تقييم آثار المخدرات على أساس الأجسام المضادة على موريني نخاع العظام وتنشيط بلعم البريتوني

ملخص

المخدرات تستند إلى جسم قد أحدثت ثورة في علاج أمراض التهابات. بالإضافة إلى وجود تأثيرات مباشرة على أهداف محددة، يمكن تنشيط الأجسام المضادة الضامة لتصبح للالتهابات. هذا البروتوكول يصف بلعم الالتهابات كيف يمكن تفعيل المقررة في المختبر، باستخدام الماوس نخاع العظم الضامة، و الحية، استخدام الضامة البريتوني.

الملخص

الضامة هي الخلايا المناعية الفطرية متجولة، الشروع في الاستجابات المناعية لمسببات الأمراض، ويسهم في رد الشفاء والأنسجة. الضامة نفس القدر من الأهمية في إيقاف تشغيل الاستجابات التحريضية. وقد أظهرنا أن الضامة حفزت مع الغلوبولين المناعي الوريدي (IVIg) يمكن أن تنتج كميات كبيرة من سيتوكين المضادة للالتهابات، انترلوكين 10 (إيل-10)، وانخفاض مستويات السيتوكينات الموالية التحريضية ردا على lipopolysaccharides البكتيرية ( لبس). IVIg هو جسم الشاملين، المقام الأول Gs (IgGs)، الغلوبولين المناعي المجمعة من البلازما من 1,000 أكثر من المتبرعين بالدم. يتم استخدامه لتكملة الأجسام المضادة في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة أو لقمع الاستجابات المناعية في المرضى الذين يعانون من الشروط الذاتية أو تحريضية. كما تبين Infliximab، جسم ألفا (TNFα) عوامل علاجية المضادة لورم نخر، لتفعيل الضامة لإنتاج إيل-10 في الاستجابة للمحفزات التحريضية. ويمكن اختبار IVIg والبيولوجي الأخرى المستندة إلى جسم لتحديد آثارها على تفعيل بلعم. وتصف هذه الورقة أساليب الاشتقاق والتحفيز والتقييم مورين نخاع العظم الضامة تفعيلها من خلال الأجسام المضادة في المختبر والضامة البريتوني مورين المنشط مع الأجسام المضادة في الجسم الحي. وأخيراً، نحن شرح استخدام النشاف الغربية لتحديد مساهمة خلية معينة إشارات الطرق المؤدية إلى نشاط بلعم المضادة للالتهابات. يمكن استخدام هذه البروتوكولات مع الفئران المعدلة وراثيا، لتحديد أثر protein(s) محددة على تفعيل بلعم المضادة للالتهابات. يمكن أيضا استخدام هذه التقنيات لتقييم ما إذا كان البيولوجي محددة قد تتصرف عن طريق تغيير الضامة إلى حالة تنشيط للالتهابات إيل-10-إنتاج يقلل من الاستجابات التحريضية فيفو. هذا تقديم معلومات عن دور التنشيط بلعم بفعالية من البيولوجي خلال نماذج المرض في الفئران، وتوفير نظرة ثاقبة إليه جديدة محتملة للعمل في الناس. على العكس من ذلك، هذا قد نحذر من استخدام البيولوجي القائم على جسم معين لعلاج الأمراض المعدية، ولا سيما إذا الضامة دوراً هاما في الدفاع المضيف ضد الإصابة بهذا.

المقدمة

الضامة هي الخلايا المناعية الفطرية، التي تلعب أدواراً متعددة في الاستجابة المناعية للعدوى أو الإصابة. الضامة المسؤولة عن بدء استجابة مناعية لأضرار الإصابة أو الأنسجة ووقف الاستجابة الالتهابية، وتعزيز استجابة الشفاء¹. من الدول التنشيط أفضل درس بلعم ثلاثة أمثلة: 1) الضامة تعامل مع الانترفيرون غاما (IFNγ) والبكتيرية lipopolysaccharide (LPS)، عينت M (IFNγ + لبس)، التي تساهم في الاستجابة الالتهابية؛ 2) الضامة حفزت مع انترلوكين 4 (إيل-4)، M(IL-4)، التي ترتبط برد الشفاء؛ 3) الضامة حفزت مع مجمعات محصنة (IC) ولبس، م (IC + لبس)، التي لها القدرة على إيقاف الاستجابة الالتهابية^2،3. M (IC + لبس) مميز....

البروتوكول

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة كولومبيا البريطانية.

1-نخاع العظام بلعم الاشتقاق والتنشيط مع الأجسام المضادة

1. تنفيذ القتل الرحيم استخدام الخنق₂ CO.
   1. مكان الماوس في الدائرة التعريفي. Euthanize الماوس مع التخدير إيسوفلوراني 5%، عن 60-90 ثانية، حتى تصبح قادرة على الحركة والتنفس العميق والبطيء.
   2. إيقاف التخدير isoflurane وإدارة 6-8 لتر في الدقيقة من CO₂ حتى الماوس توقف عن التنفس. ترك الماوس مع CO₂ في لدقيقة أخرى على الأقل 5 التحقق من أنه لم يعد هناك نبض القلب أو التنفس. أداء اضطراب عنق الرحم التأكد من الوفاة.
      ملاحظة: 8-12....

النتائج

يمكن مثقف الضامة المستمدة نخاع العظام مورين من سلائف الخلايا المكونة للدم في نخاع العظم تبين. تبين نخاع العظام المجمعة من قصبة و tibias واحدة بالماوس C57BL/6 عادة ما تسفر عن⁷ 10 نخاع العظام المستمدة الضامة، يجعلها مصدرا مناسب من الضامة للتجارب. يمكن استخدام بمدمس لاختبار الأجسام المضادة على أساس الردود المخدرات عندما تحدت مع حافز تحريضية في المختبر. ويبين الشكل 1 أن IVIg العلامة التجارية، جامونيكس (GX)، + لبس يزيد من إنتاج سيتوكين المضادة .......

المناقشة

بلعم التنشيط الدول دوراً هاما في كل الأنسجة التوازن والمرض²². يمكن أن يكون الضامة متميزة فضلا عن تداخل الولايات التنشيط، اعتماداً على الإشارات في بهم المكروية³. لديهم أدوار متميزة في جميع مراحل الاستجابة الالتهابية: الدفاع ضد العوامل الممرضة، والجرح برد الشفاء والأنسجة، ولها أيضا حالة تنشيط للالتهابات متميزة مهم لإيقاف الاستجابة الالتهابية² . يتطلب التنشيط بلعم الالتهابات المنبهات الخارجية اثنين الضامة لإنتاج كميات عالية سيتوكين المضادة للالتهابات، و.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
إيسكوف s Dulbecco المعدل s المتوسطة (IMDM)	تقنيات الحياة	12440053
مصل الأبقار الجنينية (FBS)	تقنيات الحياة	12483-020
عامل تحفيز مستعمرة البلاعم الفئران المؤتلف (MCSF)	تقنيات الخلايا الجذعية	78059
تقنيات البنسلين والستربتومايسين	لايف	15140148
مونوثيوغليسرين (MTG)	سيجما	88640
1X عازلة تحلل خلايا الدم الحمراء	eBioscience
عازلة تفكك الخلايا	تقنيات الحياة	13150016	خالية من الإنزيم ، قائمة على هانكس ، EDTA
عديدات السكاريد الدهنية (LPS)	Sigma aldrich	L 4516	من بكتريا قولونية 0127: B8
IVIg (Gammunex)	Grifols	المستلمة من مستشفى كولومبيا البريطانية للأطفال ، طب
نقل الدمIVIg (سائل Gammagard) شركة	باكستر للرعاية الصحية	تم استلامها من مستشفى BC للأطفال ، طب نقل الدم
IVIg (Octagam)	Octapharma	تم استلامه من مستشفى BC للأطفال ، طب نقل الدم
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) (معقم) ، درجة الحموضة 7.4	تقنيات الحياة	10010023
الفأر IL-10 ELISA	BD Biosciences	555252
الفأر IL-12 / 23p40 ELISA	BD Biosciences	555165
الأجسام المضادة ل Erk1 / 2	تقنية إشارات الخلية	9101
الأجسام المضادة المضادة ل pp38	تقنية إشارات الخلية	9211
الجسم المضاد المضاد ل GAPDH	Fitzgerald Industries	10R-G109A
26 جم إبرة	BD Biosciences	305110
1 مل حقنة	BD Biosciences	309659
10 مل حقنة	BD Biosciences	309604
15 مل أنبوب مخروطي	BD Biosciences	352096
50 مل أنبوب مخروطي	BD Biosciences	352070
أنبوب طرد مركزي دقيق (1.7 مل)	DIAMED	SPE155-N
75 سم 2 قارورة معالجة < / sup>	BD biosciences	353136
مكشطة الخلية	BD biosciences	353085
Forcepts	VWR	82027-386	طرف ناعم ، تشريح   ؛
مقص	VWR	82027-582	حساس, 4 1/2"
مجهر ساطع		AE31	تباين الطور المقلوب
	Mettler	PE 3000

مقياس