Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begynd med at tilføje E3 medium til lavt smeltepunkt agarose og opvarmning, indtil agarose helt opløses. Afkøles agarose til 37 grader Celsius og tilsæt tricainopløsning. Derefter bedøve embryonerne ved at tilsætte tricain til en petriskål indeholdende embryoner i E3 medium.
Ved hjælp af en overførselspipette skal du tegne et embryon med et minimalt medium. Hold pipetten i opretstående stilling og bounce embryoet for at placere det på spidsen af pipetten. Placer nu embryoet i agaroseopløsningen uden at tilføje overskydende medium, hvilket ville fortynde agarose og forhindre gelering. Bland forsigtigt embryoet i agarose og overfør opløsningen til brønden på en billedplade ved hjælp af pipetten.
Placer pladen under et mikroskop og brug en pipettespids til at placere embryoet i den ønskede retning. Når agarose størkner, hæld E3 medium indeholdende tricain oven på det for at holde agar hydreret og billede embryoet. I et eksempel protokol, vil vi montere parabiotiske zebrafisk embryoner til billeddannelse og analyse.
For at erhverve billeder af de smeltede embryoner, forberede 0,8% lavt smeltepunkt agarose. Mens du stadig er varm, aliquot en milliliter af agarose i 1,5 milliliter mikrofuge rør, der er fastsat i en 37 grader Celsius varmeblok. Bedøve de parabiotiske embryoner ved at tilføje 1 milliliter af 4 milligram per milliliter pH 7,0 tricaine til 25 milliliter E3 medium indeholder embryoner.
Så ved hjælp af en bredspidset plastoverførselspipette, derefter, drej pipetten oprejst og forsigtigt hoppe embryonerne, så de sætter sig til bunden af pipetten.
Derefter, med pipetten, overføre agarose og embryoner til brønden af et glas bund seks-godt plade. Under et stereomikroskop skal du bruge en gellæssespids, der er fastgjort til enden af en drillepind, til at placere embryonerne tæt på dækglasset og i den ønskede billedretning.
For et helt embryon synsfelt, skal du bruge en 4x subjektiv. Brug en 20x mål at billedet et bestemt væv.
