يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

Porcine القرنية النسيج Explant لدراسة فعالية الهربس البسيط فيروس -1 مضادات الفيروسات

3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62195

⸱

سبتمبر 20, 2021

 ,  , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Illinois at Chicago, 2Department of Microbiology and Immunology, University of Illinois at Chicago

في هذه المقالة

ملخص

نحن نصف استخدام قرنية البورسين لاختبار فعالية الأدوية التجريبية المضادة للفيروسات.

الملخص

يمكن أن تسبب الفيروسات والبكتيريا مجموعة متنوعة من عيوب سطح العين والانحطاط مثل الجروح والقرحة من خلال عدوى القرنية. مع وجود التآكل المصلي الذي يتراوح بين 60-90٪ في جميع أنحاء العالم، وفيروس الهربس البسيط نوع-1 (HSV-1) يسبب عادة الآفات المخاطية في المنطقة الأورو-الوجهية التي تظهر أيضا كآفات والعمى المرتبطة بالعدوى. في حين أن الأدوية المضادة للفيروسات الحالية فعالة ، فإن ظهور مقاومة واستمرار الآثار الجانبية السامة يتطلب تطوير مضادات للفيروسات جديدة ضد هذا الممرض في كل مكان. على الرغم من أن التقييم في المختبر يوفر بعض البيانات الوظيفية المتعلقة بمضادات الفيروسات الناشئة ، إلا أنها لا تثبت تعقيد الأنسجة العينية في الجسم الحي. ومع ذلك ، في دراسات الجسم الحي مكلفة وتتطلب موظفين مدربين ، خاصة عند العمل مع العوامل الفيروسية. وبالتالي نماذج الجسم الحي السابق هي خطوات فعالة ولكنها غير مكلفة للاختبار المضاد للفيروسات. هنا نناقش بروتوكول لدراسة العدوى عن طريق HSV-1 باستخدام القرنيات البرسينية ex vivo وطريقة لعلاجها موضعيا باستخدام الأدوية المضادة للفيروسات الموجودة والجديدة. كما أننا نثبت طريقة إجراء فحص البلاك باستخدام HSV-1. ويمكن استخدام الأساليب المفصلة لإجراء تجارب مماثلة لدراسة العدوى التي تشبه مسببات الأمراض HSV-1.

المقدمة

الناس الذين يعانون من التهابات العين غالبا ما تتكبد فقدان البصر1. مع ارتفاع مستوى الانتشار المصلي في جميع أنحاء العالم، HSV المصابين الأفراد يعانون من التهابات العين المتكررة التي تؤدي إلى تندب القرنية، التهاب القرنية سترومال والأوعية الدموية الجديدة2،3،4،5. وقد أظهرت العدوى HSV أيضا أن يسبب أقل تواترا, مجموعة من الحالات الخطيرة بين المرضى الذين يعانون من نقص المناعة, غير المعالجة مثل التهاب الدماغ والمراضة الجهازية6,7,8. وقد أظهرت أدوية مثل Acyclovir (ACV) ونظائرها النيوكليوسيد نجاحا ثابتا في الحد من عدوى HSV-1 وحتى إعادة تنشيط السيطرة بعد الاستخدام المطول لهذه الأدوية يرتبط بالفشل الكلوي وتشوهات الجنين وعدم تقييد ظهور مقاومة الأدوية للسلالات الفيروسية المتطورة9و10و11و12و13. التعقيدات المرتبطة بالتهابات العين HSV-1، وقد درست سابقا في المختبر باستخدام monolayers والثقافات 3D من خلايا القرنية البشرية وفي الجسم الحي باستخدام عدوى عين مورين أو أرنب. في حين أن هذه النماذج في المختبر توفر بيانات هامة عن المكونات البيولوجية الخلوية للعدوى HSV-1، إلا أنها تفشل في محاكاة التعقيد المعقد للأنسجة القرنية ولا تفعل الكثير لإلقاء الضوء على الانتشار التشجري للفيروس14. في المقابل ، على الرغم من أن في أجهزة الجسم الحي هي أكثر الثاقبة في إظهار انتشار العدوى في القرنيات واستجابات التنشيط المناعي خلال عدوى HSV -1 ، فإنها تأتي مع التحذير من أنها تتطلب محققين مدربين ومرافق كبيرة لرعاية الحيوان للتغاضي عن التجارب.

هنا نستخدم القرنيات البورسينية كنموذج الجسم الحي السابق لفحص نظام الجرح الناجم عن العدوى HSV-1. يمكن دراسة كل من الصيدلة المحتملة لبعض الأدوية وكذلك الخلية والبيولوجيا الجزيئية لنظام الجروح الناجم عن العدوى من خلال ثقافات الأنسجة. ويمكن أيضا تعديل هذا النموذج لاستخدامها لالتهابات أخرى الفيروسية والبكتيرية كذلك. في هذه الدراسة، استخدمت القرنيات البورسينية لاختبار فعالية مضادة للفيروسات من جزيء صغير قبل السريرية، BX795. ويفضل استخدام القرنيات البورسينية بسبب سهولة الوصول وفعالية التكلفة. بالإضافة إلى ذلك، نماذج القرنية porcine هي نماذج جيدة من عيون الإنسان مع القرنيات يجري من السهل عزل، الحجم الكافي للعدوى والتصور وقوية للتعامل مع15. القرنيات البورسينية هي أيضا مماثلة لتعقيد نماذج القرنية البشرية في كل من نفاذية القرنية عبر وامتصاص الجهازية15. باستخدام هذا النموذج للدراسة، تمكنا من توضيح كيف BX795 يستحق المزيد من التحقيق كمثبط المختصة من عدوى فيروس HSV-1 ويضيف إلى الأدب لتصنيفه كمركب مضاد للفيروسات جزيء صغير محتمل16.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم توفير جميع أنسجة البورسين المستخدمة في هذه الدراسة من قبل منظمة خاصة تابعة لطرف ثالث ولم يتم تنفيذ أي من التعامل مع الحيوانات من قبل موظفي جامعة إلينوي في شيكاغو.

1. المواد

  1. الكواشف
    1. استخدام الكواشف التالية لالقياس البلاك: مسحوق ميثيلسليلوز، دولبيكو النسر المعدلة المتوسطة (DMEM)، مصل الأبقار الجنينية (FBS)، البنسلين والستريبتوميسين (P /S) لايقازيح البلاك.
    2. استخدام أقراص الكريستال البنفسجي والإيثانول (درجة البيولوجيا الجزيئية) لإعداد الكريستال البنفسجي حل لالتقايس البلاك.
  2. Vero وسائل الإعلام نمو الخلية -- DMEM وسائل الإعلام كلها
    1. افتح زجاجة وسائط DMEM داخل غطاء محرك الأنسجة. إزالة 55 مل من وسائل الإعلام من زجاجة باستخدام ماصة المصلية والتخلص منه. إضافة 50 مل من FBS من P / S إلى DMEM. يبرد عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
  3. وسائط فحص البلاك - مخزون من وسائط ميثيلسليلوز بنسبة 5٪
    1. قياس 2.5 غرام من مسحوق ميثيلسليلوز مع مغناطيس اثارة داخل زجاجة 500 مل وautclave ذلك. بعد زجاجة يبرد لدرجة حرارة الغرفة، واتخاذ 500 مل من وسائط كاملة DMEM تحتوي على 50 مل من FBS و 5 مل من P / S وإضافته إلى زجاجة تحتوي على ميثيلسليلوز.
    2. حرك هذا عند 4 درجة مئوية لمدة يومين باستخدام ستيرر مغناطيسي. يبرد عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
  4. إعداد وسائل الإعلام للقرنية البورسينية المقتطعة
    1. افتح زجاجة الحد الأدنى من الوسائط الأساسية (MEM) داخل غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة. تجاهل 10 مل من MEM من الزجاجة باستخدام ماصة مصلية.
    2. إضافة 5 مل من الأنسولين نقل السيلينيوم (ITS) و 5 مل من المضادة لليميكوتيك المضادات الحيوية (AA) إلى وسائل الإعلام والتبريد في 4°C.
  5. ماجستير والمخزون العامل من الكريستال البنفسجي:
    1. لجعل الكريستال البنفسجي الأسهم الحل، إضافة 1 غرام من مسحوق الكريستال البنفسجي إلى 100 مل من الإيثانول 20٪ في الماء. هذا المخزون (1٪ ث / الخامس الكريستال البنفسجي) يمكن تخزينها واستخدامها لمدة تصل إلى سنة عند تخزينها في مكان مظلم.
    2. لجعل مخزون العمل من هذا، إضافة 50 مل من الأسهم الأصلي الحل إلى 350 مل من الماء. إضافة 100mL من الإيثانول لهذا الحل لجعل 500 مل حل الكريستال البنفسجي العمل (0.1٪ ث / الخامس الكريستال البنفسجي).
      ملاحظة: كل هذه الحلول تحتاج إلى تخزين في الظلام.

2. الإجراء

  1. عزل القرنيات Porcine من عيون كاملة17
    1. عند تلقي عيون porcine من بائع مناسب ، قم بتخزينه على الجليد إذا كان هناك تأخير في معالجة الأنسجة كما هو مصور في الشكل 1.
    2. تأكد من استخدام معدات الحماية الشخصية وارتداؤها أثناء هذا الإجراء لتجنب التلوث وكذلك الحوادث الناجمة عن انسكاب الفكاهة الزجاجية.
    3. رش منطقة العمل مع الإيثانول 70٪ لتنظيف وتطهير. لضمان مساحة العمل مستقرة، ونشر غطاء مقاعد البدلاء والشريط أسفل الجانبين بشكل آمن كما هو في الصورة في الشكل 2.
    4. ضع عيون الخنزير على الشاش (الشكل 3). باستخدام شاش 50 ملم، عقد المقطع الخلفي (الشكل 4A) من عيون porcine كما هو مبين في الشكل 4B بيد واحدة.
    5. مع إبرة 30 G، وجعل بلطف كزة واحدة في ما يقرب من مركز سطح الظهارية للعين بعناية وضمان عدم وجود ضرر لستروما (الشكل 5). يجب أن تقتصر الوخزة على الظهارة (~ 100-200 ميكرومتر) لتجنب المشاركة السترومية.
    6. باستخدام شفرة معقمة حادة، وجعل شق صغير على تصلب على مسافة 1 ملم من القرنية. قطع حافة القرنية ضمان أن الفكاهة الزجاجية لا تسرب باستخدام عمل سريع وسلس الدورية من جهة (الشكل 6A). عن طريق عقد القرنية على حافة القرنية الصلبة مع ملاقط مسطحة، وقطع الأغشية الربط المتبقية من العين باستخدام شفرة(الشكل 6B).
    7. تأخذ القرنية ووضعها في لوحة 12 جيدا مضافا مع 2 مل من القرنية المتوسطة. وينبغي وضع القرنية التي تواجه، أظهرت في سلسلة من الخطوات في الأرقام 7A-D، الشكل 8).
    8. إضافة 5 ميكرولتر من محلول الفيروس الذي يحتوي على 5 × 105 وحدات تشكيل البلاك (PFU) من 17 GFP إلى الموقع الحطام على سطح القرنية. ضع اللوحة ذات ال 12 بئرا التي تحتوي على قرنيات بورسينية مصابة في حاضنة تحتويعلى 5٪ من ثاني أكسيد الكربون لمدة 72 ساعة.
    9. رش أي عيون إضافية لا تستخدم في التجربة مع 10٪ التبييض والتخلص منها بشكل آمن في أكياس المخاطر البيولوجية.
  2. التصور
    ملاحظة: يجب تصور الفيروس كل يوم قبل إضافة الأدوية.
    1. قم بتشغيل مجهر الاستريو ومصدر ضوء LED واترك مصباح الجهاز يسخن قبل تصوير القرنيات. حمل بعناية لوحة القرنيات إلى الصك دون الإخلال الحل. تغيير مرشح بحيث GFP (380-460 نانومتر) يستخدم للنظر في العينات. تعيين وقت التعرض إلى 500 مللي ثانية لالتقاط الصور.
    2. أولا، ضع لوحة القرنية تحت المجسم والتقاط الصور بأقل تكبير 7.5x. اتبع هذا الأمر مع سلسلة من الصور التكبير المتزايد (على سبيل المثال، 15x، 25x، 35x) بحيث يتم تصور جميع انتشار الفيروسية وتشكيل dendrite بوضوح
    3. تأكد من إعادة القرنيات المصابة مرة أخرى إلى حاضنة زراعة الأنسجة وحفظ جميع الصور التي تم التقاطها.
  3. القياس الكمي للعدوى بالفيروس
    ملاحظة: يجب تقييم عوارض الفيروسات من القرنيات البورسينية كل يوم لتحليل تأثير العلاج الدوائي.
    1. لقياس الفيروس، خلايا فيرو البذور في كثافة 5 × 105 من الخلايا لكل بئر إذا باستخدام لوحة 6-جيدا كما فعلت في هذه التجربة. القيام بذلك قبل يوم واحد من العدوى. احتضان الخلايا المطلية بين عشية وضحاها لضمان أنها التقاء لتحديد كمية الفيروس.
    2. Aliquot 500 ميكرولتر من وسائل الإعلام الحرة المصل في أنابيب الطرد الدقيق متعددة. إدراج القطن المعقم مسحة يميل مغموسة في أنابيب الوسائط الحرة المصل شغلها. مسحات القطن تحتاج إلى أن تكون مغموسة ورطبة لمدة 5 دقائق على الأقل قبل الاستخدام.
    3. دون إزعاج وسائل الإعلام الأساسية، نقل لوحة القرنية porcine المصابة إلى خزانة السلامة البيولوجية. باستخدام مسحات القطن الرطب، وجعل 3 الثورات في اتجاه عقارب الساعة و 3 الثورات عكس اتجاه عقارب الساعة في قطر 5 ملم من وسط القرنية porcine المصابة دون تطبيق الضغط المفرط.
    4. إدراج مرة أخرى مسحة القطن في وسائل الإعلام الحرة مصل شغل أنبوب الطرد الدقيق وتدويرها في اتجاه عقارب الساعة ومضادة عقارب الساعة 5 مرات. يجب قطع الطرف المعدني لمسحة القطن بحيث يتناسب تماما مع أنبوب الطرد المركزي الدقيق ويمكن إغلاق الغطاء.
    5. ضع أنبوب الطرد المركزي الدقيق الذي يحتوي على طرف القطن المسحات على آلة دوامة ودوامة بسرعة عالية لمدة دقيقة واحدة.
    6. إجراء القياس الكمي للفيروس عن طريق فحص البلاك على هذه العينات.
      ملاحظة: يجب إجراء خطوة القياس الكمي هذه في الأيام 2 و4 واختياريا في 6 أيام بعد العدوى.
  4. تحديد كمية الفيروسات بواسطة مقايسة البلاك
    ملاحظة: لإجراء فحص البلاك، تنمو ولوحة خلايا Vero في لوحة 6 جيدا وضمان التقاء 90٪ من الخلايا قبل بدء الفحص. استخدام قارورةالتقاء 75 سم 2 من هذه الخلايا. جميع الخطوات أدناه تحتاج إلى القيام بها داخل خزانة السلامة البيولوجية.
    1. غسل أحادي الطبقة التقاء خلايا Vero في القارورة مع 10 مل من الفوسفات الطازج العازلة المالحة (PBS) بعد أسبيراتينغ الوسط الثقافة. كرر خطوة الغسيل مرة أخرى مع برنامج تلفزيوني بعد أسبيراتينغ المجموعة الأولى من محلول الغسيل.
    2. إضافة 1 مل من 0.05٪ تريبسين إلى أحادي الخلية. احتضان القارورة عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. بالعين المجردة، تأكد من فصل الخلايا عن السطح الداخلي للقارورة. إذا لم يكن كذلك، انتظر لمدة 5 دقائق أخرى قبل فحص القارورة مرة أخرى. عندما تظهر الخلايا منفصلة، أضف 9 مل من الوسائط الكاملة إلى الطبقة الأحادية لضمان إزاحة الخلايا تماما من سطح القارورة.
    3. جمع جميع الخلايا من قارورة جنبا إلى جنب مع وسائل الإعلام بأكملها ووضعها في أنبوب الطرد المركزي 15 مل.
    4. لكل بئر من 6 لوحات الآبار التي تستخدم في فحص البلاك، استخدم 300 ميكرولتر من أنبوب الطرد المركزي. أعلى كل بئر من لوحة بئر 6 مع 2 مل من وسائل الإعلام بأكملها. اترك اللوحات في الحاضنة بين عشية وضحاها للسماح لها بالنمو وتشكيل طبقة أحادية التقاء في كل بئر.
    5. من أجل إجراء فحص البلاك ، يجب إجراء تخفيف متسلسل للعينات قبل تحديد كمية الفيروس.
    6. إجراء سجل101 أضعاف تخفيف الفيروس في أنابيب الطرد المركزي الصغيرة باستخدام وسائل الإعلام الحرة المصل حتى يتم التوصل إلى تخفيف من10-8. عندما في تخفيف10-3، نقل 1 مل من التخفيف إلى طبقة واحدة من الخلايا المطلية بعد التجسس وسائل الإعلام النمو على الخلايا من لوحة بئر 6، وهذا سيكون خطوة العدوى. احتضان اللوحة المصابة في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.
    7. يستنشق وسائل الإعلام العدوى القائمة، وغسل مع برنامج تلفزيوني مرتين بلطف لمعطف الخلايا وإضافة 2 مل من وسائل الإعلام المحملة ميثيلسليلوز لكل بئر لجميع الآبار 6. حضانة لمدة 72 ساعة أو حتى يمكن رؤية تشكيل لويحات. يمكن تحديد لويحات من خلال تشكيل فجوات صغيرة بين الخلايا في أحادية الخلية.
    8. أضف 1 مل من الميثانول ببطء إلى زاوية كل بئر، باستخدام الجدار كطرف توجيهي. احتضان لوحة 6 بئر في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. يستنشق ببطء محتويات كل بئر من لوحة دون إزعاج أو التحريض على أحادية الخلية.
    9. إضافة 1 مل من الكريستال البنفسجي حل العمل إلى كل بئر من 6 لوحة بئر، وضمان تغطية جميع الخلايا. احتضان لوحة بئر 6 في الظلام لمدة 30 دقيقة. تجاهل الحل البنفسجي الكريستال عن طريق قرصنة وتجفيف الآبار على ورقة ماصة.
    10. عد عدد لويحات في أعلى تخفيف جيدا لتحديد إجمالي محتوى الفيروس في حل البداية. كرر العملية مرتين لتأكيد التيتر الفيروسي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لفهم فعالية مضادات الفيروسات التجريبية ، يجب اختبارها على نطاق واسع قبل إرسالها للتجارب السريرية البشرية الحية. وفي هذا الصدد، يتعين تحديد مجموعات المراقبة الإيجابية والسيطرة السلبية والاختبار. وقد استخدمت منذ فترة طويلة Trifluorothymidine (TFT) كعلاج المفضل لعلاج التهاب القرنية الهربس موضعيا16. تستخدم كسيطرة إيجابية، ومجموعات القرنية TFT تعامل تظهر انتشار العدوى أقل. كتحكم سلبي ، استخدمنا DMSO أو التحكم في السيارة المذاب في PBS. BX795، الدواء التجريبي قبل السريري كان مجموعة الاختبار. تم تخصيص ما ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد أظهرت الأبحاث السابقة BX795 أن يكون لها دور واعد كعامل مضاد للفيروسات ضد عدوى HSV-1; عن طريق تثبيط كيناز تانك ملزمة 1 (TBK1)16. وقد لعبت كل من TBK1 وautphagy دورا في المساعدة على منع العدوى HSV-1 كما هو موضح على الخلايا الظهارية القرنية البشرية. وقد تبين BX795 لتكون فعالة إلى أقصى حد مع النشاط المضاد للفيروسات بتركيز 10μM واستخدام كل من تحليل لطخة الغربية وتحليل البلاك الفيروسية من البروتينات الفيروسية الرئيسية, وقد تبين BX795 لمنع عدوى HSV-1 مماثلة لنشاط TFT16. الدراسة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ولا يعلن صاحبا البلاغ عن أي تضارب في المصالح ولا عن مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من خلال منح المعاهد القومية للصحة (R01 EY024710، RO1 AI139768، وRO1 EY029426) إلى D.S. A.A. بدعم من منحة F30EY025981 من المعهد الوطني للعيون، المعاهد القومية للصحة. أجريت دراسة باستخدام القرنيات البورسينية التي تم الحصول عليها من شركة بارك للتعبئة، 4107 شارع آشلاند، نيو سيتي، شيكاغو، IL-60609

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
30 غرام إبر تحت الجلد.305128دينار
بحريني زجاجة زجاجية سعة 500 مل.توماس ساينتفيك844027
مضاد للفطريات والمضادات الحيوية (AA)15240096 جيبكوAliquot في أنابيب سعة 5 مل واحتفظ بها مجمدة حتى استخدام
دوامة Benchtop.الحيوية BioDotBDVM-3200
مع شهادة السلامة الحيوية المستوى 2 (BSL-2).Thermofisher ScientificHerasafe 2030i
Calgiswab 6 "مسحات قياسية معقمة من الكالسيوم ألجينات.22029501بيوريتان
- 25 سمBiologix BE70-1180 70-1250
كريستال بنفسجيسيجما ألدريتشC6158قم بتخزين البودرة في مكان مظلم
Dulbecco ' s النسر المعدل s متوسط - DMEMGIBCO41966029Store عند 4 درجات ؛ C حتى استخدام
الإيثانولسيجما ألدريتشE7023
مصل الأبقار الجنيني -FBSSigma AldrichF2442Aliquot في أنابيب 50 مل والاحتفاظ بالتجميد حتى استخدام
ملاقط ذات حواف مسطحة &ndash ؛ 2.هاروارد إنسترومنتس72-8595
المجمدات - 80 درجة مئوية -ثيرموفيشر العلمي13 100 790
صندوق شفرات طازج.توماس ساينتفيكTE05091
غوازجونسون وأمبير جونسون108 بوصة مربعة مجلد 12 طبقة
HSV-1 17GFPنمت فيسلالة منزلية أصلية من الدكتورة باتريشيا سبيرز ، جامعة نورث وسترن. GFP يعبر عن سلالة HSV-1 17
الأنسولين ، ترانسفيرين ، السيلينيوم - ITSGIBCO41400045Aliquot في أنابيب 5 مل والاحتفاظ بها مجمدة حتى استخدام
النمام المغناطيسي.مقص معدني توماس ScientificH3710-HS
.هاروارد إنسترومنتس72-8400
ماصات دقيقة من 1 إلى 1000 ميكرو لتر.توماس ساينتفيك1159M37
الحد الأدنى من الوسط الأساسي - MEMGIBCO11095080Store عند 4 درجات ؛ C حتى استخدام
OptiMEM متجر جيبكو31985047عند 4 درجات. ج حتى استخدام
البنسلين / الستربتومايسين.15140148 جيبكوAliquot في أنابيب سعة 5 مل واحتفظ بها مجمدة حتى استخدام
محلول ملحي للفوسفات -PBSGIBCO10010072يخزنها في درجة حرارة الغرفة
Porcine CorneasPark Packaging Co.، Chicago، ILطلب خاص حسب الطلب
أغطية مقاعد البدلاء - حسب الحاجة.Thermofisher ScientificS42400
الماصات المصليةThomas ScientificP7132 ، P7127 ، P7128 ، P7129 ، P7137
معدات السحب المصلية.توماس ساينتفيكإيزبيت برو
مجسم مجسمكارل زايسSteREO ديسكفري V20
مغناطيس تحريك.قوارير توماس ScientificF37120
لزراعة الأنسجة ، T175 سم 2.حاضنات توماس ScientificT1275
لزراعة الأنسجة التي يمكن أن تحافظ على 5٪ من ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة ؛ درجة الحرارة.Thermofisher ScientificForma 50145523
الألواح المعالجة بزراعة الأنسجة (6 آبار).توماس ساینتفيكT1006
Trypsin-EDTA (0.05٪) ، فينول أحمرGIBCO25-300-062Aliquot في أنابيب 10 مل وحفظها مجمدة حتى استخدام
خلايا Veroالثقافة من النوع الأمريكي ATCCCRL-1586
خزانة السلامة مكشطة خلايا مجموعة

المراجع

  1. Liesegang, T. J. Herpes simplex virus epidemiology and ocular importance. Cornea. 20 (1), 1-13 (2001).
  2. Farooq, A. V., Valyi-Nagy, T., Shukla, D. Mediators and mechanisms of herpes simplex virus entry into ocular cells. Current Eye Research. 35 (6), 445-450 (2010).
  3. Farooq, A. V., Shah, A., Shukla, D. The role of herpesviruses in ocular infections. Virus Adaptation and Treatment. 2 (1), 115-123 (2010).
  4. Xu, F., et al. Seroprevalence and coinfection with herpes simplex virus type 1 and type 2 in the United States, 1988-1994. Journal of Infectious Diseases. 185 (8), 1019-1024 (2002).
  5. Xu, F., et al. Trends in herpes simplex virus type 1 and type 2 seroprevalence in the United States. Journal of the American Medical Association. 296 (8), 964-973 (2006).
  6. Koganti, R., Yadavalli, T., Shukla, D. Current and emerging therapies for ocular herpes simplex virus type-1 infections. Microorganisms. 7 (10), (2019).
  7. Lobo, A. -, Agelidis, A. M., Shukla, D. Pathogenesis of herpes simplex keratitis: The host cell response and ocular surface sequelae to infection and inflammation. Ocular Surface. 17 (1), 40-49 (2019).
  8. Koujah, L., Suryawanshi, R. K., Shukla, D. Pathological processes activated by herpes simplex virus-1 (HSV-1) infection in the cornea. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (3), 405-419 (2019).
  9. Lass, J. H., et al. Antiviral medications and corneal wound healing. Antiviral Research. 4 (3), 143-157 (1984).
  10. Burns, W. H., et al. Isolation and characterisation of resistant Herpes simplex virus after acyclovir therapy. Lancet. 1 (8269), 421-423 (1982).
  11. Crumpacker, C. S., et al. Resistance to antiviral drugs of herpes simplex virus isolated from a patient treated with Acyclovir. New England Journal of Medicine. 306 (6), 343-346 (2010).
  12. Yildiz, C., et al. Acute kidney injury due to acyclovir. CEN Case Report. 2 (1), 38-40 (2013).
  13. Fleischer, R., Johnson, M. Acyclovir nephrotoxicity: a case report highlighting the importance of prevention, detection, and treatment of acyclovir-induced nephropathy. Case Rep Med. 2010, 1-3 (2010).
  14. Thakkar, N., et al. Cultured corneas show dendritic spread and restrict herpes simplex virus infection that is not observed with cultured corneal cells. Science Report. 7, 42559(2017).
  15. Pescina, S., et al. et al Development of a convenient ex vivo model for the study of the transcorneal permeation of drugs: Histological and permeability evaluation. Journal of Pharmaceutical Sciences. 104, 63-71 (2015).
  16. Jaishankar, D., et al. An off-target effect of BX795 blocks herpes simplex virus type 1 infection of the eye. Science Translational Medicine. 10, 5861(2018).
  17. Duggal, N., et al. Zinc oxide tetrapods inhibit herpes simplex virus infection of cultured corneas. Molecular Vision. 23, 26-38 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

مستنبت قرنية خنزيريةالفعالية المضادة للفيروساتنموذج خارج الجسم الحيعدوى القرنيةمقايسة اللويحاتأمراض سطح العينالتحديد الكمي للفيروساتعزل الأنسجةالتصوير المجسم
Porcine القرنية النسيج Explant لدراسة فعالية الهربس البسيط فيروس -1 مضادات الفيروسات
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.