Summary
כנימות הם משדרים יעיל של וירוסים הצמח. Microinjection כנימה של הנגיף, ההליך נוכל להראות לכם היום, היא טכניקה המאפשרת לחוקרים להזרים וירוס ישירות hemocoel של הכנימה, לעקוף את המעיים, אחד 2 המחסומים העיקריים להעברת הנגיף באופן circulative. באותה טכניקה משמשת גם להזריק dsRNA עבור RNAi.
Abstract
תפוחי אדמה loafroll וירוס (PLRV), מן Luteoviridae משפחה מדביק צמחים solanaceous. זה מועבר על ידי כנימות, בעיקר, את הכנימה ירוק אפרסק. כאשר כנימה נגוע ניזון הצמח נגוע זה החוזים וירוס דרך השיפה המפעל. לאחר ingested, הנגיף חייב לעבור מהבטן חרקים hemolymph (דם החרקים) ולאחר מכן צריך לעבור דרך בלוטת הרוק, על מנת להיות מועבר בחזרה למפעל חדש. כנימה עשוי להימשך עד וירוסים שונים כאשר לועס צמח, אולם רק חלק קטן יעבור דרך המעי בלוטת הרוק, שני המחסומים העיקריים להעברת להדביק צמחים ועוד. במעבדה, נשתמש בצמחים physalis ללמוד הילוכים PLRV. ב לארח זו, התסמינים מתאפיינים ירקון המגבילה ו interveinal (הצהבה של העלים בין הוורידים עם הוורידים הנותרים ירוק). וידאו אנו מציגים מדגים שיטה לביצוע microinjection כנימה על חרקים שאינם PLVR וקטור וירוסים בדיקות אם במעיים מונעת העברת נגיפי. וידאו אנו מציגים מדגים שיטה לביצוע microinjection כנימה על חרקים שאינם PLVR וקטור וירוסים בדיקות אם הבטן או בלוטות הרוק שמונע העברת ויראלי.
Protocol
- כדי לבדוק אם כנימה מסוגל וקטור וירוס, אנו להאכיל את הכנימות על רקמות נגועים עבור 2 ימים.
- לאחר מכן, אנו מאפשרים את זה כדי להאכיל במפעל בריאה למשך 5 ימים. המפעל חיטוי אז אחרי 3 שבועות אנחנו מתחילים לחפש את התסמינים.
- כאשר אנו מוצאים כי הכנימה לא יכול וקטור וירוס, אנחנו יכולים להעריך מי מבין 2 מחסומים היא לעצור את הנגיף באמצעות הליך microinjection.
- הווירוס מוזרק ישירות לתוך hemocoel, ובכך לעקוף את מחסום המעיים הילוכים.
בקר ביקורות שנתי של ביולוגיה הצמח לקבלת מידע נוסף על חסינות פרוטוקול צמח זה herbivory חרקים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
