ويمكن استخدام اثنين من التقنيات لإنشاء هذا النموذج : حقن الخلايا السرطانية تعليق في الحائط الأعور أو زرع قطعة من ورم تحت الجلد على الأعور. هذا النموذج هو مفيد لدراسة التطور الطبيعي لسرطان القولون والمستقيم واختبار عوامل علاجية جديدة ضد سرطان القولون والمستقيم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الورم تحت الجلد التقليدية النموذج هو أقل من مثالية لدراسة سرطان القولون والمستقيم. نماذج الماوس مثلي من سرطان القولون والمستقيم ، والتي تتميز الخلايا السرطانية المتزايدة في مواقعها الطبيعية ، وتكرار الأمراض التي تصيب البشر مع الدقة العالية. ويمكن استخدام اثنين من التقنيات لإنشاء هذا النموذج. كلا تقنيات متشابهة وتتطلب تخدير الماوس والبطن عن التعرض للالأعور. أسلوب واحد ينطوي على حقن الخلايا السرطانية تعليق القولون الأعور في الحائط. first تزرع الخلايا السرطانية في الثقافة ، وعندما تحصد subconfluent وأعد تعليق خلية واحدة. يتم حقن كمية صغيرة من الخلايا ببطء لتجنب تسرب. تقنية أخرى تتضمن زرع قطعة من ورم تحت الجلد على الأعور. والموت الرحيم والفأر مع وجود ورم في السابق تحت الجلد والقولون والمستقيم هو إزالة الورم باستخدام تقنية معقمة. يتم تقسيم قطعة الورم إلى أجزاء صغيرة لزرعها لآخر الماوس. قبل الزرع ، معطوب طفيفة الأعوري الجدار لتسهيل تسلل خلية الورم. والوقت لتطوير أورام الكبد الأولية والانبثاث تختلف تبعا للتقنية ، خط الخلية ، وأنواع الماوس المستخدمة. هذا نموذج الفأر مثلي مفيد لدراسة تطور طبيعي لسرطان القولون والمستقيم واختبار وكلاء علاجية جديدة ضد سرطان القولون والمستقيم.
البروتوكول
أولا تحضير خلية
- تزرع خلايا سرطان القولون والمستقيم في الثقافة وحصادها عندما subconfluent.
- ويتم إعداد تعليق خلية واحدة في الفوسفات مخزنة المالحة ويحرص على الجليد.
II. ورم التحضير
- والموت الرحيم والفأر مع وجود ورم القولون والمستقيم في السابق تحت الجلد.
- إزالة ورم تحت الجلد باستخدام تقنية معقمة وتنقسم الى قطع 2-3 ملم
- وتحفظ القطع ورم في الفوسفات مخزنة المالحة على الجليد.
III. إعداد الماوس
ملاحظة : في مختبرنا استخدام استنشاق نحن isoflurane لتخدير الماوس ، بدلا من ذلك ، يمكن للمرء أن استخدام حقن المخدر لتحقيق التأثير نفسه
- ويتم تقييم عمق التخدير باستخدام قرصة أخمص قدميه. وينبغي أن يكون هناك أي انسحاب منعكس مع قرصة أخمص قدميه.
- يمكن إعطاء المضادات الحيوية عند هذه النقطة.
- يتوضع بشكل صحيح الماوس تخدير ، والذي كان يحلق في السابق.
- وهيأهم البطن بمحلول betadine.
- ورايات البطن وموقع الجراحة بطريقة عقيمة.
رابعا. البطن
- وقدم نيك صغير في الجلد
- وأدرك عضلات جدار البطن ورفعوا
- ودخلت في تجويف البطن ويتم استخدام شفرة واحدة من مقص لدفع محتويات داخل البطن بعيدا
- ويمتد الشق إلى 2-3 سم
خامسا التعرض للالأعور
- يتم التعرف على الأعور مع حقيبتها المنتهية المكفوفين وexteriorized
- غير معزولة عن بقية الأعور من الماوس باستخدام قبل قطع ، شاش معقم
- وتستخدم المياه المالحة الدافئة للحفاظ على رطوبة الأعور
سادسا. حقن الخلايا في جدار الأعوري
- ويستخدم 27 أو إبرة G أدق لحقن وحدة تخزين 50 ميكرولتر من الخلايا في جدار الأعوري
- تتم إزالة الإبرة
- ويتم تفتيش في موقع الحقن لضمان عدم تسرب
- يتم إرجاع الأعور إلى تجويف البطن
سابعا. زرع ورم على الأعور
ملاحظة : بالإضافة إلى حقن الخلايا في جدار الأعور ، وهو نهج بديل يتمثل في زرع ورم على الأعور
- يتم وضع الرقم 8 غرزة على الأعور باستخدام 6-0 أو 7-0 خياطة الحجم
- معطوب طفيفة الجدار الأعوري
- ثم ، يتم وضع قطعة ورم
- يرتبط بانخفاض غرزة
- يتم إرجاع الأعور إلى تجويف البطن
ثامنا. اختتام الماوس جدار البطن والاسترداد
- إغلاق جدار البطن باستخدام الماوس ثلاث غرز توقف باستخدام 3-0 أو 4-0 خياطة الحجم
- بدلا من ذلك ، يمكن للمرء استخدام غرزة بسيطة تشغيل
- يمكن أن تعطى المسكنات بعد الجراحة وبلعة السوائل في هذه النقطة
- ولا يسمح للماوس على التعافي من التخدير.
ملاحظة : مع التخدير استنشاق هذا يستغرق عادة 30 ثانية
تاسعا. النتائج -- الورم الرئيسي والانبثاث الكبد
الورم الرئيسي -- تظهر في الموقع (أ) والدليل على اتساع الأوعية الدموية مع (B) ؛ على تلطيخ H & E ، والأورام والغازية محليا (C)
الانبثاث الكبد -- أظهرت السابقين فيفو (D)
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
على الرغم من أن نماذج الماوس ورم تحت الجلد من السهل إنشاء ورصد ، فمن الواضح أن هذا النموذج لا يمكن نسخ الموقع الأصلي التشريحية لسرطان القولون والمستقيم. بسبب الاختلاف في المكروية ، وقد تبين أن خلايا سرطان القولون والمستقيم النامي تحت الجلد لتغيير النمط الظاهري ، وتقريبا دائما تفشل في التقدم وتنتشر 1،2. في الواقع ، يمكن للاستجابة الورم للعلاج تختلف بشكل كبير اعتمادا على ما إذا كان يتم زرع الخلايا السرطانية في خارج الرحم (تحت الجلد) مقابل 3 موقع مثلي. نماذج الماوس مثلي من سرطان الق...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
قسم الجراحة في جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو
ريمون شاهين ، MD
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أوساط ومكونات زراعة الخلايا | تختلف حسب الخط الخلوي المستخدم | ||
| المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (Phosphate Buffered Saline) | BioWhittaker | 17-512F | يُباع أيضاً من قبل عدد من الموردين الآخرين |
| أنابيب طرد مركزي سعة 15 mL، بولي بروبيلين | Corning | 430790 | |
| أطباق ذات 6 آبار مع غطاء | BD Biosciences | 353046 | |
| ملقط إيريس (Iris)، مستقيم، بأطراف مسننة | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | يُفضل توفر زوج من هذه الأدوات |
| مقص تشريح إيريس (Iris)، مستقيم، حاد | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| حامل إبر (عادي) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| حامل إبر (كاستروفيجو - Castroviejo) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | يجب تعقيم الأدوات بجهاز الأوتوكلاف بشكل دوري، ولكن يمكن أيضاً تعقيمها عن طريق النقع في Cidex |
| خيط جراحة 6-0 أو 7-0 | للأعور؛ مقدم من قسم الجراحة، UCSF | ||
| خيط جراحة 3-0 أو 4-0 | لجدار البطن؛ مقدم من قسم الجراحة، UCSF | ||
| جهاز تخدير / أيزوفلوران (Isoflurane) | J.A. Baulch and Associates | 3206 | يُباع أيضاً من قبل عدد من الموردين الآخرين |
| وسادة تدفئة، تستخدم لمرة واحدة، 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| شريط لاصق، برتقالي، 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | لتثبيت الفأر المخدر |
| ماكينة حلاقة Pro-Cord/Cordless Trimmer | Oster Professional Products | 78997-010 | لحلاقة فراء الفأر |
| بيتادين (Betadine) | Fisher Scientific | 19-027132 | يمكن شراؤه أيضاً من أي متجر للمستلزمات الطبية |
| شاش 2 x 2، ثلاثي الطبقات | Johnson & Johnson | 7635 | يمكن شراؤه أيضاً من أي متجر للمستلزمات الطبية |
| حقل معقم، حاجز، 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | يمكن شراؤه أيضاً من أي متجر للمستلزمات الطبية |
| مسحات قطنية، 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | يمكن شراؤها أيضاً من أي متجر للمستلزمات الطبية |
| حقنة، 10 cc، بطرف Luer lock | BD Biosciences | 309604 | |
| حقنة، 1 cc، توبيركولين، بطرف انزلاقي (slip tip) | BD Biosciences | 309602 | |
| إبرة 27 1/2 G | BD Biosciences | 305109 | |
| إبرة 30 G | BD Biosciences | 305106 |
المراجع
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans. Comp Med. 50, 16-26 (2000).
- Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil. Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).
- Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer. Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
