مقالة منهجية

تحضير خرزات تعويضية اقتصادية وشاملة متوافقة مع الأجسام المضادة متعددة الأنواع

DOI:

10.3791/70114

⸱

أبريل 17, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Pathology, The Second Hospital of Tianjin Medical University, 2Center for gene and immunotherapy, The Second Qilu Hospital of Shandong University, 3Department of Radiology, The First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University & Shandong Provincial Qianfoshan Hospital, 4Department of Urology, The second hospital of Tianjin Medical University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول طريقة فعالة من حيث التكلفة لتحضير خرزات تعويض متوافقة مع عدة أنواع لتعويض التألق في قياس تدفق الخلايا باستخدام كرات البوليسترين المترابطة مع البروتينات A/G/L المعاد تركيبها.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول طريقة فعالة من حيث التكلفة وقابلة للتكرار لتحضير خرزات تعويض متوافقة مع عدة أنواع لتعويض التألق في قياس تدفق الخلايا متعددة الألوان. هنا، تم التعبير عن بروتين ارتباط الغلوبولين المناعي A/G/L (بروتين A/G/L) الذي يحتوي على عدة مجالات ارتباط بغلوبولين مناعي في الإشريكية القولونية (E. coli)، وتم تنقيه باستخدام كروماتوغرافيا ألفة النيكل، وتم ربطه تساهميا مع ميكروكرات البوليسترين الكربوكسيلية عبر كيمياء EDC/NHS. ترتبط الخرزات الناتجة بالأجسام المضادة من أنواع وفئات فرعية متنوعة، مولدة إشارات فلورية قوية ومميزة مناسبة لإعداد التعويض. توفر هذه النتائج إرشادات عملية لاختيار قطر الخرزة وتحميل البروتين لتحقيق شدة فلورية مناسبة لمتطلبات التعويض المختلفة. يشير التنفيذ الناجح للبروتوكول بتنقية فعالة للبروتين وذروة فلورية واضحة وعالية الشدة للخرزات المترافقة مقارنة بخرزات التحكم أثناء تحليل قياس تدفق الخلية. يتيح هذا النهج البسيط والقابل للتوسع التحضير الروتيني لحبيبات تعويض مستقرة ومتعددة الاستخدامات في المختبرات القياسية، مما يقلل التكلفة ويحسن المرونة لتطبيقات قياس تدفق الليتومترية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أصبح قياس تدفق الخلايا أداة لا غنى عنها في علم المناعة، وعلم الأحياء الخلوي، والأبحاث السريرية للتحليل متعدد المعلمات لتجمعات الخلايا 1,2,3. تحد حرج في قياس التدفق متعدد الألوان التقليدي هو التدفق الفلوري، حيث يتداخل طيف انبعاث الفلوروكروم مع قنوات كاشف متعددة، مما يؤدي إلى تلوث الإشارة وتفسير خاطئ 4,5. لذلك، فإن التعويض المناسب ضروري لتفسير البيانات بدقة.

تقليديا، يتم إعداد ضوابط التعويض باستخدام خلايا مصبوغة بلون واحد. ومع ذلك، فإن أعداد الخلايا المحدودة، والتعبير المتغير عن المستضدات، والارتباط المختلف للأجسام المضادة بالخلايا يشكل تحديات6. وبالتالي، ظهرت الخرزات الصناعية المعدلة لربط الأجسام المضادة المتقاربة بالفلوروكروم كبديل عملي 7,8. تقدم الخرزات مزايا القدرة الثابتة على الارتباط، وكثافة الفلورة العالية، والاستقلالية عن مستويات تعبير المستضدات الخلوية9. مقارنة بالمواد الذاتية ذات النوع الواحد أو المقيدة ب FC، فإن دمج عدة مجالات ربط لغلوبولين مناعي (البروتين A، G وL) يوسع تغطية الأنواع وتوافق أشكال الأجسام المضادة، مما يسمح بتحضير خرزة واحدة لاستيعاب الأجسام المضادة المتقاربة بالفلوروكروم المتنوعة.

من بين الخرزات المستخدمة للتعويض، يوفر اقتران البروتينات المرتبطة بالغلوبولين المناعي مثل بروتين A، بروتين G، وبروتين L توافقا واسعا مع الأنماط النظيرية للأجسام المضادة من أنواع مختلفة. يرتبط البروتين A وG بمنطقة Fc للعديد من فئات IgG، بينما يرتبط بروتين L بسلاسل κ الضوئية من الغلوبولينات المناعية وبالتالي يوسع قدرة الارتباط بشظايا Fab والأجسام المضادة أحادية السلسلة10,11.

على الرغم من توفر خرزات تعويض تجارية، إلا أن تكلفتها المرتفعة نسبيا قد تكون باهظة للمختبرات ذات الميزانيات المحدودة، مما يحد من تطبيقها الواسع3. نظرا لهذه التحديات، هناك حاجة إلى منصات خرز مرنة وقابلة للتخصيص تتيح للباحثين تحديد حجم الخرز، ومجال ارتباط الأجسام المضادة، وأنواع الأجسام المضادة المستخدمة في ضوابط التعويض. هدف هذا البروتوكول هو توفير طريقة بسيطة واقتصادية وقابلة للتكرار لتحضير خرزات تعويضية متوافقة مع عدة أنواع لقياس تدفق الخلايا متعددة الألوان. يصف هذا البروتوكول تصميم وتعبير وتنقية بروتين اندماج مؤتلف يحتوي على عدة مجالات ارتباط بغلوبولين مناعي من البروتينات A وG وL، يليه اقترافه التساهمي مع خرزات بوليسترين معدلة بالكربوكسيل بأقطار محددة.

يوضح البروتوكول التصميم الجزيئي لبروتين الاندماج، وتعبيره وتنقيته في الإشريكية القولونية، وتحضير كواشف تعويضية تعتمد على الخرزات المتوافقة مع عدة أجسام مضادة متقاربة بالفلوروكروم. يهدف هذا البروتوكول إلى المختبرات التي تجري قياس تدفق الخلايا متعدد الألوان عبر بيئات بحثية متنوعة، بما في ذلك علم المناعة والأورام والدراسات الانتقالية، خاصة حيث تتطلب تقليل التكاليف، والتوافق بين الأنواع، وضوابط تعويض مرنة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: جهز جميع المخازن المؤقتة والكواشف حديثا كما هو مذكور في الجدول 1. جهز حلول EDC وNHS مباشرة قبل الاستخدام؛ لا تخزنها. بالنسبة لجميع المخازن الأخرى (التحلل، الربط، الغسيل، الشفاف، MES، PBS، Tris)، حضر محاليل المخزون مسبقا وخزنها عند 4 درجات مئوية. توازن المخازن المخزنة إلى درجة حرارة التفاعل المناسبة (درجة حرارة الغرفة أو 4 درجات مئوية) قبل الاستخدام. تأكد من تجهيز مخزن FACS ومخزن التخزين حديثا أو مخزنين عند 4 درجات مئوية.

1. التعبير والتنقية للبروتينات المؤتلفة A/G/L

  1. تعبير البروتين المؤتلف A/G/L
    1. تحويل بلازميد بروتين A/G/L من pET28 إلى خلايا مؤهلة للإشريكية القولونية BL21(DE3) باستخدام بروتوكول صدمة حرارية قياسي.
    2. قم بتغليف الخلايا المحولة على LB Agar التي تحتوي على 50 ميكروغرام·مل-1 كاناميسين وتحتضن طوال الليل عند 37 درجة مئوية.
    3. قم بتلقيح مستعمرة واحدة ب 5–10 مل من مرق LB يحتوي على الكاناميسين (50 ميكروغرام·مل-1) وزراعة طوال الليل عند 37 درجة مئوية مع هز عند 200 × جرام.
    4. انقل الثقافة الليلة إلى 200 مل من LB يحتوي على الكاناميسين (تركيز نهائي 50 ميكروغرام·مل-1) عند تخفيف 1:100.
    5. ازرع الزراعة عند 37 درجة مئوية حتى تصل الكثافة البصرية عند 600 نانوميل (OD600) إلى 0.6–0.8.
    6. تحفز تعبير البروتين بإضافة إيزوبروبيل β-D-1-ثيوجالاكتوبيرانوزيد (IPTG) إلى تركيز نهائي 0.5 مللي مولار وحضانة عند 28 درجة مئوية لمدة 12–16 ساعة.
    7. احصد الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 4 درجات مئوية، و4000 × جرام لمدة 10 دقائق.
    8. تخلص من المادة الفائقة وأعد تعليق حبيبات الخلية في مخزن التحلل. تابع فورا أو خزن الحبيبات عند -80 درجة مئوية.
      نقطة التوقف: يمكن تخزين حبيبات الخلايا عند -80 درجة مئوية لعدة أسابيع قبل التحلل.
  2. تحلل الخلايا
    1. أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في 10 مل من محلول التحلل لكل جرام من كتلة الخلية الرطبة.
    2. قم بتحليل الخلايا باستخدام متجانس عالي الضغط مضبوط على 1000 بار، وتمرير التعليق عبر 2–3 دورات حتى يصبح المحلول أقل لزوجة وشفافية.
      ملاحظة: بدلا من ذلك، يمكن إجراء تعطيل الخلية عن طريق الصوتية على الجليد باستخدام وضع النبض (5 ثوان تشغيل / 10 ثوان إيقاف) لمدة 8–12 دورة، لتجنب ارتفاع درجة الحرارة. تأكد من التحلل الكامل بفحص أليكوت صغير تحت المجهر.
    3. قم بالطرد المركزي بجهاز الليزات عند 12000 × جرام لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
    4. اجمع المادة الفائقة كجزء بروتين قابل للذوبان للتنقية.
  3. تنقية التقارب بين Ni-NTA
    1. توازن العمود وتحميل العينات
      1. توازن عمود Ni-NTA مع 10 أعمدة من حجم الارتباط يحتوي على 10 مللي مولار إيميدازول.
      2. ترشيح الليسات المصفى عبر مرشح 0.45 ميكرومول، أضف الإيميدازول إلى تركيز نهائي 10 مللي مول، ثم تحميله على العمود عند 0.5 CV·min-1.
      3. اجمع نسبة التدفق لمراقبة كفاءة الربط.
    2. الغسيل
      1. غسل العمود ب 10 CV من حاجز الارتباط وعازل غسل يحتوي على 20 ملليمولار إيميدازول بمعدل تدفق 1 CV·min-1.
    3. التواء
      1. يتم إخراج البروتين المستهدف باستخدام مخزن الخروج بمعدل تدفق 1 CV·min-1.
      2. اجمع الكسور وراقب A280 لتحديد الكسور التي تحتوي على البروتين.
    4. تبادل المخزن والبروتين
      1. انقل محلول البروتين المنقى إلى أنبوب ترشيح فوق مركزي بوزن جزيئي بوزن جزيئي (MWCO) بقدرة 50 كيلو دالتون.
      2. الطرد المركزي عند 3,500 × جرام لمدة 15–20 دقيقة عند 4 درجات مئوية حتى يتم الوصول إلى التركيز المطلوب.
      3. تخلص من التدفق عبر المخزن وأضف حجما مساويا من مخزن PBS (pH 7.4) إلى المخزن الاحتياطي لتبادل المخزن.
      4. كرر عملية الطرد المركزي واستبدال PBS 2–3 مرات لاستبدال المخزن الأصلي بالكامل ب PBS.
      5. بعد الخطوة النهائية للتركيز، اجمع البروتين المحفوظ وقس تركيز البروتين.
      6. تحقق من الكسور المخطوفة بواسطة SDS-PAGE؛ الوزن الجزيئي المتوقع للبروتين A/G/L هو حوالي 90 كيلو دالتون.
      7. أليكوت البروتين المنقى وخزن عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام الإضافي.
        ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا عند هذه الخطوة. يمكن تخزين البروتين المنقى A/G/L عند -80 درجة مئوية لتركيب الخرزات لاحقا. بعد التكثف، تم الحصول على حوالي 10 ملغ من بروتين A/G/L المنقى من 200 مل من زراعة بكتيرية، مع تركيز نهائي بين 2–5 ملغ·مل⁻1.

2. اقتران الخرزات مع بروتين A/G/L

  1. الغسل المسبق للخرز
    1. مخزن خرزات الدوامة عند أقصى سرعة لمدة 20–30 ثانية عند درجة حرارة الغرفة (20–25 درجة مئوية) ليعاد تعليقها بشكل متساو. انقل 0.2 مل 8 ميكرومولار (5 ملغ) إلى أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل.
    2. حبيبات الحبيبات بالطرد المركزي، 5000 × جرام لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    3. استنشق السوبرنت بعناية وتخلص منها دون إزعاج الحبيبة.
    4. أضف 1 مل من مخزن MES 0.1 M، ثم أعد تعليقها بلطف عن طريق التوصيل بالماصة أو الدوامة الخفيفة، ثم قم بالطرد المركزي مرة أخرى بحرارة 5000 × جرام لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وإزالة السوبرناتانت. كرر هذا الغسل مرة واحدة (بمجموع غسلتين MES).
  2. التفعيل مع EDC/NHS
    تحذير: مراكز التوزيع اليومي وNHS من المهيجات ويجب التعامل معها بمعدات الحماية الشخصية المناسبة داخل غطاء بخاري.
    1. أعد تعليق الخرزات في مخزن MES بسعة 0.5 مل، ثم أضف بشكل تسلسلي 50 ميكرولتر 50 ملغ·مل-1 من NHS و100 ميكرولتر من 50 ملغ·مل-1 EDC.
      ملاحظة: يجب تحضير حلول EDC وNHS طازجة مباشرة قبل الاستخدام.
    2. تتكسر خرزات الدوامة وتحتضن على هزاز دوار في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة ليتم تفعيلها.
  3. إزالة كواشف التنشيط وغسل
    1. حبيبات الحبيبات: 5000 × جرام، 3 دقائق، في درجة حرارة الغرفة. أزل سوبرناتانت بحذر.
    2. أضف 1 مل من مخزن PBS، ثم أعد تعليقها بلطف، ثم استخدم الطرد المركزي (5000 × جرام، 3 دقائق، في درجة حرارة الغرفة)، وإزالة السوبرناتانت. قم بغسل PBS واحد لإزالة كواشف التفعيل.
  4. اقتران البروتين
    1. أعد تعليق حبيبة الخرزة المنشطة في 0.4–0.5 مل PBS (الهدف النهائي لحجم التفاعل 0.5–0.6 مل). حافظ على الحجم منخفضا لزيادة تركيز البروتين الفعال.
    2. أضف 100 ميكروغرام بروتين A/G/L. اخلط بلطف.
    3. حضن التفاعل على هزاز متحرك في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين للاقتران السريع، أو 4 درجات مئوية طوال الليل. حافظ على التدحرج اللطيف لمنع ترسيب الخرز.
  5. رد فعل التجميد/الإنهاء
    1. حبات الحبيبات (5000 × جم، 3 دقائق) وإزالة السوبرناتانت.
    2. أضف 1 مل 0.1 مليون تريس (درجة الحموضة = 7.4) لإخماد الإسترات المتبقية من NHS. أعد تعليق القرص واحتضنه على الهزاز المتدحرج لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    3. أغسل حبيبات الحبيبات ب 1 مل PBS في نفس أنبوب الطرد المركزي الدقيق بسعة 1.5 مل. أعيد استخدام الطرد المركزي (5000 × جم، 3 دقائق) وتخلص من السوبرناتانت. ثم أعد تعليق الخرزات التي تحتوي على مخزن تخزين 0.5 مل.
      نقطة التوقف: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا في هذه الخطوة. يمكن تخزين الخرزات المعلقة عند 4 درجات مئوية.
  6. المزج والتخزين
    1. عد الخرزات المترافقة وغير المترافقة. اخلط الخرزات المتقاربة وغير المتقاربة بنسبة 25٪–75٪ في أنبوب الطرد المركزي الدقيق الجديد بسعة 1.5 مل.
    2. علق خليط الخرزات في 1 مل من مخزن التخزين (PBS يحتوي على 1٪ BSA و0.05٪ مواد حافظة مضادة للميكروبات).
    3. انقل التعليق إلى أنبوب معنون وخزنها عند 4 درجات مئوية. الحماية الضوئية غير مطلوبة. أعد تعليقها بلطف قبل الاستخدام لضمان توزيع خرزات بشكل متساو. في هذه الظروف، تبقى الخرزات مستقرة لمدة لا تقل عن 6 أشهر.

3. ممثل QC

  1. حضن 10 ميكرولتر من الخرزات المترافقة مع 1 ميكرولتر من الأجسام المضادة الفلورية في 100 ميكرولتر من FACS لمدة 15–30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: يجب أن يحتوي كل أنبوب على جسم مضاد فلوري واحد فقط.
  2. اغسل الخرز ب 1 مل PBS، ثم أعد تعليقها في 300–500 ميكرولتر PBS وتشغيل على مقياس تدفق السيل.
  3. اضبط قناة الكشف وفقا للفلوروفور المرتبط بالجسم المضاد (مثل ليزر 488 نانوميل مع كاشف FITC للأجسام المضادة المترافقة مع FITC). يمكن استخدام نطاق جهد أنبوب مضاعف ضوئي ممثل (PMT) من 0–200 فولت كنقطة انطلاق وتعديله بناء على أداء الأجهزة. اجمع ما لا يقل عن 10,000 حدث لكل عينة.
  4. بوابة على الخرزات من FSC/SSC. يجب أن تظهر الخرزات الإيجابية قمة واحدة واضحة مع مؤشر MFI مرتفع في قناة الفلوروفور؛ يجب أن يظهر التحكم السلبي فقط في الخلفية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتكون بروتين الاندماج المؤتلف A/G/L من 816 حمضا أمينا بوزن جزيئي محسوب يبلغ 90.5 كيلو دالتون (الملف التكميلي 1). يحتفظ هذا البروتين الاندماجي بخمسة مجالات ارتباط IgG B من بروتين A، ومجالين من IgG من بروتين G، وخمسة نطاقات B مرتبطة بسلسلة خفيفة κ من بروتين L، بينما تم إزالة مجال ارتباط الألبومين (الشكل 1A، جدول الملحق 1). تمت إضافة بقايا سيستين إلى الطرف C لتسهيل الارتباط التساهمي، وتم إدخال علامة 6× تم إدخال وسم لتمكين التنق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول سير عمل عملي وفعال لتحضير خرزات تعويض الفلورية المبنية على بروتين A/G/L المؤتلف. تشمل العملية التعبير البكتيري، وتنقية ألفة Ni-NTA، والاقتران التساهمي للبروتين المنقى مع ميكروكرات البوليسترين المعدلة بالكربوكسيل باستخدام كيمياء EDC/NHS. يمكن للخرزات الناتجة أن ترتبط بأجسام مضادة من عدة أنواع وفئات فرعية، مما يوفر أداة متعددة الاستخدامات وفعالة من حيث التكلفة لتعويض التألق في قياس تدفق الخلية.

استخدام الكرات المعدلة بالكربوكسيل تجاريا يبسط هذ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع المؤلفين يعلنون أنه لا يوجد لديهم تضارب مصالح وأنه ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعم هذا العمل برنامج البحث العلمي التابع للجنة التعليم في تيانجين (2021KJ224).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AF647 رات Ig2aبيو ليجند141711
ماوس APC IgG1بيو ليجند353311
الخلايا المختصة BL21(DE3)سانغونB528414
BSAسولاربيولوجياA8010
EDCثيرمو فيشر22980CAS: 1892-57-5
FITC هامستر أرمني IgGبيو ليجند400905
إيميدازولسيغما-ألدرتشI202CAS: 288-32-4
IPTGجولد بيوI2481CCAS: 367-93-1
كاناميسين سانغونA600286رمز الحساب: 8063-07-8
KClعلاء الدينP112134رمز الائتمان: 7447-40-7
KH2PO4علاء الدينP434010رمز الائتمان: 7778-77-0
MESسيغما-ألدرتشM3671رمز الاستدعاء: 145224-94-8
Na2HPO4علاء الدينS274390رمز الائتمان: 7558-79-4 
NaClعلاء الدينC111549رمز الائتمان: 7647-14-5
هيئة الخدمات الصحية الوطنيةثيرمو فيشر24500رمز الاستدعاء: 6066-82-6
Ni NTA Beads 6FFعلوم الحياة الذكيةSA005005
فأر PE IgG2aبيو ليجند362603
برو كلين 300بيوتايمST853
تريس سيغما-ألدرتش252859رمز الاستدعاء: 77-86-1 
التريبتونأكسويدLP0042
فلتر طرد مركزي فائق، 50 كيلو دالتون MWCOميليبورUFC9050
كرات كربوكسيل بوليسترين الموحدةتوميكرو بيوتيك10 مل، 25 ملغ/ملشنغهاي، الصين
مستخلص الخميرةأكسويدLP0021

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Shapiro, H. M. Practical Flow Cytometry. , John Wiley & Sons. Hoboken, NJ. (2005).
  2. Perfetto, S. P., Ambrozak, D., Nguyen, R., Chattopadhyay, P., Roederer, M. Quality assurance for polychromatic flow cytometry. Nat Protoc. 1 (3), 1522-1530 (2006).
  3. Bhowmick, D., Lowe, S. K., Ratliff, M. L. Side-by-side comparison of compensation beads used in polychromatic flow cytometry. Immunohorizons. 7 (12), 819-833 (2023).
  4. Szaloki, G., Goda, K. Compensation in multicolor flow cytometry. Cytometry A. 87 (11), 982-985 (2015).
  5. Tang, H., et al. Economical and efficient protocol for isolating and culturing bone marrow-derived dendritic cells from mice. J Vis Exp. (185), e63125(2022).
  6. Sun, J., Kroeger, J. L., Markowitz, J. Introduction to multiparametric flow cytometry and analysis of high-dimensional data. Methods Mol Biol. 2194, 239-253 (2021).
  7. Blazer, L. L., Roman, D. L., Muxlow, M. R., Neubig, R. R. Use of flow cytometric methods to quantify protein-protein interactions. Curr Protoc Cytom. 53, 13.11-13.15 (2010).
  8. Zheng, Z., Chinnasamy, N., Morgan, R. A. Protein l: A novel reagent for the detection of chimeric antigen receptor (car) expression by flow cytometry. J Transl Med. 10, 29(2012).
  9. Chevrier, S., et al. Compensation of signal spillover in suspension and imaging mass cytometry. Cell Syst. 6 (5), 612-620.e5 (2018).
  10. Patella, V., Casolaro, V., Bjorck, L., Marone, G. Protein l. A bacterial ig-binding protein that activates human basophils and mast cells. J Immunol. 145 (9), 3054-3061 (1990).
  11. Eliasson, M., et al. Chimeric igg-binding receptors engineered from staphylococcal protein a and streptococcal protein g. J Biol Chem. 263 (9), 4323-4327 (1988).
  12. Hattori, T., et al. Multiplex bead binding assays using off-the-shelf components and common flow cytometers. J Immunol Methods. 490, 112952(2021).
  13. Hermanson, G. T. Bioconjugate techniques. , Academic press. (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

A G L EDC NHS

مقالات ذات صلة