هذا الفيديو يدل على بروتوكول للمناعي ميثليته الحمض النووي (MeDIP). MeDIP هو الإجراء الذي يستخرج يومين انتقائي شظايا من الحمض النووي ميثليته من عينة الحمض النووي الجيني باستخدام الأجسام المضادة مع خصوصية لmethylcytosine - 5 (MC - 5 المضادة).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ميثليته الحمض النووي مناعي
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تحديد أنماط الحامض النووي هو اجراء شائع في دراسة علم التخلق ، كما هو معروف مثيلة لها آثار كبيرة على التعبير الجيني ، وتشارك مع التطور الطبيعي فضلا عن الأمراض
البروتوكول
استخراج الحمض النووي وإعداد العينات
ويمكن استخدام الحمض النووي من مجموعة متنوعة من عينات مختلفة (الخلايا المستزرعة ، طازجة مجمدة وكذلك الأنسجة البارافين الفورمالين ثابت مضمن) لMeDIP. من المهم استخدام الحمض النووي عالي النقاء بدون البروتينات المرتبطة بها مثل histones. من المهم أيضا لإزالة RNA أكبر قدر ممكن من العينة ، كما يمكن أن تتداخل مع الكميات الحمض النووي على حد سواء وملزمة الأضداد. يمكن لكمية من الحمض النووي المستخدمة لMeDIP مجموعة من 200 نانوغرام إلى 1 ميكروغرام اعتمادا على كمية من الحمض النووي المتاحة. لإثبات هذا البروتوكول ، سيتم استخدام 1 ميكروغرام من ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك وعي متزايد لتلعب دورا هاما في مرض الحامض النووي ، وبالتالي فإن تطوير فحوصات لقياس هذا التعديل أصبحت ذات أهمية متزايدة 3 ، 12 ، 13. تقنية MeDIP أداة قابلة للفحص في كل الجينوم ، ومكان محدد مستوى 6 و 7. هذا الأسلوب يوفر عرض سريع لمستويات الحامض النووي باستخدام كميات محدودة من بدء DNA ، ويسمح للمقارنات سهلة بين مصادر مختلفة. تطبيقات المصب استخدام المنتج MeDIP تشمل مجموعة متنوعة من ميكروأرس مثل الجينوم وCPG صفائف قليل النوكليوتيد الجزيرة مباشر المقايسات PCR ل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نود أن نشكر أعضاء براون ومختبرات لام لمشاركتهم في هذا الفيديو النقد والمقالة. وأيد هذا العمل من جانب صناديق من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة ومؤسسة مايكل سميث للبحوث الصحية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| جهاز سونيكاتور Biorupter | أداة | Diagenode | UCD-200 TM | |
| أنابيب طرد مركزي دقيقة SafeSeal سعة 1.7ml | أخرى | Sorenson BioScience | 11510 | |
| مقياس الطيف الضوئي ND 3300 | أداة | NanoDrop | ||
| الأجسام المضادة الأولية: mAb فأر مضاد لـ 5’-methylcytosine | كاشف | Calbiochem | 162 33 D3 | |
| الأجسام المضادة الثانوية: Dynabeads M-280 خروف مضاد لـ IgG الفأر | كاشف | Invitrogen | 112-01D | |
| حامل أنابيب مغناطيسي | أداة | Invitrogen | CS15000 | |
| جهاز Mini LabRoller | أداة | Labnet International | H5500 | |
| محلول الترسيب المناعي (IP Buffer) | 10 mM NaPO4 pH 7.0, 140 mM NaCl, 0.05% Triton X-100. يُحفظ في درجة حرارة الغرفة | |||
| محلول الهضم (Digestion Buffer) | 10 mM Tris pH8.0, 100 mM EDTA, 0.5% SDS, 50 mM NaCl |
المراجع
- Beck, S., Rakyan, V. K. The methylome: approaches for global DNA methylation profiling. Trends Genet. 24, 231-237 (2008).
- Lu, Q., et al. Epigenetics, disease, and therapeutic interventions. Ageing research reviews. 5, 449-467 (2006).
- Zilbe....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
