تم تسخير الطلب على الإلكترون العكسي المتعامد بيولوجيا Diels-Alder cycloadd لإنشاء استراتيجية تصوير PET فعالة ومعيرية مستهدفة مسبقا للسرطان. في هذا البروتوكول ، يتم وصف خطوات هذه المنهجية في سياق نظام نموذجي يستخدم الجسم المضاد المستهدف لسرطان القولون والمستقيم huA33 و 64Cu-Radioligand المسمى Cu.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تسخير الطلب Bioorthogonal معكوس الكترون ديلز-ألدر الإضافة الحلقية لPretargeted PET التصوير
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نظرا لتقاربها الرائع وخصوصيتها ، أصبحت الأجسام المضادة ناقلات واعدة للغاية لتوصيل النظائر المشعة إلى الخلايا السرطانية لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني. ومع ذلك ، فإن ضرورة وضع العلامات على الأجسام المضادة بالنويدات المشعة ذات عمر النصف المادي الطويل غالبا ما تؤدي إلى ارتفاع معدلات جرعة الإشعاع في الخلفية للأنسجة غير المستهدفة. من أجل التحايل على هذه المشكلة ، استخدمنا استراتيجية تصوير PET مستهدفة مسبقا بناء على تفاعل الإضافة الدورية Diels-Alder للطلب العكسي للإلكترون. تفصل المنهجية الجسم المضاد عن النشاط الإشعاعي وبالتالي تستغل الخصائص الإيجابية للأجسام المضادة ، مع تجنب عيوبها الدوائية. يتكون النظام من أربع خطوات: (1) حقن مترافق mAb-trans-cyclooctene (TCO). (2) فترة زمنية للتوطين يتراكم خلالها الجسم المضاد في الورم ويتلاشى من الدم ؛ (3) حقن التيترازين المليء بالإشعاع ؛ و (4) ربط النقر في الجسم الحي للمكونات متبوعا بإزالة الترابط الإشعاعي الزائد. في المثال المقدم في العمل المطروح ، تم استخدام 64Cu-NOTA radioligand الإشعاعي والجسم المضاد المتوافق مع البشر عبر السيكلوكتين (huA33) بنجاح لتحديد أورام سرطان القولون والمستقيم SW1222 مع تباين عال من الورم إلى الخلفية. علاوة على ذلك ، تنتج منهجية الاستهداف المسبق صورا عالية الجودة بجزء بسيط فقط من جرعة الإشعاع للأنسجة غير المستهدفة التي تم إنشاؤها بواسطة المتقارنات المناعية المشعة المصنفة مباشرة ب 64Cu أو 89Zr. في النهاية ، تعد نمطية هذا البروتوكول واحدة من أعظم أصوله ، حيث يمكن إلحاق الجزء عبر السيكلوكتين بأي جسم مضاد غير داخلي ، ويمكن ربط التيترازين بمجموعة متنوعة من النظائر المشعة.
المقدمة
على مدى السنوات الثلاثين الماضية، أصبح التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) أداة لا غنى عنها السريرية في تشخيص وإدارة من السرطان. لطالما اعتبرت الأجسام المضادة ناقلات واعدة لتسليم النظائر المشعة الباعثة للبوزيترون لأورام بسبب تقارب رائعة وخصوصية لالمؤشرات الحيوية للسرطان. 1،2 ومع ذلك، فإن بطيئة نسبيا الدوائية في الجسم الحي من الأجسام المضادة ولايات استخدام النظائر المشعة مع عدة أيام المادية نصف حياة. وهذا يمكن الجمع تسفر الجرعات الإشعاعية العالية إلى الأجهزة غير المستهدفة من المرضى، وهي المضاعفات المهمة التي هي ذات الأهمية السريرية منذ يتم حقن radioimmunoconjugates عن طريق الوريد، وبالتالي - على عكس جز....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
الأخلاق بيان: تم تنفيذ كافة من التجارب على الحيوانات في الجسم الحي وصفها وفقا لبروتوكول المعتمدة وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية للميموريال سلون كيترينج للسرطان مركز المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC).
1. توليف TZ-BN-NOTA
- في وعاء التفاعل صغيرة، ويحل 7 ملغ NH 2 -Bn-NOTA (1.25 × 10 -2 ملمول) في 600 ميكرولتر NaHCO 3 عازلة (0.1 M، ودرجة الحموضة 8.1). تحقق من الرقم الهيدروجيني للمحلول. إذا لزم الأمر، وضب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الخطوات الثلاث الأولى من التجربة - تركيب TZ-BN-NOTA، والاقتران من TCO لhuA33، وradiolabeling من TZ-BN-NOTA بناء من (أرقام 3 و 4) - هي موثوق بها للغاية. في حالة الإجراء أعلاه، تم تصنيعه في بناء TZ-BN-NOTA في ارتفاع العائد والنقاء. تم تعديل الأجسام المضادة huA33 مع 4.2 ± 0.6 TCO / ماب، وكان TZ-BN-NOTA رديولبلد مع 64 النحاس لتسفر عن جين مشع النقي في> 99٪ نقاء الكيمياء الإشعاعية،> 85٪ لتصحيح تسوس الغلة، ونشاط محدد من ~ 6.7 من mbq / نا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
والميزة الرئيسية لهذه الاستراتيجية التصوير PET pretargeted هو أنه قادر على ترسيم الأورام مع الهدف إلى خلفية تباين الصورة في جزء فقط من الجرعة إشعاع الخلفية التي تنتجها الأجسام المضادة المسمى مباشرة. على سبيل المثال، في نظام التصوير سرطان القولون والمستقيم وصفها هنا، تم توظيف البيانات من التجارب biodistribution حادة لإجراء عمليات حسابية قياس الجرعات للاستراتيجية pretargeting مقرها النحاس-64 جنبا إلى جنب مع وصفت مباشرة-64 النحاس وNOTA-huA33 و 89 عنصر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون البروفيسور رالف ويسلدر والدكتور بات زانزونيكو والدكتور ناجافاراكيشور بيلرسيتي على المحادثات المفيدة والمعاهد الوطنية للصحة للتمويل (BMZ: 1K99CA178205-01A1)
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| متجر Tetrazine NHS Ester | Sigma-Aldrich | 764701 | عند -80 درجة ؛ C |
| Trans-cyclooctene NHS Ester | Sigma-Aldrich | 764523 | Store عند -80 درجة ؛ C |
| p-NH2-BN-NOTA | Macrocyclics | B-601 | Store at -80 & deg; ج |
المراجع
- Wu, A. M. Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET. Journal of Nuclear Medicine. 50, 2-5 (2009).
- Zeglis, B. M., Lewis, J. S. A practical guide to the construction of radiometallated bioconjugates for positron emission to....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
