يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الفئران اللفائفي القولوني استئصال الأمعاء مع التحام الابتدائي

17.3K مشاهدة

DOI:

10.3791/52106

أكتوبر 29, 2014

في هذه المقالة

ملخص

يتم إجراء الاستئصال اللفائفي القولوني بشكل شائع في العديد من الأمراض البشرية ؛ ومع ذلك ، لا يعرف سوى القليل عن تأثير استئصال الأمعاء على الأمراض الجراحية. توفر هذه المقالة تعليمات حول تنفيذ الإجراء في الفئران بنجاح كبير ، مما يوفر وسيلة لدراسة آثار الاستئصال اللفائفي في نماذج المرض.

الملخص

غالبا ما تكون عمليات الاستئصال المعوي

مطلوبة لعلاج الأمراض التي تصيب الجهاز الهضمي ، مع مرض كرون وسرطان القولون مثالين شائعين. على الرغم من تكرار هذه الإجراءات ، لا تزال هناك فجوة معرفية كبيرة في وصف الآثار المتأصلة في استئصال الأمعاء على فسيولوجيا المضيف والفيزيولوجيا المرضية. تقدم هذه المقالة إرشادات مفصلة لاستئصال اللفائفي القولون مع مفاغرة أولية من طرف إلى طرف في الفئران ، بالإضافة إلى الجوانب الأساسية للرعاية المحيطة بالجراحة لتحقيق أقصى قدر من النجاح بعد الجراحة. عند اتباعه عن كثب ، ينتج عن هذا الإجراء معدل بقاء طويل الأجل بنسبة 95٪ ، وعدم وجود فشل في النمو ، ويقلل من مضاعفات ما بعد الجراحة لانسداد الأمعاء وتسرب مفاغرة. تشكل التحديات التقنية لإجراء الإجراء في الفئران عائقا أمام استخدامه على نطاق واسع في البحث. يمكن اكتساب المهارات الموضحة في هذه المقالة دون خبرة جراحية سابقة. بمجرد إتقانها ، سيوفر إجراء استئصال اللفائفي القومي في الفئران أداة قابلة للتكرار لدراسة آثار استئصال الأمعاء في نماذج الأمراض البشرية.

المقدمة

الاستئصال اللفائفي (ICR) هو إجراء شائع يتم إجراؤه في كل من الحالات الطارئة والاختيارية لمجموعة متنوعة من الأمراض. داء كرون وسرطان القولون هما أكثر المؤشرين شيوعا للإصابة ب ICR. في كلا المرضين ، يمثل تكرار الأمعاء في موقع الجراحة مشكلة سريرية كبيرة. تظل معدلات التكرار الموضعية لسرطان القولون مشكلة حتى مع عمليات الاستئصال الأكثر عدوانية1. بعد ICR في مرض كرون ، يتكرر المرض بشكل متكرر (بنسبة تصل إلى 80٪) في الدقاق النهائي الجديد في عام واحد بعد الجراحة2. بالنظر إلى تأثير هذين المرضين وتكرارهما بعد الجراحة ، من المهم فهم العوامل المعوية المحلية بعد ICR ، والتي قد يكون لها تأثيرات جوهرية على التاريخ الطبيعي لهذه الأمراض. علاوة على ذلك ، من المهم أيضا التفكير في الشفاء المفاغرة بعد ICR. في الفترة المبكرة بعد الجراحة ، يمكن أن يكون للتسربات المفاغرة عواقب وخيمة على المرضى مما يؤدي إلى تكرار العمليات الجراحية ، وإنشاء الفغرة ، والمراضة الكبيرة ، وحتى الوفيات3. على الرغم من أهمية هذا الموضوع ، إلا أن فهمنا الحالي للشفاء المفاغرة لا يزال في مهده كموضوع بحث. تعد النماذج الحيوانية ل ICR ، وخاصة الفئران ، منصة ممتازة لدراسة الشفاء المعوي والمفاغرة بعد الجراحة.

تم تطوير نموذج فأر من ICR في البداية بواسطة Helmrath et al. لاستخدامه كنموذج لمتلازمة الأمعاءالقصيرة 4. جرب المؤلفون أفواج غذائية مختلفة وأحجام خياطة لتحسين بقاء بعد ICR. وخلصوا إلى أن التغذية بنظام غذائي سائل في الفترة المحيطة بالجراحة واستخدام خيوط خيوط أحادية الشعيرات 9-0 أدت إلى بقاء مثالي بعد الجراحة بنسبة 88٪. منذ هذا النشر الأولي ، تم استخدام ICR في الفئران التي تزيل 50٪ من الأمعاء الدقيقة في العديد من الدراسات لاستكشاف ديناميكيات استئصال الأمعاء الدقيقة الضخمة واستجابة النمو التكيفية في محاولة لتطوير علاجات جديدة لمتلازمة الأمعاء القصيرة5،6.

استخدم التطبيق الأول لنموذج الفأر ICR لمرض كرون نموذج الفأر IL-10 - / - ، الذي يتطور تلقائيا إلى التهاب القولون7. وجد المؤلفون أنه بعد ICR ، طورت هذه التهابا في الدقاق النهائي الجديد مشابها لتلك التي شوهدت في مرضى مرض كرون بعد الجراحة ، وأن هذا الالتهاب كان يعتمد على وجود البكتيريا7. في الآونة الأخيرة ، تم استخدام هذا النموذج لاستكشاف التغيرات البكتيرية التي يسببها ICR. في مرض كرون ، هناك خلل متذلل مرتبط بانخفاض نسبي في البكتيريا المعروفة بخصائص مضادة للالتهابات وزيادات في الأنواع الغازية من البكتيريا8،9. ينطبق الارتباط على حالات تكرار ما بعد الجراحة10. سعت دراستان إلى تحديد التغيرات الميكروبية الناتجة عن ICR. استخدم الأول الفئران الفارغة IL-10 ، وأجرى الرحلان الكهربائي للهلام لمقارنة التشابه البكتيري بين الأمعاء الدقيقة والقولون بعد ICR11. أظهرت هذه الدراسة أن مجموعات البكتيريا أصبحت متشابهة في الأمعاء الدقيقة والقولون بعد ICR. استخدمت دراسة لاحقة الفئران من النوع البري و 16s pyrosequencing لتصنيف النشوء والتطور للأنواع البكتيرية بعد الجراحة. أظهرت هذه الدراسة تحولا ملحوظا في الأنواع البكتيرية الناتجة عن الجراحة وحدها مع هيمنة أنواع المطثية بالإضافة إلى زيادة في البكتيريا البروتينية. أكدت النتائج أيضا نتائج الدراسة السابقة مع مجموعات مماثلة وجدت في الأمعاء الدقيقة والقولون بعدICR 12.

ICR هو إجراء شائع للمرضى الذين يعانون من سرطان القولون يشمل الأعور والقولون الصاعد ، وأصبح من المسلم به بشكل متزايد أن استجابة المضيف للجراحة تساهم على الأرجح في تكرار الورم الموضعي والبعيد13. على الرغم من هذه الملاحظة ، لم يتم استخدام نماذج ICR لدراسة سرطان القولون والمستقيم وتكرار ما بعد الجراحة. سيكون فهم كل من التغيرات المناعية الجهازية والمحلية الناتجة عن ICR مهما في التحقيق في العلاجات المستقبلية. تشمل المسارات المحتملة المشاركة في تكرار الإصابة بالسرطان بعد ICR تنظيم عوامل النمو ، والتي قد تنقذ الخلايا من موت الخلايا المبرمج وتحفز الانتشار ، وتعطيل الورم الميكانيكي مع تساقط الخلايا ، وفقدان المراقبة المناعية من خلال تثبيط المناعة بعد الجراحة13،14.

نماذج الفئران من ICR لديها القدرة على أن تكون أداة قوية للتحقيق في متلازمة الأمعاء القصيرة ومرض كرون وسرطان القولون. قد يقدمون أيضا دروسا حول كيفية منع المضاعفات المفاغرة المبكرة بعد الجراحة من خلال تحديد المسارات الخلوية والكيميائية الحيوية المشاركة في شفاء مفاغرة المرض الذي تم إنشاؤه حديثا. أحد العقبات الرئيسية في استخدام نموذج ICR الفئران هو الصعوبة الفنية. يتطلب مفاغرة الأمعاء استخدام 8-0 أو خياطة 9-0 ، مجهر تشغيلي ، وتدريب على تقنيات الجراحة المجهرية. الهدف من هذه المقالة هو تقديم إرشادات واضحة حول كيفية إجراء ICR في الفئران بهدف استخدام هذا الإجراء في نماذج المرض.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وتمت الموافقة على البروتوكولات استخدام الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام العلوم الصحية في جامعة ألبرتا.

1. إعداد الآلات، الحيوانات والإعداد المنطوق

  1. نقل الحيوانات إلى جديد، نظيف غائبة قفص من جميع المواد الغذائية الصلبة 24 ساعة قبل الإجراء. قد تكون لديهم حرية الوصول إلى المياه، والنظام الغذائي السائل ليب الإعلانية حتى وقت الإجراء.
  2. الأوتوكلاف جميع الأدوات اللازمة لإجراء العملية. تنظيف سطح التشغيل ومخروط الأنف مخدر مع الايثانول 70٪.
  3. إعداد سطح التشغيل مع مجهر التشغيل، آلة التخدير واللوازم بطريقة غير مريحة للجراح التشغيل. وينبغي أن يسمح المرفقين الجراح للراحة مريح على طاولة العمليات، مع اليدين والذراعين دون عائق من قبل الأجهزة. يجب وضع الصكوك، والخيوط الجراحية، ومسحات القطن، وحقنة 10 مل في موقع يسمح بسهولة أثناء العملية.
  4. نصبمصابيح الحرارة العلوية لتوفير الدفء سواء للحيوان أثناء الإجراء والضوء لسطح التشغيل.
  5. ملء أنبوب مخروطي 50 مل مع 0.9٪ محلول ملحي، وأنبوب 1.5 مل مع الفازلين ومكان بالقرب من سطح التشغيل.
    ملاحظة: تعقيم جميع الأدوات الجراحية. لأنه مقطوع الأمعاء، الإجراء في حد ذاته ليس العقيمة. يعتبر نظيفة الملوثة. اتخاذ التدابير اللازمة لتجنب إدخال مصادر خارجية للعدوى.

2. استئصال اللفائفي القولوني مع التحام

  1. تحريض التخدير عن طريق إعطاء 4٪ الأيزوفلورين مع معدل تدفق الأوكسجين من 2 لتر / دقيقة عن طريق مخروط الأنف من المرذاذ الأيزوفلورين حتى يبطئ الحيوانات معدل التنفس إلى ما يقرب من 30-40 الأنفاس / دقيقة. ممارسة الضغط المعتدل في القدم الخلفية من الماوس لضمان عدم وجود استجابة الألم قبل البدء في الإجراء. عند هذه النقطة، رفض الأيزوفلورين إلى 2٪، وتدفق الأكسجين إلى 0.5 لتر / دقيقة. بشكل متقطعتحقق استجابة الألم أثناء العملية وضبط معدل تدفق الأيزوفلورين وفقا لذلك.
  2. تطبيق الفازلين على العينين لمنع جفاف أثناء الجراحة، ولشل حركة الماوس في موقف ضعيف مع أطرافه المضمون باستخدام الشريط الشفاف.
  3. تنظيف البطن بمحلول povodine / اليود، وتغيير في قفازات معقمة جديدة.
  4. جعل شق الجلد 1.5 سم في خط الوسط العلوي من البطن باستخدام مقص تشريح نقطة حادة لفضح اللفافة والغشاء البريتوني. فتح طبقة فافي / البريتوني بطريقة مماثلة خلال ألبا الخط لكشف محتويات البريتوني.
  5. وعلى النقيض من البشر، وعادة ما وجد الأعور الماوس في الربع العلوي الأيسر من البطن. وبمجرد تحديدها، فهم بلطف الأعور مع ملقط وتسليمها من خلال شق. استخدام قطعة قطن مبللة لمروحة من حوالي 3 سم من محطة الدقاق تمتد من الأعور على شاش معقم رايات على السطح البطني (الشكل 1A).ضمان أن يظل الأمعاء تتعرض رطبة مع 0.9٪ المالحة خلال مجمل العملية.
  6. تحديد الشريان اللفائفية المتفرعة من الشريان المساريقي العلوي على طول القولون (الشكل 1A) باستخدام مجهر التشغيل. تشريح الأنسجة من اوعائي المجاورة للشريان اللفائفية، وتطويق الشريان ligate بالتعادل 5-0 الحرير. المقبل، وتحديد وصول الدم الإقليمي لمحطة الدقاق واختيار نقطة transection 1.5-2 سم الأقرب إلى تقاطع اللفائفية. Ligate فروع هذا القسم من الدقاق على النحو الوارد أعلاه. تقسم الشرايين الصغيرة مع مقص تشريح.
  7. تقسيم الأجزاء الدماغية من اللفائفي والقولون ضمان عدم وصول الدم الكافي للانتهاء مقطوع (الشكل 1B). غالبا ما يكون من المفيد أن يستلوق؛ يمزج بالملوق الدقاق بتقسيمه بزاوية 30 درجة لزيادة قطر التجويف بحيث يتوافق بشكل وثيق القولون. مرة واحدة تمت إزالة جزء من الأمعاء اللفائفية، محاذاةيتم محاذاة نهايات مقطوع من اللفائفي والقولون على الشاش، وضمان حدود كل المساريقي.
  8. بناء مفاغرة عن طريق تقريب نهاية مقطوع من الدقاق إلى نهاية مقطوع من القولون باستخدام توقف 8-0 خيوط البولي بروبلين (الشكل 1C). يتم وضع غرزة الأول على الحدود المساريقي، مع الغرز اللاحقة وضعت كل 0.5 مم حتى مفاغرة اللفائفي القولوني هو ماء. عند تمرير إبرة خياطة من خلال الدقاق والقولون، تأكد من أن قطع الحافة لا تدحرجت، ولدغ إبرة هم 0.5 ملم من قطع حواف الأمعاء. وهناك مفاغرة نموذجية يتطلب 14 إلى 16 الغرز توقف. اختبار سلامة والمباح من مفاغرة عند الانتهاء من قبل المتداول الداني إلى القاصي مسحة القطن على الدقاق لإجبار محتويات من خلال مفاغرة. يجب أن محتويات الأمعاء الصغيرة تمر بحرية في القولون دون تسرب توصيلي.
  9. شطف الأمعاء يتعرض مع 3-4 مل من المياه المالحة 0.9٪ من حقنة 10 ملليغسل البراز من سطح الأمعاء، وتقديم الأمعاء مرة أخرى في التجويف البريتوني. باستخدام 2 مل من 0.9٪ المالحة مسح التجويف البريتوني، ومن ثم استنزاف هذا السائل من خلال تطبيق ضغط لطيف على جدار البطن أفقيا.
  10. إغلاق شق مع 3-0 خياطة الحرير التوالي، ووقف تدفق الأيزوفلورين. إدارة 0.1 ملغ / كغ من الأفيون طويل المفعول -buprenorphine- تحت الجلد للسيطرة على الألم بعد العمليات الجراحية.
  11. مراقبة الحيوانات تحت مصباح الحرارة حتى أنهم المحمول ثم نقلها إلى قفص تحسنت باستمرار.

العناية والمراقبة 3. مرحلة ما بعد المنطوق

  1. مراقبة الحيوانات في قفص تحسنت باستمرار بحثا عن علامات الضيق للفترة المتبقية من اليوم. نقل الحيوانات إلى مرفق رعاية الحيوان في قفص معقم جديد مع الوصول إلى النظام الغذائي السائل وعفوي المياه. ويمكن إيواء الحيوانات في مجموعات من 3-4.
  2. إجراء فحص على الحيوانات بعد العملية في صباح اليوم التالي،ضمان لا تظهر حيوانات في محنة. تغذية حمية سائلة الوحيد. إذا كانت تبدو غير مريحة (أي الموقف منحنية أو الحد الأدنى من النشاط) إدارة جرعة إضافية من البوبرينورفين تحت الجلد. اطمئنان على الحيوانات مرة أخرى في فترة ما بعد الظهر في يوم 1 بعد العمليات الجراحية.
  3. في صباح يوم 2 بعد العملية يجب أن تظهر الحيوانات تعافى تماما. الأدلة على استهلاك الأغذية وstooling دلائل إيجابية على الانتعاش. الآن، واستئناف اتباع نظام غذائي طعام صلبة للحيوانات.
    ملاحظة: تشمل علامات الضائقة الموقف منحنية، قلة النظافة، والحد الأدنى من النشاط. إذا علامات الضائقة بارزة يجب أن يتم التخلص من الحيوانات.
  4. الموت ببطء الحيوانات عن طريق إحداث التخدير العميق مع 4٪ الأيزوفلورين بمعدل تدفق O 2 من 2 لتر / دقيقة حتى الحيوانات لا تستجيب لضغط القدم. أداء خلع عنق الرحم، ومراعاة لعلامات euthanization السليم.
  5. المبادئ التوجيهية تختلف، لذلك الرجوع إلى توصيات المؤسسات بشأن مؤشراتلوالأساليب المناسبة لeuthanization في الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

معدلات الوفيات وتغير الوزن بعد العملية.
معدلات وفيات التالية النواب في 129S1 الفئران النوع البري عموما ~ 5٪. السبب الأكثر شيوعا للأخلاق هو انسداد الأمعاء في مفاغرة. وتشمل الأسباب الأخرى للوفيات تسرب تفاغري وفتق داخلي مما يؤدي إلى انسداد الأمعاء.

ويمكن رؤية فقدان الوزن تصل إلى 14 أيام بعد العملية، ولكن عموما غير مهم. الفئران تميل إلى استعادة كامل الوزن قبل العملية من قبل بعد الجراحة يوم 28 (ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وICR الفئران هو نموذج القوية التي يمكن أن تستخدم لدراسة آثار عملية جراحية في أمراض الأمعاء. توضح هذه المقالة طريقة لأداء مجلس النواب في الفئران مع نسبة نجاح 95٪ وأي مشاكل مع فشل النمو كما يتجلى في أوزان ثابتة تصل إلى 28 يوما بعد العملية. وتشمل أهم التحديات لنجاح ICR تجنب العوائق الأمعاء في مفاغرة والتسريبات المفاغرة.

وتهدف العناصر الفنية لعملية جراحية لمنع انسداد في تعظيم قطر التجويف في مفاغرة. استلواق؛ مزج بالمل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه

شكر وتقدير

نود أن نعرب عن تقديرنا لمساهمات التمويل للصندوق الكندي للأبحاث الجراحية ، وصندوق المساعدة البحثية للموظفين المدنيين في إدمونتون ، واتحاد ألبرتا لمرض التهاب الأمعاء من خلال منحة من Alberta Innovates

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
LD101 حمية القوارض السائلةtestdiet.com
0.9٪ كلوريد الصوديومباكسترFKE1324جودة الحقن الملحية
مجهر التشغيلZiess
Isoflurane مبخر مخدرهارفارد جهاز هارفارد34-0483
IsofluraneAbbott & nbsp ؛05260-05
صفيحةلتشغيل سطح
مسحات
حامل إبرة Micro Castroviejo ، أدوات الدقة العالمية المنحنية503377
مقص Castroviejo مستقيمالدقة العالمية555530S
مقصأدوات الدقة العالمية15922
ملقط الضمادات × 2أدوات الدقة العالمية500363
5-0 خيوط حريرية مقطوعة مسبقاEthiconA182Hلربط السفينة
8-0 Prolene على إبرة BV130-5Ethicon8732Hللمفاغرة
3-0 حرير على إبرة FS-2Ethicon8665Gلإغلاق جدار البطن
فازلينفازلين
10 مل حقنةBD biosciences بوفيدون
اليود 7.5٪ مقشر جراحيbetadine.com< / a>
مصابيح
بوبرينورفين 0.3 مجم / ملريكيت بينكيزر للرعاية الصحية المحدودة  PL36699/0006
زجاجية القطن أدوات تشريح حرارية

المراجع

  1. Hallet, J., Zih, F. S., Lemke, M., Milot, L., Smith, A. J., Wong, C. S. Neo-adjuvant chemoradiotherapy and multivisceral resection to optimize R0 resection of locally recurrent adherent colon cancer. European Journal of Surgical Oncology. 40 (6), (2014).
  2. Rutgeerts, P., Geboes, K., Vantrappen, G. Natural history of recurrent Crohn's disease at the ileocolonic anastomosis after curative surgery. Gut. 25 (6), 665-672 (1984).
  3. Davis, D., Rivadeneira, D. Complications of colorectal anastomoses: leaks, strictures, and bleeding. The Surgical clinics of North America. 93 (1), 61-87 (2013).
  4. Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse. Journal of the American College of Surgeons. 183 (5), 441-449 (1996).
  5. Dekaney, C. M., Fong, J. J., Rigby, R. J., Lund, P. K., Henning, S. J., Helmrath, M. A. Expansion of intestinal stem cells associated with long-term adaptation following ileocecal resection in mice. American journal of physiology. Gastrointestinal and liver physiology. 293 (5), (2007).
  6. Speck, K. E., De Cruz, P., et al. Inflammation enhances resection-induced intestinal adaptive growth in IL-10 null mice. The Journal of surgical research. 168 (1), 62-69 (2011).
  7. Rigby, R. J., Hunt, M. R., et al. A new animal model of postsurgical bowel inflammation and fibrosis: the effect of commensal microflora. Gut. 58 (8), 1104-1112 (2009).
  8. Kostic, A. D., Xavier, R. J., Gevers, D. The Microbiome in Inflammatory Bowel Disease: Current Status and the Future Ahead. Gastroenterology. , 1-11 (2014).
  9. Gevers, D., Kugathasan, S., et al. The Treatment-Naive Microbiome in New-Onset Crohn's Disease. Cell host & microbe. 15 (3), 382-392 (2014).
  10. Ahmed, T., Rieder, F., Fiocchi, C., Achkar, J. P. Pathogenesis of postoperative recurrence in Crohn's disease. Gut. 60 (4), 553-562 (2011).
  11. Borowiec, A., Sydora, B., et al. Small bowel fibrosis and systemic inflammatory response after ileocolonic anastomosis in IL-10 null mice. Journal of Surgical Research. 178 (1), 147-154 (2012).
  12. Devine, A. A., Gonzalez, A., et al. Impact of Ileocecal Resection and Concomitant Antibiotics on the Microbiome of the Murine Jejunum and Colon. 8 (8), (2013).
  13. Bij, G. J., Oosterling, S. J., Beelen, R. H. J., Meijer, S., Coffey, J. C., van Egmond, M. The perioperative period is an underutilized window of therapeutic opportunity in patients with colorectal cancer. Annals of surgery. 249 (5), (2009).
  14. Scott, A. D., Uff, C., Phillips, R. K. Suppression of macrophage function by suture materials and anastomotic recurrence of Crohn's disease. The British journal of surgery. 80 (3), (1993).
  15. Kiernan, J. A. Intestinal anastomosis in the rat facilitated by a rapidly digested internal splint and indigestible but absorbable sutures. Journal of Surgical Research. 45, 427-431 (1988).
  16. Andersen, T. L., et al. Action of matrix metalloproteinases at restricted sites in colon anastomosis repair: an immunohistochemical and biochemical study. Surgery. 140 (1), 72-82 (2006).
  17. Thompson, S. K., Chang, E. Y., Jobe, B. A. Clinical review: Healing in gastrointestinal anastomoses, Part I. Microsurgery. 26 (3), 131-136 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم