Testa Fysiologiska Hinder för virustransmission i Bladlöss Använda mikroinjektion

Summary

Bladlöss är effektiva sändare av vegetabiliskt virus. Bladlöss mikroinjektion av virus, förfarandet visar vi dig idag, är en teknik som gör det möjligt för forskare att injicera viruset direkt i hemocoel av bladlöss, förbi tarmen, ett av de två största hindren för virus överföring i ett circulative sätt. Samma teknik används också för att injicera dsRNA för RNAi.

Abstract

Potatis loafroll virus (PLRV), från familjen Luteoviridae infekterar Solanaceae växter. Den överförs av bladlöss, i första hand, den gröna persika bladlöss. När en infektion bladlus lever på en infekterad plantera det kontrakt viruset genom anläggningen floem. När intagna måste viruset gå från insekten tarmen till hemolymph (insekten blodet) och sedan måste gå genom spottkörteln, för att sändas tillbaka till en ny anläggning. En bladlus kan ta upp olika virus när mumsa på en växt, dock bara en liten del kommer att passera genom tarmen och spottkörteln, de två största hindren för överföring att infektera fler växter. I labbet använder vi physalis växter för att studera PLRV överföring. I denna värd, är symtom kännetecknas av hämmad tillväxt och interveinal kloros (gulfärgning av bladen mellan venerna med venerna återstående gröna). Den video som vi presenterar visar på en metod för att utföra bladlöss mikroinjektion på insekter som inte virus vektor PLVR och tester om tarmen hindrar virustransmission. Den video som vi presenterar visar på en metod för att utföra Bladlöss mikroinjektion på insekter som inte virus vektor PLVR och tester om tarmen eller spottkörteln hindrar virustransmission.

Protocol

1. För att testa om en bladlus kan vektor ett virus, mata vi bladlöss på infekterade vävnaden i 2 dagar.
2. Sedan gör vi det för att föda i en frisk anläggning för 5 dagar. Anläggningen är sedan gasade och efter tre veckor som vi börjar söka efter symptom.
3. När vi hittar en bladlus som inte kan vektor ett virus, kan vi bedöma vilken av de två hinder är att stoppa virus med hjälp av en mikroinjektion förfarande.
4. Viruset är injiceras direkt i hemocoel därmed förbi barriären tarmen överföring.

Besök de årliga översynerna av växtbiologi för mer information om detta protokoll och anläggning immunitet mot insekter herbivori.