Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Diabetes mellitus tipo 1 é uma doença humana na qual o sistema imunológico destrói insulina fazendo células beta no pâncreas. Estreptozocina pode induzir diabetes mellitus tipo 1 em zebrafish. Primeiro, anestesiar um peixe em uma solução de 2-fenoxiquitanol na água do peixe. Pegue o peixe e coloque-o em uma placa de Petri, do lado ventral voltado para cima. Calcule a dose de estreptozocina à base de 0,35 miligramas por grama do peso do peixe e dilui-lo em solução salina.
Administre a estreptozocina por injeção intraperitoneal abaixo da cinta pélvica no lado ventral do peixe-zebra. A estreptozocina é estruturalmente semelhante à N-acetilglucosamina, um ligante que liga o receptor GLUT2 em células beta pancreáticas, levando à secreção da insulina. Assim, a estreptozocina se liga aos receptores GLUT2 presentes nas células beta pancreáticas que a transportam dentro das células.
Ao entrar nas células beta, a estreptozocina desencadeia uma resposta imune levando à liberação de autoantígenos. Os autoantígenos fazem com que o sistema imunológico reconheça as células beta como estrangeiras e as destrua levando a níveis reduzidos de insulina. Administrar doses repetidas de estreptozocina nos dias três e cinco, seguidas de doses semanais, uma a cada sete dias para manter a resposta imune.
No exemplo a seguir, vamos gerar um modelo de zebrafish de diabetes mellitus tipo 1. Para gerar zebrafish com diabetes mellitus, preparar um tanque de recuperação com água de peixe normal e um tanque anestésico de água de peixe com uma diluição de 1 a 1.000 de 2-fenoxietanol. Sob um capô de fumaça, prepare uma solução de 0,3% de estreptozocina ou STZ adicionando 6 miligramas de STZ a 2 mililitros de cloreto de sódio e coloque imediatamente a solução no gelo.
Em um tubo separado, aliquot solução salina suficiente para peixe de controle. Encha uma seringa de meia CC equipada com uma agulha calibre 27 e 1/2 com o STZ, ou soluções de controle, garantindo que nenhuma bolha de ar esteja presa.
Uma vez anestesiado, coloque brevemente o peixe em uma toalha de papel para absorver qualquer excesso de água. Em seguida, coloque o peixe em um barco de pesagem e pese-o. Em seguida, coloque o peixe em uma superfície firme. Em seguida, insira a agulha sobre o bisel no aspecto posterior do peritônio ventral e injete 0,35 miligramas por grama de STZ ou um volume equivalente de solução de controle na cavidade peritêneal do peixe.
Após a injeção, coloque o peixe no reservatório de água de recuperação e monitore-o para atividade normal de natação. Depois de injetar peixes suficientes para o experimento, transfira-os para tanques vivos normais e mantenha a uma temperatura de 22 a 24 graus Celsius. A temperatura reduzida é fundamental para uma indução eficiente da hiperglicemia. Para induzir um estado prolongado de hiperglicemia muito alta, siga um cronograma de injeções frequentes durante a fase de indução seguida por injeções semanais de manutenção como mostrado aqui.
