Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Per misurare la durata media della vita di una popolazione di nematodi, iniziare con le larve L1 sincronizzate per lo sviluppo nel buffer M9. Determinare la densità delle larve, quindi aggiungerne 50 a ciascuna piastra. Preparare almeno tre piastre replicate per condizione, nonché piastre di backup.
Lasciate che questi vermi si sviluppino normalmente fino a raggiungere lo stadio L4. Ora potete aggiungere FUdR alle piastre, il che impedirà ai vermi di produrre progenie. In alternativa, sarà necessario spostare i vermi su nuove piastre ogni giorno dopo il conteggio, per assicurarsi di misurare solo la durata di una singola generazione.
Rimuovere quindi i maschi. In questo modo verranno rimuovere le variabili di sesso e accoppiamento dall'esperimento. Il giorno successivo, contare il numero di vermi viventi sul piatto cercando un movimento spontaneo o una risposta al tocco delicato. Rimuovere eventuali vermi morti e registrare i numeri. Contare i vermi sopravvissuti ogni giorno fino a quando nessuno rimane. Nel protocollo di esempio verrà mostrata una dimostrazione di un test della durata della vita.
- Caricare le piastre preparate di semi di batteri con 50 L1 animali ciascuna. Impostare le piastre in un'incubatrice di 20 gradi Celsius fino a quando gli embrioni non si sviluppano allo stadio L4. Lo sviluppo normale da L1 a L4 richiede circa 40 ore.
Quindi, per impedire la produzione di progenie, aggiungere 160 microlitri di 50x FUdR a ogni piastra. Quindi rimuovere i maschi, poiché la durata della vita viene in genere misurata solo con ermafroditi. Una volta completate, riconfezionare le piastre nell'incubatore di 20 gradi Celsius.
Fino a quando tutti i vermi non sono morti, segnarne la vitalità su base giornaliera. Per farlo, toccare delicatamente ogni nematode non in movimento sulla testa con un filo di platino o una ciglia. Gli animali non reattivi sono morti e devono essere rimossi dal piatto. Prendere nota di eventuali anomalie durante questa routine.
