशियों की कोशिकाएं देशी मांसपेशियों (लाल तीर) की तुलना में प्रत्यारोपण में नाभिक का नुकसान दिखाती हैं। देशी ऊतक (हरे तीर) पर आसानी से दिखाई देने वाले थायरॉयड रोम प्रत्यारोपित ऊतक में अनुपस्थित होते हैं। प्रत्यारोपित ऊतकों के चारों ओर चिह्नित लिम्फोसाइटिक घुसपैठ दाईं ओर दिखाई देती है (काला तीर)। स्केल पट्टियाँ = 500 μm. कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
पिछले तीन दशकों के दौरान लारेंजियल कैंसर की घटनाओं और प्रसार में क्रमशः 12% और 24% की वृद्धि हुई है, और इनमें से कई रोगी उपचार के लिए लैरींगेक्टोमी से गुजरतेहैं। यह प्रक्रिया किसी व्यक्ति के जीवन की गुणवत्ता को काफी खराब कर देती है, और इसलिए एक वैकल्पिक उपचार वांछित है। स्वरयंत्र के संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन से रोगी की सांस लेने और बोलने की क्षमता में सुधार हो सकता है; हालांकि, इस रोगी आबादी के लिए इस तकनीक का चिकित्सकीय रूप से उपयोग करने से पहले अनुसंधान की आवश्यकता है। यह पेपर लारेंजियल प्रत्यारोपण का एक लागत प्रभावी माउस मॉडल प्रदान करता है जो विभिन्न इम्यूनोसप्रेसिव रेजिमेन की जांच को सक्षम कर सकता है।
इस प्रक्रिया में कई महत्वपूर्ण कदम हैं जो सर्जरी की सफलता को निर्धारित कर सकते हैं। दाता के लिए, पेडिकल को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए विच्छेदन को बेहतर थायरॉयड धमनी से दूर रखना महत्वपूर्ण है। स्वरयंत्र खरीदते समय, पेडिकल्स की रक्षा करने और वाहिकाओं के घुमाव से बचने के लिए बेहतर थायरॉयड धमनियों के चारों ओर प्रावरणी का कफ छोड़ना भी महत्वपूर्ण है। ग्राफ्ट को खारा के साथ फ्लश करते समय पेडिकल्स की अखंडता की जांच की जानी चाहिए। यदि सही ढंग से प्राप्त किया जाता है, तो रक्त को कैरोटिड धमनी और ग्राफ्ट को कवर करने वाली छोटी केशिकाओं से बाहर निकलना चाहिए।
अगले महत्वपूर्ण कदम धमनीटॉमी और वेनोटोमी बना रहे हैं। पोत की दीवार को तम्बू करने के लिए पोत के माध्यम से सीवन को पारित करते समय, सुनिश्चित करें कि यह लुमेन के माध्यम से अंदर और बाहर जाता है, न कि केवल एडवेंटिटिया। इस तरह, सिंगल स्लिट आर्टेरियोटॉमी और वेनोटोमी वाहिका के लुमेन को उजागर करेगा और रक्त प्रवाह की अनुमति देगा। धमनीटॉमी और वेनोटोमी बनाते समय, उद्घाटन रक्त प्रवाह की अनुमति देने के लिए पर्याप्त बड़ा होना चाहिए लेकिन रिसाव को रोकने के लिए काफी छोटा होना चाहिए। यदि उद्घाटन बहुत छोटा है, तो इसे दाता पोत लुमेन के आकार से मेल खाने के लिए पतला किया जा सकता है।
अंत में, धमनी और शिरापरक एनास्टोमोस का प्रदर्शन करना सबसे चुनौतीपूर्ण है लेकिन सर्जरी का सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा भी है। सबसे महत्वपूर्ण पहलू जगह पर सीवन की उचित संख्या निर्धारित कर रहा है। पहली सीवन रखने से पहले इसका आकलन करना सबसे अच्छा है ताकि यहां तक कि अंतराल को तदनुसार योजनाबद्ध किया जा सके। बहुत अधिक सीवन रखने से रक्त प्रवाह बाधित होता है, इसके अलावा अधिक एंडोथेलियल क्षति होती है। बहुत कम सीवन रखने से लुमेन में अंतराल के माध्यम से रक्त का रिसाव होता है। इस अध्ययन में उपयोग किए गए चूहों के आकार के लिए, आम तौर पर चार सीवन नस के लिए अच्छी तरह से काम करते हैं और छह सीवन धमनी के लिए अच्छी तरह से काम करते हैं। धमनी को अपने उच्च दबाव वाले रक्त प्रवाह के कारण अधिक सीवन की आवश्यकता होती है।
इस सर्जरी को पूरा करने के लिए पूरे अध्ययन में कई संशोधन किए गए थे। प्रारंभ में, एक इंजेक्शन एनेस्थीसिया का उपयोग किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप उच्च मृत्यु दर थी, संभवतः एनेस्थेटिक ओवरडोज के कारण, और लगभग 3 घंटे का पोस्टऑपरेटिव रिकवरी समय। इनहेल्ड एनेस्थीसिया पर स्विच करने से मृत्यु दर बहुत कम हो गई और पोस्टऑपरेटिव रिकवरी समय लगभग 30 मिनट तक कम हो गया। एक और सुधार ग्राफ्ट को फ्लश करने के लिए एक कुंद सुई का उपयोग था। मूल रूप से, एक बेवेल्ड सुई का उपयोग किया गया था, जिसके कारण दाता कैरोटिड धमनियों में अनजाने में आँसू आ गए, इसलिए पोत क्षति और रिसाव हुआ। अंत में, इस प्रोटोकॉल में एक विपरीत पृष्ठभूमि सामग्री का उपयोग पेश किया गया था। जहाजों के नीचे एक हरे रंग की पृष्ठभूमि सामग्री का उपयोग करने से एनास्टोमोस के दौरान बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति मिली और जहाजों को ऊंचा करने और उन्हें अधिक आसानी से सुलभ बनाने में मदद मिली।
प्रारंभिक सर्जरी के दौरान समस्या निवारण ग्राफ्ट में धमनी रक्त प्रवाह नहीं होने के मुद्दे को हल करने पर केंद्रित था। हम अनुमान लगाते हैं कि यह धमनी एनास्टोमोसिस साइट पर प्रवाह अवरोध के कारण होने की संभावना थी। इसे ठीक करने के लिए, दाता कैरोटिड धमनी पर एक और नाटकीय बेवेल बनाया गया था ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि यह प्राप्तकर्ता कैरोटिड धमनी के साथ फ्लश करता है। एनास्टोमोसिस को घुमाते समय, जितना संभव हो उतना कम सीवन का उपयोग किया गया था और वाहिकाओं को खुद पर घूमने से रोकने के लिए वर्ग समुद्री मील की पुष्टि की गई थी।
इस मॉडल का उपयोग करते समय, ध्यान में रखने के लिए कुछ तकनीकी सीमाएं हैं। धमनियों के स्पंदन की पुष्टि करना या प्रत्यारोपण के बाद थायरॉयड के प्रारंभिक रिफिल का अवलोकन करना हमेशा गारंटी नहीं देता है कि एलटीई कॉम्प्लेक्स में निरंतर रक्त प्रवाह होगा। अलग-अलग समय बिंदुओं पर एनास्टोमोसिस पैटेंसी की जांच करने के लिए, डॉपलर अल्ट्रासोनोग्राफी जैसी अधिक परिष्कृत तकनीकों का उपयोग किया जाना चाहिए। प्रतिरक्षा अस्वीकृति और असफल शल्य चिकित्सा तकनीक के कारण रक्त प्रवाह की हानि के बीच बेहतर अंतर करने के लिए, निरंतर रक्त प्रवाह निगरानी उपकरण आगे के अध्ययनों में लागू किए जा सकते हैं। इस प्रोटोकॉल की एक और सीमा यह है कि यह त्रुटि के लिए बहुत कम जगह छोड़ता है। यदि दाता या प्राप्तकर्ता में से एक आँसू बहाता है, तो प्रक्रिया को सफलतापूर्वक पूरा करने का कोई तरीका नहीं है। इसके अलावा, हेटेरोटोपिक प्रत्यारोपण के रूप में, दाता स्वरयंत्र पूरी तरह से काम करने वाला अंग नहीं है। यह मॉडल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है, लेकिन चूंकि ग्राफ्ट वास्तव में वायुमार्ग से जुड़ा नहीं है और कोई पुनर्निरोध नहीं किया जाता है, इसलिए प्रत्यारोपित स्वरयंत्र का कार्यात्मक मूल्यांकन नहीं किया जा सकता है।
इस प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण योगदान लागत में कमी और इम्यूनोलॉजिकल परख, एंटीबॉडी और डेटा की बेहतर उपलब्धता है। लारेंजियल प्रत्यारोपण पहले चूहों, कुत्तों और सूअरों में प्रकाशित किया गया है; हालांकि, ये जानवर अधिक महंगे हैं, और कम प्रतिरक्षाविज्ञानी परख और डेटा उपलब्धहैं 11,12,13। चूहों में इस प्रक्रिया की 30 दिन की मृत्यु दर 41% 11 पाई गई; चूहों के साथ हमारे अनुभव में, यह संख्या 5% तक कम हो गई है। अंत में, लारेंजियल प्रत्यारोपण के लिए इनहेल्ड एनेस्थेटिक का उपयोग इस प्रोटोकॉल के लिए अद्वितीय है, क्योंकि अधिकांश प्रकाशित लारेंजियल प्रत्यारोपण पशु मॉडल एक इंजेक्शन एनेस्थेटिक का उपयोग करते हैं, जैसे कि पेंटोबार्बिटल 8,11,14। एक साँस लेने वाला एनेस्थेटिक एजेंट वसूली के समय को काफी कम कर देता है और इंजेक्शन योग्य एनेस्थेटिक्स की तुलना में एनेस्थेटिक गहराई पर अधिक नियंत्रण की अनुमति देता है। एनेस्थेटिक डिलीवरी मास्क गर्दन को बढ़ाकर सही स्थिति में भी मदद करता है।
इस प्रत्यारोपण मॉडल के लिए कई अनुप्रयोग हैं। सबसे महत्वपूर्ण एक संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांट के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का आकलन करने और विभिन्न इम्यूनोसप्रेशन आहार 15,16,17 का परीक्षण करने की क्षमता है। इसके अतिरिक्त, इस मॉडल का उपयोग अस्वीकृति के कारण गैर-कामकाजी धमनी एनास्टोमोसिस, गैर-कामकाजी नस एनास्टोमोसिस या एथेरोस्क्लेरोसिस की सेटिंग में वाहिका का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। यह पेपर बताता है कि ~ 3 घंटे में एक माउस से दूसरे में एक एलटीई कॉम्प्लेक्स को हेटेरोटोपिक रूप से कैसे प्रत्यारोपित किया जाए। यह व्यवहार्य और अपेक्षाकृत कम लागत वाला मॉडल एलटीई कॉम्प्लेक्स की अस्वीकृति में प्रतिरक्षा प्रणाली की भूमिका का अध्ययन करने में काफी क्षमता प्रदान करता है, जिससे अंग प्रत्यारोपण में नए उपचारों की संभावना प्रदान की जाती है।
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Disclosures
लेखक घोषित करते हैं कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित नहीं हैं। अनुसंधान के लिए एगेहान सालेप्सी की यात्रा और रहने के खर्चों को तुर्की के वैज्ञानिक और तकनीकी अनुसंधान परिषद (TUBITAK) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Acknowledgments
हम रैंडल रायश को उनकी उत्कृष्ट वीडियोग्राफी और संपादन सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| #1 Paperclips | Staples | OP-7404 | Clips are shaped manually to be used as retractors |
| 1 cc Insulin Syringes | BD | 329412 | 27 G 5/8 |
| 10-0 Ethilon Nylon Suture | Ethicon | 2870G | |
| 25 G Precision Glide Needle | BD | 305125 | 1 in |
| 3 mL Luer-Lok Tip Syringe | BD | 309657 | |
| 30 G Sterile Standard Blunt Needles | Cellink | NZ5300505001 | |
| 5-0 Monocryl Suture | Ethicon | Y822G | |
| 8-0 Ethilon Nylon Suture | Ethicon | 2815G | |
| Adson Forceps | Fine Science Tools | 11027-12 | Straight, 1 x 2 teeth |
| Adventitia scissors | S&T | SAS-10 | 19 mm, 10 cm, straight |
| Angled Forceps | Fine Science Tools | 00109-11 | 45/11 cm |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 59399-162-35 | |
| Bandaid Fabric Fingertip | Cardinal Healthcare | 299399 | |
| Betadine Solution Swabsticks | Purdue Products | 67618-153-01 | |
| Buprenex Injection | CIII | 12495-0757-1 | 0.3 mg/mL |
| Clamp applying forceps without lock | Accurate Surgical & Scientific Instruments | ASSI.CAF5 | 14 cm |
| Cotton Swabs | Puritan | 10806-001-PK | |
| DeBakey forceps | |||
| Dermabond Mini | Cardinal Healthcare | 315999 | |
| Dissecting Boards | Mopec | 22-444-314 | |
| Falcon Sterile Disposable Petri Dish | Corning | 25373-041 | 35 mm |
| Fine Scisssors | Fine Science Tools | 14029-10 | Curved Sharp-Blunt 10 cm |
| Golden A5 2-Speed Blade Clipper | Oster | 008OST-78005-140 | #10 |
| Hair Remover Sensitive Formula | Nair | 2260000033 | |
| Heparin | Meitheal Pharmaceuticals | 71288-4O2-10 | 10,000 USP units per 10 mL |
| Isoflurane | Piramal Healthcare | 66794-013-25 | |
| Low-Temp Micro Fine Tip Cautery | Bovie Medical | AA90 | |
| Mercian Visibility Background Material | Synovis Micro Companies | VB3 | Green |
| Microvascular Approximator Clamp without Frame | Accurate Surgical & Scientific Instruments | ASSI.ABB11V | 0.4-1 mm Vessel Diameter |
| Mouse face mask kit | Xenotec | XRK-S | Small |
| Needle holder | S&T | C-14 W | 5.5", 8 mm, 0.4 mm |
| Press n' Seal | Glad | 70441 | |
| Scalpel | Braun | BA210 | 10 blade |
| Single Mini Vessel Clamp | Accurate Surgical & Scientific Instruments | ASSI.ABB11M | .31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair |
| Stereomicroscope | Olympus | SZ61 | |
| Sterile Alcohol Prep Pads | Fisherbrand | 06-669-62 | |
| Sterile Disposable Drape Sheets | Dynarex | DYN4410-CASE | |
| Sterile Gauze Pads | Dukal | 1212 | |
| Sterile Saline | Hospira | 236173 | NaCl 0.9% |
| Sterile Surgical Gloves | Gammex | 851_A | |
| Straight Forceps | Fine Science Tools | 00108-11 | 11 cm |
| Tissue forceps | Accurate Surgical & Scientific Instruments | ASSI.JFLP3 | 13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm |
| Vannas Pattern Scissors | Accurate Surgical & Scientific Instruments | ASSI.SDC15RV | 15 cm, 8 mm, curved 7mm blade |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-10 | 3 mm cutting edge, curved |
| Vessel Dilator Tip | Fine Science Tools | 00126-11 | Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm |
| Vessel Dilator, Classic line | S&T | D-5a.3 W | 9 mm, 0.3 mm, angled 10 |
References
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