يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة

10.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55294

⸱

أبريل 26, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institutes of Brain Science, State Key Laboratory of Medical Neurobiology and Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نقدم بروتوكول لعزل الأنسجة الغدد التناسلية من الزرد اليرقات، التي من شأنها تسهيل التحقيقات في التفرقة بين جنس الزرد والصيانة.

الملخص

وعلى الرغم من الزرد البرية امتلاك / ZW نظام تحديد الجنس ZZ، فقد الزرد المستأنسة كروموسوم الجنس. وهي تستخدم نظام تحديد الجنس عديدة الجينات، حيث وزعت عدة جينات في جميع أنحاء الجينوم تحدد بشكل جماعي هويات جنس الأسماك الفردية. حاليا، فإن الجينات المسؤولة عن تنظيم تطوير الغدد التناسلية وكيفية عملها يبقى بعيد المنال. عادة، عزل الأنسجة الغدد التناسلية هي الخطوة الأولى لدراسة العمليات التنموية الجنس. هنا، نقدم إجراء لعزل الأنسجة الغدد التناسلية من 17 DPF (أيام آخر الإخصاب) و 25 يرقات DPF الزرد. الأنسجة الغدد التناسلية معزولة ويمكن الاطلاع في وقت لاحق من قبل التشكل والتعبير الجيني التنميط.

المقدمة

يتم فقدان المحدد الإناث رئيسيا في كروموسوم الزرد البرية 4 أو تعديلها في الزرد المستأنسة (أي سلالات مختبر المشتركة) 1. بدلا من ذلك، لديهم نظام تحديد الجنس عديدة الجينات يرافقه العوامل البيئية مثل درجة الحرارة ونقص الأكسجين، وتوافر الغذاء والكثافة السكانية. ليست مفهومة تماما آليات تفصيلية للتنمية الجنس الزرد. أسئلة أساسية مثل عندما يحدث تحديد الجنس الزرد، ما إشارة تحديد الجنس الابتدائية (ق) هو / هي، والجينات التي تنظم الخطوة الأولى من التحول الغدد التناسلية لا يزال يتعين الإجابة 2 و 3.

في عملية التنمية الجنس الزرد، وقد تم الاعتراف عدة مراحل مهمة. في مرحلة مبكرة من التنمية، بدءا من 4 HPF (آخر ساعة الإخصاب) البدائية الجرثومية خلايا (بغتش) الخضوع لمواصفات، والهجرة إلى التلال الأعضاء التناسلية وتكاثر. أرقام PGC والتفاعلات المتبادلة بين الخلايا الجرثومية والخلايا الجسدية مهمة لالغدد التناسلية التمايز 4. في 13 DPF (أيام آخر الإخصاب)، والغدد التناسلية هي في مرحلة غير متمايزة. بنسبة 17 DPF، الغدد التناسلية تتطور إلى المبايض ثنائية محتملة في كل من الإناث والذكور في المستقبل. الانتقال التي تعتمد على الخلايا من المبيض إلى الخصية يبدأ في 21-25 DPF وقد يستمر لعدة أسابيع. بنسبة 35 DPF، وقد تم تحديد جنس الغدد التناسلية وإنتاج الأمشاج مصنفة حسب الجنس جار في كلا المبيضين والخصيتين 5 و 6 و 7.

حتى الآن، وقد اقترحت الجينات وآليات تحديد الجنس مرشح متنوعة. وقد عزل البروتينات وتحليل transcriptomic العديد من الجينات مع التعبير ديمبرافيك جنسيا، وقد استخدمت هذه الجينات لدراسة التمايز بين الجنسين في الزرد 8، 9 و 10. على سبيل المثال، في الزرد اليرقات، ويتم التعبير عن الجين cyp19a1a تحديدا في المبيض ولكن ليس في الخصية 11 و 12. وبالإضافة إلى ذلك، يتم التعبير عن الجينات AMH ضعيفة في خلايا بصيلات المحببة المبيض، ولكن بقوة في الخصية خلايا سيرتولي 13. في المقابل، أعرب الجينات الأوعية مستمر في الخلايا الجرثومية كل من الزرد الإناث والذكور، مما يجعل من الغدد التناسلية علامة مناسبة 14 و 15.

بحثت العلاقة بين مستويات التعبير الجيني الغدد التناسلية أمر بالغ الأهمية لفهم الآلية الجزيئية لتحديد الجنس والتمايز خصوصا في مرحلة المبيض ثنائية إمكانيات 3 و 9. ومع ذلك، فإن صغر حجم الزرد اليرقات والغدد التناسلية صغيرة في المقابل تعقيد عزل gonadaالأنسجة ل لمزيد من التحليل الجزيئي. الدراسات السابقة المستخدمة تشريح منطقة الجذع بأكملها بين الغطاء الخيشومي والمسام الشرج 16. هذا التحضير، على الرغم من أن تحتوي على الغدد التناسلية، ويتكون من الأنسجة والأعضاء متعددة. بدلا من ذلك، والحيوانات المعدلة وراثيا مع التعبير GFP-الغدد التناسلية معين مثل الأوعية: استخدمت EGFP لعزل الأنسجة الغدد التناسلية عن طريق مضان خلية تنشيط الفرز (FACS) والقبض على الليزر الجزئي تشريح 17 و 18. لكن تطبيقها على نطاق واسع محدودة. هنا، نحن تصف إجراء بسيط لعزل الأنسجة الغدد التناسلية من الزرد اليرقات في 17 DPF و 25 DPF. نحن لشرح موقف الغدد التناسلية فيما يتعلق الأجهزة الأخرى وعزل الغدد التناسلية سليمة شكليا من الأنسجة المحيطة بها. علينا مواصلة تظهر الجينات الغدد التناسلية معين مثل الأوعية وcyp19a1a يتم التعبير عنها بشكل كبير في الغدد التناسلية معزولة مقارنة مع الأنسجة جذع من خلال PCR الكمي (QPCR) التحليل. يسمح هذا البروتوكول تحديد الهوية، والعزلة، وتنقية RNA والتضخيم من جينات معينة الغدد التناسلية من الزرد اليرقات، وبالتالي تمكين التحليل الجزيئي لاحق من أنسجة الغدد التناسلية (19).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على التجارب الزرد من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدم جامعة فودان. وأثيرت الزرد ولدت وفقا للاجراءات المتبعة 20.

1. الاستعدادات

  1. زراعة 17 DPF و 25 DPF الزرد اليرقات
    1. نقل 2 ذكور و 2 إناث الزرد الكبار (صحية، 3-6 أشهر من العمر، والمختبرات أب سترين) إلى خزان المعبر في وقت متأخر بعد الظهر قبل يوم العبور. فصل الذكور والإناث مع الجدار. في صباح اليوم التالي، وتجديد خزان المياه وإزالة الحاجز للسماح لهم للتزاوج. جمع البيض في 100 ملم أطباق بتري 1-2 ساعة بعد الإخصاب.
    2. والحفاظ على حوالي 40 الأجنة في لوحة 100 ملم مع 40 مل الجنين المتوسطة (EM) في 28.5 درجة مئوية خلال فترة النمو المبكر (4 أيام) وتحديث EM مرتين في اليوم. نقل اليرقات إلى 1 الدبابات L (40 اليرقات إلى 300 مل من الماء النظام) وتغذية مع الدوارات الحية (العرض الكامل، مرتين في اليوم) بعد 5 DPF.تغذية الأرتيميا العيش بدلا من اتباع نظام غذائي حيدة الخلية والروتيفر بعد 10 DPF. نقل الأسماك إلى تعميم-إعادة نظام المياه في 14 DPF 21.
    3. رفع الزرد اليرقات في نظام المياه تعميم إعادة حتى 17 DPF أو 25 DPF. ضمان دورة الخفيفة / مظلمة هو 14/10 ساعة ودرجة الحموضة قيمة المياه النظام حوالي 7.2. قياس طول الجسم من 17 DPF (5،5-6،8 مم) و 25 DPF (8-11 ملم) يرقات 22.
  2. إعداد 2٪ لوحات أجار للتشريح.
    1. إضافة 4 ز أجار إلى 200 مل من الماء المعقم. تسخين الخليط في فرن الميكروويف حتى يتحول شفافة.
    2. تبريد حل أجار لمدة 15 دقيقة، ثم سكبه في 60 مم أطباق بتري (حوالي 1/3 حجم لوحة). تخزين لوحات أجار طدت في 4 درجات مئوية.

2. بروتوكول 1: تشريح الأنسجة الغدد التناسلية بين 17 و 25 يرقات DPF

  1. إضافة الثلج المجروش في خزان لتخدير 17 يرقات DPF. نقلاليرقات تخدير إلى 100 ملم المبردة طبق بيتري مع حل 30 مل البرد رينغر. الحفاظ على الأسماك المحتضنة في حل رينغر مبردة لمدة 15 دقيقة على الأقل لتخدير كامل اليرقات.
  2. نقل اليرقات إلى لوحة آغار precooled مع ملعقة صغيرة من البلاستيك. غمر جسم السمكة بالكامل في 10 مل المبردة حل قارع الأجراس ووضع برفق على جانبها.
  3. هل العمليات التالية تحت مجال الرؤية من 25X المجهر ستيريو. المشبك جذع السمك مع ملاقط لتحقيق الاستقرار. مزق البطن طوليا من فتحة الشرج إلى القلب مع زوج آخر من الملقط. إزالة بلطف الجلد والعضلات على جانب واحد من الجسم لكشف الأعضاء الداخلية.
  4. إزالة كتلة من أجهزة بطني إلى المثانة السباحة بعناية. تجنب إتلاف الغدد التناسلية تعلق على المثانة السباحة.
  5. قطع الاتصال بين المثانة السباحة والجسم الأمامي. سحب المثانة السباحة بأكملها والأنسجة الغدد التناسلية بلطف.
    ملاحظة: في معظم الحالاتالصورة، أنسجة الغدد التناسلية في 17 DPF تحتوي المحيطة الأنسجة الطلائية وprotonephridium. لا ينفصلون بسهولة عن بعضها البعض، ولكن في 25 DPF يمكن فصلها بسهولة. توصيل الغدد التناسلية أيضا إلى فتحة الشرج. وهناك تقاطع مع الغدد التناسلية اليسار واليمين متصلة مع بعضها البعض في فتحة الشرج تكون مرئية بشكل واضح.
  6. استخدام ملاقط لفصل بعناية أنسجة الغدد التناسلية من المثانة السباحة وتنظيف الأنسجة الدهنية المحيطة بها.
  7. على الفور نقل أنسجة الغدد التناسلية معزولة إلى prechilled 1.5 مل أنبوب الطرد المركزي التي تحتوي على حل 200 ميكرولتر رينغر. الحفاظ على أنبوب على الجليد حتى يتم فصل جميع أنسجة الغدد التناسلية من اليرقات.
  8. تشريح الغدد التناسلية من 25 يرقات DPF كما هو موضح في الخطوات 2،1-2،7.

3. بروتوكول 2: تحليل التعبير الجيني في أنسجة الغدد التناسلية المعزولة

  1. استخراج الحمض النووي الريبي مجموع من أنسجة الغدد التناسلية اليرقات.
    1. نقل أنسجة الغدد التناسلية معزولة إلى ريبونوكلياز خالية الجديد 1.5 مل أنبوب وإزالة حل رينغر. إضافة 100 ميكرولتر حل تحلل. وهي lysed دوامة حتى الأنسجة تماما.
    2. تنفيذ الإجراء مجموع استخراج الحمض النووي الريبي وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
    3. إضافة 10/01 حجم 10X الدناز أنا العازلة و 1 ميكرولتر من الدناز الأول لهذا الحل RNA وتخلط بلطف. احتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    4. إضافة 10/01 حجم الدناز تعطيل كاشف إلى حل RNA. احتضان لمدة 10 دقيقة في 70 ° C. قياس تركيز الحمض النووي الريبي مجموع باستخدام مقياس الطيف الضوئي. تخزين في درجة حرارة -20 درجة مئوية.
  2. أداء التوليف [كدنا حبلا أولا
    1. استخدام بنسبة ضئيلة (DT) -linker التمهيدي لأداء أول حبلا التوليف [كدنا بعد بروتوكول تصنيع. إضافة 1-2 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي لإجمالي حجم رد الفعل إلى 20 ميكرولتر.
    2. احتضان محلول التفاعل لمدة 90 دقيقة في 45 ° C. إنهاء رد فعل عن طريق التسخين عند 70 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    3. إضافة 1 ميكرولتر ريبونوكلياز H إلى [كدنا ذلكlution لإزالة RNA المتبقية. المزيج بلطف وأجهزة الطرد المركزي لمدة 10 ق في ~ 13000 ز س. احتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. إضافة 20 ميكرولتر المياه مجانا نوكلياز. تخزين في -70 ° C.
  3. أداء الفلورسنت PCR الكمي
    1. أداء QPCR على نظام cycler على مع صبغة الفلورسنت. استخدام الظروف الدراجات PCR التالية: 35 دورة في 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، TM-5 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، 68 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. استخدام تسلسل التمهيدي على النحو التالي: AMH (إعادة توجيه: GTGGATGGCAGCAGTACGAC، مراجعة: GCGGAGAGGTGGAAGAGAGAATG)، cyp19a1a (إعادة توجيه: GTCCTGTTGTCTCCTACTGTCG، مراجعة: CATTTGAGTTGAATATGATGCCCTG)، nanos3 (إعادة توجيه: GCTCGGTGTACGCCAAATCAACAT، مراجعة: CCAAGTGAAAACACAACACCAGTGC)، الأوعية (إعادة توجيه: ATCGCATAGGAAGAACTGGACGCT، مراجعة: CCAAGTGAAAACACAACACCAGTGC) و β-الأكتين (إعادة توجيه: AGTGCGACGTGGACATCCGTA، مراجعة: GCACTTCCTGTGGACGATGGA) 19.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم إجراء تشريح الغدد التناسلية على أب سترين الزرد اليرقات. ويبين الشكل 1 أنسجة الغدد التناسلية نموذجية من الزرد اليرقات في 17 DPF و 25 DPF. أولا، يتم قطع الجلد والعضلات من جانب واحد من البطن لكشف الأعضاء الداخلية. بعد إزالة كتلة من الأعضاء الداخلية، والمثانة السباحة جنبا إلى جنب مع الغدد التناسلية تبقى في الجذع. كان يعلق على الغدد التناسلية إلى الجانب البطني من المثانة السباحة (السهم في الشكل

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أصبح الزرد نموذج قوي ويستخدم على نطاق واسع في مجال التنمية والبحوث المتعلقة بالمرض. وقد الطرق لعزل الأجهزة في الزرد الكبار مثل المخ والقلب والغدد التناسلية، والكلى، وموثقة جيدا 23 و 24 و 25. نظرا لصغر حجم وإعادة الديناميكية للأنسجة الغدد التناسلية في الزرد اليرقات، والعزلة من أنسجة الغدد التناسلية هي مهمة صعبة. الدراسات السابقة استخدمت كلها تشريح الأنسجة الجذع أو الأوعية المعدلة وراثيا: ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

نشكر C تشانغ لرعاية الأسماك. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (31171074، 31371099 و31571067 لGP) ومشروع المواهب بوجيانج (09PJ1401900 لGP).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
طبق زراعة الخلايا 100 مم430167 كورنينجلحضانة الأجنة
20x EMللحصول على 1 لتر مطلوب: أضف 17.5 جم كلوريد الصوديوم و 0.75 جم كلوريد كلوريد و 2.9 جم كلوريد الكالسيوم & # 183 ؛ 2ح2O; ثم أضف 0.41 جم KH2< / sub>PO4 ، 0.412 جم Na2< / sub>HPO4 اللامائي و 4.9 جم MgSO4< / sub>&# 183 ؛ 7حاء2O.
1x EMمخفف 20x EM في الماء المقطر
AGAROSE G-10Gene121985لتحضير ألواح أجار 2٪
كاشف TrizolInvitrogen15596-026لعزل الحمض النووي الريبي
عداد الزجاجشين بو250 مللتحضير ألواح أجار 2٪
فرن ميكروويفميدياM1-211Aلتسخين AGAR
ملاقط DUMONT # 5INOXأداة الدقة العالمية500341لتشريح
المجهر المجسمMoticSMZ168لتشريح
معدات المياه النقيةMillipore
Ringer ' محلولs للحصول على 1 لتر مطلوبة: أضف 6.78 جم كلوريد الصوديوم ، 0.22 جم كلوريد كلوريد ، 0.26 جم كلوريد المكالس < > 2 < / فرعي > و 1.19 جم هيبيس ؛ ثم املأ إلى 1 لتر ؛ اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.2. تعقيم عن طريق الترشيح واحتفظ بها في حاوية من البولي كربونات شفافة معقمة.
نقل الماصةSamco202 ، 204
حمام معدنيQiLinbeierنموذج GL-150
مجهرLeica   ؛M205 FA
لجهاز الطرد المركزيEppendorf5417R
طقم عزل الحمض النووي الريبي ذو المقياسالصغير AmbionAM1931لعزل الحمض النووي الريبي من أنسجة الغدد التناسلية
Dnase ISigmaAMPD1-1KTلهضم الحمض النووي في محلول الحمض النووي الريبي
RevertAid First Strand cDNA SynthesisKit Thermo Scientific#K1631لتخليق الحمض النووي (كدنا) الأول
Rnase HThermo Scientific#EN0202لهضم الحمض النووي الريبي المتبقي في محلول (كدنا
SYBR Green Realtime PCR Master MixTOYOBOQPK-201هذا المنتج عبارة عن مزيج رئيسي 2x قائم على البوليميراز DNA Taq ل PCR في الوقت الفعلي و   قابل للتطبيق على فحص الإقحام باستخدام SYBR Green I.
مقياس الطيفNe DropOD-2000 +قياس تركيز إجمالي الحمض النووي الريبي
MastercyclerEppendorfAG 22331توصيف التعبير الجيني
للتصوير الضوئي ). الضوئي في هامبورغ

المراجع

  1. Wilson, C. A., et al. Wild sex in zebrafish: loss of the natural sex determinant in domesticated strains. Genetics. 198 (3), 1291-1308 (2014).
  2. Liew, W. C., Orban, L. Zebrafish sex: a complicated affair. Genomics. 13 (2), 172-187 (2014).
  3. Orban, L., Sreenivasan, R., Olsson, P. Long and winding roads: Testis differentiation in zebrafish. Mol. Cell. Endocrinol. 312 (1-2), 35-41 (2009).
  4. Blaser, H., et al. Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish. J. Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).
  5. Wang, X. G., Orban, L. Anti-Müllerian hormone and 11 β-hydroxylase show reciprocal expression to that of aromatase in the transforming gonad of zebrafish males. Dev. Dynam. 236 (5), 1329-1338 (2007).
  6. Siegfried, K. R., Nüsslein-Volhard, C. Germ line control of female sex determination in zebrafish. Dev. Biol. 324 (2), 277-287 (2008).
  7. Uchida, D., Yamashita, M., Kitano, T., Iguchi, T. Oocyte apoptosis during the transition from ovary-like tissue to testes during sex differentiation of juvenile zebrafish. J. Exp. Biol. 205 (Pt 6), 711-718 (2002).
  8. Groh, K. J., Schönenberger, R., Eggen, R. I. L., Segner, H., Suter, M. J. F. Analysis of protein expression in zebrafish during gonad differentiation by targeted proteomics. Gen. Comp. Endocr. 193, 210-220 (2013).
  9. Siegfried, K. R. In search of determinants: gene expression during gonadal sex differentiation. J. Fish Biol. 76 (8), 1879-1902 (2010).
  10. Small, C. M., Carney, G. E., Mo, Q., Vannucci, M., Jones, A. G. A microarray analysis of sex- and gonad-biased gene expression in the zebrafish: evidence for masculinization of the transcriptome. BMC Genomics. 10, 579(2009).
  11. Chiang, E. F., Yan, Y. L., Guiguen, Y., Postlethwait, J., Chung, B. Two Cyp19 (P450 aromatase) genes on duplicated zebrafish chromosomes are expressed in ovary or brain. Mol. Biol. Evol. 18 (4), 542-550 (2001).
  12. Kishida, M., Callard, G. V. Distinct cytochrome P450 aromatase isoforms in zebrafish (Danio rerio) brain and ovary are differentially programmed and estrogen regulated during early development. Endocrinology. 142 (2), 740-750 (2001).
  13. Rodríguez-Marí, A., et al. Characterization and expression pattern of zebrafish anti-Müllerian hormone (amh) relative to sox9a, sox9b, and cyp19a1a, during gonad development. Gene Expr.Patterns. 5 (5), 655-667 (2005).
  14. Krovel, A. V., Olsen, L. C. Expression of a vas::EGFP transgene in primordial germ cells of the zebrafish. Mech Dev. 116 (1-2), 141-150 (2002).
  15. Krovel, A. V., Olsen, L. C. Sexual dimorphic expression pattern of a splice variant of zebrafish vasa during gonadal development. Dev. Biol. 271 (1), 190-197 (2004).
  16. Tzung, K. W., et al. Early depletion of primordial germ cells in zebrafish promotes testis formation. Stem Cell Reports. 4 (1), 61-73 (2015).
  17. Hsiao, C., Tsai, H. Transgenic zebrafish with fluorescent germ cell: a useful tool to visualize germ cell proliferation and juvenile hermaphroditism in vivo. Dev. Biol. 262 (2), 313-323 (2003).
  18. Jorgensen, A., Nielsen, J. E., Morthorst, J. E., Bjerregaard, P., Leffers, H. Laser capture microdissection of gonads from juvenile zebrafish. Reprod Biol Endocrinol. 7, 97(2009).
  19. Chen, S., Zhang, H., Wang, F., Zhang, W., Peng, G. nr0b1 (DAX1) mutation in zebrafish causes female-to-male sex reversal through abnormal gonadal proliferation and differentiation. Mol. Cell. Endocrinol. 433, 105-116 (2016).
  20. Westerfield, M. The Zebrafish Book: A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , Eugene: University of Oregon Press. University of Oregon. (2000).
  21. Liew, W. C., et al. Polygenic sex determination system in zebrafish. PLoS One. 7 (4), e34397(2012).
  22. Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish. Dev Dyn. 238 (12), 2975-3015 (2009).
  23. Gupta, T., Mullins, M. C. Dissection of Organs from the Adult Zebrafish. J. Vis Exp. (37), (2010).
  24. Arnaout, R., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R. Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications. J. Vis Exp. (94), (2014).
  25. Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. Dissection of the Adult Zebrafish Kidney. J. Vis Exp. (54), (2011).
  26. Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells. Development. 124 (16), 3157-3165 (1997).
  27. Braat, A. K., Speksnijder, J. E., Zivkovic, D. Germ line development in fishes. Int. J. Dev. Biol. 43 (7), 745-760 (1999).
  28. Huang, H. Y., Ketting, R. F. Isolation of zebrafish gonads for RNA isolation. Methods Mol Biol. 1093, 183-194 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

RNA qPCR
تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.