مقالة منهجية
الأنوفيلة البعوض stephensi نواقل الملاريا في الهند والتي تسكن في جميع أنحاء آسيا. هذا الفيديو يوضح هذه التقنية لأداء microinjections من هذا النوع مع الجينات المحورة التي من شأنها أن تضفي على الملاريا المقاومة للبعوض. الكثير من منهجية تظاهروا في هذا الفيديو هو تطبيق لتقنيات microinjection أنواع أخرى من البعوض.
إدخال جينات دخيلة في الجينوم من البعوض microinjection يتطلب تقنيات مصممة خصيصا لأنواع محددة من الفائدة. هذا البروتوكول الفيديو يوضح الطريقة المستخدمة من قبل المختبر جيمس microinject يبني الحمض النووي في الأجنة stephensi الأنوفيلة لجيل من البعوض المتحول. وتتجلى أساليب إعداد microinjection الإبر ، وجمع واعداد وتنفيذ الأجنة microinjection.
إعداد مقدما من microinjection :
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| إبر حقن من الكوارتز | Sutter Instrument Co. | يتم تحضير أنابيب ذات قطر خارجي 1.0 ملم، وقطر داخلي 0.70 ملم، وطول 10 سم، عن طريق سحب أنابيب شعرية باستخدام جهاز سحب الماصات الدقيقة (micropipette puller) للحصول على طرف دقيق يتراوح بين 3 إلى 8 ميكرومتر مع ساق يبلغ طولها حوالي 100 إلى 300 ملم. | ||
| جهاز سحب الكوارتز | أداة | Sutter Instrument Co. | P-2000 | الإعداد: الحرارة-275، الخيط-3، السرعة-38، التأخير-250، السحب-141 |
| طقم EndoFree لاستخلاص البلازميد | Qiagen | |||
| إيزوبروبانول | ||||
| عمود Millex-GV | SLGV RO4 NL | لتنقية الحمض النووي (DNA) | ||
| بناء الحمض النووي (DNA) | 0.5 مجم/مل | |||
| بلازميد مساعد | 0.3 ملجم/ملل | |||
| محلول حقن | محلول منظم | محلول بتركيز 1x: 5 ملي مولار KCl، و0.1 ملي مولار فوسفات الصوديوم، وبدرجة حموضة (pH) 6.8 | ||
| محلول منظم متساوي التوتر | راجع الوصفة في قسم البروتوكول | |||
| زيت التجفيف | زيت هالوكربون 700:زيت هالوكربون 27 بنسبة (1:1). يخلط جيداً. يُحضّر مسبقاً قبل عملية الحقن المجهري. | |||
| الدم | لتغذية البعوض | |||
| *Anopheles stephensi* | حيوان | البعوض، ذكر وإناث. | ||
| قارورة استزراع ذبابة الفاكهة (Drosophila) | لوضع البيض | |||
| أطباق بتري | بواسطة محلول منظم متساوي التوتر، لفقس الأجنة | |||
| فرشاة رسم دقيقة | سابل # 0000 | |||
| ورق واتمان (Whatman) بحجم 3 مم | ||||
| ملقط رقم 5 | ||||
| شريط لاصق مزدوج الوجه | ||||
| أداة التحميل الدقيق (Microloader) | Eppendorf | 5242 956.003 | ||
| جهاز نقل الجينات (Transjector) | Eppendorf | |||
| المجهر | Leica Microsystems | مع منصة متحركة ومتحكم دقيق، مضبوطين على تكبير 10x |
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن