هذا الفيديو يظهر إجراء لعزل protoplasts سليمة من أنسجة لمدة 14 يوما من العمر شتلة من Arabidopsis. بالنظر إلى أن protoplasts معزولة لا تزال سليمة على الأقل 96h ومعزولة من الشتلات بدلا من شهر واحد من العمر محطات ناضجة ، وهذا الإجراء يعجل المقايسات التي تتطلب protoplasts سليمة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزلة Protoplasts من أنسجة لمدة 14 يوما من عمره الشتلات thaliana Arabidopsis
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
Protoplasts هي الخلايا النباتية التي كانت جدران الزنزانة لازالة إنزيمي. وكانت أول من العزلة protoplasts من الأنسجة النباتية المختلفة أكثر من 40 عاما
البروتوكول
الجزء 1. إعداد المتوسطة صلبة لنمو النباتات.
نحن عادة ما تتركز على النباتات الثقافة المتوسطة (MS) وسكوغ Murasige تستكمل مع السكروز 1 ٪ و 0.7 ٪ أجار. فهو يحتوي على كل العناصر الضرورية للحفاظ على النباتات السليمة.
لإعداد MS 1L من وسائل الاعلام الرقم الهيدروجيني 5.7
- إضافة 2،15 غرام من مسحوق MS في 800 مليلتر من الماء في زجاجة 1.5 2.0L autoclavable.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لضمان عالية الغلة من الجبلة المجردة سليمة من المهم جدا البدء مع النباتات صحية. استخدام فلتر تعقيم حلول لعزل protoplasts. تذكر أن protoplasts هشة. لذلك ، عندما كنت التعامل مع protoplasts ، لا يختلطان الماصة أو دوامة منهم منذ ذلك بقوة ستحد منها. بدلا من ذلك ، مزيج protoplasts عن طريق تناوب ببطء أو تسجيل أنبوب الطرد المركزي. العائد الداخلي protoplasts سليمة صفها التي هي قابلة للحياة ما لا يقل عن 96 ساعة. ولذلك ، يمكن استخدام protoplasts لدراسة مجموعة متنوعة من العمليات الخلوية ، مثل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وقد قدم براءة اختراع مؤقتة واصفا هذا الإجراء لاستخدامها في التحليلات الفنية للجينات النباتية مع مركز كورنيل للمؤسسات التكنولوجيا وتسويقها (CCTEC) ، حزيران 2008. المفكرة لا 50341/015001 : Vatamaniuk ، موافق ، وتشاي ، Z. التحليلات الفنية للأسلوب السريع للجينات النباتية.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل محطة جامعة كورنيل التجربة الزراعية (CUAES) NYC - 125433 هاتش غرانت وكورنيل بدء المنحة لOKV
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مزيج أملاح موراشيج وسكوغ الأساسي (MS) | Sigma-Aldrich | M5524 | |
| أجار | Sigma-Aldrich | A1296 | |
| أطباق بتري (100x15mm) | Krackeler Scientific, Inc. | 82-4001 | |
| سيلولاز (OnozukaR‐10) | Research Products International Corp. | C32200 | |
| ماكيروزيم (R10) | Research Products International Corp. | M22010 | |
| مناديل قماشية من الشاش | Fisher Scientific | 06-665-29 | |
| دوار مختبري | Fisher Scientific | 1167152Q | |
| جهاز طرد مركزي AllegraX‐15R | VWR international | 392932 | |
| مجهر Axioskop 2 Plus | Carl Zeiss, Inc. |
المراجع
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
