يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نظم الدورية الثقافة خلية خلية للثقافة الإنسان : خلايا الأرومة الغاذية الإنسان نموذجا

17K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/3367

⸱

يناير 18, 2012

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Tulane University Medical School, 2Physician/Scientist Program, Tulane University Medical School, 3Department of Molecular and Cellular Biology, Baylor College of Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

التقليدية ، واثنين من خلية ثقافة تقنيات الأبعاد غالبا ما تؤدي إلى تغيير الخصائص فيما يتعلق علامات التمايز ، السيتوكينات وعوامل النمو. ثلاثي الأبعاد ثقافة خلية في نظام خلية ثقافة الدورية (المراكز المناخية الإقليمية) استعادت التعبير عن كثير من هذه العوامل كما هو موضح هنا مع خط الأرومة الغاذية extravillous الخلية.

الملخص

يساهم مجال أبحاث أرومة الغاذية البشرية في فهم البيئة المعقدة التي تتشكل أثناء تشكل المشيمة. ونظراً لطبيعة هذه الدراسات، فإن إجراء التجارب البشرية in vivo أمر مستحيل. ويدعم الجمع بين المزارع الأولية، ومزارع المستأصلات، وخطوط خلايا أرومة الغاذية1 فهمنا لغزو جدار الرحم2 وإعادة تشكيل الشرايين الحلزونية الرحمية3,4 بواسطة خلايا أرومة الغاذية خارج الزغابات (EVTs)، وهو أمر ضروري لتثبيت الحمل بنجاح. ورغم وفرة المعرفة المستخلصة من هذه النماذج، فمن المسلم به أن نماذج المزارع الخلوية in vitro التي تستخدم خطوطاً خلوية شبيهة بـ EVT تظهر خصائص خلوية متغيرة عند مقارنتها بنظيراتها in vivo5,6. وتظهر الخلايا المستزرعة في نظام استزراع الخلايا الدوار (RCCS) خصائص مورفولوجية ومظهرية ووظيفية لخطوط خلوية شبيهة بـ EVT تحاكي بشكل أوثق خلايا EVTs المتمايزة in utero، مع زيادة في تعبير الجينات الوسيطة للغزو (مثل matrix metalloproteinases (MMPs)) وتمايز أرومة الغاذية7,8,9. وقد استُخدم خط خلايا مشيمة مستشفى سانت جورج-4 (SGHPL-4) (المتبرع به مشكوراً من قبل الدكتور غاي ويتلي والدكتورة جوديث كارترايت)، وهو خط خلوي شبيه بـ EVT، للاختبار في نظام RCCS.

يعتمد تصميم وعاء استزراع نظام الاستزراع الدوار (RCCS) على مبدأ أن الأعضاء والأنسجة تعمل في بيئة ثلاثية الأبعاد (3-D). ونظراً لظروف الاستزراع الديناميكية في الوعاء، بما في ذلك ظروف القص ذات الصلة الفسيولوجية، فإن الخلايا التي تنمو في ثلاثة أبعاد تشكل تجمعات بناءً على التقاربات الخلوية الطبيعية وتتمايز إلى تجمعات شبيهة بالأنسجة النمطية للأعضاء10,11,12. ويوفر الحفاظ على مدار سائل بيئة منخفضة القص ومنخفضة الاضطراب تشبه الظروف الموجودة in vivo. ويتم مواجهة ترسيب الخلايا المستزرعة عن طريق ضبط سرعة دوران نظام RCCS لضمان السقوط الحر المستمر للخلايا. ويحدث التبادل الغازي من خلال غشاء كاره للماء ونفاذ يقع في الجزء الخلفي من المفاعل الحيوي. ومثل أنسجتها الأصلية in vivo، تستطيع الخلايا التي نمت في نظام RCCS الاستجابة للتدرجات الكيميائية والجزيئية في ثلاثة أبعاد (أي عند أسطحها القمية والقاعدية والجانبية) لأنها تستزرع على سطح حبيبات حاملات دقيقة مسامية. وعندما تنمو كطبقات أحادية ثنائية الأبعاد على أسطح غير نفاذة مثل البلاستيك، تُحرم الخلايا من هذا التواصل المهم عند سطحها القاعدي. وبناءً على ذلك، فإن القيود المكانية التي تفرضها البيئة تؤثر بشكل عميق على كيفية استشعار الخلايا للإشارات الواردة من البيئة الدقيقة المحيطة وفك تشفيرها، مما يشير إلى دور هام للوسط ثلاثي الأبعاد13.

لقد استخدمنا نظام RCCS لهندسة نماذج ثلاثية الأبعاد ذات دلالة بيولوجية لأنسجة ظهارية بشرية متنوعة7,14,15,16. وبالفعل، فقد أثبتت العديد من التقارير السابقة أن الخلايا المستزرعة في نظام RCCS يمكن أن تتخذ أنماطاً ظاهرية ذات صلة فسيولوجية لم يكن من الممكن تحقيقها باستخدام نماذج أخرى10,17-21. وباختصار، يمثل الاستزراع في نظام RCCS منصة سهلة وقابلة للتكرار وذات إنتاجية عالية توفر أعداداً كبيرة من الخلايا المتمايزة القابلة لمجموعة متنوعة من المعالجات التجريبية. في البروتوكول التالي، وباستخدام خلايا EVTs كمثال، نصف بوضوح الخطوات المطلوبة لاستزراع الخلايا الملتصقة بشكل ثلاثي الأبعاد في نظام RCCS.

البروتوكول

1. الكولاجين الخرزة التحضير

  1. قبل EVTs التحميل لمدة 3 - D خلية ثقافة ، ويحتاج المرء لتحضير حبات microcarrier Cytodex - 3 :
    1. تزن خارج القدر المناسب من Cytodex - 3 حبات المطلوبة لهذه التجربة. ويتم تكييف هذا البروتوكول للسفينة 10ML المراكز المناخية الإقليمية ، والتي هي بحاجة 0.05g من الخرز. لسفينة 50ml المراكز المناخية الإقليمية ، وفقا لمقياس. في أنبوب 50mL autoclavable المخروطية ، مزيج من 250 ملغ Cytodex - 3 حبات مع الفوسفات Dulbecco 12mL مخزنة الحل (DPBS). وهذا المبلغ غير كاف بالنسبة للسفن المراكز المناخية الإقليمية 5.
  2. ضمان وجود كمية كافية في أنبوب مخروطي الشكل ، وهذه العملية ستؤدي في الأوتوكلاف التبخر. قبعة فضفاضة الأنبوب والأوتوكلاف لمدة 10 دقيقة في 110 درجة مئوية.
  3. إزالة أنبوب مخروطي الشكل عند الانتهاء من دورة الأوتوكلاف والسماح للحل Cytodex - 3 حبة لتبرد.
  4. بعد أنبوب مخروطي الشكل ويتم تبريده الى درجة حرارة الغرفة ، واستخدام تقنية معقمة لتحقيق الحجم الكلي ل12.5mL 1X به موانئ دبيBS.
  5. قبعة وتخزين أعد Cytodex - 3 حبات في درجة حرارة الغرفة. السماح للالخرز على استعداد لتنتفخ وتبرد لدرجة حرارة الغرفة قبل استخدامها. سيتم إعداد أعلاه Cytodex - 3 حبات توفير خمس سفن 10ML المراكز المناخية الإقليمية. وقد لاحظنا أن التخزين الموسعة Cytodex - 3 حبات في درجة حرارة الغرفة سوف تؤدي إلى تراجع الأداء ، كما سيؤدي إلى زعزعة الاستقرار الكولاجين بعد شهر واحد تقريبا. Cytodex - 3 حبات يتراوح حجمها 133-215 ميكرون.

2. إعداد وسائل الاعلام

  1. تحضير 1L من المراكز المناخية الإقليمية الأمثل GTSF - 2 وسائل الاعلام (مقتبس من 22) ، الذي يتكون من 40 ٪ MEM ألفا ، بالإضافة إلى ملاحق و 60 ٪ L - 15 ليبوفيتز وسائل الاعلام (مقتبس من 22). أولا ، إعداد 400mL في إجمالي حجم ألفا MEM تستكمل مع :
    21.2mM بيكربونات الصوديوم
    0.06 ٪ ببتون
    0.7mM الفركتوز
    1.4mM الجالاكتوز
    5.6mM الجلوكوز
    1 ٪ HEPES
    1 ٪ L - الجلوتامين
    0.5 ٪ ITS
    10 ٪ FBS

  2. لإعداد محلول المخزون من ITS ، تذوب في 5mL العقيمة O 2 H يحمض أعدها إضافة حمض الخليك الجليدي (حوالي 0.05mL). دوامة حل ، اتبع مع الماء المعقم 45mL.
  3. تزن ما يكفي من L - 15 ليبوفيتش لمسحوق 600ml المتوسط ​​عن طريق إذابة الأنسجة في الثقافة O. الصف 2 H
  4. جلب المتوسطة الحجم الكلي للثقافة الخلية ل1L مع المتوسط ​​L - 15 ليبوفيتز. فلتر تعقيم وتخزين عند 4 في الظلام درجة مئوية. إضافة 1 ٪ البنسلين ، الستربتوميسين فردي لكل قسامة من الوسيلة المستخدمة.
  5. وقد تم العديد من وسائل الاعلام الصيغ الأخرى من وسائل الاعلام - 2 GTSF اختبرت بنجاح في المراكز المناخية الإقليمية. يجب المختبرات الفردية التي تقرر لنفسها المتوسط ​​هو الأمثل ليتم تنفيذ التجربة.

3. الخلايا والحضانة الخرزة

  1. نشر EVTs لconfluency 80 ٪ ~ ، ويعرض للتريبسين العد باستخدام الممارسات المقبولة ثقافة الخلية.
  2. تعليق 1x10 6 EVTs في 4mL الدافئةاد وسائل الإعلام.
  3. المزيج بلطف على استعداد Cytodex - 3 حبات. باستخدام تقنيات معقمة ، إزالة 2.5mL من الخرز إعدادها باستخدام تلميح واسعة ، 10ML ماصة المصلية ونقل إلى أنبوب مخروطي 15mL غير المستخدمة. علما أنه قد تكون هناك خسارة صغيرة من الخرز والتي يعلقونها على ماصة.
  4. السماح لل- 3 حبات Cytodex لتسوية في الجزء السفلي من الأنبوب. بعد الترسيب ، واستخدام pipettor لإزالة الطبقة العليا من دون إزعاج DPBS حبات Cytodex - 3.
  5. مزيج 1x10 6 EVTs أعدت في وسائل الإعلام مع حبات Cytodex - 3 المعدة.
  6. احتضان الخليط خلية حبة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. المزيج بلطف دوريا. احتضان لمزيد من 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5 ٪ CO 2. المزيج بلطف دوريا.

4. تحميل RWV

  1. في مجلس الوزراء تدفق الصفحي ، إزالة المراكز المناخية الإقليمية 10ML من التعبئة والتغليف ووضعه في العقيمة ، لوحة الثقافة 6 - جيدا لتحقيق الاستقرار. الرجوع إلى الشكل (1) رسم تخطيطي لتسمية المنسق المقيمCS.
  2. إزالة سدادة كبيرة من الميناء.
  3. جعل إجمالي حجم الخليط خلية حبة لاحتضان 10ML تحسنت مع وسائل الاعلام.
  4. تحميل خلية / حبة الخليط في المراكز المناخية الإقليمية ، من خلال ميناء كبير. وينبغي إمالة المراكز المناخية الإقليمية في زاوية 45 درجة (كبير يصل الميناء) عند تحميل للمساعدة في إزالة فقاعات الهواء المحتملة. منع تراكم الضغط الايجابي عن طريق ملء السفن ببطء ولكن بثبات.
  5. استبدال سدادة في ميناء كبير.
  6. إزالة بيستونز من 3 مل الحقن والمحاقن مكان فارغ على المنافذ الصغيرة. إضافة 1 - 3mL من وسائل الإعلام إلى كل حقنة. فتح ببطء الصمامات اثنين. استبدال المحاقن بيستونز على المحاقن بلطف. إضافة وسائط من الحقنة حتى تتم إزالة كافة الفقاعات من داخل الغرفة.
  7. التقط المراكز المناخية الإقليمية والاستفادة من الجانب بلطف حين تناوب في أمامك للتحقق من الفقاعات. إذا كان هناك أي فقاعات ، ويجب اخراجهم من الغرفة ، وفقاعات الهواء سوف تتداخل مع تشكيل سالمجاميع و الخلايا وإدخال قوى القص. إزالة الفقاعات من خلال تناوب المراكز المناخية الإقليمية حتى فقاعات تحت ميناء صغير. ثم ادفع برفق لأسفل على حقنة في الجانب المقابل لإجبار فقاعات في الميناء والخروج من القاعة.
  8. إغلاق ميناء واحد من الجانبين. ادفع برفق لأسفل على مكبس الحقنة أخرى لإدخال كمية صغيرة من الضغط الإيجابي في السفينة ، والذي يمنع من تشكيل فقاعات. إغلاق صمام الثانية.
  9. تحميل المراكز المناخية الإقليمية على الدوار. بدء الدوران في 19rpm في 37 درجة مئوية حاضنة 2 CO.

5. تغيير وسائل الإعلام

  1. تغيير وسائل الاعلام كل يوم على مدى الأيام الثلاثة الأولى ، ثم بعد ذلك كل يوم.
  2. إيقاف الدوار وإزالة المراكز المناخية الإقليمية. سحب المكابس لخلق بعض الشفط ، إزالة المحاقن من كل ميناء صغير ووضع المراكز المناخية الإقليمية على زاوية بحيث الخرز تسوية المقابل من ميناء كبير.
  3. بعد الخرز وقد استقر كل شيء ، فتح أحد الصمامات الصغيرة والسماح لوسائل الإعلام في التدفق من المراكز المناخية الإقليمية وداخل حاوية النفايات. إزالة 2 / 3 من وسائل الإعلام بهذه الطريقة. يجب التأكد من عدم إزعاج الخرز وعدم تجاهل أي المجاميع.
  4. إغلاق صمام الصغيرة وفتح ميناء كبير. إضافة وسائل الإعلام مرة أخرى إلى المراكز المناخية الإقليمية من خلال ميناء كبير. استبدال سدادة في ميناء كبير.
  5. كرر الخطوات من 4،6-4،9.
  6. كما المجاميع الزيادة في الحجم ، وتحتاج إلى زيادة سرعة دوران للاحتفاظ بها في تعليق العمل في جميع الأوقات ، من الناحية المثالية في نمط الدورة الدموية الصغيرة في السرعة المثلى. عموما ، وزيادة السرعة بين 0،3-0،7 بعد كل دورة في الدقيقة التغذية مرة واحدة في المجاميع تبدأ في النمو بشكل ملحوظ.

6. نشر جمع خلايا

  1. إزالة المراكز المناخية الإقليمية من الدوار. إزالة المحاقن من كل ميناء صغير ووضع المراكز المناخية الإقليمية على زاوية بحيث يمكن تسوية الخرز العكس من ميناء كبير.
  2. بعد الخرز وقد استقر كل شيء ، فتح أحد الصمامات الصغيرة والسماح لوسائل الإعلام لتتدفقمن المراكز المناخية الإقليمية وداخل حاوية النفايات. إزالة 1 / 3 من وسائل الإعلام بهذه الطريقة.
  3. إغلاق صمام الصغيرة وفتح ميناء كبير. بلطف دوامة السفينة لتفريق التجمعات مرة أخرى إلى الحل. الخليط السائل في أنبوب فارغ 50ml العقيمة المخروطية. السماح للمجاميع التي جمعت لتستقر في أنبوب مخروطي طاف به قبل أن يغسل جيدا وعاء الثقافة لتحقيق أقصى قدر من الانتعاش من الركام. ويمكن استخدام المجاميع عن المقايسات المصب على الفور ، مثل التدفق الخلوي ، المقايسات الغزو المناعي وغيرها.

7. ممثل النتائج

ويظهر مثال EVT تشبه الخلايا (خلية SGHPL - 4 الأرومة الغاذية خط) التي تزرع في المراكز المناخية الإقليمية على Cytodex - 3 حبات في الشكل 2. خط خلية EVT مثل يعرض توقعات بتمديد بعيدا عن الكتلة الرئيسية ، وربط على كتل المجاورة. مغطاة بالكامل العديد من الخرز مع خلايا التكاثر. إزالة مرة واحدة من المراكز المناخية الإقليمية وجيش التحرير الشعبى الصينىتيد على المصفوفة خارج الخلية ، وEVT مثل 3 - D غزو الخلايا المزروعة بقوة و / أو ترحيل (الشكل 3). RT - PCR البيانات تؤكد على التعبير زيادة MMPs ينظر في المجاميع 3 - D بدلا من الثقافة التقليدية monolayers الخلية (الشكل 4). ومن المثير للاهتمام ، هي أيضا upregulated الجينات لا ترتبط مع الغزو في المراكز المناخية الإقليمية (الجدول 1) و قد تساعد في تحديد مجالات مثل تفاعلات المناعية مع trophoblasts غزو الخلايا.

الشكل 1
الشكل 1. تصوير أفلام كارتون لنظام خلية الثقافة الدوارة (المراكز المناخية الإقليمية).

الشكل 2
الشكل 2. المرحلة مجهرية على النقيض من إجمالي النمو ممثل بعد 5 أيام في المراكز المناخية الإقليمية. تشير الأسهم إلى غزو الخلايا و* يدل على حبات microcarrier Cytodex - 3.

figure-protocol-3 كانت جزءا لا يتجزأ من الرقم 3. المجاميع المراكز المناخية الإقليمية يزرع في المواد الهلامية الليفين. ولوحظ من خلال غزو الجل الليفين في أقرب وقت (أ) تضمين بعد الليفين 24 ساعة و (ب) واصلت خلال 48 ساعة. تشير الأسهم الخلايا الغازية ويدل على Cytodex * 3 حبات microcarrier (بتصرف ، بإذن من المرجع 7).

الشكل 4
نشر الرقم 4. zymogram الجيلاتين المقارن المونولاير والمراكز المناخية الإقليمية SGHPL - 4 - EVT مثل الخلايا. ويفرز أشكالا المؤيدة ونشطة من MMP - 2 و MMP - 9 من الأرومة الغاذية المراكز المناخية الإقليمية الخلايا المزروعة (بتصرف ، بإذن من المرجع 7).

الجدول 1
الجدول 1. ملخص النتائج ميكروأري من خلايا - 4 SGHPL نمت في المراكز المناخية الإقليمية (بتصرف ، بإذن من المرجع 7).

  2. يشير الجينات التي كانت أقل من الحد من الكشف في monolayers.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ثقافة تقنية المعروضة هنا يقدم المحققون مع الخلايا EVT مثل الغازية للغاية. وقد تم الآن من المسلم به أن فقدان التمايز يحدث في monolayers بسبب تثبيط الاستجابات الخلوية لمنبهات الكيميائية والجزيئية في ثلاثة أبعاد (سطوح الخلايا القمي ، القاعدية ، والجانبية) 10،13. هذا الأسلوب يعكس خصائص سجلته في الرحم على غزو الخلايا EVT. كما الإجراء يحاكي الثقافة التقليدية حركية الأنسجة الوقت أحادي الطبقة ، ولكنها توفر الخلايا مع الفرق التعبير ، قد تكون استخدمت المقايسات نسبية. قد ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية الأميركية للصحة منح HD051998 # المعاهد الوطنية للصحة / معاهد الصحة القومية (لCAM).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم الكاشف شركة فهرس العدد تعليقات
Cytodex الخرز microcarrier سيغما الدريخ C3275
نظام التناوب الثقافة الخلية (المراكز المناخية الإقليمية) Synthecon المراكز المناخية الإقليمية - D ويشمل العرض الدوار قاعدة السلطة ، و 4 وحدات للتصرف المراكز المناخية الإقليمية
وحدات المراكز المناخية الإقليمية يعاد Synthecon الاتصال Synthecon
3ml حقنة غيض Luer لوك دينار بحريني 309585
10ML اسعة طرف المصلية ماصة دينار بحريني 357504
MEM ألفا Invitrogen 12561-072
L - 15 ليبوفيتش المتوسطة ، ومسحوق Invitrogen 41300-039
H 2 O ، الذيفان الداخلي مجانا الصياد MT - 25 - 055 - CM
بيكربونات الصوديوم سيغما الدريخ S - 7795
الببتون مادة تنشأ عن البروتينات فيشر العلمية BP1420 - 100
سكر الفاكهة سيغما الدريخ F3510 - 100
الجالاكتوز سيغما الدريخ G5388 - 100
جلوكوز سيغما الدريخ G7528 - 250
HEPES Invitrogen 15630-080
L - الجلوتامين Invitrogen 25030
الانسولين ترانسفيرين - زيلونيت الصوديوم (ITS) سيغما الدريخ I1884
FBS Invitrogen 10437
البنسلين الستربتوميسين Invitrogen 15140

المراجع

  1. Knofler, M. Critical growth factors and signalling pathways controlling human trophoblast invasion. Int. J. Dev. Biol. 54, 269-269 (2010).
  2. Cartwright, J. E. Remodelling at the maternal-fetal interface: relevance to human pregnancy disorders. Reproduction. 140, 803-803 (2010).
  3. Harris, L. K. IFPA Gabor Than Award lecture: Transformation of the spiral arteries in human pregnancy: key events in the remodelling timeline. Placenta. 32, Suppl 2. S154-S154 (2011).
  4. Whitley, G. S., Cartwright, J. E. Trophoblast-mediated spiral artery remodelling: a role for apoptosis. J. Anat. 215, 21-21 (2009).
  5. Apps, R. Genome-wide expression profile of first trimester villous and extravillous human trophoblast cells. Placenta. 32, 33-33 (2011).
  6. Bilban, M. Trophoblast invasion: assessment of cellular models using gene expression signatures. Placenta. 31, 989-989 (2010).
  7. LaMarca, H. L. Three-dimensional growth of extravillous cytotrophoblasts promotes differentiation and invasion. Placenta. 26, 709-709 (2005).
  8. Jovanovic, M., Stefanoska, I., Radojcic, L., Vicovac, L. Interleukin-8 (CXCL8) stimulates trophoblast cell migration and invasion by increasing levels of matrix metalloproteinase (MMP)2 and MMP9 and integrins alpha5 and beta1. Reproduction. 139, 789-789 (2010).
  9. Husslein, H. Expression, regulation and functional characterization of matrix metalloproteinase-3 of human trophoblast. Placenta. 30, 284-284 (2009).
  10. Barrila, J. Organotypic 3D cell culture models: using the rotating wall vessel to study host-pathogen interactions. Nat. Rev. Microbiol. 8, 791-791 (2010).
  11. Hammond, T. G., Hammond, J. M. Optimized suspension culture: the rotating-wall vessel. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 281, 12-12 (2001).
  12. Unsworth, B. R., Lelkes, P. I. Growing tissues in microgravity. Nat. Med. 4, 901-901 (1998).
  13. Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions. J. Cell. Sci. 116, 2377-2377 (2003).
  14. Bentrup, H. önerzu, K, Three-dimensional organotypic models of human colonic epithelium to study the early stages of enteric salmonellosis. Microbes. Infect. 8, 1813-1813 (2006).
  15. Carterson, A. J. A549 lung epithelial cells grown as three-dimensional aggregates: alternative tissue culture model for Pseudomonas aeruginosa pathogenesis. Infect. Immun. 73, 1129-1129 (2005).
  16. Myers, T. A. Closing the phenotypic gap between transformed neuronal cell lines in culture and untransformed neurons. J. Neurosci. Methods. 174, 31-31 (2008).
  17. Hjelm, B. E. Development and characterization of a three-dimensional organotypic human vaginal epithelial cell model. Biol. Reprod. 82, 617-617 (2010).
  18. Straub, T. M. In vitro cell culture infectivity assay for human noroviruses. Emerg. Infect. Dis. 13, 396-396 (2007).
  19. Nickerson, C. A. Three-dimensional tissue assemblies: novel models for the study of Salmonella enterica serovar Typhimurium pathogenesis. Infect. Immun. 69, 7106-7106 (2001).
  20. Carvalho, H. M., Teel, L. D., Goping, G., O'Brien, A. D. A three-dimensional tissue culture model for the study of attach and efface lesion formation by enteropathogenic and enterohaemorrhagic Escherichia coli. Cell. Microbiol. 7, 1771-1771 (2005).
  21. Sainz, B., TenCate, V., Uprichard, S. L. Three-dimensional Huh7 cell culture system for the study of Hepatitis C virus infection. Virol. J. 6, 103-103 (2009).
  22. Lelkes, P. I., Ramos, E., Nikolaychik, V. V., Wankowski, D. M., Unsworth, B. R., Goodwin, T. J. GTSF-2: a new, versatile cell culture medium for diverse normal and transformed mammalian cells. In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 33, 344-344 (1997).
  23. Lelkes, P. I., Ramos, E., Nikolaychik, V. V., Wankowski, D. M., Unsworth, B. R., Goodwin, T. J. GTSF-2: a new, versatile cell culture medium for diverse normal and transformed mammalian cells. In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 33, 344-344 (1997).
  24. GE Healthcare. Microcarrier Cell Culture - Principles and Methods. Handbooks. , Available from: http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/service_and_support~documents_and_downloads~handbooks (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

نظم الدورية الثقافة خلية خلية للثقافة الإنسان : خلايا الأرومة الغاذية الإنسان نموذجا
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.