مقالة منهجية

تحليلات شبكة الحمض النووي الريبي الداخلية المتنافسة في الفئران المصابة بانسداد الشريان الدماغي الأوسط بناء على lncRNA و miRNA وتعبير mRNA

668 مشاهدات

DOI:

10.3791/68876

أكتوبر 7, 2025

في هذه المقالة

ملخص

استخدمت هذه الدراسة تحليلات المعلوماتية الحيوية والتحقق التجريبي للتحقيق بشكل منهجي في الأدوار التنظيمية والآليات الأساسية للحمض النووي الريبي الطويل غير المشفر (lncRNAs) التي تعمل كحمض النووي الريبي الداخلي التنافسي (ceRNAs) في السكتة الدماغية الإقفارية.

الملخص

تهدف هذه الدراسة إلى التحقيق في الأدوار التنظيمية والآليات الأساسية ل lncRNAs التي تعمل كحمض الريبوز المرئي في السكتة الدماغية الإقفارية. بناء على فرضية ceRNA ، تم تحديد lncRNAs و miRNAs و mRNAs كمكونات لشبكة تنظيمية تشارك في السكتة الدماغية. تم اختيار lncRNAs الرئيسية من الشبكة الفرعية الناتجة لتحليلها مفصلا. كشف تحليل الإثراء الوظيفي باستخدام علم الوجود الجيني ورسم خرائط المسار من خلال موسوعة كيوتو للجينات والجينومات عن تفاعلات حاسمة داخل شبكة ceRNA المرتبطة بالحمض النووي الريبي الشمالي. تم التحقق من صحة المسارات الرئيسية ، بما في ذلك إشارات الكالسيوم ، وإشارات تقاطع الفجوة ، وتفاعل مستقبلات الترابط النشط العصبي ، باستخدام تحليل اللطخة الغربية. تألفت شبكة ceRNA المنشأة من 334 lncRNAs و miRNAs و mRNAs ، مع تحليل التخصيب الوظيفي الذي يتنبأ بأدوارها البيولوجية. تم اختيار ثلاثة lncRNAs ذات مركزية عالية الدرجة لبناء شبكة فرعية تمثيلية ceRNA. كشف تحليل اللطخة الغربية أنه بالمقارنة مع المجموعة الزائفة ، فإن مستويات التعبير عن البروتينات الرئيسية - CaMKII و calmodulin و CX36 و PKC و CX43 و GRIA3 و GABRA6 و NPY1R تم تنظيمها بشكل كبير في مجموعة النموذج ، في حين أن التعبير عن CaN كان منظما بشكل ملحوظ (P < 0.05). تشير هذه النتائج إلى أن lncRNAs تشارك بشكل كبير في التسبب في السكتة الدماغية. في الختام ، تؤدي lncRNAs التي تعمل كحمض سيرنا أدوارا تنظيمية حاسمة في التسبب في السكتة الدماغية الإقفارية.

المقدمة

السكتة الدماغية الإقفارية ، وهي اضطراب عصبي سائد ، تؤدي إلى تلف دائم في الدماغ أو إعاقة طويلة الأمد أو الوفاة1،2،3،4. تشكل MicroRNAs (miRNAs أو miR) ، والحمض النووي الريبي الطويل غير المشفر (lncRNAs) ، والحمض النووي الريبي المرسال (mRNA) شبكات تنظيمية بوساطة الحمض النووي الريبي5،6،7،8. تنظم هذه الجزيئات الوظائف الخلوية من خلال آليات معقدة مختلفة ،ويتم التعرف....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على التجارب على من قبل لجنة الأخلاقيات التجريبية بجامعة آنهوي للطب الصيني (رقم الترخيص: AHUCM-rats-2024006) وتم إجراؤها وفقا للإرشادات المؤسسية ومعايير استخدام في JoVE. تم استخدام أربعين من الذكور من فئران SD من الدرجة SPF (220 جم ± 30 جم) في هذه الدراسة. يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.

1. التجارب

  1. إيواء في مركز تجارب في ظل ظروف تجريبية قياسية. حافظ على دورة ضوئية / داكنة لمدة 12 ساعة ، وقم بتغيير الفراش يوميا ، ووفر الوصول المجاني إلى الطعام والماء.
  2. القتل الرحيم للحيوانات في نهاية التجربة عن طريق إعطاء 150 مجم / كجم من ب....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تظهر النتائج التجريبية للتحقق من معدل النجاح لكل مجموعة من نماذج الفئران في الشكل 1. بعد النمذجة ، تم إجراء تسجيل الوظيفة العصبية على الفئران (الشكل 1 أ). أظهرت المجموعة النموذجية عجزا عصبيا شديدا ، وتم تضمين أولئك الذين حصلوا على درجات تتراوح من 1 إلى 3 في التجارب اللاحقة. يوضح الشكلان 1 ب و ج نتائج تلطيخ TTC ، حيث يمثل اللون الأحمر أنسجة المخ الطبيعية والأبيض يشير إلى المنطقة المصابة بالاحتشاء. أظهرت المجموعة النموذجية احتشاءا دما.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

للتحقيق في الآليات الجزيئية الكامنة وراء التسبب في السكتة الدماغية وتحديد الأهداف التشخيصية والعلاجية المحتملة ، تم إجراء تحليلات RNA-Seq وتحليلات RNA-Seq الصغيرة (sRNA-Seq) على أنسجة المخ من الفئران التي تتبع MCAO. تهدف هذه الدراسة في المقام الأول إلى التحقيق في الشبكات التنظيمية المعقدة التي تتضمن lncRNAs و miRNAs و mRNAs. تم إجراء تحليل شامل لمجموعات بيانات RNA-Seq و sRNA-Seq من أنسجة دماغ الفئران التي يسببها MCAO لتوضيح الشبكة التنظيمية lncRNA-miRNA-mRNA. تم إنشاء تفاعل شبكي واسع الن.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يذكر المؤلفون أنه لا توجد مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذه المخطوطة من قبل مشروع تمويل المرشح الاحتياطي للقادة الأكاديميين في مقاطعة آنهوي (رقم 2022H287) ، ومشروع مفتاح البحوث الصحية في مقاطعة آنهوي (المرجع: AHWJ2022a013) ، ومشروع مفتاح أبحاث العلوم الطبيعية بكلية مقاطعة آنهوي (رقم 2023AH050745) ، ومشروع المواهب المتميزة للصحة والصحة في مقاطعة آنهوي (NO. ahsjhmypygc20230074).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
محلول تلطيخ TTC 2٪ (وزن / حجم)بكين كانجل استنساخ التكنولوجيا الحيوية المحدودة ؛20230805تلطيخ TTC
4٪ (وزن / حجم) محلول بارافورمالديهايدبيوتايمص 0099أنسجة المخ الثابتة
40 ذكر من فئران SD من الدرجة SPFHagzhou Ziyuan مختبر تربية المحدودةSCXK [zhe] 2024-0004المختبر
5٪ حليب مجفف منزوع الدسمالعلم النباتيطفر1519البنك الدولي
نظام الرحلان الكهربائي الاغاروزبكين Liuyi التكنولوجيا الحيوية المحدودةDYCP-44Pالبنك الدولي
أداة التعرض التلقائيشنغهاي Peiqing التكنولوجيا المحدودةشبيبة - M6Pالبنك الدولي
مقياس التعريض التلقائيشنغهاي Peiqing التكنولوجيا المحدودةشبيبة - M6Pالبنك الدولي
صانع الثلج الأوتوماتيكيمدينة تشانغشو Xueke الأجهزة الكهربائية المحدودةIMS-20البنك الدولي
كالمودولينتقارب49ب2443البنك الدولي
كامكيتقارب14G0796البنك الدولي
الطرد المركزيHaimen Qilinbeier أداة التصنيع المحدودةLX 300البنك الدولي
حزمة clusterProfilerالموصل الحيويclusterProfiler_4.17تحليلات الإثراء
سي اكس 36زينبيوN24AP24البنك الدولي
سي اكس 43زينبيوM08NO01البنك الدولي
طقم التلألؤ الكيميائي فائق الحساسية ECLبيوشاربBL520Bالبنك الدولي
فرن تجفيف الهواء الكهربائي بالحرارةشنغهاي Sanfa الصك العلمي المحدودة[دتغ-9070]البنك الدولي
جهاز الرحلان الكهربائيشنغهاي Tianeng التكنولوجيا المحدودة (تانون)EPS300البنك الدولي
جهاز الرحلان الكهربائيشنغهاي تانون للعلوم وأمبير شركة التكنولوجيا المحدودةEPS300البنك الدولي
خزان الرحلان الكهربائيشنغهاي تانون للعلوم وأمبير شركة التكنولوجيا المحدودة[في-180]البنك الدولي
غابرا6تقارب46 فولت 5371البنك الدولي
الماعز المضادة للفأر IgGز-بيو142637البنك الدولي
الماعز المضادة للأرانب IgGز-بيو139931البنك الدولي
غريا 3تقارب0C33051البنك الدولي
جهاز طرد مركزي مبرد عالي السرعةشركة Anhui Jiawen للمعدات الصك المحدودةجي دبليو -3021 إتش آرالبنك الدولي
نظام هاي سيك 2500إيلوينا/تسلسل الحمض النووي الريبي عالي الإنتاجية
برنامج ImageJالمعاهد الوطنية للصحةImageJ 1.54kتلطيخ TTC
المحرض التدفئة المغناطيسيةمدينة تشانغتشو ومصنع الأدواتجي جي -79-1البنك الدولي
ماصة دقيقةألمانيا Eppendorf/البنك الدولي
جهاز طرد مركزي صغير بدرجة حرارة عاديةشركة Haimen Qi Limber Instrument Manufacturing Co.، LTD. LX300LX300البنك الدولي
NPY1Rتقارب2D38248البنك الدولي
ماصهإيبندورف0.5-10ulالبنك الدولي
بي كي سيتقارب17 [إ3745]البنك الدولي
علامة البروتين الملطخة مسبقابيوشاربBL712Cالبنك الدولي
غشاء PVDFميليبورIPVH00010البنك الدولي
طقم إزالة الحمض النووي الريبي الريبي Ribo-ZeroIllumina ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية/استخراج الحمض النووي الريبي
محلل ريبابيوشاربBL504 أالبنك الدولي
بنتوباربيتال الصوديومبكين ثينك فار التكنولوجيا المحدودةميركمخدر
أداة غشاء النقلشنغهاي تانون للعلوم وأمبير شركة التكنولوجيا المحدودة[في-186]البنك الدولي
جهاز الغشاءشنغهاي Tianeng التكنولوجيا المحدودة (تانون)[في-186]البنك الدولي
&beta ؛ - أكتينز-بيو19AW0505البنك الدولي

المراجع

  1. Marquez-Ortiz, R. A., et al. Neuroimmune support of neuronal regeneration and neuroplasticity following cerebral ischemia in juvenile mice. Brain Sci. 13 (9), 1337(2023).
  2. Han, M., Ma, B., She, R., Xing, Y., Li, X.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

lncRNA miRNA ceRNA

مقالات ذات صلة