يصف لنا طريقة لقياس تنشيط وظائف المستجيب بوساطة لجنة التيسير بالأجسام المضادة التي تستهدف هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا. يمكن تكييفها مع هذا التحليل أيضا لتقييم القدرة [مونوكلونل] أو [بولكلونل] سيرا استهداف glycoproteins السطحية الفيروسية الأخرى للحث على الحصانة بوساطة لجنة التيسير.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
أسلوب لتقييم وظائف المستجيب Fc بوساطة الناجم عن الإنفلونزا هيماغلوتينين أجسام مضادة محددة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأجسام المضادة تلعب دوراً حاسما في اقتران الاستجابات المناعية الفطرية والتكيف ضد مسببات الأمراض الفيروسية من خلال مستضد ملزمة مجالات ومناطق Fc. هنا، ونحن تصف كيفية قياس التنشيط من نادي اكتب وظائف المستجيب بالأجسام المضادة استهداف هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا باستخدام خط الخلية جوركات المهندسة وراثيا معربا عن تفعيل لجنة التيسير 1-FcγR-باستخدام هذا الأسلوب، يمكن تحديد مساهمة تفاعلات Fc FcγR محددة يمنحها المناعية باستخدام فحص في المختبر .
المقدمة
وقسمت تقليديا الحصانة التي يوفرها لقاح الإنفلونزا الموسمية من hemagglutination تثبيط (مرحبا) المقايسة1، الذي يقيس وجود الأجسام المضادة التي تستهدف موقع مستقبلات ملزم هيماغلوتينين. هذه الأجسام المضادة النشطة مرحبا يمكن أن يضفي حصانة تعقيم، ولكن عموما ضيقة في اتساع تلك الحماية، وتوفير الحصانة لفقط تحديد سلالات قليلة من فيروس الإنفلونزا. عزل ووصف رد الفعل على نطاق واسع [مونوكلونل تعترف هيماغلوتينين (ها) تشير إلى تطوير لقاح الإنفلونزا العالمي هو في متناول اليد، 2،،من34 5 , 6 ,....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأجريت التجارب بريفورميد في هذه المخطوطة المؤسسية مدونة للتالية "آيكان كلية الطب" الأخلاقيات والأنظمة.
1-التعبير عن هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا عن طريق تعداء أو الإصابة
تعداء:
- لوحة "الكلي الجنينية البشرية" (HEK 293T) الخلايا في كثافة من 2 × 104 خلايا/بئر في ثقافة الأنسجة بيضاء تعامل لوحة 96-جيدا، والسماح لها الجلوس لح 4 في حاضنة 37 درجةمئوية (مع 5% CO2).
- ترانسفيكت الخلايا مع 100 نانوغرام من الحمض النووي الترميز الفيروسية هيماغلوتينين وميكروليتر 0.2 من تعداء كاشف كل بئر في إجمالي حجم 50 ميكروليتر.
ملاحظة: على حد سواء هي تضعف كاشف بلاز....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
أظهرنا أن ماب ساق على حدة، 6F12، ولكن لا ماب الرأس الخاصة برئيس معين، PY102، وكان قادراً على تنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية الأساسية التي أوبريجولاتينج CD107a والانترفيرون γ19. نموذج لجسم ساق على حدة قادرة على تنشيط الخلايا ناغورني كاراباخ البشرية الأساسية، نظهر أن ماب ساق على حدة، 6F12، يمكن تنشيط قوة الخلية جوركات تعديل التعبير عن FcγRIV مورين من ~ معدل. من ناحية أخرى، ماب الخاصة بالرأس، و PY102 ومراقبة مفتش لا (الشكل 2)28.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الأسلوب الموصوفة هنا يسمح للمستخدم لقياس قدرة جسم [مونوكلونل] هكتار على حدة للمشاركة FcγRIV موريني. هو أعرب عن مستضد المستهدفة، هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا، على سطح الخلايا بعد الإصابة بالفيروس أو تعداء بلازميد الحمض النووي. المقايسة زيادة قابلة لاستخدام البروتينات الفيروسية المختلفة أعرب عن السطح في تركيبة مع FcγRs الأخرى (البشر أو الفئران). بالإضافة إلى ذلك، وقد استخدمنا عينات الأمصال لتقييم قدرة الأجسام المضادة في سياق [بولكلونل] للحث على وظائف المستجيب Fc (البيانات لا تظهر)، التي قد توفر معلومات أكثر أهمية عند دراس.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ويعلن المؤلف لا تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذا المشروع في الجزء مع الأموال الفيدرالية من المعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية، والمعاهد الوطنية للصحة، وزارة الصحة والخدمات الإنسانية، تحت سيرس العقد P01AI097092-04S1 (P.E.L.).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| خلايا A549 | ATCC | CCL-185 | الخلايا الظهارية القاعدية السنخية البشرية |
| الغدية HEK 293T الخلايا | ATCC | CRL-3216 | خلايا الكلى الجنينية البشرية |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | كاشف 11668019 | الإرسال |
| 1X Opti-MEM مصل متوسط | ThermoFisher Scientific | 51985-034 | |
| ثقافة الأنسجة البيضاء المعالجة 96 بئر لوحة | Corning، Inc. & nbsp ؛ | 3917 | لوحات فحص |
| 10X MEM | Gibco | 11430-030 | |
| خلية Jurkat التي تعبر عن الفئران توفر مجموعة FcgRIV | Promega | M1201 | الخلايا ونظام فحص Bio-Glo Luciferase و 1X RPMI وخلية Jurkat في مصل IgG |
| منخفضة التي تعبر عن FcgRIIIa Promega G7010 Kit التي تعبر عن الإنسان FcgRIIIa | Promega | G7010 | Kit تشمل الخلايا ونظام فحص Bio-Glo Luciferase و 1X RPMI ومصل |
| IgG منخفضتوفر مجموعة Jurkat التي تعبر عن FcgRIIa | Promega | G9901 | خلايا ونظام فحص Bio-Glo Luciferase و 1X RPMI ومقياس إضاءة مصل IgG |
| BioTek | Synergy H1 قارئ متعدد الأوضاع | قارئ لوحة التلألؤ | |
| فحص Bio-Glo Luciferase | Promega | G7940 | يحتوي على مخزن مؤقت لفحص لوسيفيراز وركيزة فحص لوسيفيراز |
| الكلى | مادين داربيATCC | CCL-34 | خلايا الكلى |
المراجع
- Hobson, D., Curry, R. L., Beare, A. S., Ward-Gardner, A. The role of serum haemagglutination-inhibiting antibody in protection against challenge infection with influenza A2 and B viruses. J Hygiene. 70 (04), 767-777 (1972).
- Throsby, M., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
أجسام مضادة للهيموجلوتينين لفيروس الإنفلونزاطريقة مقايسة الخلايا القاتلة المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCC)خلايا جوركات ذات مستقبلات Fcتر transfection للتعبير عن الهيموجلوتينينالكشف عن ركيزة اللوسيفيريزالسمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادةتنشيط مستقبلات غاما Fcمقايسة مناعية في المختبرتنشيط الخلايا effectors
