Method Article

عزل الخلايا الجذعية من أنسجة العظام والعضلات الناعمة

DOI:

10.3791/2011

⸱

July 5th, 2010

 ,  , 
1Stem Cell Research Center, Childrens Hospital of Pittsburgh of UPMC, 2Department of Bioengineering, University of Pittsburgh, 3Department of Orthopedic Surgery, University of Pittsburgh, 4Department of Pathology, University of Pittsburgh, 5Department of Molecular Genetics & Biochemistry, University of Pittsburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عزل الخلايا الجذعية من الأنسجة العضلية الناعمة على أساس سرعة الانضمام إلى الخلية القارورة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

منذ فترة طويلة الخلايا الجذعية البالغة التي نوقشت في ما يخص تطبيقها في مجال الطب التجديدي. لقد ولدت الخلايا الجذعية للبالغين قدرا كبيرا من الإثارة لعلاج الجرحى والأنسجة المريضة بسبب قدراتها على الخضوع للإعجاب متعددة النسب تمايز الخلايا وقدرتها على التجدد الذاتي. الأهم من ذلك ، جعلت هذه الصفات من المفيد لهم لاستخدامها في علاجات ذاتي زرع الخلايا. والبروتوكول الحالي يعرض القراء إلى تقنية تعديل preplate حيث الأنسجة الرخوة في الجهاز الحركي ، مثل الأوتار والعضلات ، هي 1

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بشكل عام ، واستكمال إجراءات تعديل preplate يتطلب 1-2 أيام من التحضير ، 1 اسبوع من تنفيذ الإجراء التقني ، 2-3 أيام لتحديد هوية الخلية مع كيمياء سيتولوجية مناعية ، ومبلغا إضافيا 2-3 أسابيع من الخلايا الجذعية والتوسع السكاني. المعدات اللازمة لزراعة الخلايا الجذعية هي مماثلة لتلك التي من غيرها من النظم التي تشمل الثقافة الخلية مقعد العلوي الطرد المركزي ، حاضنة CO 2 ، رقائقي زراعة الأنسجة وغطاء تدفق مجهر مقلوب مجهزة مضان وكاميرا رقمية. الخلايا الجذعية المعزولة يمكن أيضا أن تكون مستنسخة ، ويمكن تخزينها على المدى الطويل في النيتروجين السائل ل1،2 الدراسات الحالية أو المستقبلية. يجب على جميع الكواشف والمواد المستخد....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم الاعتراف بأن بعض أنسجة البالغين تحتوي على خلايا جذعية متعددة. على مدى السنوات القليلة الماضية من الدراسة ، وقد تم الكشف عن الخلايا الجذعية في الأنسجة العضلية الناعمة لل، بما في ذلك الهيكل العظمي والعضلات والأوتار. هذا البروتوكول الحالي تفاصيل إجراء ، والمعروفة باسم تقنية preplate المعدلة ، التي استخدمت بنجاح في المختبر لدينا لعزل الخلايا الجذعية من الأوتار والعضلات والهيكل العظمي. ويمكن باستخدام تقنية preplate تعديل الخلايا المذكورة أعلاه يمكن تقسيمها إلى عدة السكان على أسا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون ممتنون كثيرا من السيدة هاى يينغ بان والسيد إيان Bellayr لما قدموه من مساعدة تقنية على عزل خلية للأفلام الحالي ، والسيد كايل هولدن والسيد جوناثان لوكاس لمساعدتهم على تحرير الشريحة. جزيل الشكر إلى القائمة التالية للأشخاص الذين تورطوا مع تطور التقنيات preplate تعديل على مدى السنوات الماضية : الدكاترة. برهان غرايبة ، تساو BaoHong ، بريدجيت Deasy ، توماس باين R. ، لو اى بينغ ، Hairong بنغ ، هيديكي أوشيما ، بو تسنغ شياو دونغ مو ، Kimimasa Tobita رون يانكوفسكي ، Makato Ikezawa. نحن ممتنون للمساعدة التقنية من جيمس H. الكمون ، Pruchnic ريان ، Feduska جوزيف ، ريبيكا Schugar جيم ، وعموم هاى يينغ وTebbets جيسيكا. المؤلف كما يود أن....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen# 11995-073
FBSInvitrogen# 10437-028
مصل الحصان المعطل بالحرارةInvitrogen# 26050-088
مستخلص جنين الفرخكيميائي دقيق#CE650T-10
100U مل البنسلين / الستربتومايسينInvitrogen# 15140-122
Dulbecco's PBSInvitrogen# 14190-250
Hank's Buffered Salt SolutionInvitrogen# 24020-117
Collagenase type XI 0.2٪ (wt / vol)Sigma-Aldrich#C7657
Dispase2.4U ملInvitrogen# 17105-041
Trypsin-EDTA0.5٪ (بالوزن / المجلد) (10x ؛ 5 جرام لتر تربسين (1: 250)Invitrogen# 15400-054
كولاجين لقارورة الطلاء: النوع الأول من الكولاجين المشتق من جلد العجل 0.1 جرام لترسيجماألدريتش #C-9791
DMSOسيجما#D-2650

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
  2. Qu-Petersen, Z. Identificatio....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Stem Cell IsolationMusculoskeletal TissueEnzymatic DigestionPreplate TechniqueCollagen Coated FlaskCell DissociationFlow CytometryImmunofluorescenceMicroscopyProliferation Medium

Related Articles