Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Chemistry

通过组织的X射线激发发光化学成像对植入物相关感染进行高空间分辨率化学成像

Published: September 30, 2022 doi: 10.3791/64252

Summary

在这里,我们提出了一种通过X射线激发发光化学成像(XELCI)对植入式医疗设备周围的化学信息进行高分辨率光学检测的协议。这种新颖的成像技术是在我们的实验室开发的,可以研究植入物相关的感染生物化学。

Abstract

与植入式医疗器械相关的微生物感染是骨折固定失败的主要问题。这种感染的早期诊断将允许用抗生素成功根除,而无需支付第二次手术的额外费用。在本文中,我们将XELCI描述为一种具有高X射线分辨率,植入物特异性和对植入式医疗设备表面附近的非侵入性成像化学浓度的化学敏感性的技术。这些设备涂有化学报告表面。这种化学反应表面由涂在植入式医疗设备上的两层组成;pH敏感层(溴酚蓝或溴甲酚绿掺入水凝胶),涂覆在红光闪烁体(Gd 2 O2S:Eu)层上进行监测。聚焦的X射线束照射植入物上的一个斑点,闪烁体产生的红光(具有620 nm和700 nm的峰值)通过传感层传输,传感层根据pH值改变光谱比。通过扫描穿过植入物的X射线束并逐点测量通过组织的光的光谱比来生成图像。我们使用这种成像技术通过改进的植入板传感器监测先前在股骨骨表面上的植入物相关感染。现在我们正在研究胫骨髓内杆感染引起的pH值变化。在试点前兔子研究中使用了两种不同类型的髓内杆设计,我们了解到XELCI技术可用于监测不仅在骨骼表面而且在骨骼内部发生的任何化学变化。因此,这使得无创、高空间分辨率、低背景局部pH成像能够研究植入物相关的感染生物化学。

Introduction

在美国,每年约有200万个骨折固定装置入,其中5%-10%导致种植体相关感染1。由于生物膜的异质性和抗生素耐药性,这些感染在后期阶段更难用抗生素治疗23。如果早期诊断,可以用抗生素和手术清创治疗感染,以防止第二次手术的额外医疗费用,以更换治疗骨折部位的硬件。X线平片和其他先进的放射线照相技术应用于骨科植入物相关感染、不愈合和相关并发症的诊断。尽管这些技术经常用于获取骨科植入物周围骨骼和组织的结构信息,但它们无法在特定环境中提供生化信息。因此,我们开发了一种新颖的X射线激发发光化学成像(XELCI)技术,用于在植入部位无创地对生化信息进行高分辨率成像。骨科植入物相关感染的诊断通常通过一种或多种不同的方法进行。临床观察(疼痛、肿胀、发红、伤口分泌物等)提示感染的最初迹象。之后,进行放射学和实验室实验以确认骨愈合进展的失败并确定病原微生物45。核医学技术,如计算机断层扫描(CT),磁共振成像(MRI)和放射性核苷酸方法,如单光子发射计算机断层扫描(SPECT)和正电子发射断层扫描(PET)用于更好地可视化感染植入物和相关感染67。CT和MRI分别有利于确定骨坏死和软组织异常,但在金属植入物的近距离处会引起干扰8。不同的X射线方法(如SPECT和PET)与放射性同位素标记的分析物(如体内成像造影剂)相结合,广泛用于诊断植入物相关性骨髓炎2。当前的应用将来自CT扫描的数据和来自SPECT或PET的标记数据结合起来,以生成解剖学信息9。尽管这些成像方式中的一种或多种用于帮助感染诊断,但它们无法及早检测到与感染相关的pH变化,从而开始使用抗生素治疗以避免额外的医疗和手术费用。

利用本研究中使用的成像系统监测植入物相关感染的主要优点是它能够通过光谱参考揭示有关生物膜微环境的生化信息。虽然主要重点是成像和绘制感染部位的pH值,但可以改变这种方法以监测植入物相关感染的其他特异性生物标志物。因此,XELCI可以了解感染的病理生理学。高空间分辨率成像允许随着感染的增长绘制异质性。发生生物膜形成的表面的pH值对于理解生化变化非常重要。此外,由于细菌1011的抗生素相关应激反应,可能会发生其他微环境变化。由于表面特异性和高空间分辨率成像,可以监测抗生素对生物膜微环境的影响。该技术还可用于研究靶向药物递送实验的生物膜环境。我们可以研究有针对性的低pH药物释放或提高pH值,使它们更容易在较高的pH下起作用。

这种成像技术的三个具体特征是X射线分辨率,植入物表面特异性和化学灵敏度(图1A)。这些特征可以与目前可用的用于成像骨科植入物相关感染的成像技术进行比较(图1B)。一旦用X射线照射,涂覆在植入物表面的荧光粉颗粒就会产生红色和近红外(NIR)光,可以穿透几厘米的组织(尽管有一些衰减)1213表1 显示了所开发的成像系统与用于测量生物膜中或通过组织pH的其他方法相比的一些特征。

XELCI是一种新颖的成像技术,结合X射线激发,在植入式医疗设备附近光学获取高空间分辨率化学信息,如图 2所示。这里利用了X射线可激发荧光粉颗粒的选择性激发和光学检测。植入物涂有两层,在一层闪烁体颗粒上掺入pH敏感染料的聚合物层。一旦一系列聚焦的X射线束照射植入物,闪烁体层就会产生可见光(620 nm和700 nm)。产生的光通过pH敏感层,根据周围环境的pH调节发光光谱。低pH值通常与感染和生物膜形成有关;随着感染的进展,pH值从生理pH值(pH 7.2)变为酸性(低于pH 7),传感器中的pH染料会改变颜色,从而改变吸光度。 图2E显示了溴 甲酚绿色pH染料在pH 7和pH 4下的发光光谱的变化。收集通过组织和骨骼的透射光,光谱比决定pH值。为了生成pH图像,聚焦的X射线束一次照射闪烁体薄膜中的一个点,并逐点扫描样品上的光束。以前,该技术应用于骨科植入物1415 表面的pH变化成像,并对其进行了测试以监测髓内管通过骨骼和组织的pH变化。

下面的图3显示了成像系统的示意图。成像系统的基本组件是带有聚毛细管光学元件的X射线激发源,连接到两个光电倍增管的一体式丙烯酸光导,x,y和z电动载物台(30 cm x 15 cm x 6 cm行程)和连接用于数据采集的计算机。X 射线源、x、y、z 载物台和收集光学元件(弯头、光导、光电倍增管 (PMT))位于 X 射线防护外壳中,而 X 射线控制器、PMT 电源、连接到数据采集 (DAQ) 板的函数发生器和计算机则保存在外部。位于外壳和门前部之间的按钮常开开关用作联锁。如果门没有完全关闭(联锁开关打开),X射线源不会打开,如果在操作过程中打开X射线源,它会自动关闭X射线源。电机可以执行连续扫描,也可以移动到任何离散位置。y轴的扫描速度通常为1-5 mm/s,而x轴上的步长通常可在150-2000μm之间选择。可以根据所需的空间分辨率选择参数。均匀的曝光时间通过整个连续扫描的一致速度来确认。

一旦聚焦的X射线束照射在X射线发光粒子上,产生的光将通过根据周围的pH调节光来穿过pH敏感膜。透射光将与组织相互作用(部分散射和吸收),而散射和吸收的光衰减将随着组织厚度的增加而增加。该系列光学元件包括一个一体式分叉丙烯酸光导,起点配有反光铝弯头(具有 90° 弯曲和抛光反光内表面)。这是为了确保光线到达光导后立即准直。这些添加显著提高了光收集效率。有关更多详细信息, 图4 显示了弯头和光导的机器图纸。90°弯头由铝加工而成,内表面抛光至镜面,光导用亚克力加工。我们还在弯头的起点安装了宽范围的长通蓝光滤光片(阻挡350-450nm的光),以确保只有红光会通过。一体式丙烯酸光导的末端分叉成两个流,导致两个不同的PMT。PMT被封装在一个与热电冷却器接触的小型光密金属盒中,以将PMT冷却到~5°C。 在其中一个PMT开始时,连接了一个窄范围长通滤光片(阻挡570-640 nm光并通过640-740 nm光)以仅测量700 nm光。因此,620 nm和700 nm光可以分别计算。PMT设置为光子计数模式,它们为每个检测到的光子生成晶体管-晶体管逻辑(TTL)脉冲。DAQ 系统 使用 USB 通信 计算 脉冲 (饱和 点 每秒 2000 万 脉冲) 计数。处理数据后生成两个单独的强度图,并通过考虑信号波长强度(620 nm)与参考波长强度(700 nm)的比值来创建最终图像。该比率解释了总光收集效率的差异,这在很大程度上取决于收集光学器件的位置、X 射线照射强度和组织厚度。此外,没有任何pH指示剂染料的空间分离参比区域解释了波长依赖性组织穿透引起的光谱失真。基于图形的编程语言用于控制成像系统,操作的基本流程图如下所示。除计算机、X 射线控制器和 DAQ 单元外,成像设置都封闭在安全的 X 射线外壳中,以最大限度地减少辐射暴露。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

该程序遵循克莱姆森大学机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的动物使用协议。实验是根据克莱姆森大学生物安全委员会(IBC)和辐射安全委员会(RSC)进行的,并遵循相关的指导方针和规定。

注:完成XELCI扫描的流程图如图 5 所示,随后是成像过程的详细分步说明。

1. 初始化系统并获取X线平片

  1. 打开PMT冷却器,通常需要~15分钟才能达到设定值(例如,4°C)。在打开 PMT 之前执行其余初始化步骤。
  2. 打开成像系统控制软件。控制软件程序通信并初始化x-y-z轴电动载物台。将载物台 x 轴和 y 轴移动到所需的起始位置。
  3. 将样品放在可移动的x-y-z载物台上。通过升高或降低X射线源和/或载物台,定位样品高度(z轴),使放射性发光装置位于多毛细管聚焦光学元件下方5-5.5厘米处。此外,在激光十字头的帮助下将试样定位在 x-y 平面上(两个红线形激光指示器连接到 X 射线聚焦毛细管并彼此成 90° 放置,以便线与 X 射线聚焦的地方相交)。在打开 X 射线和 PMT 之前关闭激光器。
  4. 固定成像机箱前门上的按钮联锁。打开光线源的电源。取出聚焦光学元件以获得样品的X光片。
  5. 打开X射线控制软件并设置X射线功率(通过调节电压和电流)。使用 X 射线控制软件打开 X 射线快门。
  6. 打开X射线相机的软件。点击曝光按钮拍摄X线平片。关闭曝光并关闭X射线。
    注意:如果需要,移动样品以改善样品位置或在不同位置获取一系列X射线,以便可以整理它们以获得更大的X光片视图。人们也可以在单独的系统上获得X光片,但如果标本移动,XELCI和X线照相之间的共同配准变得更加困难。
  7. 打开存储模块门。

2. (可选)在关闭 X 射线的情况下执行后台扫描

  1. 将多毛细管光学元件再次连接到X射线源。
  2. 关闭存储模块并固定联锁装置。打开 PMT 电源。
    注意: 每当门打开或即将打开时,应始终关闭 PMT 电源,以避免过度暴露在光线下。
  3. 打开成像系统控制软件并指定步长、扫描速度和扫描区域。设置完所有参数后,点击开始扫描 运行 按钮。
    注意:对于高分辨率扫描,步长将为1000 μm,对于低分辨率扫描,步长将为250 μm。扫描速度可以从 5 mm/s 到 1 mm/s 进行选择。扫描区域取决于样品的尺寸。
  4. 在关闭X射线的情况下运行背景扫描,以确定外壳中除样品外存在的任何光线的暗计数。

3. 在开启 X 射线的情况下进行样品扫描

  1. 使用激光十字头确保样品仍处于正确位置以开始扫描。
  2. 关闭存储模块并固定联锁装置。如果 PMT 已关闭(例如,在打开门之前关闭),请打开 PMT 电源。
  3. 打开成像系统控制软件。输入步长、扫描速度和扫描区域的值。设置完所有参数后,点击 运行 按钮开始扫描。
    注意:对于高分辨率扫描,步长将为1000 μm,对于低分辨率扫描,步长将为250 μm。扫描速度可以从 5 mm/s 到 1 mm/s 进行选择。扫描区域取决于样品的尺寸。
  4. 在打开X射线的情况下获取样品的扫描。
  5. 首先,以较大的步长和较高的扫描速度执行低分辨率扫描,以获得目标的初步图像。在获得样品所需区域的低分辨率扫描后,以较小的步长和较低的扫描速度获得更高分辨率的扫描。
  6. 在打开门之前关闭 PMT 电源。

4. 形成形象

  1. 验证当前扫描是否对目标的感兴趣区域进行成像。如果没有,请通过点击停止当前扫描 Stop 停止 按钮。
  2. 再次调整控制软件中的扫描位置,然后再次点击 运行 按钮。
    注:从扫描的第一行开始连续记录y轴。执行扫描时,记录自上次更新电机位置以来每个波长和时间的计数数。记录的时间将考虑电机速度的任何变化,从而说明曝光时间。对于每个像素,计数/秒被归一化。y轴电机行进扫描y轴当前行的末端,电机回到起始位置。然后,x轴电机按用户定义的步长增加其位置,并扫描y轴的第二行。此过程循环进行,直到 x 轴电机达到 x 方向的指定宽度。用户可以控制扫描尺寸、电机速度和电机起始位置。步长将决定 y 轴最终图像中像素的大小。

5. 培养细菌在无菌条件下成像(如果对细菌生长的传感器进行成像)

  1. 要制备金 黄色葡萄球菌 1945 (ATCC 25923) 的新鲜培养物,请使用 1 周内划线的 TSA(胰蛋白酶大豆琼脂)平板中的一个菌落接种 5 mL 无菌胰蛋白酶大豆肉汤 (TSB)。
  2. 在37°C下轻轻摇动细菌培养物16-18小时,直到固定相。
  3. 接下来,通过在室温(RT)下以4000× g 离心10分钟从TSB沉淀培养物,并用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤沉淀两次,并将沉淀重悬于5mL无菌PBS中。
  4. 使用线性范围使用600nm处的光密度量化细菌浓度,这是验证比尔-朗伯定律的OD范围(OD = kN; k 是相对于分子消光和光路长度的系数, N 是细菌浓度)16。然后使用无菌PBS将样品稀释至105 个细胞/ mL。
  5. 通过高压灭菌对胰蛋白酶大豆琼脂(TSA)进行灭菌,然后通过混合冷却直至温度达到45°C。 将细菌接种到TSA中。
  6. 将稀释的细菌培养物(100μL)移液到植入式传感器的表面上。
    注意:植入物通过浸入70%乙醇中5分钟并储存在无菌PBS中进行灭菌。
  7. 将 100 μL 未接种的 TSA 移液到另一个无菌植入物上作为对照
  8. 在植入式传感器上再加入100μL未接种的TSA,然后在植入前在37°C孵育48小时。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

作为初步研究,我们在兔子尸体14的扩孔胫骨中对髓内杆传感器进行了成像。传感器有三个不同的区域:参考区域、pH 8 区域(碱性 pH)和 pH 4 区域(酸性 pH)。参考区域是掺入粗糙环氧树脂薄膜中的闪烁体(Gd2 O2S:Eu)颗粒。独特的酸性和碱性pH区域代表髓内管内的感染和非感染情况(图6AB14

完成扫描后,在MATLAB中分别生成620 nm、700 nm和比率(图7A-C)的图像。颜色的变化表明pH值的变化。由于碱性pH区域的溴基酚蓝比酸性pH区域显着吸收发射光,因此较低的pH区域在620nm处显示为更亮的信号。700 nm 处的闪烁体发射可作为闪烁体薄膜不一致、组织组成变化以及检测光学元件位置在扫描之间发生的任何变化的光谱参考。

Figure 1
图 1:XELCI 成像与当前可用技术相比 的具体特征 (A) 主要特征;(B)与目前可用的成像技术进行比较。 请点击此处查看此图的大图。

Figure 2
图 2:该技术的工作原理和传感器在有和没有感染的情况下的行为。 A) 显示用聚焦X射线束照射的植入物和收集的发光进行检测的示意图;(B)闪烁体和pH敏感膜包被的髓内杆传感器的放大视图;(C)在低pH值引起感染时,髓内杆传感器由蓝色变为黄色,而无染料参比区不变;(D)感染期间髓内棒的放大视图;(E)光谱显示环氧PEGpH传感器膜(含有溴甲酚的10%PEG水凝胶,涂覆在含有Gd2 O2S:Eu闪烁体颗粒的环氧树脂膜的顶部)和没有pH指示剂PEG水凝胶的环氧闪烁体层。该图经Uzair等人许可转载14请点击此处查看此图的大图。

Figure 3
图 3:成像系统。A) 示意图(红色箭头表示光朝向 PMT 的方向);(B)实际系统的照片。 请点击此处查看此图的大图。

Figure 4
图 4:显示尺寸的计算机辅助设计软件 图纸。 (A) 90°弯头的图纸 (B) 一体式亚克力光导的图纸。(所有尺寸均以毫米为单位) 请点击此处查看此图的大图。

Figure 5
图5:成像过程的流程请单击此处查看此图的大图。

Figure 6
图 6兔尸体铰孔胫骨中的髓内杆传感器。A) 涂有 Gd 2 O2S:Eu 掺入环氧树脂和 pH 敏感丙烯酰胺-PEG 凝胶的不锈钢棒;()将涂覆的不锈钢棒插入兔胫骨的钻孔中。该图经Uzair等人许可转载14请点击此处查看此图的大图。

Figure 7
图 7:髓管中视杆传感器的图像。A)620nm波长的分析图像;(B)分析图像为700nm波长;(C)分析比例图像(620/700);()棒状传感器的X线平片;()叠加比例图像和普通X线照相。该图经Uzair等人许可转载14请点击此处查看此图的大图。

表面特异性成像 平衡/非平衡 通过组织实现高分辨率 电离辐射 X射线易于叠加 代表性参考文献
pH微电极 是的,一次一个点 非平衡、(能斯特方程)结垢和时间会导致漂移 是的,一次一个点 23-25
荧光pH指示剂 是的 平衡 18,26
磁共振成像(欧洲中部时间) 是的 平衡 3D 但速度慢 27
赛尔奇 是的 平衡 是的 是的 是的 14,15,22

表1:XELCI与其他pH成像技术相比的特点。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

为了能够及早发现和研究骨科植入物相关感染,以避免骨髓炎和二次外科手术的并发症,我们引入了XELCI作为一种新颖的功能成像技术。它与目前可用的通过组织监测pH的技术相当。

在定位样品进行成像时,我们使用连接到多毛细管聚焦光学元件的激光十字头,两个相交的线形激光指示器呈 90° 角,以将弯头精确地对准其下方。在开始扫描之前,应关闭这些激光器,以消除除闪烁体产生的光之外到达探测器的任何不需要的光。在距离方面,用户在开始实验之前测量从聚焦光学元件尖端到样品顶部的距离约为5-5.5厘米。这可以通过手动升高X射线源或上下移动载物台来实现。相同的程序用于活体动物或通过组织进行测量,除了我们将动物置于麻醉之下并运行异氟醚气体管以确保它说睡着了。我们定期监测其温度和脉搏,并添加额外的床上用品和胶带以正确定位动物解剖结构,尤其是角度,我们估计5-5.5厘米的焦点位置是植入物的深度,而不仅仅是使用到皮肤顶部表面的距离。通常拍摄普通的X射线图像或粗略扫描以确保正确的位置,然后与在同一点拍摄的化学XELCI图像叠加。对于未被组织覆盖的传感器,X射线源电流通常从50 kV时的最大600 μA降低到低至15 μA,以确保PMT不饱和。X射线源及其状况由克莱姆森大学辐射安全定期监测。X射线控制器的钥匙仅供XELCI用户使用,并且始终远离,以防止任何意外打开/关闭电源。此外,在打开 X 射线之前,应小心固定外壳前门上的按钮联锁装置。如果联锁装置无法正常工作,用户将无法打开 X 射线的电源,并且会产生错误。在整个实验过程中,当X射线打开时,橙色灯被打开以警告每个人X射线正在运行。

通常同时运行低分辨率扫描和高分辨率扫描。低分辨率扫描的步长较大,高分辨率扫描的步长较小。扫描所需的时间在很大程度上取决于三个因素:步长、扫描速度和扫描区域。例如,以 1 mm/s 的慢扫描速度和 200 μm 的步长扫描 15 mm x 15 mm 的区域以获得高分辨率图像需要 ~20 分钟。以较低的分辨率和更快的扫描速度扫描同一区域可以减少时间(例如,1 mm步长和5 mm/s速度大约需要1分钟)。在扫描之前需要额外的时间来正确设置和定位动物或标本,并低估植入物的位置。对于动物实验,监测体温以确保麻醉期间温度不会下降太多。X射线辐射的加热可以忽略不计,因为本研究中使用的扫描的X射线剂量很小。假设 1 Gy = 1 J/kg 局部 X 射线剂量,肌肉17 的热容为 3.45 kJ/kg K,则辐射吸收的最大温度升高将小于 mK

Equation 1等式 1

Q-热能
m- 质量
C-比热容
ΔT- 温度变化

Equation 2

Equation 3

Equation 4

根据上述计算,温度的升高可以忽略不计。此外,即使这种微小的温度升高也会通过血液循环迅速消散。

光电倍增管的有源光电阴极直径为 22 mm;这个大区域有助于从皮肤下的大漫射区域捕获光线。为了减少热感应电子发射产生的暗电流,允许PMT在下面冷却。我们有一个一体式亚克力光导,它分为两个流,通向两个不同的光电倍增管(PMT)进行信号检测。系统的这种改进使我们能够提高光收集效率,从而检测通过骨骼和组织的信号。以前,这种成像技术用于监测骨科植入物表面的感染,我们可以成功地对pH变化1415进行成像。我们通过兔胫骨中约2厘米的骨骼和组织生成了改良髓内杆的高信号/噪声图像。通常,散射和吸收的光衰减随组织厚度呈指数增加。因此,在成像的组织厚度、X 射线剂量/扫描时间和空间分辨率之间需要权衡。

这里描述的这种成像技术涉及植入探针和扫描仪。该探头包含X射线闪烁体,当被X射线照射时会产生可见光和近红外光。它在闪烁体层上制造了一个化学敏感层,会影响光强度或光谱。为该应用选择的化学敏感层是溴百里酚蓝,它在 600 nm 波长处具有 pH 依赖性吸光度,在 700 nm 光下具有几乎恒定(与 pH 无关)的吸光度,与闪烁体发射(620 nm 和 700 nm)重叠。溴百里酚蓝或溴甲酚绿在我们感兴趣的监测植入物相关感染的pH范围内具有pK。在使用pH敏感荧光比例染料分析细菌生物膜的pH微环境时,pH可以在5.6(生物膜内)和pH 7(在周围的散装液体中)之间变化18。植入探针还具有没有pH指示染料的闪烁体层,其充当空间上不同的参考区域。此外,我们使用的闪烁体粒子在~600 nm和~700 nm波长处具有突出的发射。上述染料的吸光度光谱与Gd2 O2S:Eu颗粒的发射光谱重叠。激发X射线和红/近红外发光光子都用于体内生物医学成像,因为它们可以通过组织传播192021

图1 显示了本研究中使用的成像系统的三个特定特征:X射线分辨率,化学特异性和植入物表面特异性。这些特征与目前可用的成像技术相当,如SPECT,PET,MRI,US等22。尽管这些技术以高分辨率提供高分辨率的结构/解剖学信息,但我们无法绘制/成像植入物表面的化学变化。该技术将光学指示剂染料的化学敏感性与涂层的植入物特异性相结合。X射线的空间分辨率提供了独特的低背景和更高的空间分辨率检测/映射通过骨骼和组织在植入物表面的化学浓度。

X射线激发发光化学成像提供了一种独特的方法来研究植入物表面的局部化学环境,具有高空间分辨率,用于研究感染。将来,该方法可以推广到通过选择不同的指示剂染料来监测其他分析物。它可以使用涂有闪烁体颗粒和指示染料的注射或植入医疗设备潜在地应用于其他疾病和病症。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

提交人声称不存在利益冲突。

Acknowledgments

作者要感谢克莱姆森大学,COMSET和克莱姆森SC BioCRAFT。XELCI设置最初由NSF CAREER CHE 12255535和后来由NIH NIAMS R01 AR070305-01的资金开发。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
90 degree elbow Produced in Hilltop Technology Laboratory, 51 Parker, Irvine,CA
Bromo Cresol Green Sigma-Aldrich 45ZW10
Bromo Thymol Blue Sigma 76-59-5
ElectraCOOL Advanced thermoelectric cool plate Pollock industries, White River, VT, USA TCP 50
Ethanol Beantown Chemical, 9 Sagamore Park Road
Hudson, NH 03051
64-17-5
Gadolinium Oxysulfide Europium doped (Gd2O2S:Eu) particles-~8.0 µm Phosphor Technologies Inc., Stevenage, England UKL63/N-R1
LabVIEW National Instruments, Austin, TX
Motorized Linear Vertical Stage Model (for Z axis) Motion Control, Smithtown, NY, USA AT10-60
National instruments c-DAQ 9171 National Instruments, Austin, TX NI cDAQ™-9171
One piece acrylic light guide Produced in Hilltop Technology Laboratory, 51 Parker, Irvine,CA
pH 4 buffer VWR BDH Chemicals BDH5024
pH 8 buffer VWR BDH Chemicals BDH5060
Phosphate Buffer Solution MP Biomedicals, Irvine, CA. USA 2810305
Photo multiplier tubes Model P25PC-16 SensTech, Surrey, UK Model P25PC-16
Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA ATCC 25923
Tryptic Soy Agar Teknova, Hollister, CA, USA  T0520
Tryptic Soy Broth EMD Millipore, Burlington, MA, USA 1005255000
X-ray source-iMOXS Institute for Scientific Instruments GmbH, Berlin, Germany
X,Y motorized stage-30 cm x 15 cm x 6 cm travel Thorlabs Inc., Newton, NJ, USA LTS300 and LTS150

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Arciola, C. R., Alvi, F. I., An, Y. H., Campoccia, D., Montanaro, L. Implant infection and infection resistant materials: A mini review. International Journal of Artificial Organs. 28 (11), 1119-1125 (2005).
  2. Renick, P., Tang, L. Device-related infections. Racing for the Surface. Li, B., Moriarty, T. F., Webster, T., Xing, M. , Springer International Publishing. Cham. 171-188 (2020).
  3. Stewart, P. S., Franklin, M. J. Physiological heterogeneity in biofilms. Nature Reviews Microbiology. 6 (3), 199-210 (2008).
  4. Metsemakers, W. J., et al. Fracture-related infection: A consensus on definition from an international expert group. Injury. 49 (3), 505-510 (2018).
  5. Arciola, C. R., Campoccia, D., Montanaro, L. Implant infections: Adhesion, biofilm formation and immune evasion. Nature Reviews Microbiology. 16 (7), 397-409 (2018).
  6. Polvoy, I., Flavell, R. R., Rosenberg, O. S., Ohliger, M. A., Wilson, D. M. Nuclear Imaging of Bacterial Infection: The State of the Art and Future Directions. Journal of Nuclear Medicine. 61 (12), 1708-1716 (2020).
  7. vander Bruggen, W., Bleeker-Rovers, C. P., Boerman, O. C., Gotthardt, M., Oyen, W. J. G. PET and SPECT in Osteomyelitis and Prosthetic Bone and Joint Infections: A Systematic Review. Seminars in Nuclear Medicine. 40 (1), 3-15 (2010).
  8. Trampuz, A., Zimmerli, W. Diagnosis and Treatment of infections associated with fracture-fixation devices. Injury. 37 (2), 59-66 (2006).
  9. Ady, J., Fong, Y. Imaging for infection: From visualization of inflammation to visualization of microbes. Surgical Infections. 15 (6), 700-707 (2014).
  10. Truong-Bolduc, Q. C., et al. Implication of the NorB Efflux pump in the adaptation of Staphylococcus Aureus to growth at acid pH and in resistance to Moxifloxacin. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (7), 3214-3219 (2011).
  11. Hengge-Aronis, R. Signal transduction and regulatory mechanisms involved in control of the σS (RpoS) subunit of RNA polymerase. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 66 (3), 373-395 (2002).
  12. Gao, R., Yan, D. Molecular phosphors for x-ray detection. Science Bulletin. 67 (10), 1015-1017 (2022).
  13. Gao, R., Fang, X., Yan, D. Recent developments in stimuli-responsive luminescent films. Journal of Materials Chemistry C. 7 (12), 3399-3412 (2019).
  14. Uzair, U., et al. Conformal coating of orthopedic plates with x-ray scintillators and ph indicators for x-ray excited luminescence chemical imaging through tissue. ACS Applied Materials & Interfaces. 12 (47), 52343-52353 (2020).
  15. Uzair, U., Benza, D., Behrend, C. J., Anker, J. N. Noninvasively imaging pH at the surface of implanted orthopedic devices with x-ray excited luminescence chemical imaging. ACS Sensors. 4 (9), 2367-2374 (2019).
  16. Begot, C., Desnier, I., Daudin, J. D., Labadie, J. C., Lebert, A. Recommendations for calculating growth parameters by optical density measurements. Journal of Microbiological Methods. 25 (3), 225-232 (1996).
  17. Giering, K., Minet, O., Lamprecht, I., Müller, G. Review of thermal properties of biological tissues. Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. , 45-65 (1995).
  18. Hunter, R. C., Beveridge, T. J. Application of a pH-sensitive fluoroprobe (C-SNARF-4) for pH microenvironment analysis in Pseudomonas aeruginosa biofilms. Applied and Environmental Microbiology. 71 (5), 2501-2510 (2005).
  19. Pogue, B. W., Leblond, F., Krishnaswamy, V., Paulsen, K. D. Radiologic and Near-Infrared/Optical Spectroscopic Imaging: Where Is the Synergy. American Journal of Roentgenology. 195 (2), 321-332 (2010).
  20. Ryan, S. G., et al. Imaging of X-ray-excited emissions from quantum dots and biological tissue in whole mouse. Scientific Reports. 9 (1), 19223 (2019).
  21. Yang, Y., Wang, K. -Z., Yan, D. Ultralong persistent room temperature phosphorescence of metal coordination polymers exhibiting reversible pH-responsive emission. ACS Applied Materials & Interfaces. 8 (24), 15489-15496 (2016).
  22. Chen, H., Rogalski, M. M., Anker, J. N. Advances in functional X-ray imaging techniques and contrast agents. Physical Chemistry Chemical Physics. 14 (39), 13469 (2012).
  23. Allan, V. J. M., Macaskie, L. E., Callow, M. E. Development of a pH gradient within a biofilm is dependent upon the limiting nutrient. Biotechnology letters. 21 (5), 407-413 (1999).
  24. Wang, Z., Deng, H., Chen, L., Xiao, Y., Zhao, F. In situ measurements of dissolved oxygen, pH and redox potential of biocathode microenvironments using microelectrodes. Bioresource Technology. 132, 387-390 (2013).
  25. Xiao, Y., et al. In situ probing the effect of potentials on the microenvironment of heterotrophic denitrification biofilm with microelectrodes. Chemosphere. 93 (7), 1295-1130 (2013).
  26. Nakata, E., et al. A novel strategy to design latent ratiometric fluorescent pH probes Based on self-assembled SNARF derivatives. RSC Adv. 2014 (4), 348-357 (2014).
  27. Villano, D., et al. A fast multislice sequence for 3D MRI-CEST pH. Magnetic Resonance in Medicine. 85 (3), 1335-1349 (2021).

Tags

化学,第187期,
通过组织的X射线激发发光化学成像对植入物相关感染进行高空间分辨率化学成像
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Rajamanthrilage, A. C., Levon, E.,More

Rajamanthrilage, A. C., Levon, E., Uzair, U., Taylor, C., Tzeng, T. R., Anker, J. N. High Spatial Resolution Chemical Imaging of Implant-Associated Infections with X-ray Excited Luminescence Chemical Imaging Through Tissue. J. Vis. Exp. (187), e64252, doi:10.3791/64252 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter