يوفر هذا البروتوكول إجراء خطوة بخطوة لتحليل عبء تصلب الشرايين في الفئران. يمكن للمحققين استخدام هذا البروتوكول لمقارنة وفرة وموقع وحجم آفات تصلب الشرايين في الحيوانات المختلفة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصوير وتحليل آفات الشريان الأورطي الكامل الملطخة بالزيت الأحمر في نموذج فأر فرط شحميات الدم تمدد الأوعية الدموية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الفئران المفرطة للدهون الناقصة Apolipoprotein E (Apoe) - أو مستقبلات البروتين الدهني منخفض الكثافة (Ldlr) هي النموذجان الأكثر استخداما لأبحاث تصلب الشرايين. يتم استخدامها لدراسة تأثير العوامل الوراثية المختلفة وأنواع الخلايا المختلفة على تكوين آفة تصلب الشرايين وكذلك اختبار تطوير علاجات جديدة. العزل ، واستئصال الشريان الأورطي بأكمله ، والقياس الكمي لآفات تصلب الشرايين الملطخة بالزيت الأحمر O هي طرق مورفومترية أساسية تستخدم لتقييم عبء تصلب الشرايين. الهدف من هذا البروتوكول هو وصف طريقة جراحية محسنة خطوة بخطوة لتشريح وإصلاح الثقب والعزل والبقع والصورة وتحليل آفات تصلب الشرايين في الشريان الأورطي للفئران باستخدام Oil Red O. نظرا لأن الآفات التصلب الأذيني يمكن أن تتشكل في أي مكان في شجرة الأبهر بأكملها ، فإن طريقة تلطيخ الأبهر بالزيت الأحمر O بأكملها تتمتع بميزة تقييم اللويحات المحملة بالدهون في الشريان الأورطي بأكمله وجميع الفروع في فأر واحد. بالإضافة إلى تلطيخ الزيت الأحمر O ، يمكن استخدام الأبهر الكامل المعزول الطازج لمجموعة متنوعة من التجارب في المختبر وفي الجسم الحي وعزل الخلايا.
المقدمة
عادة ما يحدث مرض الشريان التاجي، وهو سبب رئيسي للوفيات في الولايات المتحدة، بسبب تصلب الشرايين، وهي عملية تؤدي إلى تراكم اللويحات داخل جدران الشرايين1. تعد الفئران المعرضة لفرط شحميات الدم المعرضة لنقص Apoe و Ldlr أساسية لتحقيقات تصلب الشرايين ومضاعفاته وتطوير العلاجات2،3،4،5. يعد التحديد الكمي لآفات تصلب الشرايين من الشريان الأورطي في الوجه تحليلا مهما لنقطة النهاية لتقييم تأثير التلاعب الجيني في أنواع الخلايا المختلفة. كما أنه يساعد على دراسة العلاجات الجديدة المصممة للتأثير على بدء مرض تصلب الشراي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم شراء الفئران mT / mG (رقم المخزون 007676) ، و Apoe-/- (رقم المخزون 002052) من مختبر جاكسون. كانت الفئران Myh11-CreERT2 هدية من ستيفان أوفرمان (متوفرة من مختبر جاكسون كمخزون رقم 019079). تم الحصول على الفئران Tgfbr2fl / fl من هارولد ل. موسى (جامعة فاندربيلت). تم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية باستخدام بروتوكولات معتمدة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة ييل.
1. الفئران
- إنتاج MYH11-CreERT2 ؛ mT / mGf / f ؛ أبو-/- و MYH11-CreERT2; Tgfbr2f/f;mT/m....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في هذا البروتوكول ، تم تحليل آفات تصلب الشرايين في الفئران TGFβR2iSMC-Apoe بعد 4 أشهر على نظام غذائي HCHF 7. بالإضافة إلى تصلب الشرايين واسع النطاق ، طورت هذه الفئران تمدد الأوعية الدموية الأبهري الصدري والبطني ، كما ذكر سابقا. بالمقارنة مع الفئران Apoe-/- ، أظهرت جدران الأبهر للفئران TGFβR2iSMC-Apoe تصلب الشرايين الشديد ، مما يجعل من الصعب تشريح الآفات (الشكل 2C ، D ، E). بالإضافة إلى ذلك ، فإن تمدد الأوعية الدموية وا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
البروتين الشحمي E (Apoe) ومستقبلات البروتين الدهني منخفضة الكثافة (Ldlr) الفئران الناقصة مفيدة لدراسة تطور وعلاج تصلب الشرايين. يمكن للمحققين تقييم تأثير الوراثة والتلاعب العلاجي على بدء الأمراض المرتبطة بتصلب الشرايين وتطورها وتراجعها باستخدام تلطيخ الزيت الأحمر O للشريان الأورطي بأكمله9. يعد تلطيخ زيت الشريان الأورطي الأحمر O وتحديد كمية الآفة نقطة النهاية القياسية الذهبية لأبحاث تصلب الشرايين. هذه التقنية غير مكلفة ولا تتطلب معدات خاصة10. ومع ذلك ، ليس .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يعلن صاحبا البلاغ عن أي مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل ، جزئيا ، من خلال منحة صغيرة مشتركة لاتحاد البيولوجيا مقدمة بموجب منحة المعاهد الوطنية للصحة P30AR070253 (P.-Y.C.) ، و HL135582 (M.S). نحن ممتنون ل R. Webber و L. Coon للحفاظ على الفئران المستخدمة في هذه الدراسة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1.5 مل أنبوب Eppendorf | DENVILLE | C2170 | |
| 10 مل حقنة | BD | 302995 | |
| 16٪ فورمالديهايد | Polysciences | 18814-10 | |
| 70٪ إيثانول | VWR | RC2546.70-5 | لتنظيف أدوات التشريح |
| شمع التشريح الأسود | CR Scientific | C3541 | |
| زيت الذرة | Sigma | مذيب C8267 | لتاموكسيفين |
| DNeasy Blood & مجموعة المناديل | QIAGEN | 69506 | لعزل الحمض النووي من أذن الفأر |
| Dulbecco s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1X DPBS) ، درجة الحموضة 7.4 | Gibco | 14190-144 | |
| مقص ناعم | أدوات العلوم الدقيقة | 14059-11 | لقطع جلد الفأر وفتح القفص الصدري |
| Fisherbrand Economy Plain Glass Microscope Slides | Fisher Scientific | 12-550-A3 | |
| نظام غذائي عالي الكوليسترول عالي | حمية بحثية | D12108 | للحث على تصلب الشرايين |
| التصوير برنامج | المعاهد الوطنية للصحة | صورة J | القياس الكمي لآفة الأبهر |
| الأيزوبروبانول | VWR JT9079-5 | ||
| Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | لتنظيف شرائح المجهر الزجاجي |
| McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring | Scissors ROBOZ | RS-5602 | لفصل القلب والشريان الأورطي وفتح فروع |
| الشريان الأورطي والشريان الأورطيبرنامج التحكم في المجهر | Olympus | DP | Controller لتصوير الشريان الأورطي |
| دبابيس Minutien | أدوات العلوم الدقيقة | 26002-10 | |
| Needle-25G | BD | 305124 | |
| إسفنجة غير منسوجة | McKesson | 94442000 | |
| زيت أحمر O | Sigma | O-0625 | لتلطيخ آفات تصلب الشرايين |
| Pall Acrodisc حقنة معقمة مرشحات مع غشاء فائق | VWR | 28143-312 | لتصفية العمل زيت أحمر O محلول |
| مقص زنبركي | أدوات العلوم الدقيقة | 15021-15 | لتشريح وتنظيف الشريان الأورطي |
| البرنامج الإحصائي | GraphPad | Prism 8 | التحليل الإحصائي |
| المجهر المجسم | نيكون | SMZ1000 | لتشريح الشريان الأورطي |
| مجهر مجسم | أوليمبوس | SZX16 | لتصوير الشريان الأورطي |
| Tamoxifen | Sigma | T5648 | للحث على إعادة تركيب Cre-loxP |
| Tissue-Tek O.C.T مركب ، Sakura Finetek | VWR | 25608-930 | |
| Tweezer Style 4 | علوم المجهر الإلكتروني | 0302-4-PO | لقص جلد الفأر وفتح القفص الصدري |
| الملقط نمط 5 | علوم المجهر الإلكتروني | 0302-5-PO | للتشريح والتنظيف الشريان الأورطي |
المراجع
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
- Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).
- Plump, A. S., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
