مقالة منهجية

ميثليته الحمض النووي مناعي

DOI:

10.3791/935

⸱

يناير 2, 2009

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cancer Genetics and Developmental Biology, BC Cancer Research Centre, 2Interdisciplinary Oncology Program, University of British Columbia - UBC, 3Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia - UBC, 4Photography/Video Production, Multi-Media Services, BC Cancer Agency, 5Department of Medical Genetics, Life Sciences Institute,, University of British Columbia - UBC

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الفيديو يدل على بروتوكول للمناعي ميثليته الحمض النووي (MeDIP). MeDIP هو الإجراء الذي يستخرج يومين انتقائي شظايا من الحمض النووي ميثليته من عينة الحمض النووي الجيني باستخدام الأجسام المضادة مع خصوصية لmethylcytosine - 5 (MC - 5 المضادة).

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تحديد أنماط الحامض النووي هو اجراء شائع في دراسة علم التخلق ، كما هو معروف مثيلة لها آثار كبيرة على التعبير الجيني ، وتشارك مع التطور الطبيعي فضلا عن الأمراض

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

استخراج الحمض النووي وإعداد العينات

ويمكن استخدام الحمض النووي من مجموعة متنوعة من عينات مختلفة (الخلايا المستزرعة ، طازجة مجمدة وكذلك الأنسجة البارافين الفورمالين ثابت مضمن) لMeDIP. من المهم استخدام الحمض النووي عالي النقاء بدون البروتينات المرتبطة بها مثل histones. من المهم أيضا لإزالة RNA أكبر قدر ممكن من العينة ، كما يمكن أن تتداخل مع الكميات الحمض النووي على حد سواء وملزمة الأضداد. يمكن لكمية من الحمض النووي المستخدمة لMeDIP مجموعة من 200 نانوغرام إلى 1 ميكروغرام اعتمادا على كمية من الحمض النووي المتاحة. لإثبات هذا البروتوكول ، سيتم استخدام 1 ميكروغرام من ا....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك وعي متزايد لتلعب دورا هاما في مرض الحامض النووي ، وبالتالي فإن تطوير فحوصات لقياس هذا التعديل أصبحت ذات أهمية متزايدة 3 ، 12 ، 13. تقنية MeDIP أداة قابلة للفحص في كل الجينوم ، ومكان محدد مستوى 6 و 7. هذا الأسلوب يوفر عرض سريع لمستويات الحامض النووي باستخدام كميات محدودة من بدء DNA ، ويسمح للمقارنات سهلة بين مصادر مختلفة. تطبيقات المصب استخدام المنتج MeDIP تشمل مجموعة متنوعة من ميكروأرس مثل الجينوم وCPG صفائف قليل النوكليوتيد الجزيرة مباشر المقايسات PCR ل.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر أعضاء براون ومختبرات لام لمشاركتهم في هذا الفيديو النقد والمقالة. وأيد هذا العمل من جانب صناديق من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة ومؤسسة مايكل سميث للبحوث الصحية.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أداة الصوتنة BiorupterDiagenodeUCD-200 TM
1.7 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقة SafeSealأخرىSorenson BioScience11510
ND 3300 أداة مقياس الطيفالضوئي NanoDrop
الجسم المضاد الأساسي: كاشف الفأر المضاد ل 5'-methylcytosine mAbCalbiochem162 33 D3
الجسم المضاد الثانوي: Dynabeads M-280 Sheep المضاد للفأر كاشف IgGInvitrogen112-01D
أداة رف الأنبوب المغناطيسيInvitrogenCS15000
Mini LabRollerToolLabnet InternationalH5500
IP Buffer10 mM NaPO 4< / sub > درجة الحموضة 7.0 ، 140 ملي كلوريد الصوديوم ، 0.05٪ Triton X-100. مخزنة في درجة حرارة الغرفة
عازلة10 ملي تريس pH8.0 ، 100 ملي EDTA ، 0.5٪ SDS ، 50 ملي كلوريد الصوديوم
الهضم

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Beck, S., Rakyan, V. K. The methylome: approaches for global DNA methylation profiling. Trends Genet. 24, 231-237 (2008).
  2. Lu, Q., et al. Epigenetics, disease, and therapeutic interventions. Ageing research reviews. 5, 449-467 (2006).
  3. Zilbe....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

5 mC

مقالات ذات صلة