هنا ، نقدم بروتوكولا لكسر عمود عظم الفخذ من فئران Wistar albino ومتابعة تطور الكالس. يمكن أن يساعد نموذج قطع عظم الفخذ هذا الباحثين في تقييم عملية التئام الكسور ودراسة كيفية تأثير الدواء على التئام الكسور.
مقالة منهجية
هنا ، نقدم بروتوكولا لكسر عمود عظم الفخذ من فئران Wistar albino ومتابعة تطور الكالس. يمكن أن يساعد نموذج قطع عظم الفخذ هذا الباحثين في تقييم عملية التئام الكسور ودراسة كيفية تأثير الدواء على التئام الكسور.
التئام الكسور هو عملية فسيولوجية تؤدي إلى تجديد عيوب العظام من خلال العمل المنسق لبانيات العظم والخلايا الآكلة للعظم. الأدوية الابتنائية العظمية لديها القدرة على زيادة إصلاح الكسور ولكن لها قيود مثل التكاليف المرتفعة أو الآثار الجانبية غير المرغوب فيها. يمكن تحديد إمكانات شفاء العظام للدواء في البداية من خلال الدراسات المختبرية ، ولكن هناك حاجة إلى دراسات في الجسم الحي للإثبات النهائي للمفهوم. كان هدفنا هو تطوير نموذج للقوارض العظمية لعظم الفخذ يمكن أن يساعد الباحثين على فهم تطور تكوين الكالس بعد كسر عمود عظم الفخذ ويمكن أن يساعد في تحديد ما إذا كان الدواء المحتمل له خصائص شفاء العظام. تم استخدام ذكور الفئران البيضاء Wistar albino البالغة بعد تصريح لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية. تم تخدير القوارض ، وفي ظل ظروف معقمة ، تم إنشاء كسور عرضية كاملة في الثلث الأوسط من مهاوي عظم الفخذ باستخدام قطع العظم المفتوح. تم تقليل الكسور وإصلاحها داخليا باستخدام أسلاك K داخل النخاع ، وسمح بحدوث التئام الكسور الثانوية. بعد الجراحة ، تم إعطاء المسكنات داخل الصفاق والمضادات الحيوية لمدة 5 أيام. الأشعة السينية الأسبوعية المتسلسلة تقييم تشكيل الكالس. تم التضحية بالفئران بناء على نقاط زمنية محددة إشعاعيا مسبقا ، وتم تحليل تطور الكالس المكسور إشعاعيا وباستخدام الكيمياء المناعية.
العظم هو نسيج ضام كثيف يتكون من الخلايا المكونة للعظام ، وبانيات العظم ، والخلايا الممتصة للعظام ، ناقضات العظم. التئام الكسور هو عملية فسيولوجية تؤدي إلى تجديد عيوب العظام من خلال العمل المنسق لبانيات العظم والخلايا الآكلة للعظم1. عندما يكون هناك كسر ، فإن نشاط العظم العظمي والعظم العظمي في موقع الكسر هي بعض العوامل المهمة التي تحدد شفاء العظام2. عندما ينحرف التئام الكسر عن مساره الطبيعي ، فإنه يؤدي إلى تأخر الاتحاد أو سوء الاتحاد أو عدم الاتحاد. يقال إن الكسر يكون في حالة عدم الاتحاد عندما يكون هناك فشل في اتحاد الكسر لمدة 9 أشهر ، مع عدم وجود تقدم في الإصلاح في آخر 3 أشهر3. ما يقرب من 10٪ -15٪ من جميع الكسور تعاني من تأخير في الإصلاح قد يتطور إلى nonunion4. معدل عدم الاتحاد لجميع الكسور هو 5٪ -10٪ ويختلف باختلاف العظم المعني وموقع الكسر5.
يشتمل النظام الحالي لعلاج عدم اتحاد الكسور على طرائق جراحية و / أو طبية. في الوقت الحالي ، يمكن التغلب على الكسور المتأخرة أو غير المنتظمة عن طريق الاستراتيجيات الجراحية مثل تطعيم العظام. ومع ذلك ، فإن تطعيم العظام له حدوده ومضاعفاته مثل توافر أنسجة الكسب غير المشروع ، وألم موقع المتبرع ، والمراضة ، والعدوى6. يشمل العلاج الطبي أدوية الابتنائية العظمية مثل البروتين المورفولوجي العظمي (BMP) وتيريباراتيد (نظير هرمون البارات). عوامل الابتنائية العظمية المستخدمة حاليا لديها القدرة على زيادة إصلاح الكسور ولكن لها قيود مثل التكاليف الباهظة أو الآثار الجانبية غير المرغوب فيها7. وبالتالي ، هناك مجال لتحديد بدائل غير جراحية فعالة من حيث التكلفة لشفاء العظام. يمكن تحديد إمكانات شفاء العظام للدواء في البداية من خلال الدراسات المختبرية ، ولكن هناك حاجة إلى دراسات في الجسم الحي للإثبات النهائي للمفهوم. يجب تقييم الدواء المعروف بتعزيز التئام العظام في المختبر ، وإذا وجد واعدا ، يمكن استخدامه في دراسات النماذج الحيوانية في الجسم الحي . إذا أثبت الدواء أنه يعزز تكوين العظام وإعادة تشكيلها في النموذج الحي ، فيمكن أن ينتقل إلى المرحلة التالية (أي التجارب السريرية).
يعد تقييم التئام الكسور في الحيوانات خطوة منطقية إلى الأمام لتقييم عامل جديد تم تقديمه لشفاء العظام قبل أن يخضع لتجارب بشرية. بالنسبة لدراسات النموذج الحيواني في الجسم الحي لالتئام الكسور ، أصبحت القوارض نموذجاشائعا بشكل متزايد 8. ولدت نماذج القوارض اهتماما متزايدا بسبب انخفاض تكاليف التشغيل ، والحاجة المحدودة للمساحة ، والوقت الأقل اللازم لشفاء العظام9. بالإضافة إلى ذلك ، تحتوي القوارض على مجموعة واسعة من الأجسام المضادة والأهداف الجينية ، والتي تسمح بإجراء دراسات على الآليات الجزيئية لشفاء العظام وتجديدها10. سلط اجتماع توافقي الضوء بشكل شامل على العديد من نماذج شفاء عظام الحيوانات الصغيرة وركز على المعلمات المختلفة التي تؤثر على شفاء العظام ، بالإضافة إلى التأكيد على العديد من نماذج كسور الحيوانات الصغيرة والغرسات11.
يمكن تقسيم نماذج الكسر الأساسية على نطاق واسع إلى نماذج مفتوحة أو مغلقة. تستخدم نماذج الكسور المغلقة قوة ثني من ثلاث أو أربع نقاط على العظم ولا تتطلب نهجا جراحيا تقليديا. أنها تؤدي إلى كسور مائلة أو حلزونية ، تشبه كسور العظام الطويلة في البشر ، ولكن عدم توحيد موقع الكسر وأبعاده قد يكون بمثابة عامل مربك فيها12. تتطلب نماذج الكسور المفتوحة الوصول الجراحي لقطع العظم العظمي ، وتساعد على تحقيق نمط كسر أكثر اتساقا في موقع الكسر ، ولكنها ترتبط بتأخر الشفاء مقارنة بالنماذج المغلقة13. يبقى اختيار العظام المستخدمة لدراسة التئام الكسور بشكل أساسي الساق وعظم الفخذ نظرا لأبعادهما وإمكانية الوصول إليهما. عادة ما يكون اختيار موقع الكسر هو الحجاب الحاجز أو الميتافيزيس. يتم اختيار منطقة metaphyseal خصيصا في الحالات التي يتم فيها دراسة التئام الكسور في مواضيع هشاشة العظام ، حيث أن metaphysis أكثر تأثرا بهشاشة العظام14. يمكن استخدام العديد من الغرسات مثل المسامير داخل النخاع والمثبتات الخارجية لتثبيت الكسر11,15.
كان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير نموذج بسيط وسهل المتابعة للقوارض يمكن أن يساعد الباحثين ليس فقط على فهم تطور الكالس بعد كسر عظم الفخذ ولكن يمكن أن يساعد في تحديد ما إذا كان الدواء المحتمل له خصائص شفاء العظام من خلال فهم الآلية التي يعمل بها.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إجراء التجارب على الحيوانات بعد الحصول على الموافقة الأخلاقية من لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية (IAEC) ، AIIMS ، نيودلهي ، الهند (286 / IAEC-1/2021).
1. إجراء ما قبل الجراحة
2. إجراء جراحي لإنشاء كسر عرضي كامل من خلال قطع العظم المفتوح
ملاحظة: استخدم غرفة عمليات مخصصة مزودة بطاولة عمليات ودرجة حرارة محيطة مثالية (26 درجة مئوية) لتنفيذ الإجراء.
3. رعاية ما بعد الجراحة
4. الإجراء الإشعاعي
5. القتل الرحيم للحيوانات واسترجاع الكالس
6. إزالة الكلس من العظام وأنسجة الكالس
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أجريت هذه الدراسة لتطوير نموذج قطع عظم الفخذ في فئران Wistar albino. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم التئام العظام ، وكذلك التأثير العظمي لدواء ابتنائي عظمي واعد في التئام العظام. تم اتباع الاحتياطات والبروتوكولات الجراحية القياسية. تم استخدام العباءات المعقمة والستائر والمعدات الجراحية لهذا الإجراء (الشكل 1). تم تعقيم المعدات (الجدول 1) قبل 48 ساعة من الجراحة. تم استخدام التخدير والمسكنات والمضادات الحيوية وفقا للبروتوكول لضمان إبقاء الحيوانات خالية من الألم والعدوى في جميع...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تصف هذه الطريقة بوضوح التفاصيل اللازمة لتطوير نموذج قطع العظم للكسر في فئران Wistar albino. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم التأثير العظمي لدواء ابتنائية عظمي واعد في التئام الكسور ، وكذلك فهم تعقيدات التئام العظام. الميزة البارزة لهذه الطريقة هي أنها بسيطة ولا تحتاج إلى الكثير من الوقت أو المعدات المتطورة. في هذه الطريقة ، تم اختيار ذكور الفئران البيضاء Wistar البالغة كنموذج للقوارض للتجارب. تم اختيار الجنس الموحد لإزالة أي عامل مربك على شفاء العظام المتعلق بالهرمونات الجنسية.
اتبعت هذه الدرا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى أي من المؤلفين أي تضارب في المصالح أو أي إفصاحات مالية أخرى.
يود المؤلفون أن يشكروا المجلس المركزي للبحوث في المعالجة المثلية (CCRH) ، وزارة AYUSH ، حكومة الهند ، على تمويل البحوث. يعرب المؤلفون عن امتنانهم لمساعدة ودعم مرفق الحيوان المركزي ، AIIMS ، نيودلهي ، لمساعدتهم ودعمهم في التجارب على الحيوانات و CMET ، AIIMS ، نيودلهي ، لمساعدتهم ودعمهم في التصوير الفوتوغرافي والفيديو.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الكحول | رامان & أمبير Weil Pvt. Ltd ، مومباي ، ماهاراشترا ، الهند | MFG / MD / 2019 / 000189 | المطهر لليدين الستيريليوم |
| ؛ | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | G.105.05S | 5 "، مقبض |
| مستقيم Bard-Parker | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | G.103.03 | الحجم رقم 3 |
| حل البيتادين | Win-medicare نيودلهي ، الهند | UP14250000001 | 10٪ وزن / فول محلول اليود بوفيدون |
| ضام جلد مخلب القط ؛ | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | 908.S | مختبرات أبحاث |
| EDTA | Sisco الصغيرة Pvt. المحدودة ، ماهاراشترا ، الهند | 43272 | ملح ثنائي الصوديوم |
| Eosin | Sigma Aldrich ، Merck Life Sciences Pvt Ltd ، مومباي ، ماهاراشترا ، الهند | 115935 | لتحضير محلول التلوين ؛ |
| ملقط (عادي) | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | 115.06 | 6 "، |
| ملقط عادي (مسنن) | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | 117.06 | 6 "، مختبرات |
| الفورمالديهايد | المسننة سيسكو Pvt. المحدودة ، ماهاراشترا ، الهند | 84439 | لإعداد الفورمالين المحايد المخزن ؛ |
| Haematoxylin | Sigma Aldrich ، Merck Life Sciences Pvt Ltd ، مومباي ، ماهاراشترا ، الهند | 104302 | لتحضير محلول التلوين ؛ |
| سديم المطرقة | الجراحية ، غوجارات ، الهند | 401.M | |
| حقن سيفوروكسيم | أكومنتيس للرعاية الصحية المحدودة ، ثين ، ماهاراشترا ، الهند | 48 / UA / SC / P-2013 | سيفوروكسيم الصوديوم IP ، 1.5 جم / قارورة ؛ |
| حقن الكيتامين | باكستر المستحضرات الصيدلانية الهند الخاصة المحدودة ، غوجارات ، الهند | G / 28-B / 6 | هيدروكلوريد الكيتامين IP ، 50 مجم / مل & nbsp ؛ |
| حقن زيلازين | الهندية المناعية المحدودة ، حيدر أباد ، تيلانجانا ، الهند | 28 / RR / AP / 2009 / F / G | زيلازين هيدروكلوريد USP ، 20 مجم / مل |
| حقن مختبرات ليجنوكائين | جاكسون Pvt Limited ، البنجاب ، الهند & nbsp ؛ | 1308-B | 2٪ ليجنوكائين هيدروكلوريد IP ، 21.3 مجم / مل |
| حقن ترامادول ؛ | إنتاس للمستحضرات الصيدلانية المحدودة ، أحمد أباد ، غوجارات ، الهند | MB / 07/500 | ترامادول هيدروكلوريد IP ، 50 مجم / مل |
| K-wire ؛ | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | 166 (1 مم) | 12 بوصة ، |
| مثقاب ميكانيكي مزدوج النهاية لإدخال K-wire | & lrm ؛ Bosch, Germany | 06019F70K4 | GSR 120-LI مقص قطع |
| Metzenbaum المهنية | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | G.121.06S | 6 "، مستقيم |
| حامل إبرة | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | G.108.06 | 6 "، مرهم العيون المستقيم |
| ؛ | GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited ، بنغالورو ، كارناتاكا ، الهند | KTK / 28a / 467/2001 | نيومايسين ، كبريتات البولي ميكسين ب والباسيتراسين مرهم الزنك للعين USP |
| Osteotome (إزميل) | السديم الجراجيكي ، غوجارات ، الهند | 1001.S.10 | 10 مم ، مصعد السمحاق المستقيم |
| ؛ | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | 918.10.S | 10 مم ، كماشة مستقيمة |
| نائب الرئيس قاطع الأسلاك | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | 604.65 | |
| رينولد s مقص | السديم الجراحي ، غوجارات ، الهند | G.110.06S | 6 "، النظام |
| الغذائي شبه الاصطناعي القياسي المستقيم ؛ | صناعات أشيرفاد ، شانديغار ، الهند | لا يوجد رقم كتالوج متاح | التركيب التفصيلي المقدم في المواد المستخدمة |
| كوب فولاذي لحفظ البيتادين للتطبيق | الشراء المحلي | لا يوجد رقم كتالوج متاح | |
| صينية فولاذية مع غطاء لأدوات التعقيم | الشراء المحلي | لا يوجد رقم كتالوج متاح | |
| شاش معقم | Ideal Healthcare Industries ، دلهي ، الهند & نب سب. | E(0047)/14/MNB/7951 | معقم، 5 سم × 5 سم، 12 رقائق |
| كتلة رخامية معقمة لدعم | الشراء المحلي | لا يوجد رقم كتالوج متاح | مصنع محليا؛ |
| حقنة وإبرة قابلة للتعقيم (1 مل) | Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India | REF 303060 | 1 مل حقنة معقمة مع 26 جم × 1/2 (0.45 مم × 13 مم) |
| حقنة وإبرة إبرة (2 مل) | Becton Dickinson India Pvt. Ltd. ، هاريانا ، الهند | REF 307749 | مل حقنة معقمة مع 24 جم × 1 بوصة (0.55 مم × 25 مم) |
| حقنة وإبرة إبرة (10 مل) ؛ | محاقن هندوستان & الأجهزة الطبية المحدودة فريد أباد, الهند | 334-B (H) | 10 مل حقنة معقمة مع 21 جم × 1.5 بوصة (0.80 مم × 38 مم) |
| شفرات جراحية (مقاس رقم 15) | باراماونت سورجيميد المحدودة ، نيودلهي ، الهند لشركة Medline Industries Inc ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية | المرجع | معقمة تستخدم لمرة واحدة |
| (حجم رقم 24) | Paramount Surgimed Ltd ، نيودلهي ، الهند لشركة Medline Industries Inc ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية | المرجع | معقمة ، |
| الفردي Healthium Medtech Pvt Ltd ، بنغالور ، كارناتاكا ، الهند | SN 3318 | 4-0 ، 16 مم ، 3/8 إبرة قطع دائرية ، خياطة أحادية الشعيرات البولي أميد ؛ | |
| كتلة الشمع في صينية الألومنيوم | مصنع محليا | لا يوجد رقم كتالوج متاح | 30 سم × 30 سم × 4 سم صينية ألومنيوم تحتوي على شمع (لمنع من الانزلاق) |
| آلة الأشعة | السينية Philips India Ltd ، Gurugram ، هاريانا | SN19861013 | الموديل: Philips Digital Diagnost R 4.2 & nbsp ؛ |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن