مقالة منهجية

واللونية الفحص أن يقيس على وجه التحديد آخر باء granzyme متعلق ب التحلل البروتيني: التحلل من بوك علاء علاء-ASP-S-BZL

DOI:

10.3791/52419

⸱

نوفمبر 28, 2014

 ,  , 
1Cancer Immunology Program, Peter MacCallum Cancer Centre

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نصف مقايسة لونية بسيطة وكمية تقيس على وجه التحديد النشاط المحلل للبروتين للإنسان أو الفأر أو الفئران Granzyme B (GzmB). يمكن تكييف هذا البروتوكول بسهولة لتحديد نشاط البروتياز للبروتياز الحبيبي السيرين الآخر عن طريق التحلل المائي لركائز الببتيد الاصطناعية الأخرى بتسلسل التعرف المناسب.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتوسط البروتياز السيري Granzyme B (GzmB) في موت الخلايا المبرمج للخلية المستهدفة عند إطلاقه بواسطة الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا (CTL) أو الخلايا القاتلة الطبيعية (NK). GzmB هو أكثر أنواع الجرانزيم دراسة في البشر والفئران ، وبالتالي ، يحتاج الباحثون إلى أدوات محددة وموثوقة لدراسة وظيفته ودوره في الفيزيولوجيا المرضية. هذا يتطلب بشكل خاص فحوصات لا تتعرف على البروتياز مثل الكاسباسات أو الجرانزيم الأخرى المرتبطة هيكليا أو وظيفيا. هنا ، نطبق تفضيل GzmB للانقسام بعد بقايا حمض الأسبارتيك في مقايسة لونية باستخدام الببتيد ثيوستر Boc-Ala-Ala-Asp-S-Bzl. GzmB هو بروتياز السيرين الوحيد القادر على شق هذه الركيزة. يتم شق الركيزة بكفاءة مماثلة بواسطة الإنسان والفأر والجرذ GzmB ، وهي خاصية لا تشترك فيها ركائز الببتيد الأخرى المتاحة تجاريا ، حتى بعض التي يتم الإعلان عنها على أنها مناسبة لهذا الغرض. يتم توضيح هذا البروتوكول باستخدام المحللات غير المجزأة من خلايا NK المنشطة أو CTL وهو مناسب أيضا للبروتياز المؤتلف المتولد في مجموعة متنوعة من الأنظمة بدائية النواة وحقيقية النواة ، بشرط استخدام الضوابط الصحيحة. هذا الاختبار هو طريقة محددة للغاية للتأكد من النشاط المحتمل المؤيد لموت الخلايا المبرمج للجزيئات السامة للخلايا في الخلايا الليمفاوية للثدييات ، ونظيراتها المؤتلفة التي يتم التعبير عنها من خلال مجموعة متنوعة من المنهجيات.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Granzymes هي عائلة من البروتياز سيرين وجدت في الجسيمات الحالة إفرازية من القاتلة الطبيعية (NK) الخلايا والخلايا الليمفاوية التائية السامة (CTL) 1. وتوجد خمسة granzymes مختلفة في البشر (A، B، H، K وM)، وعشرة في الفئران (A - G، K، M و N) 2،3. Granzyme ألف وباء granzyme (GzmA، GzmB) هي الأكثر وفرة وتم التحقيق فيها على نطاق واسع في الإعداد البشري والقوارض.

وظيفة كلاسيكية من GzmB هو استحثاث موت الخلايا المبرمج في الخلايا المستهدفة تنفيذها بالتزامن مع البروتين perforin تشكيل المسام، مما يسمح للgranzyme للوصول إلى الخلية المستهدفة العصارة الخلوية (4). وعلى الرغم من GzmB التعبير وجدت بشكل لا لبس فيه في الخلايا الليمفاوية السامة للخلايا، والدراسات الأخيرة تم معالجة مجموعة متنوعة من أنواع أخرى خلية، معربا عن GzmB، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على الخلايا الكيراتينية 5، قعدات 6، 7 الخلايا البدينة، الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل 8، والخلايا B 9، 10.وفي هذا السياق، تم الكشف عن وظائف GzmB غير أفكارك تتراوح من المشاركة في عمليات التهابات، وإعادة عرض الأنسجة وخصائص immunoregulatory أخرى 11-14.

وبالنظر إلى أن تم اقتراح دورا البيولوجي أوسع للGzmB مما اعتقد سابقا، تتطلب الباحثين أدوات محددة وموثوق بها للكشف لها. من ميزة هو شرط GzmB المحددة ليلتصق على الجانب الكربوكسيل من بقايا حمض الأسبارتيك، وهي خاصية فريدة من نوعها بين البروتياز سيرين حقيقية النواة 15. الماوس والبشرية وGzmB الفئران وهيكليا مشابهة جدا، ولكن خصوصية الركيزة طويلة من الماوس GzmB تختلف بمهارة من أن كل من الإنسان والفئران 16، وهو ما يعني أن بعض ركائز العامة مع آسيا والمحيط الهادئ في محطة (P1) يمكن المشقوق كفاءة من خلال GzmB من جميع الأنواع الثلاثة، في حين ركائز أخرى مع تسلسل أكثر تعقيدا من المنبع P1 قد تعطي نتائج متفاوتة على نطاق واسع. في كل من الماضي وأكثر من ذلك لى مؤخراterature، هذه الحقيقة قد تسبب ارتباك كبير وسوء فهم لأهمية بيولوجية لبعض النتائج التجريبية، على الرغم تسيطر عليها بعناية، سعت الدراسات الحركية لتصحيح الوضع 17.

في هذه الورقة سعينا لتوضيح هذه النقاط باستخدام اثنين من ركائز المتاحة تجاريا، وهي بوك علاء علاء-ASP-SBzl وN-أسيتيل-إيل-حمض الغلوتاميك-برو-ASP-P-nitroanilide. الكواشف اثنين لا تولد مختلف الجماعات المتفاعلة التالية الانقسام (أ sulphydryl مجانا مقابل paranitroanilide مجانا الفلورسنت)، ولكن هذا أي تأثير مهما على انشقاق بروتين. بروتوكول صفها هو التكيف الحديثة من بروتوكول قديمة جدا 18، ولكن ينبغي أن تساعد المحققين لاستخدام ركائز GzmB المختلفة بشكل مناسب، مع توفير إطار منهجي للكشف عن نشاط granzymes أخرى، مثل GzmA وGzmH.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأجريت الطحال كانت مستمدة من الفئران (6-10 أسابيع من العمر) وجميع التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية الحيوان مركز السرطان ماك كالام بيتر (E486): ملاحظة.

1. إعداد العينات.

  1. إعداد تنشيط خلايا فأر NK.
    1. عزل خلايا NK ساذجة الأولية من وحيدة الخلية تعليق من الطحال من C57BL / 6 أو B6.GrzmB - / - (GzmB اغية الجينات) الفئران عن طريق الانتقاء السلبية باستخدام أدوات متوفرة تجاريا.
    2. اتبع بروتوكول الصانعين. لفترة وجيزة، مغناطيسيا تسمية "غير NK-" خلايا مثل T و B الخلايا، والخلايا الجذعية، المحببة، الضامة، وخلايا الدم الحمراء باستخدام الأجسام المضادة البيوتين مترافق ضد علامات سطح الخاصة. استخدام الفصل المغناطيسي مع حبات مكافحة البيوتين في استنزاف خلايا "غير NK".
    3. ثقافة معزولة خلايا NK لمدة 5-7 أيام في وسائل الإعلام التي تحتوي على IL-2 (1،000 U / مل) في 700،000 خلية / مل في 24 لوحات جيدةفي 37   ° C.
    4. بدلا من ذلك، تنشيط خلايا T استخدام 19، وتقييد مستضد الأساسي CTL من OT1 T مستقبلات الخلايا الفئران المعدلة وراثيا 20، ولدت CTL في الثقافات المختلطة اللمفاويات 21، أو supernatants من خلايا NK تنشيط لتحديد نشاط يفرز GzmB 19.
  2. صيانة الإنسان NK خط الخلية وعزل الخلايا NK الأولية.
    1. الحفاظ على سرطان الدم NK البشري (خلايا YT) في معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) متوسطة تستكمل مع 10٪ مصل العجل الجنين. بدلا من ذلك، تنقية الخلايا القاتلة الطبيعية الأولية من الدم المحيطي من المواضيع الصحية وتحفيز لمدة 2-3 أيام في المتوسط ​​تحتوي على IL-2 في 100 U / مل كما هو موضح سابقا (22).
  3. جيل من الخلية لست].
    1. غسل الخلايا ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.4)، ثم وقف في Nonidet P-40 تحلل العازلة (0.1٪ NP-40، 250 مم كلوريد الصوديوم، و 25 ملي HEPES، 2.5 ملي EDTA). من الناحية المثالية، ليز ما لا يقل عن 5 × 10 6 خلايا NK، أو 1 × 10 7 T الخلايا في 100 ميكرولتر عازلة. لا تقم بإضافة مثبطات الأنزيم البروتيني، وكثير وكذلك مثبطات البروتياز سيرين لا رجعة فيها، وعلى وجه الخصوص في tryptases مثل GzmA. احتضان على الجليد لمدة 20 دقيقة، ثم تكوير نوى في microcentrifuge في 15،000 x ج لمدة 10 دقيقة. تجاهل بيليه النووي ونقل طاف لأنبوب جديد.
  4. تحديد تركيز البروتين من لست].
    1. استخدام بروتوكول المتاحة تجاريا من اختيار مثل برادفورد أو حمض bicinchoninic (BCA) وتحديد تركيز البروتين. تأكد من أن التركيز هو ~ 2 ملغ كحد أدنى / مل. متجر لست] في -20 درجة مئوية حتى المطلوبة (النشاط granzyme مستقرة لعدة شهور في -20 ° C).

2. باء granzyme آخر الفحص

  1. إعداد الكواشف
    1. إعداد 10 ملي الأسهم من ركائز (بوك-AAD-S-BZL أو التيار المتردد-IEPD-السلطة الوطنية الفلسطينية) في DMSO (~ 5 ملغ / مل) وتخزينها في aliquots في -20 & #176، C. إعداد تخفيف العمل الطازجة وتجاهل بعد كل يوم، كما بوك-AAD-S-BZL hydrolyzes جزئيا على التخزين في DMSO.
    2. إعداد 250 ملي الأسهم من كاشف اللونية (5،5'-ثنائي ثيو؛ ديثيو مكرر (حمض 2-nitrobenzoic)، DTNB) في DMSO (0.09 جم / مل) وتخزينها في -20 ° C. إعداد التخفيف عمل جديدة كل يوم. مطلوب فقط هذا كاشف عن ركائز مع جماعات مؤشر SBzl، وليس السلطة الوطنية الفلسطينية.
    3. تشكل عازلة جديدة (0.1M HEPES، 0.05 M MgCl 2، ودرجة الحموضة 7.3) كل 2-3 أسابيع.
  2. جلب DTNB وركائز الاصطناعية إلى درجة حرارة الغرفة. تمييع ركائز (1:16، على سبيل المثال 100 ميكرولتر في 1.6 مل من العازلة) وDTNB (1: 250، على سبيل المثال 10 ميكرولتر في 2.5 مل عازلة) وتخلط جيدا.
  3. تمييع ما لا يقل عن 100 ميكروغرام البروتين المحللة من كل عينة في المنطقة العازلة على الحجم النهائي من 160 ميكرولتر. باستخدام ماصة الأقنية إضافة 50 ميكرولتر لكل بئر في ثلاث نسخ (~ 33.3 ميكروغرام / جيد) في '' U '' الفينيل أسفل لوحة 96-جيدا.تشمل "العازلة فقط" التحكم (أيضا في ثلاث نسخ).
  4. إضافة 100 ميكرولتر من المخفف DTNB لسيطرة عينات / عازلة (حذفت هذه الخطوة عند العمل مع ميلان-IEPD-السلطة الوطنية الفلسطينية.
    ملاحظة: الشق من التيار المتردد-IEPD-السلطة الوطنية الفلسطينية من قبل GzmB النشرات مباشرة الفلورة السلطة الوطنية الفلسطينية (الشكل 4B).
  5. استخدام ماصة الأقنية لإضافة بسرعة 50 ميكرولتر من ركائز المخفف إلى كل مجموعة من يثلث، بدءا من المخزن المؤقت ثم أي ضوابط السلبية والتشطيب مع العينات الايجابية المتوقعة.
  6. وضع لوحة في قارئ لوحة. قياس النشاط آسيا والمحيط الهادئ-بورصة عمان من قبل التحلل من بوك علاء علاء-ASP-S-BZL / AC-IEPD-السلطة الوطنية الفلسطينية في القارئ صفيحة ميكروسكوبية OD 405 نانومتر. استخدام بروتوكول الفحص الحركي، ويستغرق 25 القراءات، كل 15 ثانية (حوالي 6 دقائق الوقت في القراءة الإجمالية).
  7. استخدام قراءات الامتصاصية ولدت في كل نقطة زمنية لحساب معدل الركيزة الانقسام يدويا إذا كان برنامج لوحة القارئ لا يمكن أن تولد قيمة للVMAX.

3. تحليل داتا

ملاحظة: البيانات التي تم إنشاؤها يرد كحد أقصى سرعة، الذي يعرف بأنه تغيير OD على مر الزمن (وزارة الدفاع / دقيقة).

  1. لتحليل البيانات، وتحديد الحد الأقصى لمعدل الانقسام الركيزة، والذي يحسب من معدل التغير في الامتصاصية. القيام بذلك تلقائيا باستخدام برنامج قارئ لوحة، التي لديها عادة هذا الخيار.
  2. بدلا من ذلك بعد عرض المؤامرات الحركية للتغيير في الامتصاصية، والتي يتم إنشاؤها أثناء الفحص الحركي على قارئ لوحة، يدويا تحديد نقاط البيانات التي تعطي أشد خط على التوالي. بالنسبة لمعظم المقايسات ويتحقق الحد الأقصى لمعدل داخل دقيقة 2 الأول من الفحص.
  3. طرح القراءة OD الأولية من أعلى قراءة OD على هذا الخط المستقيم والقسمة على الفاصل الزمني. نقل البيانات الخام إلى منصة مايكروسوفت اكسل / الرسم البياني للتحليل الإحصائي وعرض الرسوم البيانية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الركيزة بوك-AAD-S-BZL هي محددة لGzmB

وGzmB سيرين البروتياز هو أحد المكونات الرئيسية من الخلايا الليمفاوية السامة للخلايا (خلايا CTL وNK) وغالبية سكانها من المسؤول عن إحداث الموت أفكارك السريع في الخلايا المستهدفة، مثل الخلايا أو تحويلها المصابة بالفيروسات. هذا هو إلى حد كبير بسبب تفضيل ركيزة لها للانشقاق بعد بعض مخلفات اسبارتاتي محددة في البروتينات المختارة، سمة مشتركة مع caspases، الذي يلتصق أيض...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تاريخيا تم تحديد granzymes كما الجزيئات المستجيب الرئيسية من الخلايا الليمفاوية السامة للخلايا (خلايا CTL وNK) قادرة على إحداث الموت أفكارك السريع في الخلايا المستهدفة. جاء هذا الارتفاع نتيجة لعمل GzmB، التي المشقوق المستهدفة جزيئات الركيزة في اسبارتاتي (D) المخلفات وبالتالي كان قادرا على تفعيل تتالي كاسباس من قبل كل من الشق المؤيدة للcaspases، فضلا عن العديد من أهدافها المصب. ومع ذلك، وهي محط تقدير الآن أن GzmB التعبير لا يقتصر على الخلايا السامة للخلايا اللمفاوية وظيفتها يجوز تم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلقى هذا العمل دعما من خلال منحة HA 6136 / 1-1 من Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG ، مؤسسة الأبحاث الألمانية) إلى MH. يتم دعم JAT من خلال منح البرامج والمشاريع من المجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية في أستراليا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Boc-Ala-Ala-Asp-S-BzlSM Biochemicals LLC ، CASMSB05Granzyme B الركيزة (الفأر والإنسان)
Ac-IEPD-pNA & nbsp ؛SM Biochemicals LLC ، CASMPNA009ركيزة Granzyme B (الإنسان فقط)
N- &# 945 ؛ -CBZ-L-lysine-S-Bzl Sigma-AldrichC3647Granzyme الركيزة
Suc-Phe-Leu-Phe-S-BzlSM Biochemicals LLC ، CASB025Granzyme H الركيزة
5،5'-dithio-bis (2-حمض النيتروبنزويك)   ؛سيجما ألدريتشD8130DTNB ، إلمان s كاشف
NK خلية عزل طقم II الماوسMiltenyi Biotec GmbH130-096-892طقم الاختيار السلبي
طقم عزل الخلايا NK البشريMiltenyi Biotec GmbH130-092-657طقم الاختيار السلبي
قارئ اللوحةBiorad iMarkBiorad Microplate Manager إصدار البرنامج MPM6.3
Serocluster U-bottom الفينيل 96 بئر لوحةCorning ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية2797

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Trapani, J. A., Browne, K. A., Dawson, M., Smyth, M. J. Immunopurification of functional Asp-ase (natural killer cell granzyme B) using a monoclonal antibody). Biochem Biophys Res Commun. 195 (2), 910-920 (1993).
  2. Ewen, C. L., Kane, K. P., Bleackley, R. C. A quarter century of granzymes. Cell Death Differ. 19 (1), 28-35 (2012).
  3. Hoves, S., Trapani, J. A., Voskoboinik, I. The battlefield of perforin/granzyme cell death pathways. J Leukoc Biol. , (2009).
  4. Peters, P. J., et al. Cytotoxic T lymphocyte granules are secretory lysosomes, containing both perforin and granzymes. J Exp Med. 173 (5), 1099-1109 (1991).
  5. Berthou, C., et al. Acquisition of granzyme B and Fas ligand proteins by human keratinocytes contributes to epidermal cell defense. J Immunol. 159 (11), 5293-5300 (1997).
  6. Tschopp, C. M., et al. Granzyme B, a novel mediator of allergic inflammation: its induction and release in blood basophils and human asthma. Blood. 108 (7), 2290-2299 (2006).
  7. Strik, M. C., et al. Human mast cells produce and release the cytotoxic lymphocyte associated protease granzyme B upon activation. Mol Immunol. 44 (14), 3462-3472 (2007).
  8. Jahrsdorfer, B., et al. Granzyme B produced by human plasmacytoid dendritic cells suppresses T cell expansion. Blood. , (2009).
  9. Hagn, M., et al. Human B cells secrete granzyme B when recognizing viral antigens in the context of the acute phase cytokine IL-21. J Immunol. 183 (3), 1838-1845 (2009).
  10. Hagn, M., et al. Human B cells differentiate into granzyme B-secreting cytotoxic B lymphocytes upon incomplete T-cell help. Immunol Cell Biol. 90 (4), 457-467 (2012).
  11. Froelich, C. J., Pardo, J., Simon, M. M. Granule-associated serine proteases: granzymes might not just be killer proteases. Trends Immunol. 30 (3), 117-123 (2009).
  12. Hagn, M., Jahrsdorfer, B. Why do human B cells secrete granzyme B? Insights into a novel B-cell differentiation pathway. Oncoimmunology. 1 (8), 1368-1375 (2012).
  13. Susanto, O., Trapani, J. A., Brasacchio, D. Controversies in granzyme biology. Tissue Antigens. 80 (6), 477-487 (2012).
  14. Walch, M., et al. Cytotoxic cells kill intracellular bacteria through granulysin-mediated delivery of granzymes. Cell. 157 (6), 1309-1323 (2014).
  15. Odake, S., et al. Human and murine cytotoxic T lymphocyte serine proteases: subsite mapping with peptide thioester substrates and inhibition of enzyme activity and cytolysis by isocoumarins. Biochemistry. 30 (8), 2217-2227 (1991).
  16. Casciola-Rosen, L., et al. Mouse and human granzyme B have distinct tetrapeptide specificities and abilities to recruit the bid pathway. J Biol Chem. 282 (7), 4545-4552 (2007).
  17. Kaiserman, D., et al. The major human and mouse granzymes are structurally and functionally divergent. J Cell Biol. 175 (4), 619-630 (2006).
  18. Powers, J. C., Kam, C. M. Peptide thioester substrates for serine peptidases and metalloendopeptidases. Methods Enzymol. 248, 3-18 (1995).
  19. Hagn, M., et al. Activated mouse B cells lack expression of granzyme. B. J Immunol. 188 (2), 3886-3892 (2012).
  20. Konjar, S., et al. Human and mouse perforin are processed in part through cleavage by the lysosomal cysteine proteinase cathepsin L. Immunology. 131 (2), 257-267 (2010).
  21. Sutton, V. R., et al. Residual active granzyme B in cathepsin C-null lymphocytes is sufficient for perforin-dependent target cell apoptosis. J Cell Biol. 176 (4), 425-433 (2007).
  22. Trapani, J. A., Smyth, M. J., Apostolidis, V. A., Dawson, M., Browne, K. A. Granule serine proteases are normal nuclear constituents of natural killer cells. J Biol Chem. 269 (28), 18359-18365 (1994).
  23. Cullen, S. P., Adrain, C., Luthi, A. U., Duriez, P. J., Martin, S. J. Human and murine granzyme B exhibit divergent substrate preferences. J Cell Biol. 176 (4), 435-444 (2007).
  24. Thornberry, N. A., et al. A combinatorial approach defines specificities of members of the caspase family and granzyme B. Functional relationships established for key mediators of apoptosis. J Biol Chem. 272 (29), 17907-17911 (1997).
  25. Bird, C. H., et al. Selective regulation of apoptosis: the cytotoxic lymphocyte serpin proteinase inhibitor 9 protects against granzyme B-mediated apoptosis without perturbing the Fas cell death pathway. Mol Cell Biol. 18 (11), 6387-6398 (1998).
  26. Bots, M., Medema, J. P. Serpins in T cell immunity. J Leukoc Biol. 84 (5), 1238-1247 (2008).
  27. Sun, J., et al. A new family of 10 murine ovalbumin serpins includes two homologs of proteinase inhibitor 8 and two homologs of the granzyme B inhibitor (proteinase inhibitor 9). J Biol Chem. 272 (24), 15434-15441 (1997).
  28. Bird, C. H., Hitchen, C., Prescott, M., Harper, I., Bird, P. I. Immunodetection of granzyme B tissue distribution and cellular localisation. Methods Mol Biol. 844, 237-250 (2012).
  29. Jenkins, M. R., et al. Visualizing CTL activity for different CD8+ effector T cells supports the idea that lower TCR/epitope avidity may be advantageous for target cell killing. Cell Death Differ. 16 (4), 537-542 (2009).
  30. Edwards, K. M., Kam, C. M., Powers, J. C., Trapani, J. A. The human cytotoxic T cell granule serine protease granzyme H has chymotrypsin-like (chymase) activity and is taken up into cytoplasmic vesicles reminiscent of granzyme B-containing endosomes. J Biol Chem. 274 (43), 30468-30473 (1999).
  31. Sutton, V. R., et al. Initiation of apoptosis by granzyme B requires direct cleavage of bid, but not direct granzyme B-mediated caspase activation. J Exp Med. 192 (10), 1403-1414 (2000).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

B NK DTNB B

مقالات ذات صلة