$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. الوركي انقباض العصب المزمن
وينبغي استخدام تقنيات التطهير لإجراء العملية الجراحية. تطهير سطح العمل الجراحي مع الايثانول 70٪، وإعداد مسبق في الصكوك معقم (على سبيل المثال، مقص غرامة، ملقط، وضام)، الشاش، ومسحات من السلع الاساسية عن طريق جهاز الأوتوكليف. الخضوع لعمليات جراحية متعددة، وأدوات تنظيف resterilise مع الايثانول 70٪ أو معقمات جافة حبة بين الفئران. وينبغي ارتداء قناع جراحي، غطاء محرك السيارة الشعر والقفازات المعقمة.
لانقباض في العصب، وإعداد خياطة الوتر الكروم عن طريق خفض هذا إلى قطع صغيرة من سم طول حوالي 3 مغمورة في المياه المالحة عقيمة، لمنع جفاف. لإغلاق الجرح، واستخدام خيوط الحرير المتاحة تجاريا العقيمة.
- خدر الفأر في غرفة الاستقراء باستخدام 5٪ isoflurane في O 2، ثم تقدم 2٪ isoflurane في O 2 عن طريق العرف قناع، ورصد الحيوانات anesthetised أثناء إجراء. يتم استنشاق مواد التخدير بديل مشترك هالوثان أو الصوديوم داخل الصفاق بنتوباربيتال. الكيتامين، باعتبارها مستقبلات ن ميثيل مد اسبارتاتي (NMDA)، ينبغي تجنب منذ هذه المستقبلات هي مهمة في تطوير ألم الأعصاب.
- حلاقة الساق اليسرى الخلفية من الفئران. ثم، ضع الحيوان على حصيرة التسخين الحراري للتنظيم في 37 درجة مئوية وتطبيق التشحيم مرهم للعين للعيون.
- تعقيم منطقة حلق مع ثلاثة تطبيقات بديلة للايزوبروبيل 70٪ ومحلول اليود.
- مع الفئران ملقاة على صدره / الصدر، رفع الساق الخلفية اليسرى وعقد في موقف مع femor على 90 درجة في العمود الفقري تستخدم شريطا لاصقا على القدم.
- جعل شق في مواز الجلد، ولكن مم 3-4 تحت femor، وخالية من الجلد والعضلات المحيطة شق من خلال قطع النسيج الضام.
- باستخدام مقص حادة، من خلال قطع النسيج الضام بين السطحي الألوية والعضلة ذات الرأسينعضلات الفخذ.
- استخدام ضام إلى توسيع الفجوة بين عضلات اثنين، والسماح لتصور واضح للالعصب الوركي.
- باستخدام المنحني حادة ذات الرؤوس ملقط ومقص الصغرى، بلطف الحرة حوالي 10 ملم من العصب الوركي (الأقرب إلى انفراق ثلاثي الوركي) من النسيج الضام المحيطة بها.
- تحت المجهر ومصدر ضوء جيد، والتعادل 4 الحروف المركبة (الكروم 4.0 امعاء، وEthicon، الولايات المتحدة الأمريكية) مع عقدة مزدوجة، 1 ملم وبصرف النظر، الأقرب إلى انفراق ثلاثي من العصب الوركي. لكل ضمد، وتبدأ مع حلقة فضفاضة واحدة، ثم فهم طرفي بالقرب من حلقة وتشديد حتى الحلقة هو مجرد دافئ بالكاد وضمد لا ينزلق على طول العصب. لعقد حلقة في موقعها الصحيح، ووضع حلقة ثانية على رأس أول لاستكمال عقدة. أخيرا، قطع المغفلة من ضمد إلى حوالي 1MM. وينبغي أن انقباض في العصب يكون ضئيلا للغاية، وتوقفت على الفور ما اذا لوحظ نشل وجيزة، لمنع القبض على عشرةه تدفق الدم فوق القوس العصبية. خلال تشديد الحروف المركبة يؤدي إلى axotomy، وانشطار ذاتي (تشويه الذات)، وكلاهما غير مرغوب فيه من الآثار الجانبية التي تحول دون نجاح اختبار فرط الحساسية والألم.
- استخدام الخيوط الجراحية (Mersilk 5.0، Ethicon) لإغلاق طبقة العضلات والسلع الاساسية (Autoclip، 9 ملم) لربط الجلد. المقبل، واستخدام محلول اليود (Riodine) لتعقيم الجرح.
- مراقبة عن كثب فأر خلال فترة النقاهة التخدير، والسماح له لاسترداد في قفص منفصل مع الفراش ورقة مسطحة (وليس تربية الحيوانات معيار الفراش)، وذلك لمنع الحيوان فاقد الوعي الاختناق.
وينبغي قبل اعطاء اي بعد العملية المحققين تسكين النظر في حقيقة هذا قد تتداخل مع اختبار فرط الحساسية والألم. في الواقع، هناك أدلة على أن التطبيق المحلي للمخدر، يدوكائين، في وقت من الإصابة يمكن أن يغير وضع ألم الأعصاب، وتقلل من درجة من فرط التألم في الأسابيع السابقة 7. لمزيد من المناقشة حول هذا مatter رؤية الاستعراض بينيت وآخرون 8.
2. قياسات للسلوكيات الألم
- ينصح التعامل اليومي من الفئران لعدة أيام قبل البدء في التجربة من أجل تعويد الفئران إلى معالج بهم، والحد من التوتر والخطر من العض.
- قبل الاختبار السلوكية، والفئران يجب أن تعود على إجراء الاختبار والعلبة الحيوانية. يجب أن تبقى في بيئة الاختبار هادئة وتسيطر عليها بشكل جيد، مع درجة حرارة ثابتة ومستويات الرطوبة، ونفذت في وقت مماثل من يوم كل جلسة اختبار.
- يجب أن يتم تنفيذ اختبار فرط الحساسية والألم عدة مرات من قبل غرفة تجارة وصناعة (خط الأساس)، وعند نقاط زمنية مختلفة بعد غرفة التجارة والصناعة، على النحو المرغوب فيه.
3. الميكانيكية سحب عتبة
- في يوم الاختبار، والجرذان مكان في قفص شبكة اختبار طوابق مرتفعة 15-30 دقيقة قبل قياس عتبات انسحاب، مما يسمح للقفص الاستكشاف وgrooأنشطة مينغ لوقف والفئران لتصبح مريحة وثابتة.
- باستخدام ديناميكية أخمصي فون aesthesiometer فراي (أوغو باسيلي، إيطاليا)، وموقف وحدة اتصال ومشجعا مع خيوط مباشرة تحت سطح منتصف أخمصي من hindpaw، وتجنب شبكة معدنية، واضغط على مفتاح البداية. هذا يرفع من شعيرات لتحفيز ميكانيكيا السطح الأخمصي لhindpaw مع قوة متزايدة.
دليل فون الشعر فراي هي سلسلة من زيادة شعيرات قطر التي هي معايرة للحث على قوة معينة عندما يطبق على الجلد. يمكن استخدامها كبديل للديناميكية أخمصي الالكترونية aesthesiometer فراي فون لقياس عتبة انسحاب مخلب، كما هو موضح سابقا 4. وهناك أيضا العديد من الشركات المصنعة بديل فراي الالكترونية aesthesiometers فون (مثل المجلس الدولي والولايات المتحدة وSomedic، السويد).
- تسجيل عتبة انسحاب الميكانيكية من hindpa كلا المصابين ويصب بأذىوفاء سلطان، في ترتيب رباعية. وينطبق هذا الجهاز الضغط على مخلب وبناء على رد فعل انسحاب من نظام السجلات تلقائيا ويعرض أقصى قوة تطبيق (بالغرام). إذا كان هناك استجابة غامض يحدث (أي في حالة التمشي أو الاستمالة)، كرر التحفيز وتسجيل عتبة مرة أخرى. لعق أو يهز من hindpaw التحفيز التالية هي علامة على السلوك المرتبطة الألم.
- تكرار التنبيه الميكانيكي 3 مرات مع فاصل من حوالي 5 دقائق بين المنبهات، تسجيل العتبات، ثم حساب متوسط عتبات انسحاب مخلب.
4. الحرارية سحب الإختفاء
وينبغي أن تعدل شدة حرارة الأشعة تحت الحمراء (IR) وثيقة اختبار أخمصي قبل بدء التجربة. في مختبرنا، علينا أن نعدل كثافة الأشعة تحت الحمراء لإعطاء انسحاب مخلب متوسط الكمون من حوالي 10 ثانية في الفئران ساذجا، ونحن تعيين كمون وقف انتاج المواد الانشطارية في 20 ثانية لتجنب سد الأنسجةالعمر في حالة عدم إزالة مخلب.
- في يوم الاختبار، والجرذان مكان في اختبار قفص زجاجي طوابق 15-30 دقيقة قبل قياس كمون، مما يسمح للاستكشاف القفص والاستمالة لوقف الأنشطة والفئران لتصبح مريحة وثابتة.
- باستخدام أداة الحرارية تسكين أخمصي (أوغو باسيلي، إيطاليا)، وموقف مصدر الأشعة تحت الحمراء مباشرة تحت سطح منتصف أخمصي من hindpaw، واضغط على مفتاح البداية. هذا يكشف عن سطح أخمصي من hindpaw إلى شعاع من الحرارة الإشعاعية من خلال سطح زجاجي شفاف. وهناك أيضا الشركات المصنعة بديلة للصكوك تسكين أخمصي الحرارية (مثل المجلس الدولي والولايات المتحدة وStoelting، الولايات المتحدة الأمريكية).
- تسجيل كمون انسحاب من hindpaws كلا المصابين ويصب بأذى، في ترتيب رباعية. هذا الجهاز تلقائيا بتسجيل الوقت الذي يستغرقه (ثانية) من بداية التحفيز الحراري للانسحاب من مخلب من مصدر الحرارة. إذا كان هناك استجابة غامض يحدث (أي في حالة ambulaنشوئها أو الاستمالة)، كرر التحفيز وتسجيل كمون مرة أخرى. لعق أو يهز من hindpaw التحفيز التالية هي علامة على السلوك المرتبطة الألم.
- تكرار التنبيه الحرارة ما لا يقل عن 3 مرات مع فاصل من حوالي 5 دقائق بين المنبهات، سجل اختفاء، ثم حساب متوسط الاختفاء انسحاب مخلب.
4. ممثل النتائج
ويرد مثال على عتبة انسحاب الميكانيكية والحرارية كمون انسحاب في الكفوف المماثل (المصاب) والمقابل (يصب بأذى) من قبل فئران ويستار (خط الأساس) و. 2-12 أيام بعد غرفة التجارة والصناعة في 3A الشكل، والشكل 3B ويمكن من هذه الأرقام أن نرى أن غرفة تجارة وصناعة يؤدي إلى خفض كبير في كل من عتبات انسحاب الميكانيكية والاختفاء انسحاب الحراري للhindpaw المماثل، تشير إلى وجود فرط الألم الميكانيكية والحرارية، وكلاهما من ملامح آلام الأعصاب المزمنة .

الشكل 1. التخطيطي توضح المواقع من الحروف المركبة في غرفة تجارة وصناعة نموذج. هذا نموذج حيواني من آلام الأعصاب ويشمل وضع الحروف المركبة من أربعة الكروم، الأمعاء فضفاضة على العصب الوركي، عند مستوى منتصف الفخذ. أنه يؤدي إلى إصابة فقط جزء من afferents الذهاب الى فرط الألم في القدم واللاحقة للhindpaw.

الشكل 2. رسم تخطيطي لمنطقة hindpaw تستخدم لاختبار الألم. ويستخدم السطح منتصف أخمصي الخلفي فقط لقطاع الطرق، كما هو مبين من قبل الدائرة المنقطة الحمراء، لاختبار الألم. ومعصب هذا المجال في الغالب من قبل فروع محطة من العصب الوركي. وينبغي تجنب الكعب وقطاع الطرق نظرا لحساسية الجلد التفاضلية.
3.JPG "/>
فرط الألم الرقم 3. بعد انقباض مزمن في العصب الوركي في الفئران. بعد غرفة التجارة والصناعة، وهناك hindpaw خفض كبير في عتبة انسحاب مخلب للمحفزات الميكانيكية (A) ومخلب كمون انسحاب للمؤثرات الحرارية (B) في المصاب (المماثل) مقارنة hindpaw (المقابل) يصب بأذى (P <0.01 التدابير المتكررة 2 في اتجاه وأنوفا). تظهر البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة، ن = 7 فئران ويستار.