نماذج لغزو الخلايا السرطانية في ثلاثي الأبعاد المصفوفة خارج الخلية تعكس على نحو أفضل في الجسم الحي الوضع من المقايسات حركية ثنائية الأبعاد. ويمكن استخدام المقايسات غزو مصفوفة جنبا إلى جنب مع التصوير مبائر من الخلايا التي تحمل علامات fluorescently معلومات مفصلة عن أوضاع الغزو ومساهمات متميزة من كبار التالية مقابل الحصول على الخلايا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
النمذجة والتصوير 3 الأبعاد غزو الخلية الجماعية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ومن الخصائص المميزة للخباثة السرطان هو الغزو والانبثاث 1. في بعض أنواع السرطان (ه ز. دبقي 2) ، والغزو المحلية في الأنسجة السليمة المحيطة هي السبب الجذري للمرض والموت. لأنواع أخرى من السرطان (ه ز. الثدي والرئة ، الخ.) ، فإنه هو عملية الانبثاث ، والتي تحرك الخلايا السرطانية من الورم الرئيسي الشامل ، استعمار المواقع البعيدة وتساهم في نهاية المطاف إلى فشل الجهاز ، الذي يؤدي في النهاية إلى الإصابة بالأمراض و 3 وفيات. وقد قدر أن الغزو والانبثاث هي المسؤولة عن 90 ٪ من الوفيات الناجمة عن السرطان 4. نتيجة لذلك ، كان هناك اهتمام كبير في تحديد العمليات الجزيئية وسطاء البروتين حرجة من الغزو والانبثاث لأغراض التشخيص والعلاج وتحسين 5.
وثمة تحد للعلماء السرطان هو تطوير المقايسات الغزو الذي يشابه الوضع بما فيه الكفاية في الجسم الحيلتمكين دقة النمذجة المرض 6. ثنائي الأبعاد المقايسات حركية الخلية ليست سوى بالمعلومات عن جانب واحد من الغزو ولا تأخذ في الاعتبار إعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية البروتين (ECM) التي هي أيضا عنصرا حاسما. في الآونة الأخيرة ، وقد صقلت الأبحاث فهمنا لغزو الخلايا السرطانية وكشف ان الخلايا الفردية قد تحرك من جانب وسائط مستطيلة أو مستديرة 7. بالإضافة إلى ذلك ، كان هناك مزيد من التقدير لمساهمة الغزو الجماعي ، التي تغزو الخلايا في صحائف ، وفروع ومجموعات ، وخصوصا في الأورام المتباينة للغاية التي تحافظ على الخصائص الظهارية ، إلى انتشار مرض السرطان 8.
نقدم اتباع أسلوب دقيق 9 لدراسة مساهمات من البروتينات المرشحة لغزو الجماعي 10. ولا سيما عن طريق الهندسة حمامات منفصلة للتعبير عن خلايا البروتينات الفلورية مختلفة ، فمن الممكن أن تشريح جزيئيا الأنشطة وproteiنانوثانية المطلوبة في الخلايا مما يؤدي مقابل تلك المطلوبة في الخلايا التالية. استخدام رني يوفر أداة لتفكيك الجزيئية تجريبيا العمليات التي ينطوي عليها غزو الخلايا الفردية ، وكذلك في مواقع مختلفة من الغزو الجماعي. في هذا الإجراء ، هي خليط من الخلايا مطلي fluorescently التي تحمل علامات على الجزء السفلي من ادخال Transwell شغلها سابقا مع البروتين ECM Matrigel ، ثم سمح لغزو "صعودا" من خلال تصفية والى Matrigel. إعادة بناء مداخن صورة ض السلسلة ، التي حصلت عليها مبائر التصوير ، إلى ثلاثة الابعاد تتيح للتمثيلات تصور جماعي فروع الغازية وتحليل تمثيل الخلايا fluorescently ذات العلامات الرائدة في مقابل المواقف التالية.
البروتوكول
1. فيروسات توسيم الخلايا مع البروتينات الفلورية
- لوحة الخلايا التغليف فيروسات (مثل فينيكس) من الخلايا عند 0.25 س 6 10 لكل بئر من 6 جيدا طبق في مصل بقري جنيني 10 ٪ (FBS) / DMEM.
- Transfect خلايا الحمض النووي مع فيروسات 48 ساعة في وقت لاحق باستخدام الخلايا Effectene وفقا لتعليمات الصانعين.
- شطف الآبار مرتين مع 24 ساعة في وقت لاحق متوسطة ، ثم يضاف 1.5 مل من 10 ٪ FBS / DMEM لكل بئر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تقليديا المقايسات غزو Matrigel إعداد مع الخلايا يوضع فوقه طبقة من البروتين المصفوفة خارج الخلية مع جاذب كيميائي بفعل حركية وصوب من خلال مرشح في القاع. وسجل الغزو بوصفها وظيفة من عدد الخلايا يمكن أن تحسب على الجانب السفلي من التصفية. بالرغم من وجود فارق كبير من الناحية العملية مع "معكوس" مقايسة الغزو المذكورة أعلاه ، هناك معلومات أكثر بكثير عن عملية الغزو التي يمكن تحديدها من خلال وضع تصور لأنها تغزو خلايا تتحرك صعودا وخلال Matrigel. على سبيل المثال ، بالإضافة إلى كونه قا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
التمويل لهذا البحث من معهد أبحاث السرطان في المملكة المتحدة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم الكاشف | شركة | فهرس العدد | |
| DMEM (متوسطة Dulbecco في التعديل النسر) | GIBCO | 21969 | |
| المصل البقري الجنين | PAA | A15 - 101 | |
| البنسلين الستربتوميسين | GIBCO | 15140 | |
| L - 200 ملي الجلوتامين (100X) | GIBCO | 25050-032 | |
| بوروميسين | سيغما الدريخ | P8833 | |
| 0.05 ٪ التربسين EDTA | GIBCO | 25300 | |
| Polybrene | سيغما الدريخ | AL - 118 | |
| Lipofectamine الكاشف 2000 | Invitrogen | 11668019 | |
| 6.5mm Transwells ، 8.0 ميكرون حجم المسام | كورنينج | 3422 | |
| إكمال Matrigel | العلوم البيولوجية دينار بحريني | 354234 | |
| Calcein AM | Invitrogen | C1430 | |
| ريبونوكلياز | Qiagen | 19101 | |
| Propidium التأيد | سيغما الدريخ | P4864 | |
| مبائر microcope | لايكا | SP2MP |
المراجع
- Olson, M. F., Sahai, E. The actin cytoskeleton in cancer cell motility. Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).
- Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironm....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
