Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Le diabète sucré de type 1 est une maladie humaine dans laquelle le système immunitaire détruit l’insuline faisant des cellules bêta dans le pancréas. La streptophzocine peut induire le diabète sucré de type 1 chez le poisson zèbre. Premièrement, anesthésier un poisson dans une solution de 2 phénoxyéthanol dans l’eau du poisson. Prenez le poisson et placez-le sur une boîte de Pétri, côté ventral orienté vers le haut. Calculez la dose de streptophzocine à base de 0,35 milligramme par gramme de poids du poisson et diluez-le dans une solution saline.
Administrer la strepttozocine par injection intraperitoneal au-dessous de la ceinture pelvienne sur le côté ventral du poisson zèbre. Streptozocine est structurellement similaire à la N-acétylglucosamine, un ligand qui lie le récepteur GLUT2 sur les cellules bêta pancréatiques, conduisant à la sécrétion d’insuline. Ainsi, la streptococine se lie aux récepteurs GLUT2 présents sur les cellules bêta pancréatiques qui le transportent à l’intérieur des cellules.
En entrant dans les cellules bêta, la streptophzocine déclenche une réponse immunitaire conduisant à la libération d’autoantigènes. Les autoantigènes font reconnaître les cellules bêta comme étrangères et les détruisent conduisant à des niveaux réduits d’insuline. Administrer des doses répétées de streptophène les jours trois et cinq, suivies de doses hebdomadaires, une tous les sept jours pour maintenir la réponse immunitaire.
Dans l’exemple suivant, nous allons générer un modèle de poisson zèbre de type 1 diabète sucré. Pour générer du poisson zèbre avec le diabète sucré, préparer un réservoir de récupération avec de l’eau de poisson normale et un réservoir anesthésique d’eau de poisson avec une dilution de 1 à 1 000 de 2 phénoxyéthanol. Sous un capot de fumée, préparer une solution de 0,3 % de streptophzocine ou de STZ en ajoutant 6 milligrammes de STZ à 2 millilitres de chlorure de sodium à 0,09 % et placer immédiatement la solution sur la glace.
Dans un tube séparé, aliquot assez salin pour contrôler les poissons. Remplissez une demi-seringue CC munie d’une aiguille de calibre 27 et 1/2 avec le STZ, ou des solutions de contrôle, en veillant à ce qu’aucune bulle d’air ne soit piégée. Anesthésiez un seul poisson en le plaçant dans de l’eau anesthésique et en attendant que le mouvement de nage cesse, environ une à deux minutes.
Une fois anesthésié, placez brièvement le poisson sur une serviette en papier pour absorber tout excès d’eau. Ensuite, placez le poisson dans un bateau de pesage et pesez-le. Ensuite, placez le poisson sur une surface ferme. Puis insérez l’aiguille au-delà du biseau dans l’aspect postérieur du péritoine ventral et injectez soit 0,35 milligramme par gramme de STZ, soit un volume équivalent de solution de contrôle dans la cavité péritonéale du poisson.
Après l’injection, placez le poisson dans le réservoir d’eau de récupération et surveillez-le pour une activité normale de natation. Après avoir injecté suffisamment de poisson pour l’expérience, transférez-les dans des réservoirs de vie normaux et maintenez-les à une température de 22 à 24 degrés Celsius. La température réduite est essentielle pour une induction efficace de l’hyperglycémie. Pour induire un état prolongé d’hyperglycémie très élevée, suivez un calendrier d’injections fréquentes pendant la phase d’induction suivie d’injections d’entretien hebdomadaires comme on le voit ici.
