مقالة منهجية

تقنية نافذة رقيقة الجمجمة لالمزمنة ثنائي الفوتون في الجسم الحي التصوير من الخلايا الدبقية الصغيرة في الفئران نماذج من Neuroinflammation

DOI:

10.3791/2059

⸱

سبتمبر 19, 2010

 ,  ,  ,  , 
1Center for Neural Development and Disease, Department of Neurology, Child Neurology Division, University of Rochester, 2Department of Neurobiology and Anatomy, University of Rochester

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن تصف طريقة لتصور مرارا الفئران الخلايا الدبقية الصغيرة وتعميم حيدات في الجسم الحي على مدى الأيام ، ساعات أو أسابيع باستخدام العابر لاثنين الفوتون المجهري. نحن لشرح كيفية إعداد إطار ضعفت - الجمجمة التي تتيح مراقبة متقطعة من الخلايا الدبقية الصغيرة هادئة التي يمكن تفعيلها عن طريق الحقن المجسم المتاخمة للتات HIV - 1 البروتين التنظيمية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقليديا في علم الأعصاب في الجسم الحي وقد اشتركت رابطتان التصوير فوتون للنظام العصبي المركزي الفئران إما استخدام مفتوح 1،2 الجمجمة أو ضعفت الجمجمة - 3 التحضيرات. في حين أن الجمجمة المفتوح تقنية متعددة جدا ، فإنه ليس الأمثل لدراسة الخلايا الدبقية الصغيرة لأنها الغازية ويمكن أن يسبب تنشيط دبقية صغيرة. على الرغم من أن نهج ضعفت - الجمجمة مينيملي ، وتكرار إعادة ترقق الجمجمة المطلوبة للتصوير المزمن يزيد من مخاطر الاصابة الأنسجة وتنشيط دبقية صغيرة ويسمح لعدد محدود من جلسات التصوير. هنا نقدم مزمن أسلوب النافذة رقيقة الجمجمة لرصد الخلايا الدبقية الصغيرة في الفئران الحية على مدى فترة طويلة من الوقت باستخدام اثنين من الفوتون المجهري. نحن لشرح كيفية إعداد وميسرة مستقرة وضعيفة ، الجمجمة النافذة القشرية (TSCW) مع ساترة الزجاج الشفاف الذي لا يزال apposed على مدى ثلاثة اسابيع من المراقبة على فترات متقطعة. هذا التحضير هو أكثر بكثير TSCW خامل مناعيا مع الاحترام لتفعيل دبقية صغيرة من حج القحف أو فتح الجمجمة المتكررة رقيق ويسمح لعدد من جلسات التصوير التعسفي خلال فترة زمنية تصل إلى أسابيع. نحن نستعد TSCW في 3 CX CR + 1 الفئران GFP / 4 لتصور الخلايا الدبقية الصغيرة مع بروتين الفلورية الخضراء لتعزيز 150 ميكرومتر ≤ تحت سطح حنوني. نعرض أيضا أنه يمكن استخدام هذا الإعداد بالاشتراك مع حقن الدماغ المجسم للبروتين HIV - 1 أعصاب تات ، بجوار TSCW ، وهي قادرة على إحداث microgliosis دائم. ولذلك ، فإن هذه الطريقة مفيدة جدا لدراسة التغيرات في التشكل والحركة دبقية صغيرة مع مرور الوقت في الدماغ الذين يعيشون في نماذج من اضطراب عصبي المرتبطين بفيروس نقص المناعة البشرية (اليد) وغيرها من الأمراض العصبية التي تحتوي على عنصر neuroinflammatory.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد الحيوانية للتصوير

  1. في تجاربنا ، ونحن نستخدم الكبار 3 CX CR الفئران GFP 1 / + التي يمكن استخدامها في التعبير عن GFP الأنساب الخلايا وحيدة النواة ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة. 4 سلالات مختلفة من الفئران لتلبية احتياجات مشروع معين.
  2. تخدير الفأر مع حقنة داخل الصفاق من مزيج يتألف من المخدرات three الفنتانيل ملغم / كغم 0.05 ، 5.0 ملغم / كغم الميدازولام ، و 0.5 Medetomidine ملغم / كغم. 5 التحضير الجراحي ليبدأ بعد TSCW الحيوان لم يعد يستجيب للمؤثرات المؤلمة ، مثل كما قرصة الذيل. طوال الجراحة والتصوير ، وعلينا أن نحافظ على الحيوان على وسادة تدفئة لمنع ما بعد التخدير انخفاض حرارة الجسم. إذا لزم الأمر ، يمكن لجرعة منشطة من ثلث إعطاء الجرعة الأصلي للكوكتيل مخدر لاستعادة الطائرة مخدر الأصلي.
  3. تغطية أعين الحيوان مع مرهم للعين وقائية للحفاظ على العينين رطبة أثناء التخدير ، الذي يكبت المنعكس الحيوان الوميض. إزالة الشعر من فروة الرأس للحيوان باستخدام شفرة حلاقة ، ومقصات ، ومقص ، أو أساليب كيميائية. تطهير فروة الرأس باستخدام 10 ٪ محلول البوفيدون اليودي والايثانول 70 ٪. جميع الأدوات الجراحية يلزم تعقيمها ، معقم للتعقيم الزجاج حبة ، أو تطهيرها مع الايثانول 70 ٪.
  4. جعل شق خط الوسط من فروة الرأس باستخدام مقص صغير ، بدءا 4-5 ملم الذيلية في الجمجمة والمضي قدما إلى الأمام إلى الأمام من وجهة نظر. المهم أن هذا الشق طويلة بما فيه الكفاية أن الجلد لن تتدخل مع لصق لوحة الرأس التي تستخدم لتحقيق الاستقرار في رأس الفأر خلال جلستين الفوتون التصوير (الشكل 1). تحديد المنطقة لتكون ضعيفة تحت نطاق تشريح. تجنب المناطق ذات الاهتمام تقع مباشرة عبر خيوط الجمجمة ، والجمجمة وأقل استقرارا في هذه المناطق والأسباب الكامنة السفن الكبيرة والسحايا وسوف تتداخل مع التصوير.
  5. تطبيق الإيثانول بنسبة 100 ٪ تليها حل 10 ٪ من كلوريد الحديديك مع مسحة القطن المعقم لتجف الأغشية على قمة الجمجمة وتتخلص منهم بعيدا باستخدام الملقط الغرامة أو شفرة حلاقة. فشل لإزالة النتائج غير المستقرة في الأغشية رئيس مرفق لوحة.
  6. وضع طبقة رقيقة من الغراء 910 Permabond حول حواف الإطار عرض لوحة تحت الرأس. مكان لوحة مغطاة الرأس الغراء فوق منطقة الفائدة على جمجمة الحيوان مع الضغط الخفيف (الشكل 1). من المهم أن يتم لصقها فقط لوحة التوجه الى عظمة الجمجمة. فإن أي الجلد أو الأغشية التي اشتعلت بين لوحة جمجمة الرأس وانخفاض في استقرار السندات. تنطبق على كمية صغيرة من اكريليت حول نافذة عرض لاستخدام حقنة الفور السندات الغراء. أخيرا ، وتطبيق كمية صغيرة من وكتايت 454 إلى حواف الإطار عرض لمنع التسريبات.
  7. المسمار لوحة رئيس لصاحب الحيوان (الشكل 1) وتحقق الاستقرار في لوحة الرأس تحت نطاق تشريح التي تحقق باستخفاف مع زوج من الملقط. يجب أن يكون هناك أي تحرك من الجمجمة النسبي إلى لوحة الرأس. وضع قطرة من المياه المالحة على نافذة عرض لضمان عدم وجود تسربات.

2. إعداد إطار الجمجمة ضعيفة القشرية

  1. استعدادا لترقق الجمجمة وجافة الجمجمة باستخدام مزيج من مسحات القطن المعقم والهواء المضغوط. نحن في البداية رقيقة الجمجمة مع قليلا IRF العقيمة حفر حفر 007 في الثاني Microtorque مجموعة في 4000 دورة في الدقيقة. بلطف جدا ، تبدأ رقيق قطره ملم 2-2،5 منطقة دائرية من الجمجمة. استخدام الاقتراحات التي تجتاح الضوء الوحيد موازية تقريبا لالجمجمة ، واستخدام أي ضغوط مباشرة الهبوطي. وقف عمليات الحفر في كل ثانية 20-30 لإزالة الغبار العظام باستخدام الهواء المضغوط. هذه القطع في حفر تسمح للجمجمة لتبريد حتى لا يكون هناك أي ضرر الناجم عن الحرارة للأنسجة الدماغ الكامنة.
    1. كما تقدم الحفر ، لاحظ التحول إلى طبقة العظم الإسفنجي رطوبة (أي "diploe"). حالما يتم التوصل إلى هذه الطبقة ، وممارسة الحذر اضافية مع الحفر.
  2. الاختيار أحيانا ركاكة من الجمجمة عن طريق وضع المالحة فوق منطقة ضعيفة وعرض ضمن نطاق تشريح. وسوف تتيح زيادة الملوحة تبديد الحرارة. كما ضعفت الجمجمة ، أصغر الأوعية الدموية تصبح مرئية.
  3. استخدام الأسنان microblade العقيمة لتحقيق النهائية رقيق تحت المالحة ، كما يوفر التغذية الراجعة microblade اللمس أكثر نحو الاستقرار في الجمجمة. وهذا يسمح للأرق بكثير من التحضيرات مع الحفر وحدها. من تجربتنا ، وسماكة الجمجمة الأمثل هو 10-30 ميكرومتر.
    1. فمن المهم للتحقق من ركاكة من الجمجمة تحت عدة مرات خلال epifluorescence المحاولات القليلة الأولى في صنع نافذة الجمجمة رقيقة. من حدة وعمق الخلايا الدبقية الصغيرة وضوحا والأوعية الدموية تعطي مؤشرا جيدا بالنسبة إلى عندما تكون النافذة جاهزة للتصوير.
  4. مرة واحدة في إطار جاهز ، الغراء قطعة مستطيلة مصنوعة خصيصا لل# 0 ساترة واي عشر بعدا من أقل من 2 ملم على كل جانب أكثر من النافذة. باستخدام ماصة 1.0 مم الزجاج ، ضع قطرة صغيرة من الغراء cyanoacrylate على منطقة الجمجمة ضعيفة وأقل بعناية أسفل قطعة صغيرة من ساترة ، ثم اضغط بلطف على الجمجمة إلى استنزاف كمية كبيرة من الصمغ. فمن المهم لتجنب تشكيل فقاعة بين الزجاج والغراء منذ الهواء المحبوس يؤدي إلى أن تصبح المنطقة تحت مبهمة بصريا. يتم استخدام الغراء cyanoacrylate لأنه لا يزال شفافا عندما تجف ، ويمنع كذلك إعادة نمو العظام والحفاظ على غشاء الجمجمة تحت النافذة رقيقة وشفافة. إذا كان هناك أي الغراء على أعلى من الزجاج غطاء ، استخدم microblade لإزالة بعناية لمرة واحدة لتغطية الزجاج في مكان والغراء جافة.
  5. يدار على مسكن (على سبيل المثال ، البوبرينورفين 2 ملغم / كغم من الباطن cutaneously) فورا بعد الجراحة وإعادة تديرها في أي علامات الألم ، بما في ذلك عدم الرغبة في التحرك ، وتناول الطعام أو الشراب ، وفقدان الوزن ، واللعاب ، انتصاب الشعر ، والأصوات التنفسية ، إلخ

3. ثنائي الفوتون التصوير

  1. تحضيرا لمدة الفوتون التصوير ، مع تغطية TSCW المالحة وتحديد مجالات الاهتمام في إطار epifluorescence (الشكل 2). لتمكين التصوير اللاحقة في المنطقة ، التقاط صورة باستخدام كاميرا التصوير الفوتوغرافي.
  2. لاثنين من الفوتون التصوير ، ونحن نستخدم عادة من صنع اثنين الفوتون المجهر مع تي 6 : ليزر الياقوت ضبطها ل920 نانومتر. تم الكشف عن مضان باستخدام أنبوب مضخم للضوء في وضع كشف كامل الحقل وتصفية الانبعاثات 580/180. ويتم استخدام مياه الغمر 20X عدسة (0.95 NA) طوال الدورة التصوير. يتم تعيين الحد الأقصى لانتاج الطاقة الليزر على الهدف بين 50 و 65 ميغاواط.
  3. حدد مساحة من الاهتمام في طبقات قشرية الأول أو الثاني (تصل إلى 150 ميكرومتر تحت سطح حنوني). لتسهيل إعادة التصوير ، والتقاط صور لنفس الحقل نظر في 2X ، 1X ، وتقريب رقمي 3X. الأوعية الدموية يمكن أن تكون بمثابة معالم للعثور بسهولة على نفس الحقل للعرض خلال جلسات التصوير لاحقة. يمكن تحت التكبير ، متعددة Z - 3X مع مداخن 80-90 سيتم شراؤها Z - الخطوات في كل خطوة ومكدس 0.69 ميكرون كل 5 دقائق لمدة تصل إلى 30 دقيقة ، والتي تمكن عينة جيدة من التشكل دبقية صغيرة والسلوك على مر الزمن ( الشكل 3). بين الاستحواذ على Z - المداخن ، ينبغي للمرء أن تحقق مستوى الملوحة على TSCW ، فضلا عن عمق الحيوان للتخدير.

4. حقن عصبي HIV - 1 ، تات

  1. أولا ، silanize البطانة الداخلية للإبرة قياس 35 و 10 حقنة Microvolume ميكرولتر لمنع ترسب تات. سحب الحل silanizing (Sigmacote) حتى يملأ كل من الإبر والمحاقن. يسمح الحل للجلوس لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. الحل فارغة من المحاقن ، وإزالة المكبس ، والسماح للالمحاقن والإبر حتى يجف تماما. أخيرا ، وغسل المحقنة والإبرة جيدا بالماء منزوع الأيونات.
  2. أداء حج القحف صغيرة قطرها 0.5 مم 3 مم إما منقاري أو الجانبية للTSCW حيث تم الحصول على صور ثنائية الفوتون ، باستخدام أصغر قليلا الحفر وترقق بعناية الجمجمة حتى زوج من ملقط مع نصائح حادة يمكن إزالة طبقة رقيقة من العظم بعيدا بسهولة. نحن نستخدم 10 المحاقن Microvolume ميكرولتر مزودة إبرة قياس 35 يسيطر عليها ضخ حقنة Ultramicropump الثالث شنت على micromanipulator من 3 محاور ، وبعد اصطفاف طرف الإبرة إلى حج القحف ، فمن المتقدمة بدقة على عمق 700-900 ميكرون أدناه السطح حيث حنوني 3 ميكرولتر تات 1-72 (أو غيرها من العوامل المؤيدة للالتهابات) أو المالحة (أو مراقبة المركبات) يتم تسليمها في 80 NL / دقيقة.

5. الحيوان الإسكان

  1. إذا كان هذا الحيوان هو أن تكون التقط عدة مرات في يوم واحد ، تغطي مساحة مفتوحة من الجمجمة مع خليط من مرهم للعين والفازلين لمنع الإزعاج أو الأضرار التي لحقت في الجمجمة بين جلسات التصوير. قطع الجسر من دعم لوحة رأس الصغيرة (انظر الشكل 1B) ، ومكان للحيوان في قفص حرارة يمكن الوصول إليها بسهولة مع الطعام والماء. جميع الحيوانات ويتم توفير مساكن منفردة بعد عملية جراحية في جميع الأوقات. مرة واحدة في دورات التصوير للحيوان كاملة ليوم معين ، وإزالة بعناية كاملة وجها لوحة وخياطة الجلد إلى أكثر من الجمجمة مع # 6 أو أصغر خياطة. مرة أخرى ، البيت الحيوانات منفردة مع الغذاء والماء يمكن الوصول إليها بسهولة بين أيام التجريبية. التحقق من الحيوانات يوميا لأي علامات الاجهاد ، والألم ، أو العدوى.

6. ممثل النتائج

figure-protocol-1
الشكل 1. الحيوانية لتحقيق الاستقرار لعملية جراحية واثنين من الفوتون التصوير (A) ورئيس تصميم لوحة (B).

figure-protocol-2
الشكل 2. GFP المسمى تصور مع الخلايا الدبقية الصغيرة epifluorescence.

jove_content "> figure-protocol-3
الشكل 3. GFP المسمى الخلايا الدبقية الصغيرة تصور مع اثنين من الفوتون التصوير بعد زرع TSCW ، ما يقرب من 50 ميكرومتر تحت سطح حنوني ، واحد ثنائي الفوتون المقاطع التي اتخذت 15-30 دقيقة بعد زرع TSCW (يوم 0) ، وكذلك 7 و 17 يوما في وقت لاحق ، على أن يبقى النوافذ واضح بينما تبقى الخلايا الدبقية الصغيرة المعطلة في غياب الشتائم للالتهابات. ض التوقعات التي اتخذت 6 و 24 ساعة بعد الحقن لفيروس نقص المناعة البشرية عصبي تغييرات مثيرة للإعجاب متبادلة المعرض المورفولوجي لتنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة شريط الحجم : 10 ميكرون.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك اجماعا متزايدا على ان الركيزة الفعلية لHIV - 1 عجز عصبي المرتبطة بها (اليد) هو تدمير البنية متشابك ، المفترض أنها ناتجة عن التهابات وسطاء الموالية للصدر من HIV - 1 البالعات وحيدات النوى المصابة. تعتبر التنشيط دبقية صغيرة ، والخلايا العملاقة multinucleated ، ونظرا لتضخم دباق نجمي بصمات غير محدد من HIV - 1 العدوى والالتهابات في الجهاز العصبي المركزي 7. في المقابل ، ارتبط شدة المرض العصبي سابق للموت مع فقدان متشابك من التعقيد ، فضلا عن عبء البلاعم في الجهاز العصبي المركزي 8،9،10،11. ومع ذلك ، التفاعلات الدينامية بين الخلايا الدبقية الصغيرة ، الطرفية التسلل الضامة ، والخلايا العصبية لدى المرضى الذين يعانون HAND ببساطة لا يمكن أن تكون على غرار باستخدام المعالجة التقليدية الثابتة التي تم الحصول عليها من دراسات immunocytochemical التقليدية. وقد اقترحت الدراسات الحديثة من مختبراتنا التي يمكن أن تكون على غرار ما لا يقل عن بعض من هذه التفاعلات بين الخلايا وحيدة النواة المركزية والطرفية ، والخلايا العصبية في جزء منه عن طريق الحقن المجسم للبروتين HIV - 1 تات 1-72 في حمة الدماغ (لو ، ماركر ، تريمبلي ، تشي ، وGelbard ، بيانات غير منشورة). ولذلك قررنا أن تطبق في مجال التصوير فيفو الفوتون اثنين إلى دراسة التفاعل بين الوحيدات المستمدة الضامة ، الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ والخلايا العصبية المقيمين ، في نموذج حيوان صغير الانقياد لneuroAIDS. في حين أن الأعمال التحضيرية مفتوحة الجمجمة أو ضعفت الجمجمة وتحمل فحص واحد للعمارة القشرية لفترة وجيزة من الزمن (ساعة) ، والمحققين المهتمين دوام الأحداث تحت الحاد لا يمكن استخدام هذه المستحضرات دون تفعيل artifactually الخلايا الدبقية الصغيرة / بلعم بسبب التلاعب الجراحي نافذة قبي. نحن هنا يبرهن على وجود طريقة بسيطة للتحايل هذه القيد بواسطة لصق قطعة صغيرة من الزجاج ساترة فوق منطقة الجمجمة ضعيفة منع من تجديد القبة في TSCW فضلا عن الحفاظ على شبه الشفافية لأسابيع 3 ≥. نظهر أيضا أن هذه التقنية تسمح لنا بمراقبة سلوك حيدات الطرفية دخول microvasculature الدماغي وكذلك الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ المقيم في الاستجابة لحقن المجسم من فيروس نقص المناعة البشرية 1-72 تات في القشرة من الفئران متخالف لCX CR 3 / 1 GFP ( لتحديد الخلايا وحيدة النواة من النسب). ويمكن بسهولة أن تتكيف هذه التقنية لاستخدامها في الفئران مع خلفيات وراثية مختلفة ، على سبيل المثال ، فإننا نستخدم عادة متخالف CX CR 3 / 1 GFP خاصتك X - 1 12 YFP الفئران لتحقيق التفاعل بين الوحيدات المستمدة الضامة ، الخلايا الدبقية الصغيرة المقيمة في الدماغ والخلايا العصبية في النماذج الحية من neuroinflammation ذات الصلة في متناول اليد. استعدادنا TSCW يسمح للمحققين لدراسة الخلية خلية التفاعلات بين المحيط والجهاز العصبي المركزي التي قد تحدث على مدى فترات من أسبوعين ، التي يمكن من خلالها تصوير الحيوان مرارا قبل وبعد العلاج التجريبي. وبالتالي ، يمكن لكل حيوان بمثابة ايقاعه. التحذير واحد لهذا النموذج TSCW هو أن الخلايا المستهدفة في إطار التحقيق بحاجة إلى أن يكون إما وراثيا في التعبير عن البروتينات الفلورية محسن (eXFP) أو أن يكون المسمى مع صبغة الفلورسنت دون الإخلال الميكانيكية من القبة ، وأنه يجب أن يكون التعبير eXFP قوية بما يكفي ل تسمح العمارة الخليوي الى أن تصور بعد دورات التصوير المتكرر على مدى فترة من أسابيع.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر اميلي ألف كيلي رئيس لتصميم لوحة.

نحن ممتنون للدعم من المعاهد الوطنية للصحة لجوائز HAG : PO1 MH64570 ، RO1 MH56838 ، RO1 MH078989 ، R21 MH03851 والدعم السخي للصندوق Waasdorp جيفري الأعصاب للأطفال والتي بدونها لن هذا العمل لم يكن ممكنا. وتمول من قبل المعاهد الوطنية للصحة بأنقرة (EY019277) ، ومؤسسة وايتهول ، وP. ألفريد سلون ومؤسسة جائزة شهادة في العلوم الطبية الحيوية من صندوق ويلكوم بوروز. وتمول من قبل MET دي فون LA RECHERCHE EN دو كيبيك سانتي (FRSQ) ما بعد الدكتوراه جائزة التدريب. سوق دبي المالي هو متدرب في برنامج التدريب الطبي العلماء ، بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة T32 GM07356 وAI049815 T32.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
سترات الفنتانيلHospira Inc.
ميدازولام هيدروكلوريدBaxter Internationl Inc.
ميديتوميدين هيدروكلوريد (Domitor)Pfizer Pharma GmbH
وسادات تدفئةBeyond Bodi Heat
مرهم توبراميسين وديكساميثازون للعين (TobraDex)Alcon
محلول بوفيدون-يود 10%Betadine Puredue Pharma
محلول كلوريد الحديديك 10%Ricca Chemical Company3120-32
ميثيل سيانو أكريليت 910Permabond
سيانو أكريليت 454Loctite
مادة أطقم الأسنان TEETS ميثيل ميثاكريلات متشابكCo-Oral-lte Dental Mfg CO
طقم القطعة اليدوية Microtorque IIPearson AssessmentsR14-0002
ريش مثقاب IRF 007Fine Science Tools19008-07
شفرة دقيقة قابلة للثني من Norland بنصف قطر كاملSalvin DentalBLAD-NORLAND-69
سيانو أكريليتThe Original Superglue
غطاء شرائح زجاجي رقم #0Electron Microscopy Sciences63750-01
حقنة دقيقة الحجم 10 μlWorld Precision Instruments, Inc.ILS010LT
UltraMicroPump IIIWorld Precision Instruments, Inc.UMP3-1
إبرة NanoFil مقاس 35World Precision Instruments, Inc.NL35BL-2
مطحنة كرات، ريش كاربيد #1/4World Precision Instruments, Inc.501860
SigmacoteSigma-AldrichSL2-100
أنبوب مضاعف ضوئيHamamatsu Corp.HC125-02
ليزر Ti:Sapphire Mai-TaiNewport Corp.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mostany, R., &, P. ortera-C. ailliau, C, A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J Vis Exp. 12, (2008).
  2. Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4, (2009).
  3. Yang, G. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nature Protoc. 5, 213-21 (2010).
  4. Jung, S. Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion. Mol Cell Biol. 20, 4106-41 (2000).
  5. Mrsic-Flogel, T. D. Homeostatic regulation of eye-specific responses in visual cortex during ocular dominance plasticity. Neuron. 54, 961-96 (2007).
  6. Majewska, A., Yiu, G., &, Y. uste, R, A custom-made two-photon microscope and deconvolution system. Pflugers Arch. 441, 2-3 (2000).
  7. Sharer, L. R. Pathology of HIV-1 infection of the central nervous system. A review. J Neuropathol Exp Neurol. 51, (1992).
  8. Everall, I. P., Aliberti, J., &, B. alcerzyk, M, Neuronal density in the superior frontal and temporal gyri does not correlate with the degree of human immunodeficiency virus-associated dementia. Acta Neuropathol (Berl. 88, 538-53 (1994).
  9. Masliah, E., Banati, R. B., &, Q. uinlan, M, E. Dendritic injury is a pathological substrate for human immunodeficiency virus-related cognitive disorders. Ann Neurol. 42, 963-96 (1997).
  10. Everall, I. P., Banati, R. B., &, U. pender, B, M. Cortical synaptic density is reduced in mild to moderate human immunodeficiency virus neurocognitive disorder. Brain Pathol. 9, (1999).
  11. Glass, J. D., Fedor, H., Wesselingh, S. L., &, M. cA. rthur, C, J. Immunocytochemical quantitation of human immunodeficiency virus in the brain: correlations with dementia. Ann Neurol. 38, (1995).
  12. Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, (2000).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CX3CR1 GFP HIV Tat

مقالات ذات صلة