عزل الخلايا الجذعية من الأنسجة العضلية الناعمة على أساس سرعة الانضمام إلى الخلية القارورة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل الخلايا الجذعية من أنسجة العظام والعضلات الناعمة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
منذ فترة طويلة الخلايا الجذعية البالغة التي نوقشت في ما يخص تطبيقها في مجال الطب التجديدي. لقد ولدت الخلايا الجذعية للبالغين قدرا كبيرا من الإثارة لعلاج الجرحى والأنسجة المريضة بسبب قدراتها على الخضوع للإعجاب متعددة النسب تمايز الخلايا وقدرتها على التجدد الذاتي. الأهم من ذلك ، جعلت هذه الصفات من المفيد لهم لاستخدامها في علاجات ذاتي زرع الخلايا. والبروتوكول الحالي يعرض القراء إلى تقنية تعديل preplate حيث الأنسجة الرخوة في الجهاز الحركي ، مثل الأوتار والعضلات ، هي 1
البروتوكول
بشكل عام ، واستكمال إجراءات تعديل preplate يتطلب 1-2 أيام من التحضير ، 1 اسبوع من تنفيذ الإجراء التقني ، 2-3 أيام لتحديد هوية الخلية مع كيمياء سيتولوجية مناعية ، ومبلغا إضافيا 2-3 أسابيع من الخلايا الجذعية والتوسع السكاني. المعدات اللازمة لزراعة الخلايا الجذعية هي مماثلة لتلك التي من غيرها من النظم التي تشمل الثقافة الخلية مقعد العلوي الطرد المركزي ، حاضنة CO 2 ، رقائقي زراعة الأنسجة وغطاء تدفق مجهر مقلوب مجهزة مضان وكاميرا رقمية. الخلايا الجذعية المعزولة يمكن أيضا أن تكون مستنسخة ، ويمكن تخزينها على المدى الطويل في النيتروجين السائل ل1،2 الدراسات الحالية أو المستقبلية. يجب على جميع الكواشف والمواد المستخد....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد تم الاعتراف بأن بعض أنسجة البالغين تحتوي على خلايا جذعية متعددة. على مدى السنوات القليلة الماضية من الدراسة ، وقد تم الكشف عن الخلايا الجذعية في الأنسجة العضلية الناعمة لل، بما في ذلك الهيكل العظمي والعضلات والأوتار. هذا البروتوكول الحالي تفاصيل إجراء ، والمعروفة باسم تقنية preplate المعدلة ، التي استخدمت بنجاح في المختبر لدينا لعزل الخلايا الجذعية من الأوتار والعضلات والهيكل العظمي. ويمكن باستخدام تقنية preplate تعديل الخلايا المذكورة أعلاه يمكن تقسيمها إلى عدة السكان على أسا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
المؤلفون ممتنون كثيرا من السيدة هاى يينغ بان والسيد إيان Bellayr لما قدموه من مساعدة تقنية على عزل خلية للأفلام الحالي ، والسيد كايل هولدن والسيد جوناثان لوكاس لمساعدتهم على تحرير الشريحة. جزيل الشكر إلى القائمة التالية للأشخاص الذين تورطوا مع تطور التقنيات preplate تعديل على مدى السنوات الماضية : الدكاترة. برهان غرايبة ، تساو BaoHong ، بريدجيت Deasy ، توماس باين R. ، لو اى بينغ ، Hairong بنغ ، هيديكي أوشيما ، بو تسنغ شياو دونغ مو ، Kimimasa Tobita رون يانكوفسكي ، Makato Ikezawa. نحن ممتنون للمساعدة التقنية من جيمس H. الكمون ، Pruchnic ريان ، Feduska جوزيف ، ريبيكا Schugar جيم ، وعموم هاى يينغ وTebbets جيسيكا. المؤلف كما يود أن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | |
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | |
| مصل حصان مُعطل حرارياً | Invitrogen | #26050-088 | |
| مستخلص جنين الدجاج | Accurate Chemical | #CE650T-10 | |
| 100U ml بنسلين/ستريبتومايسين | Invitrogen | #15140-122 | |
| Dulbecco's PBS | Invitrogen | #14190-250 | |
| محلول ملحي منظم لهانك | Invitrogen | #24020-117 | |
| كولاجيناز النوع XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | |
| ديسباز 2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | |
| Trypsin-EDTA 0.5%(wt/vol) (10x؛ 5g لتر تريبسين (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | |
| كولاجين لطلاء الدوارق: كولاجين من النوع I مشتق من جلد العجل 0.1 g لتر | Sigma-Aldrich | #C-9791 | |
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
المراجع
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
- Qu-Petersen, Z. Identificatio....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
