Nuovo saggio di immersione in vasca: un metodo per studiare le risposte allo stress innate in Zebrafish

- Per iniziare, posizionare una luce infrarossa dietro il nuovo serbatoio e un foglio acrilico bianco tra il serbatoio e la luce per diffondere la luce e prevenire l'abbagliamento. Ora riempire 3/4 del serbatoio con acqua del sistema di pesci generata dall'osmosi inversa dell'acqua del rubinetto. Trasferire un pesce acclimatato da un serbatoio di contenimento a un becher contenente acqua del sistema ittico e lasciarlo riposare per altri 10 minuti. Successivamente, versare delicatamente l'acqua e il pesce nel nuovo serbatoio.

Usando un'immagine video fotogramma fermo per trovare la parte superiore, centrale, e le aree inferiori del serbatoio calcolando l'altezza del serbatoio e dividendolo per 3, determinare il tempo trascorso in ogni area e la distanza totale percorsa utilizzando il software di tracciamento. Un pesce adulto, quando viene collocato in un serbatoio sconosciuto, di solito mostra una preferenza per la metà inferiore, a causa dello stress. Man mano che il livello di stress si riduce, nuota gradualmente verso l'alto più spesso. Testare almeno 10 pesci per esperimento. In un protocollo di esempio, vedremo la configurazione sperimentale per un nuovo test di immersione in vasca.

- Iniziare riempiendo un becher da 250 millilitri e almeno due serbatoi di detenzione con acqua del sistema di pesci. La mattina del test, trasferire almeno 10 zebrafish adulti per ogni condizione sperimentale in singoli serbatoi di detenzione prima di trasferire tutto il pesce nella sala comportamentale per l'acclimatazione per almeno un'ora. Etichettare i serbatoi in modo che la condizione o il genotipo degli animali sia cieco allo sperimentatore e utilizzare una rete per posizionare delicatamente un singolo adulto nel becher precompilato.

Consentire al pesce adulto di acclimatarsi nel becher per 10 minuti prima di versare delicatamente l'acqua e il pesce dal becher nel nuovo serbatoio sperimentale. Non appena il pesce si trova nel serbatoio, iniziare la registrazione della fotocamera e allontanarsi dalla configurazione per evitare ulteriori disagi al pesce. Al termine della registrazione, rimuovere l'individuo dal nuovo serbatoio e posizionare il pesce in un nuovo serbatoio di detenzione.